Ao de la inversin para el Desarrollo Rural y la Seguridad Alimentaria

Bioensayo de Ecotoxicidad en Daphnias, realizadas con

cipermetrina
Alumnos: Aquino,Militza;Blas,Maritza;Gallo,Yuliana;Palomino,Daniel
Profesor:Chiclla Salazar,Armando
Carrera profesional: Ing.Ambiental- Ciclo 4

RESUMEN:
A continuacin se realiza un anlisis de los procedimientos empleados para determinar la
DL50 en un bioensayo a travs del mtodo de Probit, se citan los pasos para determinar
la DL50 en Daphnias y bajo condiciones de Cipermetrina al 0.05 % como sujeto de
prueba.
PALABRAS CLAVES:

Toxicidad: es la capacidad de cualquier sustancia qumica de producir efectos

perjudiciales sobre un ser vivo.
Cipermetrina: La cipermetrina es un insecticida, no sistmico (no ataca al
organismo por completo), no voltil que acta por contacto e ingestin.
Dosis letal media (DL50): es una forma de expresar el grado de toxicidad de una
sustancia.
Piretroide: Son molculas con actividad insecticida.

INTRODUCCIN:
El presente trabajo se refiere que mediante este bioensayo para comprender los efectos
producidos con un toxico en una determinada especie, para poder identificar los
contaminantes, y la dosis letal que puede resistir un determinado organismo.
El enfoque principal como bien dicho antes es comprender las caractersticas fsicas y
qumicas, el efecto de los contaminantes hacia los organismos con pruebas de toxicidad.
La experimentacin de este bioensayo se realiz con la finalidad de cmo puede afectar
un toxico a una poblacin de daphnias ya sea de organismo, plantas, humanos. Esto
permiti identificar la resistencia que puede llegar a tener cada individuo ante un agente
contaminante siendo capaz de tolerarlo.
Por otra parte, establecer indicadores de la tasa mortalidad de aquellos organismos que
no llegaron a resistir la sustancia txica.

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La metodologa usada fue someter a un grupo de organismos, especie elegida por

nosotros, a la dosis letal, que se realiz con todos los instrumentos requeridos para el
xito de este experimento.
El experimento se realiz a la especie de daphnias, siendo separados en vasos
descartables con el txico determinado siguiendo su desarrollo hasta el da de hoy.
MARCO TERICO:
MATANOX 20 EC:
QU ES EL MATANOX 20 EC?
Es un insecticida piretroide que acta por contacto e
ingestin, moderadamente txico para el hombre y
animales de sangre caliente. Acta en el parsito en
sus diferentes fases de desarrollo (larva, ninfas y
adultas), en los parsitos hembras impide la puesta
del huevo.

CIPERMETRINA:
Es un Insecticida piretroide de largo efecto residual, amplio espectro de accin y
altamente eficaz en el control de insectos, teniendo una baja toxicidad para el hombre.
COMPOSICIN/INGREDIENTES:
Nombre comn: Cipermetrina 20 EC

Grupo Qumico: Piretroide

Nombre Qumico: Alpha-cyano-3-phenoxybenzyl-cis,trans-3-(2,2-dichlorovinyl)2,2-dimethyl-cyclopropane carboxilate

% Ingrediente activo: Cipermetrina 20%

Frmula Qumica: C22H19CL2NO3

PROPIEDADES FSICAS Y QUMICAS

Estado: Lquido

Color: amarillo claro

Olor: Qumico suave

Concentracin: 20%
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p H: 7

Punto de inflamacin: 43 C

Totalmente emulsionable en agua

INFORMACIN TOXICOLGICA:
Toxicidad aguda Oral: LD50>1.070 mg/kg (rata)

Toxicidad aguda trmica: LD50>8.000 mg/kg (rata)

INFORMACIN ECOLGICA:
Los residuos de reas tratadas puede dar peligros a organismos acuticos en reas
cercanas. Po ende no se debe aplicar directamente al agua o a reas donde hay agua
superficial.
DATOS TOXICOLGICOS:

DATOS ECOTOXICOLGICOS:

PROPIEDADES BIOLGICAS:
La cipermetrina es un piretroide que afecta los canales de Sodio (NA+ ) en la membrana
nerviosa provocando una intensa actividad repetitiva, es decir un bloqueo de la

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transmisin del influjo nervioso, y en consecuencia la muerte Tambien inhibe la

alimentacin.
DAPHNIA o PULGA DE AGUA

Las Daphnia son un gnero de crustceos planctnicos del orden Cladocera. Se conocen
vulgarmente como dafnias, como las de agua y tambin como pulgas de agua, debido a
lo pequeas que son y a su forma de nadar como saltando, aunque las pulgas, al
ser insectos, estn muy alejadas de las daphnias.
El tamao de las dafnias vara entre 0,2 y 5,0 mm de longitud. Habitan en medios
acuticos, desde charcos hasta ros, y se alimentan esencialmente de fitoplancton,
pudiendo tambin ingerir microorganismos como protistas y bacterias, as como materia
orgnica particulada o disuelta. La divisin del cuerpo en segmentos no se puede apreciar
a simple vista. La cabeza se encuentra fusionada, y est generalmente posicionada hacia
abajo, tocando el cuerpo, aprecindose la separacin entre el cuerpo y la cabeza. En la
mayora de las especies el cuerpo est cubierto por un exoesqueleto, con una abertura
ventral en los 5 6 pares de patas.
El ciclo de vida de las pulgas de agua no excede el ao y es altamente dependiente de la
temperatura. Por ejemplo, individuos pueden vivir 108 das a 3 C (37 F), mientras que
otros organismos pueden vivir solamente 29 das a 28 C (82 F). Una clara excepcin a
esto es el invierno, durante el cual las hembras pueden llegar a vivir 6 meses. Estas
hembras tienen generalmente una menor tasa de crecimiento, pero son de mayor tamao
que las normales.
CATEGORA DE PROTECCIN
Las daphnias no estn en peligro de extincin, pero cuando se presenta cierto grado de
contaminacin en arroyos, ros, lagos, y lagunas tienden a desaparecer.

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POR QU UTILIZAR DAPHNIAS EN EL ESTUDIO DE TOXICIDAD?

Porque dentro del grupo de los cladceros, las especies del gnero Daphnia son las ms
utilizadas como organismos de prueba o de referencia en pruebas de toxicidad. La amplia
distribucin geogrfica, el importante papel que cumplen al interior de la comunidad
zooplanctnica, la facilidad de cultivo en el laboratorio, la reproduccin partenogentica (lo
cual asegura una uniformidad de respuesta), y el corto ciclo de vida con la produccin de
un alto nmero de cras, han hecho de este grupo un ideal para la evaluacin de
toxicidad, a nivel universal.
El gnero Daphnia se ubica dentro del orden cladcera de la clase crustcea, y especies
como D. magna, D. pulex, y D. similis, son utilizadas extensivamente en pruebas de
toxicidad, por lo cual existe una extensa informacin sobre las tcnicas de cultivo, los
requisitos de temperatura, luz y nutrientes, as como su respuesta a muchos compuestos
txicos. Especficamente, los ensayos de toxicidad con D. magna permiten determinar la
letalidad potencial de sustancias puras, aguas residuales domsticas e industriales,
lixiviados, aguas superficiales o subterrneas, agua potable, y agua de poro de
sedimentos, entre otros.
En las pruebas de toxicidad con neonatos menores de 24 horas de edad son expuestos a
la muestra o compuesto a probar, por un perodo de 48 horas, al trmino del cual se
cuantifica el nmero de organismos muertos. Con estos resultados se establece la
proporcin o porcentaje de mortalidad producida.

OBJETIVO:
Calcular la DL50 de la Cipermetrina en la poblacin de daphnia.
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA:
La contaminacin hoy en da asciende con pasos agigantados hacindose cada vez ms
visible adoptando ms inters en la actualidad. Esta contaminacin afecta no solo a los
seres humanos sino tambin a todo organismo viviente por ello, la toxicologa le da a
entender cmo las substancias qumicas afectan adversamente a los organismos
vivientes. Debido a la multiplicidad de las substancias y nuestra limitada comprensin
sobre cmo funciona el organismo humano.
La experimentacin realizada es para un beneficio al conocimiento definiendo el efecto
que podra tener alguna sustancia txica en los organismos ayudando as al aporte de
nuevos componentes que puedan contrarrestar lo mismo, tambin a la resistencia de los
organismos a un determinado txico.
Por tanto el experimento puede suministrar respuestas a muchas pregunta que
quisiramos hacer, pero esas respuestas deben ser tomadas con precaucin.

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Entonces nos genera un beneficio aprovechable a lo largo de los experimentos que

haremos, para la identificacin de la dosis letal que resista cada organismo, la
preparacin de un txico y la evaluacin constante.
Desde el punto de vista terico, esta investigacin generar reflexin y discusin tanto
sobre el conocimiento existente del rea investigada, como dentro del mbito de las
Ciencias.
Desde el punto de vista metodolgico, esta investigacin est generando la aplicacin de
un nuevo mtodo de investigacin para generar conocimiento vlido y confiable dentro del
rea estudiada.
DETERMINACIN DE LA DL50
Para la determinacin de la DL50 el primer paso es el conteo de los organismos muertos
en cada extracto y cada blanco, se corrigen las mortalidades mediante la frmula de
Abbott y paralelamente se utiliza otra correccin que se basa en el porcentaje de
supervivencia de los individuos, esta correccin es utilizada en algunos procedimientos
encontrados. Las frmulas de estas correcciones son las siguientes:

me mb
(Formula de Abbott)
1 mb

DONDE:
M = Mortalidad.
me = mortalidad en el extracto.
mb = mortalidad en el blanco.
MTODOS:
La sustancia se administrar por va oral a un grupo de daphnias de experimentacin a
una de las dosis ya definida.
La sustancia se somete a ser repetida a cada tanto de txico en las diferentes muestras
siendo necesario un estudio de previa observacin inmediata.
Segn la ausencia o presencia de mortalidad de los organismos en relacin con la
sustancia recibida en un fase determinada
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MATERIALES:

Daphnias
Probeta
Pipetas
Agua destilada
Cipermetrina(matanox)
Agua mineral(san mateo)
Vasos descartables
3 Botellas de vidrio

PROCEDIMIENTO:
Preparacin de la concentracin stock;

Se diluy 0,1ml del txico (CIPERMETRINA) con 999.9ml de agua destilada

Se hizo la mezcla correspondiente obteniendo 1L de la concentracin stock.
Posteriormente se separ 50 ml de la concentracin stock, siendo esta la
cantidad de la concentracin con la que se trabajar en las daphnias.

Preparacin del disolvente (agua):

Se hizo una mezcla entre el 50% de agua mineral (San Mateo) y EL 50 % del
agua donde habitan las daphnias.

Preparacin de la disolucin:

Para la disolucin de 100%,(1) se utiliz 20ml de la concentracin stock (pura)

teniendo 4 rplicas (1A, 1B, 1C, 1D) de dicha disolucin.
Para la disolucin de 50% (2) se utiliz 10 ml de la concentracin stock, ms 10 ml
de agua, teniendo 4 rplicas (2A, 2B, 2C, 2D).
Para la disolucin del 25% (3) se utiliz 10 ml de la disolucin 2, ms 10 ml de
agua, teniendo 4 rplicas (3A, 3B, 3C, 3D).
Para la disolucin del 12.5% (4), se utiliz 10 ml de la disolucin 3 ms 10 ml de
agua, teniendo 4 rplicas (4A, 4B, 4C, 4D).
Para la disolucin del 6.25% (5) se utiliz 10 ml de la disolucin 4 ms 10 ml de
agua, teniendo 4 rplicas (5A, 5B, 5C, 5D).
Posteriormente se aadieron las daphnias a dichas disoluciones, teniendo en
cuenta que para cada disolucin con su respectiva rplica se utilizaron 10
daphnias para cada una.

RESULTADOS:
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Se proporcionaran los resultados de cada grupo de daphnias que separamos. Se reunir

los resultados en forma de un cuadro que presente cada grupo de ensayo el nmero de
organismo utilizados, el nmero de organismos hallados muertos durante la prueba ,y el
momento de la muerte de los distintos grupos de organismos dependiendo la magnitud de
cada toxico separado en 5 grupos, la evolucin temporal de los efectos txicos
CONTROL:
El control se hizo dentro de 48 horas debido a que segn las investigaciones la
cipermetrina acta dentro de 48 horas.
LUNES 23 DE SEPTIEMBRE A LAS 12:30 PM
NMERO DE MUERTOS
toxico
10
5
2.5
1.25
0.625

FILA 1
10
10
5
3
2

FILA 2
10
10
5
3
1

FILA 3
10
10
3
4
1

FILA 4
10
10
4
3
1

FILA 5
10
10
6
4
1

NMERO DE VIVOS
toxico

FILA 1

FILA 2

FILA 3

FILA 4

FILA 5

10

NINGUNO

NINGUNO

NINGUNO

NINGUNO

NINGUNO

NINGUNO

NINGUNO

NINGUNO

NINGUNO

NINGUNO

2.5

1.25

0.625

MTODO PROBIT
toxico

Log.conc.toxica

# individuos

#muertos

%mortalidad

10

10

50

0.5%

0.70

10

50

0.5%

2.5

0.40

10

23

0.23%

1.25

0.09

10

17

0.17%

0.625

-0.20

10

0.06%

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REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/573/cap1.pdf
http://www.gruposilvestre.com.pe/ArchivosProducto/C_SA_127.pdf
CONCLUSIONES:
Uno de los efectos ms importantes del txico hacia las daphnias fue el dao de
su sistema nervioso y de su exoesqueleto translcido, siendo sta el
provocamiento de su muerte

ANEXOS:

MATERIALES

PREPARACIN DE LA
CONCENTRACIN STOCK

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CONCENTRACIN STOCK

PREPARACIN DEL AGUA (AGUA DEL HABITAD DE LAS

DAPHNIAS MAS AGUA MINERAL)

DISOLUCIONES

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