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I-LFQ-42
Revisin: 05
Fecha: 18-08-2015
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1. OBJETIVO:
Conocer las instrucciones para realizar el mtodo de ensayo de Demanda Bioqumica de Oxgeno en
muestras de agua para consumo humano, residual, natural y salina.
CO
2. CAMPO DE APLICACIN:
Este mtodo de ensayo es aplicable para la medicin de concentraciones 2 4 000 mg/L de la Demanda
Bioqumica del Oxgeno en agua.
PI
NO
4. INTERFERENCIAS:
4.1. Verificacin del pH: Si la muestra no est entre 6.0 y 8.0 ajustar a temperatura de 203 C luego
ajustar pH de 7.0 a 7.2 usando solucin de cido sulfrico 1N o hidrxido de sodio 1N. La cantidad
de reactivo aadido no debe diluir la muestra por ms que el 0.5.
LA
RO
NT
CO
4.2. Muestras que contienen compuestos de cloro residual: Si es posible evtense todas las muestras
que contienen cloro residual. Se eliminara el cloro residual con exposicin a la luz en un lapso de 1
a 2 horas, para las muestras en que el cloro no se disipa en una tiempo corto destruir el cloro residual
aadiendo solucin de Na2SO3. Determinar el volumen requerido de solucin de Na2SO3 en una
fraccin de 100 a 1000 ml de muestra neutralizada aadiendo 10 ml 1 +1 cido actico o 1+50
cido sulfrico, 10 ml de solucin de yoduro de potasio (10 g/100 ml) y titulando con Na2SO3
hasta el punto final del almidn-yodo para el residuo. Adase a la muestra neutralizada el
volumen proporcional de solucin de Na2SO3 determinado por la prueba anterior, mezclar y
despus de 10 a 20 minutos verificar el cloro residual de la muestra. (Nota: el exceso de
Na2SO3 ejerce un requerimiento de oxgeno y reacciona lentamente con ciertos compuestos
de cloraminas orgnicas que pueden estar presentes en las muestras cloradas).
DA
4.3. Muestras sobresaturadas con OD (Oxgeno disuelto): en aguas fras o en aguas donde se produce
la fotosntesis es posible encontrar muestras encima de la saturacin a 20 C Para evitar la prdida
de OD durante la incubacin de tales muestras reducir el OD hasta la saturacin llevando la
muestra a 20 3 C en botellas parcialmente llenas mientras se agita vigorosamente.
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TODA COPIA EN PAPEL DE ESTE DOCUMENTO ES UNA COPIA NO CONTROLADA A EXCEPCIN DEL ORIGINAL, A MENOS QUE HAYA SIDO
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4.4. Muestras que contienen perxido de hidrgeno: perxido de hidrgeno restante en muestras de
algunos procesos industriales de blanqueamiento tales como los utilizados en fbricas de
papel y plantas textiles pueden causar niveles de oxgeno sobresaturados en muestras
recogidas para la prueba de DBO.
Mezclar la muestra vigorosamente en recipientes abiertos durante un tiempo suficiente para
permitir que el perxido de hidrgeno se disipe antes de la prueba del DBO. Compruebe la
eliminacin del perxido mediante la observacin de concentraciones de oxgeno disuelto
en el tiempo durante el mezclado.
CO
5. EQUIPOS Y MATERIALES:
5.1. Winklers.
5.2. Minicompresora.
5.3. pH metro.
5.4. Pipetas volumtricas: 1, 2, 5, 10, 15, 25, 50, 100 ml.
5.5. Pipetas graduadas 5, 10 ml.
5.6. Vasos 50, 100, 250 y 600 ml.
5.7. Bagueta
5.8. Matraz 250 ml, 300 ml.
5.9. Bureta 25 ml
5.10. Agitador magntico.
5.11. Probeta 250 ml.
5.12. Oxigenador pequeo.
5.13. Manguera delgada de 30 cm aproximadamente.
5.14. Difusor de oxgeno pequeo.
6. REACTIVOS
PI
NO
CO
DA
LA
RO
NT
6.1. Solucin de sulfato manganoso: Disolver 480 g MnSO4.4H2O, 400 g MnSO4.2H2O o 364 g
MnSO4.H2O en agua desionizada. Filtrar si es necesario o ayudarse con el agitador magntico y
diluir a 1L.
6.2. Reactivo de lcali ioduro azida: Disolver 500 g de NaOH (o 700 g KOH) y 135 g NaI (o 150 g KI) en
agua desionizada y dilyase a 1 L. Adase 10 g NaN3 disueltos en 40 mL de agua desionizada.
6.3. cido sulfrico H2SO4 conc.
6.4. Almidn: disolver 2 g de almidn soluble, calidad de laboratorio en 100 mL de agua desionizada
caliente, agregar 0,2 g de cido saliclico para preservarlo, Refrigerar.
6.5. Titulante de tiosulfato sdico: disolver 6,205 g de Na2S2O3.5 H2O en agua desionizada. Aadir 0,4
g de NaOH slido y diluir a 1L. Estandarizar con solucin de biyodato, para estandarizar seguir los
pasos que se describen en el formato F-LFQ-56 ESTANDARIZACIN DEL TIOSULFATO DE
SODIO (Na2S2O3.).
6.6. Solucin tampn fosfato: disolver 8,5 g de KH2PO4, 21,75 g de K2HPO4, 33,4 g de Na2HPO4. 7H2O
y 1,7 g de NH4Cl en unos 500 mL de agua desionizada y diluir a 1 L, el pH en eta solucin debe ser
de 7,2, sin ajustes adicionales.
Nota: Los pesos deben ser exactamente como se indican para obtener el pH deseado.
6.7.
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a) Solucin cida H2SO4 1N: A un volumen de agua, adase lentamente y con agitacin suave, 28
mL de cido sulfrico conc. Y diluir a 1 L con agua desionizada. . La dilucin debe hacerse dentro
de un bao de agua fra, ya que la reaccin es exotrmica.
b) Solucin bsica de NaOH 1N: Disolver 40 g de hidrxido de sodio en agua desionizada y disolver
a 1 L. La disolucin debe hacerse dentro de un bao de agua fra, ya que la reaccin es exotrmica.
6.11. Solucin de sulfito de sodio: disolver 1,575 g Na2SO3 en 1000 ml de agua desionizada. Esta
solucin no es estable; preparar diariamente.
6.12. Fuente de agua para preparar el agua de dilucin:utilizar agua desionizada para realizar las
diluciones de las muestras.
6.13. Suspensin de inculo comercial: mezcla de bacterias diseado como una semilla de inculo
para la prueba de demanda bioqumica de oxgeno.
6.14. Kit de determinacin de cloro: permitir determinar la presencia de cloro en una determinada
muestra.
PI
7. DESARROLLO:
7.1. Limpieza del material: todo el material utiliado en el anlisis debe ser lavado como indica el instructivo:
I-LFQ-12.
7.2. Recepcin de las muestras:
7.2.1. En la oficina de recepcin y toma de muestras ingresan segn el procedimiento P-RTM-02
Procedimiento para manipulacin de muestras de ensayo.
7.2.2. Las muestras se trasladan de la Oficina de Recepcin y Toma de Muestras al Laboratorio de
Fsico-Qumica segn el procedimiento P-RTM-02 Procedimiento para manipulacin de las
muestras de ensayo.
7.2.3. Todas las muestras deben ingresar con el formato F-RTM-05 Orden de ensayo.
7.2.4. todos los ingresos y salidas de las rdenes de ensayo se registran en el formato F-GGTC-22
Control de entrega de reporte de resultados.
7.2.5. Para todas las muestras de ensayo debe cumplirse las especificaciones de la tabla:
Tabla N 01 Recepcin y almacenamiento de muestras
NO
RO
Preservantes
Pre-tratamiento de la muestra
Mximo tiempo para analizar
Ninguno
1L
LA
NT
CO
Condiciones de recepcin de
muestras
Ninguno
48 horas
DA
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LA
7.6.2. Adicin del inculo: de usarse la siembra aadir el volumen de inculo a las botellas de
DBO individuales antes de la dilucin final.
Preparar la solucin de inculo de la siguiente manera:
Colocar todo el contenido de una cpsula (desechar la cpsula de gelatina)en 500 ml de agua
de dilucin.esta agua de dilucin se denominar como la suspensin de inculo. Nota: el
salvado acta como un portador para los microorganismos, ni se disolver ni inhibir la
actividad microbiana; debe ser colocada fuera de la solucin antes de su uso.
Airear y agitar la solucin durante 1 hora, luego dejar que la solucin sedimente por 5 a 15
minutos.
Decantar el sobrenadante con cuidado dejando fuera de la solucin biolgica el salvado.
Verter la solucin decantada en un vaso limpio de 500 ml y agitar suavemente durante el resto
de la prueba.
La solucin debe utilizarse dentro de las 6 horas de la rehidratacin de la cpsula.
Elegir de 3 a 4 alicuotas de inculo para sembrar.
Luego sacar cuidadosamente una alcuota de la solucin; las alcuotas pueden ser de 15, 20 y
25 ml, El OD consumido por la adicin de inculo medido en cada botella generalmente debera
estar entre 0.6 y 1.0 mg/L pero la cantidad aadida de inculo debe ser ajustada desde este
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LA
RO
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CO
,=
/ , =
Donde:
OD: Oxgeno disuelto
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En todos los clculos anteriores no hacer correcciones sobre la absorcin de oxgeno disuelto por el
blanco de agua de dilucin durante la incubacin, esta correccin es innecesaria si la dilucin con
agua cumple los criterios estipulados para el blanco de agua de dilucin.
Si el agua de dilucin no cumple con los criterios, las correcciones adecuadas son difciles; no
registrar los resultados o como mnimo registrar que no cumplieron con los criterios de control de
calidad.
Promedie los resultados para todas las botellas de prueba en cada serie de dilucin.
Las muestras que presentan grandes diferencias entre la DBO calculada para las diferentes diluciones,
por ejemplo, mayor que el 30% pueden indicar la presencia de una sustancia txica o problemas
analticos. Cuando el efecto se vuelve repetitivo, investigar para identificar la causa.
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9.3.3. Calcular el OD inicial siguiendo los pasos a partir del punto (7.6.3.1.)
9.3.4. Su frecuencia es cada vez que se realiza el ensayo y debe cumplirse que el consumo despus
de los 5 das de OD 0,2 mg/L, de lo contrario descartar todos los datos para la prueba que utilizan
esta agua de dilucin.
9.4. Blanco Fortificado:
9.4.1. Se realizara un blanco fortificado por cada 15 muestras.
9.4.2. Se prepara 1L de solucin patrn ( ver 6.3.2) que equivale 198 30,5 mg/L
9.4.3. Se Procede a tomar una alcuota de 6 mL y llevada a un winkler (300 mL), se
analiza como una muestra, seguir los pasos a partir del punto 6.5.1.3
9.4.4. Los criterios de aceptacin se describen en el registro F-GGTC-73 PROGRAMA
PARA EL ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LOS RESULTADOS.
9.4.5. De emplearse el inculo ser realizar la verificacin de la glucosa-cido
glutmico con su respectivo duplicado; sembrndose con el volumen
determinado de inculo cuyo resultado debe ser 198 30,5mg/L
Duplicado:
PI
9.5.
9.5.1.
9.6.
NO
9.5.2.
Se realizar un duplicado de muestra por cada lote de muestra, cada lote est
conformado por 15 muestras.
9.7.
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muestra
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+ 1 mL MnSO 4
Si el pH no est
entre 6-8 ajustar
el pH: 7,0-7,2 con
H2SO 4 o NaOH
Si la muestra
es efluente se
utiliza una
alcuota de :
2-25 mL
+ 1 mL reactivo de
lcali ioduro azida
Mezclar invirtiendo
varias veces
+ H 2SO 4
Para otras
matrices utilizar
alcuotas entre:
50 -200 mL
conc.
Tapar y mezclar
hasta disolucin
completa
RO
Sulfato de magnesio
Ajustar la
temperatura de
la muestra por
1h a 20C 3C
4
Titulacion
de la
muestra
NT
Tampn fosfato
3
Preparacion
de
diluciones
CO
Adicionar
nutrientes
2
Preparacion
de la
muestra
NO
Agregar tanto mL
de nutrientes por
cada Litro de agua
desionizada.
PI
1
Preparacion
del agua de
dilucion
Agregar al winkler y
enrasarlo con el agua
de dilucin, hasta el
tope y sin burbujas.
Adicionar 201 mL
de muestra a un
matraz Erlenmeyer
LA
Cloruro frrico
1-2 gotas de
indicador almidn
DA
Titular con
Cloruro de calcio
Na2S2O3.5 H2O
0,025M
Airear por Ms
de 1h a 20C
3C
Se obtiene OD inicial
Despus de 5 das
volver aplicar el
proceso de titulacion
y obtener OD final
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