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MARA ESPERANZA CAMACHO VALLEJO, doctora en veterinaria e

investigadora titular del Instituto Andaluz de Investigacin y Formacin Agraria.


IFAPA.

JUAN VICENTE DELGADO BERMEJO, doctor en veterinaria y profesor titular


del Departamento de Gentica de la Universidad de Crdoba.

DEPARTAMENTO DE GENTICA
INFORMAN:

Tesis Doctoral

Que la tesis doctoral titulada, CARACTERIZACIN REPRODUCTIVA DE


TOROS DE LA RAZA MARISMEA COMO BASE A SU CONSERVACIN,
de la que es autor D. ngel Faustino Vallecillo Hernndez, ha sido realizada
bajo nuestra direccin y que rene las condiciones exigidas y el rigor cientfico

CARACTERIZACIN REPRODUCTIVA DE TOROS DE LA RAZA


MARISMEA COMO BASE A SU CONSERVACIN

Tesis presentada por: ngel Faustino Vallecillo Hernndez

para su exposicin y defensa en la Facultad de Veterinaria con vista a optar al


ttulo de Doctor.

Para que conste a los efectos oportunos se firma el presente.

Crdoba,

Espaa, a 27 de Enero de 2011.

Bajo la direccin de los doctores: Mara Esperanza Camacho Vallejo


Juan Vicente Delgado Bermejo

Fdo. D. Mara Esperanza Camacho Vallejo

Crdoba, Enero de 2011

Fdo. D. Juan Vicente Delgado Bermejo

AGRADECIMIENTOS:

DEDICATORIA

Quisiera agradecer en primera instancia a la Agencia Espaola de Cooperacin


Internacional, por la concesin de mi beca doctoral, lo que me ha permitido realizar
con xito esta tesis.

A mis directores de tesis: Dra. D. Mara Esperanza Camacho Vallejo y Dr. D. Juan
Vicente Delgado Bermejo, por haber depositado toda su confianza, apoyo
incondicional y paciencia para que este proyecto se llevara a cabo.

Al Centro Agropecuario Provincial de la Diputacin de Crdoba, y todo su personal,


por poner a mi alcance todos los medios necesarios para realizar este trabajo de
investigacin.

A la Estacin Biolgica de Doana, por su inestimable aporte en la cesin de los


animales.
A mi padre NGEL
Al Dr. D. Fernando Pea, profesor titular del Departamento de Medicina y Ciruga

mi esposa MARIELA

Animal de la Universidad de Extremadura, por su valiosa ayuda en la realizacin de los

mi nio SAMUEL

ensayo de citmetro de flujo y CASA.

Al Dr. D. Carlos Prez Marn, profesor titular del Departamento de Medicina y Ciruga
Animal de la Universidad de Crdoba, por el apoyo logstico y tcnico en los ensayos
de campo.

Al grupo de Investigacin PAIDI AGR- 218, por darme la oportunidad de formarme en


tareas investigadoras y permitirme la realizacin de este trabajo.

A mis amigos Juanvi y Esperanza, porque siempre han tenido las palabras ms
adecuadas para infundir animo en todo momento. Sus aportaciones han sido y sern
de gran vala en mi formacin personal y profesional. Muchas gracias por regalarme su
amistad.
A mis compaeros de trabajo Mara Mir, Sergio Nogales y Mayra Gmez por todas
sus aportaciones en la revisin del manuscrito y trmites burocrticos.

2.6.2- Importancia de la conservacin en la diversidad de los animales

NDICE
Pag.

26

domsticos

Resumen

2.6.2.1- Econmico

28

Abstract

2.6.2.2- Cientfico

28

2.6.2.3- Cultural

28

I. Introduccin

2.6.3- Pautas para determinar las razas en situacin de riesgo

29

2.6.3.1- Desaparecida o extinta

30

1.1- Introduccin y objetivos

2.6.3.2- Crtica

30

II. Revisin bibliogrfica

2.6.3.3- En peligro

30

2.1- La ganadera bovina espaola. estado actual y contexto

2.6.3.4- Crtica-mantenida o en peligro-mantenida

30

2.1.1- El vacuno de carne

2.6.3.5- No en peligro

31

2.1.2- El vacuno de leche

10

2.6.4- Mtodos de conservacin

31

2.1.3- Distribucin del censo bovino espaol

10

2.6.4.1- Conservacin in situ

31

11

2.6.4.2- Conservacin ex situ

31

2.2- Origen del ganado bovino domstico


2.2.1- Clasificacin en la escala zoolgica

13

2.7- Conservacin de la diversidad de los animales domsticos en Espaa

32

2.3- Origen del bovino espaol

14

2.7.1- Conservacin y utilizacin de los recursos zoogenticos espaoles

32

2.4- Origen del bovino Marismeo

15

2.7.1.1- Razas autctonas espaolas

33

2.5- Descripcin de la raza Marismea

16

2.7.1.2- Razas espaolas

33

2.5.1- Caractersticas generales

16

2.7.1.3- Razas de la Unin Europea

33

2.5.2- Morfotipo de la raza

17

2.7.1.4- Razas de terceros pases

34

2.5.2.1- Cabeza

17

2.7.1.5- Razas sintticas espaolas

34

2.5.2.2- Cuello

17

2.7.2- Evaluacin del estado de conservacin de la diversidad de los

2.5.2.3- Tronco

17

animales de granja en Espaa

2.5.2.4- Color

18

2.7.3- Medidas de apoyo a la conservacin, mejora y fomento de las razas

2.5.2.5- Extremidades y aplomos

18

ganaderas en Espaa

2.5.2.6- Piel, pelo y mucosa

19

2.5.2.7- Formato y apariencia

19

2.8- Criopreservacin
2.8.1- Objetivos de la criopreservacin

2.5.3- Explotacin y manejo

19

2.9- Estado del arte en tecnologas reproductivas para la conservacin de

2.5.4- Situacin actual y perspectivas

21

poblaciones amenazadas

2.5.5- Programa de conservacin de la raza bovina Marismea

34

37

38
39
39

22

2.9.1- Inseminacin artificial

40

2.5.5.1- Caracterizacin gentica

22

2.9.2- Trasferencia de embriones

41

2.5.5.2- Caracterizacin productiva

23

2.10- Estado del arte en tecnologas de criopreservacin para la conservacin

2.5.5.3- Caracterizacin morfolgica

24

de especies amenazadas

2.6- Conservacin de la diversidad de los animales domsticos


2.6.1- Conservacin de los recursos zoogenticos

42

24

2.10.1- Semen

42

24

2.10.2- Embriones

43

2.10.3- Ovocitos

43

2.21- Procesamiento del semen para su congelacin

91

2.10.4- Otras tecnologas

43

2.21.1- Tratamiento inicial y proceso de equilibrado

91

44

2.21.2- Envasado

92

2.21.3- Mtodos de congelacin

93

2.11- Descripcin de la naturaleza del material a conservar


2.11.1- Espermatozoide y plasma seminal

44

2.12- Mtodos de obtencin del semen bovino

47

2.13- Valoracin de la calidad espermtica del toro

48

III. Material y mtodos

97

49

3.1- Material animal

98

2.13.2- Volumen

49

3.1.1- Animales

98

2.13.3- Concentracin

50

3.1.2- Alimentacin

99

2.13.4- Espermatozoides totales

51

3.2- Localizacin y periodo del experimento

99

2.13.5- Motilidad

51

3.3- Adaptacin y adiestramiento

99

2.13.6- Motilidad progresiva

52

3.3.1- Adaptacin

2.13.7- Viabilidad

54

3.3.2- Adiestramiento

2.13.8- Morfologa

56

3.4- Recoleccin de semen

101

58

3.5- Comportamiento sexual

102

59

3.5.1- Tiempo de reaccin

104

3.5.2- Descripcin del etograma

104

2.13.1- Color

2.13.9- Estado del acrosoma


2.14- Valoracin de la motilidad espermtica mediante el sistema
informatizado CASA
2.14.1- Cuantificacin de los movimientos espermticos
2.15- Valoracin de la viabilidad espermtica mediante la tcnica de

60
62

3.6- Caracterizacin seminal de los sementales Marismeos


3.6.1- Estudio descriptivo de las caractersticas seminales (macroscpica y

99
100

104
104

microscpica)

citometra de flujo
2.16- Factores que influyen en las caractersticas seminales

65

2.17- Estudio y evaluacin del comportamiento sexual en los sementales

71

3.6.1.1- Valoracin macroscpica

105

3.6.1.1.1- Volumen del eyaculado

105

2.17.1- Caractersticas del comportamiento sexual

74

3.6.1.1.2- Color del eyaculado

105

2.17.2- Actos de cortejo o etograma

74

3.6.1.2- Valoracin microscpica

105

2.17.3- Actos de apareamiento

75

3.6.1.2.1- Motilidad masal

105

75

3.6.1.2.2- Motilidad progresiva

105

2.17.4.1- Test del libido

75

3.6.1.2.3- Concentracin

106

2.17.4.2- Test de capacidad de servicio

77

3.6.1.2.4- Espermatozoides totales por eyaculados

106

2.17.4.3- Tiempo de reaccin

78

3.6.1.2.5- Vitalidad espermtica mediante la tincin eosina-nigrosina

106

2.17.4- Mtodos para evaluar el comportamiento sexual en toros

2.18- Principios bsicos para la criopresevacin del semen

78

2.19- El papel de los crioprotectores en los diluyentes de congelacin

3.6.1.3- Porcentaje de formas anormales

83

3.6.2- Anlisis multifactorial de efectos fijos y prueba a posteriori de

2.19.1- El glicerol

85

homogeneidad de medias para las caractersticas seminales de toros

2.19.2- La yema de huevo

86

marismeos

2.19.3- Lipoprotenas de baja densidad

87

3.6.3- Efecto de factores inherentes al semental (edad, peso, circunferencia

89

escrotal), sobre las caractersticas seminales estudiadas

2.20- Diluyentes empleados para la congelacin de semen bovino

107
108

109

3.7- Preparacin de diluyentes y procedimiento de preservacin seminal

110

4.3.3- Espermatozoides totales

151

3.7.1- Preparacin y almacenamiento del diluyente Biociphos

110

4.3.4- Motilidad masal

154

3.7.2- Procedimiento para la preservacin seminal

111

4.3.5- Motilidad progresiva

156

4.3.6 - Espermatozoides vivos

159

3.7.2.1- Dilucin del semen

111

3.7.2.2- Envasado del semen

111

4.4- Efecto de factores inherente al semental (edad, peso, circunferencia

3.7.2.3- Refrigeracin del semen

112

escrotal), sobre las caractersticas seminales estudiadas

3.7.2.4- Congelacin y conservacin seminal

113

4.5- Estimacin objetiva del estado de conservacin del banco de

3.7.3- Valoracin seminal despus de la criopreservacin

114

germoplasma mediante sistemas informticos (CASA y Citmetro de flujo)

3.7.4- Descongelacin y estimacin subjetiva de la calidad del semen

114

3.8- Estimacin objetiva del estado de conservacin del banco de

114

germoplasma mediante sistemas informticos (CASA y Citmetro de flujo)

4.5.1- Estimacin de la calidad del semen mediante sistema CASA


4.5.1.1- Evaluacin de la motilidad segn la progresividad del semen

167

167
172

criopreservado

3.8.1- Estimacin de la calidad del semen mediante sistema CASA

115

4.5.2.- Evaluacin de la vitalidad espermtica y grado de apoptosis en el

3.8.2- Evaluacin de la vitalidad espermtica y grado de apoptosis en el

118

semen criopreservado mediante citometra de flujo

semen criopreservado mediante citometra de flujo


3.9- Tratamiento de sincronizacin, induccin de celo e inseminacin artificial

161

4.6- Fertilidad in vivo y gestin del banco de germoplasma para la


120

173

174

recuperacin y multiplicacin de la raza en caso de una catstrofe

3.9.1- Hembras

120

3.9.2- Sincronizacin de celo

121

V. Discusin

181

3.9.3- Inseminacin artificial

121

5.1- Comportamiento sexual

182

3.9.3.1- Machos

121

5.2- Caractersticas seminales

187

3.9.3.2- Hembras

122

5.2.1- Espermatozoides con formas anormales

3.9.4- Diagnstico ecogrfico de gestacin

122

5.3- Anlisis multifactorial de efectos fijos que influyen sobre las

3.9.5- Creacin y mantenimiento del banco de semen

123

caractersticas seminales de toros marismeos

124

5.4- Efecto de factores inherente al semental (peso, circunferencia escrotal),

3.10- Fertilidad in vivo y gestin del banco de germoplasma para la

190
193

199

sobre las caractersticas seminales estudiadas

recuperacin y multiplicacin de la raza en caso de una catstrofe

5.5- Estimacin de la calidad del semen mediante sistema CASA

202

IV. Resultados

127

5.6- Evaluacin de la vitalidad espermtica y grado de apoptosis en el semen

208

4.1 - Comportamiento sexual: etograma y tiempo de reaccin

128

criopreservado mediante citometra de flujo

4.2- Caracterizacin seminal de los sementales Marismeos

130

5.7- Fertilidad in vivo y gestin del banco de germoplasma para la

4.2.1- Estudio descriptivo de las caractersticas seminales

130

recuperacin y multiplicacin de la raza en caso de una catstrofe

142

5.8- Situacin del banco de germoplasma

215

VI. Conclusiones

221

VII. Referencias Bibliogrficas

225

4.2.1.1- Porcentajes de formas anormales


4.3- Anlisis multifactorial de efectos fijos y prueba a posteriori de

212

146

homogeneidad de medias para las caractersticas seminales de toros


marismeos
4.3.1- Volumen del eyaculado

146

4.3.2- Concentracin seminal

149

Tabla N 19. Caractersticas seminales medias para el conjunto de los datos

ndice de tablas
Pag.

141

en funcin del mes

Tabla N 1. Censo bovino espaol distribuido por Comunidades Autnomas

11

Tabla N 20. Anlisis de varianza para la variable volumen del eyaculado

146

Tabla N 2. Pesos aproximados de ejemplares a diferentes edades y sexo

19

Tabla N 21. Anlisis de varianza para la variable concentracin seminal

149

Tabla N 3. Nmero de razas autctonas clasificadas por especie y su estado

35

Tabla N 22. Anlisis de varianza para la variable espermatozoides totales

151

de conservacin

Tabla N 23. Anlisis de varianza para la variable motilidad masal

154

Tabla N 4. Razas autctonas bovinas clasificadas por su estado de

Tabla N 24. Anlisis de varianza para la variable motilidad progresiva

156

36

Tabla N 25. Anlisis de varianza para los espermatozoides vivos

159

Tabla N 5. Puntuacin numrica para la evaluacin global de la libido en toros

76

Tabla N 26. Anlisis de la co-varianza para las variables seminales

162

Tabla N 6. Crioprotectores permeables de bajo peso molecular,

84

estudiadas en funcin de la edad del semental

conservacin y distribucin geogrfica

Tabla N 27. Estadsticos de los parmetros de velocidad y descriptores

crioprotectores no permeables de bajo peso molecular, crioprotectores no

cinemticos del semen criopreservado mediante el sistema CASA

permeables de alto peso molecular


Tabla N 7. Doble tincin empleada para determinar espermatozoides vivos-

108

Tabla N 28. Estadsticos de los parmetros de velocidad y descriptores

Tabla N 8. Parmetros de velocidades medidos por sistema CASA

117

N 541

Tabla N 9. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el

131

Tabla N 29. Estadsticos de los parmetros de velocidad y descriptores

133

134

134

135

136

137

138

139

semental 583 en funcin del ao

muertos, cambios en la integridad de la membrana y cambios tempranos en la

criopreservacin
Tabla N 35. Tasa de fertilidad in vivo en novillas tras el proceso de

semental 575 en funcin del ao


Tabla N 18. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el

174

permeabilidad de la membrana espermtica durante el proceso de

semental 546 en funcin del ao


Tabla N 17. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el

172

criopreservado mediante sistema CASA


Tabla N 34. Doble tincin para la deteccin de espermatozoides vivos

semental 541 en funcin del ao

171

dinmica espermtica
Tabla N 33. Valores medios de los parmetros de progresividad del semen

conjunto de los datos en funcin de ao

Tabla N 16. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el

170

N 583.
Tabla N 32. Anlisis de varianza del efecto de los sementales sobre la

semental N 583

Tabla N 15. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el

Tabla N 31. Estadsticos de los parmetros de velocidad y descriptores


cinemticos del semen criopreservado mediante el sistema CASA. Semental

semental N 575

Tabla N 14. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el

170

cinemticos del semen criopreservado mediante el sistema CASA. Semental


N 575

semental N 546

Tabla N 13. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el

N 546.
Tabla N 30. Estadsticos de los parmetros de velocidad y descriptores

semental N 541

Tabla N 12. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el

169

cinemticos del semen criopreservado mediante el sistema CASA. Semental

conjunto de los datos

Tabla N 11. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el

169

cinemticos del semen criopreservado mediante el sistema CASA. Semental

muertos y porcentajes de morfoanomalas

Tabla N 10. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el

167

140

inseminacin con semen criopreservado

175

Tabla N 36. Tasa de fertilidad in vivo en vacas tras el proceso de

176

ndice de grficos

inseminacin con semen criopreservado


Tabla N 37. Nmero de machos necesarios para la recuperacin de la

Pag.
177

poblacin amenazada
Tabla N 38. Nmero de dosis necesarias para la reconstruccin de la raza a

178

travs de retrocruce
Tabla N 39. Nmero actual de dosis seminales del banco de semen de la
raza Marismea

Grfico N 1. Porcentajes de animales con diferentes colores de capas

18

Grfico N 2. Proporcin global de razas del mundo clasificadas por su estado

29

de riesgo
Grfica N 3. Frecuencias en las manifestaciones de la conducta sexual de los

179

129

sementales durante el cortejo de la hembra


Grfica N 4. Tiempo medio de reaccin de los sementales en presencia de la

130

hembra
Grfico N 5. Porcentajes de formas anormales de los eyaculados para el

143

conjunto de los Sementales


Grfico N 6. Porcentajes de formas anormales de los eyaculados para el

144

semental N 541
Grfico N 7. Porcentajes de formas anormales de los eyaculados para el

144

semental N 546
Grfico N 8. Porcentajes de formas anormales de los eyaculados para el

145

semental N 575
Grfico N 9. Porcentajes de formas anormales de los eyaculados para el

145

semental N 583
Grfico N 10. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para el

147

volumen Seminal en funcin del semental


Grfico N 11. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para el

148

volumen seminal en funcin del mes


Grfico N 12. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para el

148

volumen seminal en funcin del ao


Grfico N 13. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para la

150

concentracin seminal en funcin del semental


Grfico N 14. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para la

150

concentracin seminal en funcin del mes


Grfico N 15. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para la

151

concentracin seminal en funcin del ao


Grfico N 16. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para los

152

espermatozoides totales en funcin del Semental


Grfico N 17. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para los
espermatozoides totales en funcin del mes

153

Grfico N 18. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para los

153

ndice de figuras

espermatozoides totales en funcin del ao


Grfico N 19. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para la

Pag.
155

motilidad masal en funcin del Semental


Grfico N 20. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para la

155

motilidad masal en funcin del mes


Grfico N 21. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para la

156

motilidad masal en funcin del ao


Grfico N 22. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para la

157

motilidad progresiva en funcin del Semental


Grfico N 23. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para la

158

160

espermatozoides vivos-muertos en funcin del ao


Grfico N 26. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para los

Figura N 3. Morfologa del espermatozoide bovino

46

Figura N 4. Corte sagital de una cabeza espermtica de bovino

47

Figura N 5. Parmetros de velocidad determinados por el CASA

62

Figura N 6. Alteraciones fsicas de los espermatozoides durante el proceso

83

microcristales de hielo. Las flechas representan el movimiento del agua o del

Figura N 7. Proceso de recela y coleccin seminal

102

Figura N 8. Proceso del Llenado Manual de las Dosis Seminales

112

Figura N 9. Representacin esquemtica de la rampa de congelacin. El eje

113

de Ordenadas (Y) representa el descenso gradual de la temperatura (C) y el


160

espermatozoides vivos en funcin del mes


Grfico N 27. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para los

25

zoogenticos

crioprotector
158

motilidad progresiva en funcin del ao


Grfico N 25. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para los

21

Figura N 2. Secuencia de actuacin para la conservacin de los recursos

de congelacin y descongelacin. Las estrellas representan cristales y

motilidad progresiva en funcin del mes


Grfico N 24. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para la

Figura N 1. Ubicacin Geogrfica del Parque Nacional de Doana

eje de Abscisa (X) representa el tiempo parcial de cada rampa de


congelacin, as como el tiempo total que dura la congelacin

161

espermatozoides muertos en funcin del mes

Figura N 10. Imagen obtenida del anlisis de la motilidad. Segn su

Grfico N 28. Variacin de la motilidad masal segn la circunferencia escrotal

164

marcados en amarillo son los estticos, los marcados en verde son los

Grfico N 29. Variacin de la concentracin seminal segn la circunferencia

164

medios y los marcados en azul son los lentos

escrotal
Grfico N 30. Variacin de los espermatozoides totales segn la

Figura N 11. Cuadrantes de las sub-poblaciones espermticas sometidas a


165

circunferencia escrotal
Grfico N 31. Variacin del volumen seminal segn la circunferencia escrotal

165

Grfico N 32. Variacin del volumen seminal segn el peso del semental

166

Grfico N 33. Variacin de los espermatozoides totales segn el peso del

166

semental
Grfico N 34. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para el
desplazamiento lateral de la cabeza en funcin del semental

117

velocidad, los espermatozoide marcados en rojo son los rpidos, los

171

tinciones dobles de Ioduro de Propidio y Hemodmero de Etidio

120

Resumen

Abstract

El ganado Marismeo, es una raza autctona espaola en peligro de extincin, se

Marismeo cattle population is an endangered Spanish autochthonous breed; it is also

trata de una raza emblemtica en la Unin Europea y una de las pocas razas ferales

an emblematic breed in the European Unin because this breed is one of the few feral

que existen en el continente, y que por tanto, se explota bajo un estricto sistema

breeds in the continent, and so on, it is bred under a strict extensive system.

extensivo. Como parte del programa de conservacin puesto en marcha, se estn

As a part of the implemented conservation program, works on characterization,

llevando a cabo trabajos para la caracterizacin, conservacin y promocin de la raza.

conservation and promotion of the breed are under development. The main objective of

El objetivo primordial de la presente tesis dentro de la caracterizacin reproductiva es

the present PhD work inside the reproductive characterization of the breed, it is the

la creacin del banco de germoplasma de la raza, con el objeto de asegurar la

creation of the it germplasm bank, to ensure the ex situ in vitro conservation of the

conservacin ex situ in vitro. Para ello hemos dividido el trabajo en siete fases: La

breed. To get it the work has been divided into seven phases: the first was to submit

primera de ella fue someter a los sementales capturados a un estricto rgimen de

the sires caught in wild conditions to an intense regime of adaptation and managing for

adaptacin y adiestramiento para la recoleccin de semen; una segunda fase consisti

semen collection; the second phase consisted in the sire sexual behavior study; in the

en estudiar la conducta sexual de los sementales; en la tercera fase se plante

third phase the knowledge of the natural semen characteristics in the breed was

conocer las caractersticas naturales del semen de esta raza; la cuarta fase determin

planed; the fourth phase determined the direct over the production and quality of the

la influencia de efectos que influyen de manera directa sobre la produccin y calidad

semen; the fifth permitted us to know to effects of some intrinsic factors (weight, age,

del semen; la quinta fase, nos permiti conocer el efecto de algunos factores

scrotal circumference) over the studied seminal characteristics; a sixth phase consisted

inherentes

las

in the objective characterization of the semen quality in the criopreserved material by

caractersticas seminales estudiadas; una sexta fase consisti en caracterizar de

mean of computerized systems (CASA,, Citometry of current); the seventh and last

manera objetiva las calidades seminales del material criopreservado, a travs de

phase had two essential objectives, on one hand to test the In vivo fertility of the

sistemas objetivos informatizados (CASA, Citmetro de flujo); La sptima y ltima

criopreserved ejaculates kept in the semen bank. On the second hand, the disposition

parte tuvo dos objetivos cruciales: en primer lugar, comprobar la fertilidad in vivo de

of a large number of sires and semen samples in the bank to ensure a sufficient level

los eyaculados criopreservados del banco de semen de la raza y el segundo inters,

on genetic diversity in front of a possible crisis.

ha sido, poder disponer de un nmero determinado de sementales y dosis seminales,

Results of our study have shown that the sexual behavior as seminal characteristics

que permitan garantizar unos niveles de diversidad gentica suficientes ante una

are in the ranges of the specie, on another side the influence of fixed effects or the

crisis. Los resultados de nuestro estudio muestran que tanto los parmetros de

spermatic characteristics studied in the present work, resulted highly significant.

comportamiento sexual como las caractersticas seminales se encuentran dentro del

Factors intrinsic to the sires shown as the age has an important influence over the

rango de su especie, por otra parte mencionar que la influencia de efectos fijos

studied variables, while the weight and the scrotal circumference only shown highly

resultaron tener un efecto altamente significativo sobre las variables espermticas

significant effects over the quantitative. Regarding all related to the state of

estudiadas; En los factores inherentes al semental se observa que la edad tiene una

conservation of the criopreserved semen we can ensure its good conditions as was

influencia altamente significativa sobre las variables estudiadas, en cambio, el peso y

demonstrated in the laboratory by the citometry and CASA studies, as in vivo with its

la circunferencia escrotal slo muestran efecto altamente significativo sobre las

use in the experimental artificial insemination of cow. Finally we could say that the

variables cuantitativas; En relacin al estado de conservacin del semen

semen bank is concluded, because 12402 doses from 14 Sires are presently available.

del

semental

(peso,

edad

circunferencia

escrotal)

sobre

criopreservado podemos asegurar sus buenas condiciones de preservacin, as lo


demuestran los estudios de Citometra CASA y las pruebas in vivo llevadas a cabo.
Podemos decir que nuestro banco de semen est concluido, ya que disponemos de un
total de 12402 dosis de 14 Sementales.
1

Introduccin

1.1- Introduccin y objetivos

La vaca Marismea es una raza autctona espaola en peligro de extincin, tal y


como se recoge en el Catlogo Oficial de Razas de Ganado de Espaa, anexo I del
Real Decreto 2129/2008, de 26 de diciembre.

La raza bovina Marismea ha recibido a lo largo de la historia diferentes


denominaciones que hasta la fecha se siguen usando en el habla cotidiana. Hasta
hace no mucho era llamada Palurda o Mostrenca (salvaje, perdida, sin dueo), lo cual
hace referencia a su peculiar forma de vida y a sus caractersticas primitivas (Snchez
Belda, 1984). Se trata de una raza que vive en condiciones de completa libertad,
donde la intervencin del hombre no tiene apenas protagonismo en comparacin con
razas de bovinos sujetas a condiciones de manejo en intensivo e incluso extensivo
comn.

Se trata de una raza emblemtica en la Unin Europea, y una de las pocas razas
ferales que existen en el continente y que, por tanto, se explota bajo un sistema de
extensivo estricto que garantiza los fundamentos ms bsicos de la produccin
ecolgica.

La existencia de esta raza en el Parque Nacional de Doana (en adelante PND)


as como sus condiciones de explotacin se remonta varios siglos atrs. En la
actualidad stas siguen siendo similares (Lazo, 1992). Se sabe que desde el siglo XII,

I. INTRODUCCIN

las Marismas del Guadalquivir han experimentado un tipo de aprovechamiento mixto


cinegticoganadero, y que al menos desde ese siglo el Ganado Marismeo ha estado
sometido a un rgimen de gestin similar al actual (Ojeda 1985; Granados, 1987).

A partir de los aos 80, hasta comienzos de la dcada de los 90, con la puesta en
marcha del Plan Rector de Uso y Gestin del PND, en el que se describe la exclusin
de los aprovechamientos tradicionales en la zona, se establece un ncleo de animales
de la raza gestionado por la Reserva Biolgica de Doana (en adelante RBD).

En adelante se tratan como animales en ganadera extensiva estricta, con unas


condiciones de explotacin compatibles con la conservacin del parque y, por tanto,

Introduccin

Introduccin

una mnima incidencia sobre el ecosistema. Para ello, se establecen cargas ganaderas

Marismea. El segundo tiene una naturaleza ms de transferencia cientfica al sector

limitadas.

ya que implica la solucin de un problema real e inmediato como es la creacin del


banco de germoplasma de la raza para asegurar su conservacin ex situ in vitro,

Las capturas anuales de los animales se basan principalmente en la retirada de los


excedentarios, tareas sanitarias, recogida de datos de las parideras y seleccin de los

inicindolo en base al mantenimiento de una coleccin suficiente de dosis seminales y


toros donantes. Todo ello a travs de los siguientes objetivos especficos:

nuevos candidatos a reproductores.


1.- Caracterizacin del comportamiento reproductivo de los sementales Marismeos
La divisin del parque en terrenos de pasto es un hecho que ha ocasionado
consecuencias al ganado, ya que han quedado aislados varios ncleos, en la EBD, lo

en la estacin de recogida seminal (etograma, tiempo de reaccin), con vistas a definir


un correcto protocolo de entrenamiento y colecta en esta raza tan peculiar.

que en la actualidad se piensa que fue correcto, ya que es ah donde se conservan


los animales con caractersticas ms primitivas y con menor grado de influencia de

2.- Definir las caractersticas generales del semen Marismeo con parmetros

razas exticas y un menor grado de manejo por el hombre.

laboratoriales convencionales.

Es interesante mencionar la falta de atencin cientfica de la que haba sido objeto


la raza, ya que como habamos apuntado anteriormente tiene muchos aos de estar

3.- Valorar la influencia de efectos fijos (Semental, Ao, Mes), sobre las caractersticas
seminales estudiadas, mediante la aplicacin de modelos multifactoriales.

radicada en el PND.
4.- Efecto de factores inherente al semental (edad, peso, circunferencia escrotal),
Como parte del Programa de Conservacin puesto en marcha por la Asociacin de

sobre las caractersticas seminales estudiadas.

Ganaderos en colaboracin con la Estacin Biolgica de Doana, la Diputacin de


Crdoba y el Grupo de Investigacin PAIDI AGR-218 de la Universidad de Crdoba,

5.- Estimacin objetiva del estado de conservacin del banco de germoplasma

se estn llevando a cabo trabajos para la caracterizacin, conservacin y promocin

mediante sistemas informticos (CASA y Citmetro de flujo).

de la raza y sus productos.


6.- Comprobar y cuantificar la capacidad fecundante del semen congelado de la raza
Se han realizando estudios en la caracterizacin gentica de la poblacin, basada
en la utilizacin de marcadores moleculares. Conjuntamente se ha puesto en marcha

en diseos in vivo con aplicaciones en hembras receptoras y comprobacin de los


ndices preez.

la caracterizacin reproductiva de la raza a travs de la creacin del banco de


germoplasma, donde se evalan aquellos sementales que formarn el banco

7.- Utilizar toda la informacin anterior para dimensionar el banco de germoplasma de

definitivo. Por otra parte, se ha realizado la caracterizacin morfolgica de los

la raza de acuerdo a las previsiones extremas de reconstruccin de la raza en caso de

animales en campo. Se est trabajando con la caracterizacin productiva tanto en

catstrofe.

estacin experimental como en rgimen de libertad, esto como paso previo a la


elaboracin de una marca de calidad para sus productos.

8.- Organizar la gestin de colecciones de dosis seminales procedentes de toros


fundadores en un banco de germoplasma de la raza.

Como parte del proyecto emprendido, en la presente tesis nos hemos planteado
dos objetivos genricos. El primero de ellos de naturaleza ms investigadora como es
la caracterizacin

de la fisiologa reproductiva de los sementales de la raza

Revisin bibliogrfica

2.1- La ganadera bovina espaola. Estado actual y contexto

El sector bovino espaol, en su doble aptitud crnica y lechera, ha constituido,


histricamente, uno de los pilares de la ganadera nacional, estando adems
ntimamente ligado al tejido social del medio rural.

La tendencia vivida en los ltimos aos ha supuesto un decidido impulso al sector,


tanto desde el punto de vista cuantitativo como cualitativo, lo cual se ha acompaado
de una progresiva profesionalizacin de los ganaderos, aun en detrimento de su
nmero y de una constante diferenciacin en su orientacin productiva.

La capacidad del ganado bovino de aprovechar recursos pastables aportando


carne, leche, cuero y trabajo, ha sido aprovechada por el ser humano desde los
albores de la humanidad. As, todava en el mundo actual y en Espaa, coexisten
sistemas de produccin tradicionales basados en el empleo de razas autctonas
adaptadas al medio con modernas formas de produccin intensiva con las ms
avanzadas tecnologas, difundidas por todo el planeta.

El censo actual de ganado bovino se sita en 6.082.442 animales (MARM, 2009b),


sobre una cifra aproximada de 1300 millones de reses a nivel mundial, con
independencia de mayores o menores variaciones interanuales en los distintos
estados miembros. La cabaa vacuna sita tradicionalmente a Espaa como cuarto
pas de la Unin Europea (-grupo de los 25 pases) emparejado con Italia y por

II. REVISIN BIBLIOGRFICA

encima de Irlanda y Polonia- en nmero de bovinos (MARM, 2007).

Tanto el nmero total de bovinos como su orientacin zootcnica se encuentran


influidos por gran nmero de factores. Dentro de los principales, y sin afn exhaustivo,
podran enmarcarse los siguientes:
La entrada en vigor de la reforma de la Poltica agrcola comn del 2003 en
Espaa el 1 de Enero del 2006.
El impacto de la llegada en mayo de 2004 de 10 nuevos socios
comunitarios a la Europa de los 15 complementado con la adhesin, en
enero de 2007, de Bulgaria y Rumana-, destacando algunos de ellos como
importantes productores.

Revisin bibliogrfica

La superacin de la crisis de la encefalopata espongiforme bovina, con una


recuperacin del consumo y de la confianza de los consumidores, gracias

Revisin bibliogrfica

garanta han sido establecidas clasificaciones y calificaciones a nivel de mercado. La


ms conocida y prestigiosa es la Indicacin Geogrfica Protegida (IGP).

en gran medida a una reaccin legislativa sin precedentes en la higiene y la


Finalmente, es de destacar la existencia de un voluminoso catlogo de razas

produccin animal.
La creciente importancia de las transacciones comerciales, como de las

autctonas, que por su valor ecolgico, su vinculacin al territorio y al paisaje, y su

relaciones internacionales que las promueven en un mundo globalizado,

capacidad para generar productos adaptados al mercado, resultan destacables,

tanto de forma multilateral, en el seno de la Organizacin Mundial de

cubriendo as los grandes pilares del desarrollo sostenible.

Comercio, como bilateral, con los principales demandantes y productores


2.1.2- El vacuno de leche

del mundo.
2.1.1- El vacuno de carne

Tradicionalmente situado en las zonas de grandes pastos naturales, cada vez


adquieren mayor importancia ncleos interiores, prximos a los grandes centros de

El bovino de carne espaol es un sector heterogneo, fruto de la diversidad de

consumo, apoyados en unos menores costos de produccin (la alimentacin

condiciones climticas y orogrficas en que se integra. As, las zonas adehesadas del

fundamentalmente). A lo largo de los ltimos aos, se ha experimentado un marcado

occidente espaol albergan el mayor nmero de reproductores de razas crnicas,

descenso en el nmero de explotaciones, si bien acompaado de un progresivo

coexistiendo razas espaolas con otras forneas de especializacin crnica. La

aumento en el tamao y cuota de produccin, la profesionalizacin y la rentabilidad

cornisa cantbrica y el norte de nuestro pas, de orientacin productiva lechera,

econmica de las mismas.

generan gran cantidad de terneros mamones para su posterior cebo, que se realiza en
el resto de la Pennsula, desligado de la tierra y en granjas prximas a los grandes
centros de consumo.

El bovino lechero espaol se sita principalmente en el norte peninsular, gracias a


la abundancia de lluvias y, por ello, de recursos pastables. La produccin de leche se
realiza, casi en su totalidad, mediante el empleo de animales de la raza Frisona,

En el sector crnico, dos mandatos influyentes marcan la pauta sobre la que


pretende desenvolverse la produccin y el mercado de la carne bovina, como son: la

altamente seleccionada y especializada. Ello ha permitido aumentar enormemente los


rendimientos productivos por individuo.

calidad y trazabilidad de sus productos.


La necesidad de adaptarse a un mercado basado en un sistema de cuotas de
En el rea productiva, la calidad ha sido la notable mejora selectiva registrada en

produccin que ajusta la oferta a la demanda, ha influido considerablemente en una

las razas autctonas. Unas porque lograron plenamente la especializacin y reflejan

disminucin del nmero de animales dedicados a la produccin lechera y la

cotas similares a las ms cualificadas, y otras por su papel en los cruzamientos.

reconversin zootcnica del ganado hacia animales de aptitud crnica, de manera casi
ininterrumpida desde la entrada de Espaa en la Unin Europea.

En el campo comercial, el mercado est suficientemente abastecido de protenas


animales, con precios razonables, procedentes de otras especies domsticas (cerdo,

2.1.3- Distribucin del censo bovino Espaol

pollo), de forma que el vacuno no tiene otra salida que la calidad, en la cual se
demandan mecanismos que la avalen. stos no son otros que la trazabilidad o

A continuacin, se presentan los resultados de la Encuesta Nacional de ganado

cmputo informativo de su origen, tratamiento y particularidades culinarias. Para su

bovino por Comunidad Autnoma, correspondiente a los aos 2008 y 2009. Los datos
de la tabla N 1 reflejan que 3 Comunidades Autnomas representan casi el 50%

10

Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

(48,65%) del censo nacional, encabezadas por Castilla y Len y seguidas, segn

Brock, 1999). Dichos bvidos salvajes tenan un tamao superior al de sus derivados,

orden de importancia, por Galicia y Extremadura.

estimndose una alzada prxima a los dos metros en los machos y algo menor en las
hembras. En su expresin corporal destacaba la exagerada amplitud torcica,

Son estas mismas Comunidades autnomas y en el mismo orden, las que

motivada entre otras causas por el gran desarrollo de las apfisis espinosas de las

contienen tambin ms del 54% (54,9%) del total nacional de vacas. Sin embargo, en

vrtebras dorsales que segn Adametz (1943), citado por Laguna (2001), eran muy

vacas de ordeo es Galicia la que encabeza el censo nacional con el 40,8%, seguida

largas tanto absoluta como relativamente.

por Asturias y Castilla y Len, con un 10% ambas.


El otro bovino salvaje, que merece especial atencin, es el llamado de cuernos
Tabla N 1. Censo bovino espaol distribuido por Comunidades Autnomas.
(MARM 2009)

cortos que se identifica como el Bos brachiceros. Se presume que procede tambin de
los territorios asiticos, de los que se desplaz a la parte oriental del norte de frica.

Ganado Bovino por CCAA

Total Animales ao 2009

Total Animales ao 2008

En opinin de diferentes autores, los rebaos de cuernos cortos y cuernos largos se

GALICIA

950.938

985.227

mezclaron entre s en distintas pocas, originando otras formas diversas. Sealan,

P. ASTURIAS

395.166

405.406

adems, que el grupo de cuernos largos alcanz Egipto sobre el ao 5000 a.e.c.

CANTABRIA

264.909

298.561

(antes de la era comn), mientras que el de cuernos cortos estaba presente en el 2700

PAS VASCO

151.801

155.443

y el 2500 a.e.c, empujando a los primeros hacia la Pennsula Ibrica.

NAVARRA

107.486

111.818

LA RIOJA

35.050

41.584

En la india se domestic una subespecie local de Auroch que dio lugar a ganado

ARAGN

273.627

267.659

de hombros giboso, orejas grandes y gran papada, con vrtebras de formas distintas

CATALUA

545.354

479.017

adems de un cromosoma Y caracterstico. Este ganado se denomina Ceb o (Bos

BALEARES

26.223

25.793

indicus) y, actualmente, son tpicos de ambientes tropicales y subtropicales. El ganado

CASTILLA Y LEN

1.199.961

1.213.931

que no tiene giba se origin en algn otro sitio y se conoce como ganado bovino (Bos

MADRID

112.152

90.731

taurus). A pesar de sus diferencias genticas, el vacuno y el ceb pueden cruzarse

CASTILLA-LA MANCHA

462.116

456.586

libremente. Por otro lado, Loftus y cols., (1994) asegura que Bos taurus y Bos inducus

C. VALENCIANA

55.085

52.104

estn consideradas como subespecies, ya que ha sido probado a nivel molecular que

R. DE MURCIA

57.095

60.162

todas las razas europeas y africanas de bovinos domsticos, ya sean de origen

EXTREMADURA

808.458

847.798

cebuno o taurino, son de una misma lnea mitocondrial, en tanto que las razas indias

ANDALUCA

618.332

510.664

son de otra lnea. Estudios similares, utilizando el ADN del cromosoma Y, muestran

CANARIAS

17.689

17.677

los antecedentes ceb de las poblaciones de bovinos africanos con cuernos. La

Espaa

6.082.442

6.020.161

interpretacin de estos resultados es que los cebes africanos se han desarrollado a


partir de un origen hbrido, siendo la introduccin de la sangre ceb, principalmente, a

2.2- Origen del ganado bovino domstico

travs de los machos. Hay, entonces, algunas pruebas de dos domesticaciones


separadas, sin duda de dos subespecies diferentes de Aurochs. Merece la pena

Los ancestros salvajes del ganado bovino eran poblaciones locales de uros o
Aurochs (Bos primigenius). Estos animales probablemente se domesticaron de forma
independiente hace unos 9.000 aos en el oeste de Asia, frica, China e India (Clutton

11

destacar que tambin se domesticaron otras especies bovinas salvajes, como el Bos
laranicus (Banteng), Bos gantus (Gaus) y el Bos mutus (Yak), las cuales se mezclaron
genticamente con Bos indicus y Bos taurus.

12

Revisin bibliogrfica

En estudios recientes con muestras de ADN procedentes de fsiles de Uro,

Revisin bibliogrfica

2.3- Origen del bovino espaol

recogidas en emplazamientos Arqueolgicos britnicos y comparadas con muestras


de ganado Bovino actual, se muestra que los especmenes fsiles eran muy distintos a

En cuanto a la ascendencia de los tipos actuales del ganado vacuno domstico,

los contemporneos, por lo que ahora se confirma que el vacuno europeo actual

existen una gran diversidad de teoras contradictorias que pueden dividirse en dos

desciende del vacuno trado del Cercano Oriente por los primeros ganaderos, por lo

grandes grupos; las que admiten una ascendencia comn de todas las formas

que no son el resultado de la domesticacin local de los Uros (Troy y cols., 2001).

actuales (teoras monofilticas), y las que admiten orgenes diversos (polifilticas). La


primera admite la procedencia absoluta del ganado vacuno actual a partir del Uro

2.2.1- Clasificacin en la escala Zoolgica

Europeo (Bos primigenius). Por el contrario los que defienden la segunda teora
admiten dos formas originarias de los bovinos domsticos, Bos primigenius y el Uro

Los bovinos domsticos pertenecen al orden Artiodctilo, Suborden Rumiantes,

braqucero.

Familia Bovidae y gnero Bos. A la que pertenecen tambin otros animales


domsticos como los yaks, bisontes y bfalos, que han jugado un rol importante desde
el punto de vista econmico, cultural y religioso (Ritz y cols., 2000).

En lo que respecta a la Pennsula Ibrica, la determinacin de los ancestros


bovinos dista mucho de estar determinada, por cuanto los criterios de los
tradicionalistas responden bsicamente a hiptesis u opiniones deductivas inspiradas

Dentro de los Bvidos se distingue la Subfamilia Caprinae, que incluye las ovejas y
las cabras como gneros diferenciados (Capra y Ovis) pero prximos, existiendo otros

en los comportamientos culturales de los pueblos, como tambin en las formas de


interpretar los insuficientes hallazgos (Laguna, 2001).

gneros que se pueden considerar intermedios entre los dos (Pseudois, Hemitragus,
Ammotragus).

Diferentes autores espaoles admiten la intervencin de formas bovinas primitivas


encuadradas en grupos de perfil recto convexo y cncavo. Adems coinciden en la

Actualmente se reconocen dos especies del gnero Bos: Bos taurus o ganado
taurino y Bos indicus o ganado ceb, que se caracteriza por tener giba.

existencia de bovinos primitivos y autctonos. El Bos ibericus se formara de otras


poblaciones primitivas, permaneciendo aisladas durante largo tiempo en el territorio
peninsular, pero al que cada uno de los autores asigna un origen distinto. Herrera

Reino Animal

(1980) seala, como condiciones propicias para tal aislamiento, la separacin definitiva

Tipo Cordados

entre la Pennsula Ibrica y el norte de frica, que pudo suceder entre el IX y VI

Clase Mamferos

milenio (a.e.c.), considerando que desde entonces, hasta que llegaron a nuestro

Subclase Terios

territorio las primeras corrientes humanas con los bvidos domsticos, no se alcanz

Orden Artiodctilos

la cultura necesaria para su domesticacin, mediando un largo periodo de tiempo en el

Suborden Rumiantes

cual se pudo configurar en bovino autctono.

Familia Bvidos
En esa misma lnea, Fernndez-Sanz y cols. (2006) mencionan que la Pennsula

Subfamilia Bovinos
Gnero Bos

Ibrica situada en el sur de Europa, prxima a frica, constituye una regin que ha

Especie Bos Taurus Bos Indicus

podido recibir influencia tanto de poblaciones bovinas provenientes del norte de


Europa, como de otras provenientes de frica. A pesar de que tradicionalmente la
influencia de las poblaciones africanas se asociaba a la llegada de los cartagineses
primero (unos 200 aos a.e.c.), y a la de los bereberes despus, recientemente se han

13

14

Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

encontrado en la Pennsula Ibrica (concretamente en Atapuerca), restos de bovinos

terrenos, propiciara, sin duda, que se acentuara progresivamente su asilvestramiento

de la Edad de Bronce (3800 aos), cuyo origen es claramente africano.

(Caldern 2004).

La influencia africana sobre algunas de la razas bovinas de la Pennsula Ibrica ha

Tambin se habla de la vaca Mostrenca del PND, como una poblacin formada

sido corroborada recientemente en varios trabajos utilizando ADN mitocondrial. En la

probablemente a partir de los animales que fueron embarcados rumbo a Amrica y

raza de lidia aparece esta influencia clara del bovino africano, con una intensidad muy

que usaron las Marismas como zona de concentracin debido a su proximidad a los

diferente entre las distintas poblaciones.

principales puertos martimos (Rodero y cols., 1994). Cabe sealar la similitud


morfolgica entre el ganado marismeo y el criollo americano (Lazo, 1992).

2.4- Origen del bovino marismeo


Por lo tanto, se puede decir que la presencia de ganado en el PND es un hecho
Para Snchez Belda (2002), la raza Marismea no tiene ascendencia filogentica

histrico; si bien la ausencia de barreras artificiales hasta hace unos aos, inclina a

conocida, aunque se supone que est ligada a las primeras formas derivadas de Uro

pensar en un origen multirracial o ms bien multipoblacional, ya que cuando se form

salvaje, diversificado en el Bos taurus primigenius y ste en el Bos taurus macroceros,

no estaba claro el concepto de raza tal y como lo conocemos hoy da.

biotipo comn del sur europeo. A partir de ah se form el Bos taurus tartensus, que es
el ancestro directo de la raza Marismea. Constituyen unos de los bovinos de mayor

2.5- Descripcin de la raza Marismea

celebridad por su primitivismo y bravura.


El nico morfotipo propuesto hasta el momento para la vaca Marismea procede
Histricamente, como hemos hecho alusin anteriormente, la raza bovina

de Snchez Belda (2002), que describe tambin las caractersticas generales de la

Mostrenca ha estado presente en el parque nacional de Doana (en adelante PND)

raza, adems de las importantes aportaciones de Caldern (2004). Ambas

durante siglos. En todo este tiempo, tanto las condiciones de vida como las prcticas

descripciones se dan a continuacin tal como las exponen sus autores.

de manejo de los animales han sido las mismas.


2.5.1- Caractersticas generales
Actualmente, el

ganado presenta un tipo de conformacin caracterstico de

animales primitivos, quiz similar al que ha presentado durante siglos.

Los animales de la raza Marismea o Mostrenca son ortoides, eumtricos a


elipomtricos, mesolineos a sublongilineos, de poca masa y menos hueso. Capa

Snchez Belda (2002) comenta que histricamente, esta raza es propia de un

predominante colorada aunque son tambin relativamente comunes las negras, y

bovino salvaje para el cual no hay testimonio de su domesticacin, y que durante

menos las crdenas y jaboneras. Existen, as mismo, los berrendos de todos estos

siglos fue tenido como una res de caza mayor (al igual que el Uro en

pelos en proporciones menores. La arquitectura corporal responde a la imagen de un

Europa) hasta nuestros das, que est en el mismo estado, aunque dedicado a la

tipo primitivo de lneas abiertas y predominio del tren anterior.

produccin de carne.
Acusadamente rsticos, fuertes y resistentes en un medio francamente
Garca Dory (1992) sostiene que es muy probable que la raza Marismea se haya

disgensico, presentan fondo constitucional y hbito temperamental igual al de los

ido constituyendo en las Marismas y Cotos, a partir de bovinos cimarrones

ungulados (Ciervo, Gamo y Jabal) con los que convive. Quiz sean estos ltimos los

procedentes de vacadas que venan a pastar en estas reas de las que se separaran

rasgos ms caractersticos a la hora de definir la raza (Caldern, 2004), al igual que lo

o perderan de su hato. La vasta rea de pastoreo, as como la despoblacin de los

15

16

Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

es la bravura en el toro de Lidia, pues la Marismea como aquel, presenta pelos

regin dorso lumbar recta y no muy musculada, grupa algo inclinada con sacro

diversos y varios tipo de encornadura.

realzado y cadera deprimida. Cola de nacimiento adelantado, pegada entre squiones


largos y con generoso borln. Pecho proporcionado; trax alargado y manifiestamente

Esta raza al estar en un espacio de gran valor ecolgico y no estar sometida a

profundo; vientre no muy abultado para el rgimen alimenticio que tiene.

manipulacin, ni ella ni su medio, es fcil buscar el beneficio ganadero en sus


producciones de tipo ecolgicas (carnes, pieles, etc.).

2.5.2.4- Color: El color de la capa es muy variable (Caldern, 2004). Predomina el rojo
uniforme aunque son tambin relativamente comunes el negro y menos el crdeno y el

2.5.2- Morfotipo de la raza

gris o jabonero. (grfico N 1).

Suele presentar manchas blancas en las zonas

inferiores del tronco (la barriga blanca es muy frecuente), y ascender sobre el mismo
Con las justificadas reservas consecuentes, la morfologa regional responde a la
caracterizacin siguiente:

en forma de salpicaduras. Son relativamente comunes los berrendos de todos estos


pelos. Tambin es relativamente frecuente la decoloracin periocular (ojos de perdiz),
as como los ejemplares ojinegros o carinegro y la cara canosa. Algunos animales

2.5.2.1- Cabeza: Pequea, de testuz despejado largo y recto. Frente plana o algo

presentan, as mismo, orla alrededor del morro (bociclaros).

excavada y cara corta. Cuernos largos, finos, nacen por encima de la lnea del testuz
dirigindose hacia arriba en forma de arco de convexidad externa, por lo que en su
conjunto dan imagen de media luna, perfectamente contrastada en la mayor parte de

Grfico N 1. Porcentajes de animales con diferentes colores de capas


(Caldern, 2004).

los machos.
50%

Segn Caldern (2004) la hembras presentan ms variaciones tanto en la forma

45%

como en la apertura y en la inclinacin sobre la horizontal; con la edad el crecimiento

40%

hace rotar el tercio distal hacia atrs y hacia afuera, siendo bastantes comunes las

35%

formas en lira ms o menos abierta y las Playeras, es decir muy planas, abiertas e

30%

inclinadas hacia atrs; el color suele ser blancos o nacarados, con las puntas

25%

levemente sombreadas. Orejas grandes y ovales, si bien frecuentemente desfiguradas

20%

por las incisiones y mutilaciones del marcado de los propietarios. Ojos a flor de cara

15%

con iris invariablemente negro intenso. Morro recogido de color sonrosado, pizarra o

10%

sonrosadopizarra.

5%
0%

2.5.2.2- Cuello: Corto, de abundante papada, discretamente enmorrillado en los

CO

BC

NE

BN

CR

JA

BJ

COLORES DE CAPAS

machos adultos.
2.5.2.3- Tronco: Armnico y profundo. Su silueta denuncia el aleonado o predominio

CO: Colorada, BC: Berrenda en colorada, NE: Negra, BN: Berrenda en negra, CR: Crdena, JA:
Jabonera, BJ: Berrenda jabonera.

del tercio anterior en los toros, y la variante cuesta abajo o bajo de agujas en las

2.5.2.5- Extremidades y aplomos: Cortas bien aplomadas, con regiones superiores

hembras, que tambin suele presentarse en menor proporcin que en los machos, es

descarnadas. Pezuas pequeas unidas y fuertes de color ambarina.

decir, lnea superior inclinada de atrs hacia delante y de arriba abajo. Cruz elevada,

17

18

Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

2.5.2.6- Piel, pelo y mucosa: La piel es gruesa y se le atribuye cierto grado de

La actitud productiva de esta raza es la crnica (aprovechamiento a partir de

motilidad autnoma. Pelo corto, sentado y tupido; abundante en el pabelln auricular.

terneros), aunque no deben esperarse altos rendimientos de produccin ya que est

No tiene flequillo pero si abultado borln. Mucosas sonrosadas ligeramente

sometida a las estrictas normas de capacidad de carga que tiene asignadas para

oscurecidas (lo que se ha llamado sonrosado-pizarra) o pizarra.

pastar, esto ha ocasionado que la comercializacin de su carne sea exclusivamente en


zonas prximas a su explotacin.

2.5.2.7- Formato y apariencia


La actitud productiva de esta raza es la crnica (aprovechamiento a partir de
Los datos que reporta Rodrguez Chico (2003) arrojan pesos medios para los

terneros), aunque no deben esperarse altos rendimientos de produccin. Est

machos adultos de alrededor de 450 kg, pudiendo rondar los 700 kg los ejemplares

sometida a estrictas normas de capacidad de carga para la asignacin de pastos, lo

mayores (tabla N 2). Las hembras son menores que los machos, con un peso medio

que ocasiona que sus censos no pueden aumentarse dentro del PND.

para las vacas adultas de 400 kg, pudiendo llegar hasta los 500 kg. La alzada media a
la cruz de las hembras adultas es de 127 cm, y de 139 cm en los machos, siendo de
ms alzada los individuos que pastan en zonas de marismas que los del monte.

Las operaciones de manejo prcticamente se limitan a dos aspectos en particular:


En primer lugar, al marcado de las reses, con la modalidad a fuego (representado
por una cabeza de lince en el ganado de la EBD), aunque antiguamente se practicaba

Tabla N 2. Pesos aproximados de ejemplares a diferentes edades y sexo.


(Rodrguez Chico, 2003).

el marcaje por cortes del pabelln auricular, modernamente sustituido por el crotalado
(obligatorio para controles sanitarios y administrativos).

PESO (KG)
EDAD (MESES)

HEMBRAS

MACHOS

El segundo aspecto son los controles sanitarios que se basan, segn la normativa,

12 24

Entre 180 y 250

200 275

en el anlisis de la totalidad de los animales de la explotacin y el saneamiento, es

24 36

Entre 250 y 325

275 375

decir, la eliminacin fsica de los que resultan positivos. Para el caso en particular de la

36 48

Entre 325 y 400

375 450

tuberculosis, se procede a realizar, segn normativa, dos saneamientos cada 42 das;

> 48

Entre 400 y 500

450 700

dichas labores implican, en cierto sentido, un esfuerzo maysculo, ya que reunir a


todos los animales es una tarea casi imposible. Cabe destacar, a este respecto, el
hecho de la poca aplicacin que tiene dicha ley, ya que se estn eliminando animales

2.5.3- Explotacin y manejo

serolgicamente positivos sin tener en cuenta que el reservorio de dichas


El ganado de la Reserva Biolgica vive totalmente en libertad, en un rea de 6.700

enfermedades est en la especies salvajes como ciervos y gamos, con los cuales el

hectreas, sin que ninguna barrera fsica ni ningn tipo de control interfieran sus

ganado marismeo convive, por lo que consideramos que es sta una de las causas

movimientos. Durante mucho tiempo, la nica intervencin humana sobre este ganado

para que la poblacin disminuya.

se limit a la captura de los becerros aojos. No se proporciona alimentacin


suplementaria ni tampoco cuidados veterinarios. Esta raza tiene una importancia

La alimentacin descansa totalmente en los recursos naturales, con la

ecolgica por ser el nico animal domstico que mantiene una convivencia pacfica

particularidad de que incluye plantas acuticas. Si stos fallan por sequas o

con la naturaleza de un parque nacional de la importancia de Doana.

inundaciones se saca el ganado del parque, ya que no est permitido introducir


raciones de sustitucin o complementarias.

De acuerdo con Snchez Belda (2002), la explotacin de la raza Marismea ofrece


gran semejanza con el rgimen de vida de los ungulados con los cuales convive.

19

20

Revisin bibliogrfica

La reproduccin es nicamente por monta natural y bajo la ley del semental ms


fuerte; tiene marcado carcter estacional, coincidiendo con el mejor momento

Revisin bibliogrfica

(figura N 1). El registro auxiliar y registro de nacimientos suman en total 800


ejemplares segn datos proporcionados por la asociacin.

vegetativo de la hierba.
Aunque presenta dificultades debido a cruzamientos y mestizajes, en la raza
Figura N 1. Ubicacin Geogrfica del Parque Nacional de Doana.

Marismea se han iniciado labores de conservacin con alto rigor cientfico, dado el
profundo inters por parte de los ganaderos as como la propia Administracin.
(MARM 2009).

2.5.5- Programa de conservacin de la raza bovina Marismea

La raza Mostrenca o Marismea es un fenmeno destacado dentro de la


Produccin Animal Espaola, ya que es la nica entidad racial que se explota en
rgimen de asilvestramiento. Esta peculiaridad, por un lado, la hace un exponente de
la produccin natural y ecolgica de carne de bovino, y por otro, le confiere un lugar en
el extraordinario ecosistema del Parque Nacional de Doana y su periferia, donde ha
demostrado desde hace muchos siglos una completa sostenibilidad.

En el ao 2004, nuestro grupo de investigacin PAIDI AGR-218 de la Universidad


de Crdoba, pone en marcha el proyecto de conservacin de la raza titulado:
Caracterizacin Gentica y Morfolgica de la Raza Bovina Marismea y Control de la
Endogamia con el Uso de Semen Criopreservado (INIA RZ 2004-00022-00-00). En el
trabajo propuesto se describen las principales actuaciones en el programa de
conservacin, el cual est enfocado en cuatro vertientes: Caracterizacin Gentica,
Productiva, Morfolgica y Reproductiva. (Delgado y cols., 2001, Vallecillo y cols.,
2005).

2.5.4- Situacin actual y perspectivas

La Asociacin Nacional de Criadores de Ganado Marismeo se fund con el


objetivo de mejorar y promocionar la raza. Es responsable de la llevanza del libro
genealgico la propia asociacin, la cual recibe ayudas del Ministerio as como de la
Consejera de Agricultura y Pesca de la Junta de Andaluca.

Actualmente, el nmero de efectivos esta en torno a los 1650 ejemplares (registro


fundacional), repartidos en 77 ganaderas, de las cuales 73 pastan en el PND, 3
ganaderas en otras comarcas de Huelva, y slo una se encuentra en Jerez, Cdiz

21

2.5.5.1- Caracterizacin gentica

En relacin a la caracterizacin gentica basada en marcadores moleculares,


podemos decir que presentan muchas ventajas como herramienta indispensable en
los estudios genticos. Las ventajas de los microsatlites se basan en que poseen
elevado grado de polimorfismo, herencia mendeliana, codominancia y facilidad de
identificacin. Una de las principales utilidades de este tipo de marcador, es la
posibilidad de estimar los niveles de variabilidad gentica dentro de las poblaciones y
analizar las relaciones genticas existentes entre las mismas. Este tipo de estudio es

22

Revisin bibliogrfica

de gran importancia para realizar estimaciones de la diversidad gentica y de la

Revisin bibliogrfica

2.5.5.3- Caracterizacin morfolgica

consanguinidad existente en poblaciones de animales domsticos en peligro de


extincin. Durante los ltimos aos, se han realizado muchos estudios que han

La caracterizacin morfolgica se basa en la obtencin de promedios de la

utilizado los microsatlites para anlisis filogenticos, concluyendo que, con un buen

poblacin para una serie de caractersticas externas de naturaleza cuantitativa, como

nmero de loci investigados y con apropiadas tasas de mutacin, los microsatlites

el peso, permetro torcico, alzada a la cruz y dimetros. Esto se realiza sobre los

pueden dar una muy buena aproximacin de la filogenia (Takezaki y Nei, 1996).

miembros de toda la poblacin, cuando sea posible, o a travs de muestras


estadsticamente representativas. Tambin es importante tomar nota de algunas

Dentro de los alcances de dicho proyecto, podemos mencionar los datos


publicados por Martnez y cols. (2005) sobre la caracterizacin gentica de la raza.

caractersticas externas de tipo cualitativo, como son: color de capa y mucosas, forma
de cuernos, perfiles ceflicos, etc.

Dicho trabajo se llev a cabo a partir de muestras de 340 animales, utilizando 26


microsatlites de ADN recomendados por la FAO para estudios de biodiversidad

Mediante la caracterizacin morfolgica se pretende, en primer lugar, ofrecer al

bovina. Pudiendo concluir que se ha conseguido determinar el perfil gentico de la

sector una herramienta bsica para la gestin de la raza, como es un patrn racial

poblacin, herramienta til para la gestin del libro genealgico y una posible

actualizado y un morfotipo vlido. Si bien, la estructura convencional de los animales

trazabilidad racial de sus productos.

est sobradamente descrita y reconocida oficialmente.

En estudios pormenorizados (Anlisis Bayesiano para asignacin multilocus) sobre

En relacin a los avances obtenidos en los tres aos de estudio de este apartado,

la relacin gentica que existe entre la raza Marismea y dems razas aledaas a su

podemos concluir que el patrn morfolgico obtenido en los animales integrados en el

entorno (Quiroz y cols., 2007), se pudo concluir que se trata de una joya gentica, ya

clster gentico principal, no difiri estadsticamente del patrn racial en uso, por tanto,

que no tiene influencia de razas cercanas geogrficamente y presenta una gran

no se ha propuesto ninguna modificacin del mismo.

originalidad.
2.6- Conservacin de la diversidad de los animales domsticos
2.5.5.2- Caracterizacin productiva
2.6.1- Conservacin de los recursos zoogenticos
La caracterizacin productiva se basa en la obtencin de los valores promedios
raciales para las distintas variables de inters econmico que se expresan en los

La conservacin de los recursos zoogenticos es vista, a veces, como algo esttico,

animales. En este caso, son evaluados los caracteres crnicos ligados a la

menos dinmico de lo que en realidad demandan las poblaciones. En muchos casos

productividad, como son los pesos y crecimientos a distintas edades, la calidad de la

es considerada como la preservacin de poblaciones animales que en la actualidad no

canal y calidad de carne, tanto en rgimen extensivo como intensivo. En estudios

tienen una utilidad concreta, o simplemente como almacenamiento de semen y/o

preliminares de Nogales (2009), sobre las curvas de crecimiento de la raza Marismea

embriones. Cabe destacar la imperante necesidad de activar acciones que conduzcan

en cebadero convencional, se apunta de manera general una clara diferencia de

a la utilizacin sostenible de los mismos, como parte de la estrategia para su

comportamiento del crecimiento entre animales Marismeo y otras razas, permitiendo

preservacin.

concluir claras diferencias en el modelo de crecimiento de la Marismea,


probablemente debidas a siglos de seleccin en ambiente natural. La diferenciacin

La conservacin de los recursos zoogenticos es la puesta en marcha de todas las

del comportamiento en el crecimiento sugiere el camino de una diferenciacin de sus

acciones necesarias para garantizar la adecuada gestin de los mismos, para poder

productos con la originalidad que estos poseen.

ser utilizados el mximo de tiempo posible y poder brindar beneficios sustentables

23

24

Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

para las futuras generaciones (Scherf, 2000). La conservacin de los recursos

2.6.2- Importancia de la conservacin en la diversidad de los animales

zoogenticos animales debe incluir las estrategias, planes, polticas, y acciones

domsticos

emprendidas para asegurar la diversidad de los recursos zoogenticos. Para Henson,


(1992), la conservacin de estos recursos es para el mantenimiento de la
alimentacin, produccin agrcola productividad ahora y el futuro.

Desde los albores de la civilizacin, el hombre ha dependido del ganado domstico


para su supervivencia y desarrollo (Henson, 1992). Histricamente, los animales han
sido utilizados como fuerza de trabajo, transporte, vestimenta, abonado de sus

Todas estas acciones deben pasar previamente por la identificacin y

cultivos, defensa, guarda, compaa y alimentacin. Por muchos siglos, la evolucin y

caracterizacin de los recursos disponibles. Solo as, se pondrn en marcha

las necesidades de los humanos, en cada momento histrico, han producido

estrategias que conduzcan a su mejora y utilizacin sostenible, y aseguren el equilibrio

combinaciones innumerables de genes que han dado la oportunidad de originar razas

entre el aumento de la produccin y el mantenimiento de la diversidad gentica.

idneas para determinadas condiciones. Es por ello que hoy en da encontramos una

(Luque y Cardelino, 2007). Su sabia gestin radica en los siguientes pilares

ingente cantidad de razas.

fundamentales: la caracterizacin racial fenotpica (basada en sus caracteres


morfoestructurales, morfolgicos y fanerpticos) y gentica (ADN nuclear y
mitocondrial), y la caracterizacin de su sistema de cra (figura N 2).

Las actividades de conservacin de los recursos genticos animales se haban


limitado por lo general a la vida silvestre (UNEPD, 1995). Sin embargo, la produccin
sostenible de productos animales en los trpicos depende necesariamente del ganado

Figura N 2. Secuencia de actuacin para la conservacin de los recursos

autctono, sobre todo a causa de su capacidad de adaptacin, y a las exigencias

zoogenticos (Luque y Cardelino. 2007).

biticas y abiticas locales. Una de las principales tareas es la conservacin de la


diversidad gentica encontrada en razas autctonas de una especie determinada
(ganado vacuno, ovejas, cabras, cerdos, pollos, etc.), y en especies silvestres
emparentadas. La diversidad gentica de los animales domsticos comprende la
variabilidad entre las especies y dentro de ellas, as como en las especies silvestres
emparentadas.

El hombre utiliza unas 40 especies de animales como ganado domstico para


satisfacer sus necesidades de alimentacin, ropa, traccin, etc. Dentro de estas
especies existen un total de 5000 razas conocidas como recursos genticos animales.
Se estima que ms del 30 % de las razas estn en peligro de extincin, y la inmensa
mayora en los pases en vas de desarrollo, debido a una utilizacin ineficaz de estas.

Una raza est amenazada cuando sufre algn tipo de presin modificadora, que
afecta a sus probabilidades de continuar existiendo indefinidamente o mantener un
nmero de individuos suficiente para preservar las caractersticas genticas que la
distinguen de otras poblaciones. El trmino amenaza, es de carcter general y tiene
connotaciones precisas como vulnerable, en peligro y crtico. Dichos aspectos los
abordaremos ms adelante.

25

26

Revisin bibliogrfica

Durante los ltimos aos, la conservacin de razas y poblaciones ha cobrado un

Revisin bibliogrfica

2.6.2.1- Econmico

gran auge, debido principalmente a la conciencia de la sociedad en la necesidad de


conservar dichos recursos. La importancia de la diversidad y conservacin qued

Deben conservarse poblaciones que se encuentran en peligro y que tengan un

marcada para todos los pases a raz de la cumbre de las naciones en Ro de Janeiro

potencial econmico ahora como en el futuro. Su potencial econmico puede ser la

de 1992, acordando y comprometindose, los 170 pases participantes, a preservar y

produccin de carne, ordeo, fibra, piel. (Royal Society, 2003). Este potencial de

estudiar los componentes de la diversidad biolgica.

produccin puede estar en condiciones climticas y medioambientales diversas y


adversas. Las poblaciones en peligro, con buen potencial econmico, pueden tener

Para Hammond y Leitch (1995), el mayor peligro para la diversidad ha estado en

adaptacin regional desarrollada para el pas de origen, o adaptaciones que pueden

las exportaciones masivas de animales desde los pases desarrollados a los que estn

ser beneficiosas en otras reas del mundo donde existan condiciones similares o

en vas de desarrollo, para cruzarlas con las razas criollas o simplemente para

complementarias. Los animales con caractersticas distintas pueden incorporarse

sustituirlas. De esta forma estas ltimas han sido sacrificadas con la falsa creencia

beneficiosamente en los programas de cra de otros pases, por ejemplo, las

que las procedentes de pases desarrollados eran ms rentables.

caractersticas prolficas.

Segn Hodges (2002), la conservacin y utilizacin de los recursos genticos

2.6.2.2- Cientfico

animales ha sido ahora reconocida como actividad legtima de beneficio pblico. Slo
a partir de mitad del siglo XX, las razas domsticas empezaron a estar en peligro de

Deben conservarse poblaciones que se encuentren en peligro para su posible uso

manera importante (FAO, 1999). Actualmente, estas razas estn reconocidas como

cientfico. Puede incluirse investigacin biolgica bsica en fisiologa, nutricin,

parte importante de la herencia de la humanidad y su prdida supondra una

reproduccin o tolerancia climtica a nivel fisiolgico y gentico. Se necesitan razas

disminucin de la calidad de vida.

genticamente distintas para la investigacin en la resistencia de la enfermedad y


susceptibilidad que podran ayudar en el desarrollo de mejores direcciones. Tambin

La Organizacin de las Naciones Unidas es el rgano encargado de gestionar los

podra ayudar la identificacin de genes especficos involucrados en enfermedades

recursos genticos animales globales. En ese sentido se han hecho grandes avances.

naturales o control de parsitos. Algunas poblaciones tambin pueden usarse como

Sin embargo, las experiencias y sentir de muchos pases es que se necesita

modelos de la investigacin de otras especies, incluso el hombre.

desarrollar estrategias de acuerdo a las especificidades culturas de cada pas, aunque


no cabe duda del alto costo que esto produce. Por otra parte, en muchos pases, estos

2.6.2.3- Cultural

recursos son muy escasos y ser necesario establecer prioridades para la


conservacin de razas, programas de desarrollo, y estudios de evaluacin.

Las razas agropecuarias reflejan la identidad cultural e histrica de las


comunidades que las desarrollaron, y han formado parte integral de la vida y

De acuerdo con Barker (1999), las razas diferentes deberan ser favorecidas para

tradiciones de muchas sociedades. La prdida de razas tpicas, por tanto, significa una

la conservacin, ya que el objetivo es mantener la mxima diversidad gentica de

prdida de identidad cultural para las sociedades afectadas, as como una prdida de

cada especie ganadera.

parte del patrimonio de la humanidad.

Los motivos de la conservacin de recursos genticos animales incluyen

Muchas poblaciones han jugado un papel importante en periodos especficos de la

poblaciones con uso potencial econmico, cientfico y cultural. (FAO, 1998 Royal

historia nacional o regional. Por ejemplo, la oveja Merina espaola que data su

Society, 2003).

27

28

Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

creacin en el siglo XVII, la cual ha intervenido en la creacin de todas las razas

nmero de rebaos. Otro factor tomado en cuenta es la existencia de un programa de

ovinas de este tronco en el mundo.

conservacin.

Se puede decir que el mantenimiento de las razas domsticas se justifica porque

2.6.3.1- Desaparecida o extinta

stas son una expresin de la herencia y de la cultura del hombre, a lo que habra que
sumar razones de tipo educacional. (Rodero y Rodero, 2007).

Se considera desaparecida cuando no es posible recrear la poblacin. Esta


situacin es absoluta cuando no hay machos (semen) ni hembras reproductoras

2.6.3- Pautas para determinar las razas en situacin de riesgo

(ovocitos), ni embriones. En realidad, la desaparicin puede constatarse bastante


antes de la prdida del ltimo animal, gametos u embriones.

En los anlisis del Banco Mundial de Datos (Scherf 1997; FAO 1999; FAO 2010),
las razas son clasificadas en siete categoras (grfico N 2).

2.6.3.2- Crtica

Grfico N 2. Proporcin global de razas del mundo clasificadas por su

machos reproductores es inferior o igual a 5. El tamao total de la poblacin es

estado de riesgo. FAO (2010).

prximo o superior a 100 y decreciente, y el porcentaje de hembras criadas en raza

El nmero total de hembras reproductoras es inferior a 100 o el nmero total de

DESCONOCIDA

CRITICA

CRITICA MANTENIDA

EN PELIGRO

EN PELIGRO MANTENIDA

NO EN PELIGRO

EXTINTA

pura es inferior al 80 por ciento.

2.6.3.3- En peligro
9%

Cuando el nmero total de hembras reproductoras est comprendido entre 100 y


1000 o el nmero total de machos es inferior o igual a 20 pero superior a 5. El tamao
36%

total de la poblacin est prximo de 100, pero ligeramente inferior a 100 y creciente, y
el porcentaje de hembras criadas en pureza es superior al 80 por ciento. El tamao
total de la poblacin est ligeramente superior a 1000 y decreciente y el porcentaje de

35%

hembras criadas en pureza es inferior al 80 por ciento.

2.6.3.4- Crtica-mantenida o en peligro-mantenida.


7%
3%

1%
9%

Estas categoras identifican a poblaciones crticas o en peligro para las cuales


existen programas de conservacin activos o todava estas poblaciones son
mantenidas por compaas comerciales (parques, zoolgicos, etc) o institutos de

Dicha clasificacin est basada en el tamao total de la poblacin, el nmero de

investigacin.

hembras reproductoras y la tendencia de la evolucin del nmero de individuos


(creciente, decreciente o estable). Si una raza est en el lmite de dos categoras se
consideran otros factores, como el nmero de machos usados en inseminacin
artificial, el nmero de dosis de semen o el nmero de embriones acumulados, y el

29

30

Revisin bibliogrfica

2.6.3.5- No en peligro

Revisin bibliogrfica

utilizados para recrear una raza o grupos de animales. Tambin puede ser la
preservacin de segmentos de ADN, sangre, pelos.

Se considera no en peligro, si el nmero total de hembras y machos


reproductores es superior a 1000 y 20, respectivamente; Si el tamao de la poblacin

Para muchos autores la conservacin ex situ in vivo tiene escala limitada, ya que

se acerca a 1000 y si el porcentaje de hembras criadas en pureza es prximo al 100

no garantiza el mantenimiento de la presente diversidad gentica, y por otra parte a

por ciento, y si la poblacin total es creciente.

menudo no existe una clara distincin con la conservacin in situ (Hiemstra y


Woelders, 2007).

Estas definiciones son usadas actualmente por la FAO, aunque no se puede


presumir como definitiva. stas se han clasificado de acuerdo a la informacin del

Hoy en da existe un creciente inters en las estrategias de conservacin ex situ,

banco de datos globales de los animales de granjas actualizados por todos los pases.

que conlleva una variedad de objetivos. En muchos casos representa un componente


integral en la estrategia de conservacin. (Hiemstra y cols., 2005).

2.6.4- Mtodos de conservacin


La seleccin de animales dentro de las razas de inters es una consideracin
En el contexto de la conservacin de la diversidad de los animales domsticos, con
objeto de evitar la grave erosin que estn sufriendo la mayora de las razas, existen a
grandes rasgos dos mtodos de conservacin:
2.6.4.1- Conservacin in situ

importante en la construccin del material a crioconservar. La seleccin de los


animales debe basarse en una falta de relacin gentica, con un nmero suficiente de
animales para asegurar la mxima captura de alelos (Blackburn, 2004).

La conservacin in situ y ex situ no son mutuamente excluyentes, pero si


complementarias. La crioconservacin de los recursos genticos as como la vida en

Para la FAO (1998), esencialmente, es la cra activa de poblaciones animales


para la produccin agrcola y alimentara, de tal manera que la diversidad sea a la vez

cautividad de los animales en los parques zoolgicos, juegan un papel importante en


apoyos de programas de conservacin (Henson, 1992).

utilizada lo mejor posible en el corto plazo y mantenida para un largo plazo. Las
actividades relacionadas con la conservacin in situ comprenden el control de las
producciones y los programas de desarrollo. La conservacin in situ comprende
igualmente el mantenimiento de los ecosistemas y su utilizacin para una produccin
agrcola y alimentara sustentable. En el caso de los animales salvajes, la
conservacin in situ, es el mantenimiento de las poblaciones vivientes en su medio o
en condiciones lo ms prximo posible a tal ambiente.

Cualquier iniciativa cientfica para la conservacin de pequeas poblaciones de


animales domsticos que incluyan medidas in situ y ex situ, debe ir coordinada por un
programa de gestin gentica que permita el mantenimiento de la variabilidad
gentica, de tal forma que se luche, por un lado, contra el incremento de la frecuencia
de aparicin de genes deletreos, fundamentalmente ligados a la reproduccin
(fertilidad, prolificidad, viabilidad de la descendencia, etc.), y por otro lado, que
mantenga el vigor de la raza.

2.6.4.2- Conservacin ex situ

2.7- Conservacin de la diversidad de los animales domsticos en Espaa

En el contexto de la conservacin de la diversidad de los animales domsticos,

2.7.1- Conservacin y utilizacin de los recursos zoogenticos espaoles

conservacin ex situ implica acumulacin. Esto incluye la preservacin de animales


vivos (conservacin ex situ in vivo) aislados de su medio habitual y/o se refiere a la
coleccin y congelacin en nitrgeno lquido de recursos genticos animales en forma

En Espaa el inters por sus razas autctonas se concret oficialmente en la


publicacin de la Orden Ministerial de 30 de julio de 1979, la cual estableca por

de semen, ovocitos, embriones o tejidos (conservacin ex situ in vitro), que pueden ser

31

32

Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

primera vez el Catlogo Oficial de Razas de Ganado de Espaa, con la intencin de

2.7.1.4- Razas de terceros pases: Aquellas, autctonas de los mismos, distintas a

establecer una poltica agraria, en virtud del destacado inters que la misma tena en

las razas ya definidas, que para poder figurar en el Catlogo de Razas de Espaa

ordenar el patrimonio gentico ganadero espaol.

necesita estar contrastada suficientemente su adecuacin al ecosistema espaol, y ser


de inters productivo y econmico, tras un perodo de observacin y seguimiento.

Transcurrieron casi 20 aos hasta que se public el Real Decreto 1682/1997 de 7


de noviembre, por el cual se actualizaba el Catlogo Oficial de Razas Puras. En el

2.7.1.5- Razas sintticas espaolas: Aquellas que han sido caracterizadas y

desarrollo del mencionado Real Decreto fueron consultadas las Comunidades

desarrolladas en Espaa a partir de cruces planificados entre diferentes razas, que

Autnomas y las entidades cientficas y representativas en materia de reproduccin,

tienen un objetivo funcional o de produccin definido en un programa de mejora, con

seleccin y gentica animal.

censo suficiente para desarrollarlo, y que no cumplen los requisitos para incorporarse
al resto de las categoras establecidas en el Catlogo Oficial de Razas.

Desde este momento, se han realizado cinco actualizaciones por las rdenes APA
de 3 de marzo de 2000; 25 de junio de 2001; 2 de enero de 2002; 28 de agosto de

2.7.2- Evaluacin del estado de conservacin de la diversidad de los animales de

2003; y 6 marzo de 2006.

granja en Espaa

El Catlogo Oficial de Razas de Ganado de Espaa, no slo reconoce oficialmente

Espaa se ha comportado como un pas ejemplar en la conservacin de sus

las razas autctonas, sino todos los recursos genticos animales explotados en

recursos genticos animales. A las iniciativas ministeriales se han unido mltiples y

Espaa, tal como lo recoge el real decreto 2129/2008. Para ms claridad, se

muy importantes actuaciones por parte de las Comunidades Autnomas, movidas por

establecen una serie de categoras para ordenar los recursos segn su procedencia y

los fuertes sentimientos nacionales que en ellas han prosperado y que han repercutido

su situacin, y, por tanto, por su inters estratgico para nuestro pas (MARM, 2009a).

en un deseo de proteccin del propio patrimonio, y entre l sus animales domsticos.

2.7.1.1- Razas autctonas espaolas: Son las originarias de Espaa, catalogndose

Cabe destacar que en Espaa la revolucin industrial y el desarrollo consecuente

como razas de fomento aquellas que por su censo y organizacin se encuentran en

de los cultivos intensivos llegaron tarde, y por ello la erosin gentica sobre las

expansin; y como razas de proteccin especial o en peligro de extincin, aquellas que

poblaciones locales se retras tambin. Afortunadamente, la desaparicin de razas en

se encuentran en grave regresin o en trance de desaparicin, de acuerdo con los

Espaa no ha sido tan grave como en otros pases, debido a que la debacle de las

criterios establecidos a nivel nacional o internacional.

razas autctonas coincidi con el xito de las ideas conservacionistas, y de alguna


manera, esto supuso un contrapeso que fren la desaparicin de poblaciones locales.

2.7.1.2- Razas espaolas: Son aquellas que se han incorporado al patrimonio


espaol porque llevan ms de veinte aos explotndose en nuestro pas, con

En Espaa la riqueza racial es excepcional y destaca enormemente en Europa,

genealoga y controles de rendimiento conocidos, y que poseen un nmero de

sobre todo si se tiene en cuenta que no ha sido un pas con tradicin en la formacin

reproductoras censado que permite desarrollar un esquema de valoracin.

de razas sintticas, por tanto, la mayor parte de las razas autctonas son razas
ambientales, adaptaciones locales a los variados ecosistemas con los que cuenta

2.7.1.3- Razas de la Unin Europea: Aquellas, reconocidas por el Comit Zootcnico

Espaa. En todas las especies la riqueza racial es importante, y la mayor parte de

Permanente, de los dems Pases miembros y que cuentan con libros genealgicos,

estas razas estn fuertemente ligadas a su contexto con lazos histricos y culturales.

controles de rendimiento y asociaciones de criadores.

33

34

Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

Tabla N 3. Nmero de razas autctonas clasificadas por especie y su estado de

Tabla N 4. Razas autctonas bovinas clasificadas por su estado de

conservacin. (MARM 2008).

conservacin y distribucin geogrfica. (MARM. 2008).

ESPECIE

FOMENTO

PROTECCIN ESPECIAL

Bovino

31

Ovino

10

33

Caprino

17

Porcino

Equino

RAZA

REGIN

Asturiana de los Valles

Asturias

Avilea Negra Ibrica

Nacional

Lidia

Nacional

Morucha

Castilla Len

Pirenaica

Nacional

13

Retinta

Nacional

Rubia Gallega

Galicia

Asnal

TOTAL

25

109

RAZAS DE FOMENTO

Albera

Catalua

Alistana-Sanabresa

Castilla Len

Asturiana de las Montaas

Asturias

Avilea-Negra Ibrica vr Bociblanca

Castilla Len

de 26 de diciembre establece un censo, en la que se establecan una serie de

Berrenda en Negro

Nacional

categoras para las razas ganaderas explotadas en Espaa. En dicho catlogo, se

Berrenda en Colorado

Nacional

Betizu

Pas Vasco

El catlogo Oficial de Razas de Ganado de Espaa, del Real Decreto 2129/2008,

reconocen oficialmente 134 razas de las especies bovina, ovina, caprina, porcina,
equina y asnal (tabla N 3).

Como se observa, una minora de las razas locales se encuentra bien implantada
de una manera competitiva en el mercado ganadero espaol. La mayor parte de las
razas est amenazada de extincin, pero a pesar de ello, y como aspecto positivo, se
destaca que en los ltimos 27 aos no ha habido que reflejar la extincin de ninguna
raza. Al contrario, se han ido incorporando nuevas razas que tras el correspondiente

RAZAS PROTECCIN ESPECIAL

estudio cientfico y propuesta oficial han alcanzado su reconocimiento administrativo.


Esto queda claro si comparamos el Catlogo Oficial de 1977 y el Catlogo actual.

En esta comparacin se percibe, adems de esta inclusin de nuevas razas, el


cambio de nombre de otras por mayor adaptacin a la terminologa local.

Bruna de los Pirineos

Catalua

Blanca Cacerea

Extremadura

Cachena

Galicia

Caldelana

Galicia

Canaria

Canarias

Crdena Andaluza

Andaluca

Frieiresa

Galicia

Limiana

Galicia

Mallorquina

Baleares

Marismea

Andaluca

Menorquina

Baleares

Monchina

Cantabria

Morucha(Negra)

Castilla Len

Murciano Levantina

Murcia

Negra Andaluza

Andaluca

Pajuna

Andaluca

Palmera

Canarias

Pasiega

Cantabria

sus categoras de fomento y de proteccin especial. Ntese la ubicacin geogrfica de

Sayaguesa

Castilla Len

las poblaciones y su gran diversidad. Las que se nombran como nacional son

Serrana Negra

Aragn

Las razas autctonas espaolas bovinas quedan reflejadas en la tabla N 4, en

aquellas razas que se localizan en ms de una comunidad autnoma.

35

36

Serrana de Teruel

Teruel

Terrea

Pas Vasco

Tudanca

Nacional

Vianesa

Galicia

Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

La categora de fomento se correspondera con la categora sin riesgo de la FAO,

La evolucin de los sistemas de produccin ganadera y la nueva Poltica Agraria

mientras las razas de proteccin especial incluiran a las categoras crtica, crtica-

Comn, han evidenciado que todava deben de establecerse medidas ms slidas de

mantenida, amenazada y amenazada-mantenida. Afortunadamente, en la

apoyo a las razas autctonas.

categora de extinta slo se tiene que reflejar, en el caso de la especie bovina, a la


raza Mantequera Leonesa.

Las nuevas medidas de fomento de las razas han quedado refrendadas en el Real
Decreto 2129/2008 de 26 de Diciembre, por el que se establece el Programa Nacional

Debemos destacar que en la categora de desconocidas si entendemos como tales

de Conservacin, Mejora y Fomento de las razas ganaderas, y que dicho sea de paso,

todas aquellas que no han sido reconocidas oficialmente. Tenemos que reflejar que

se pone en concordancia con las nuevas directrices internacionales de la FAO y la UE-

son muchas las poblaciones que en la actualidad se encuentran bajo estudio e

25, fruto de los compromisos adquiridos con el Convenio sobre la Diversidad Biolgica

investigacin para someter su inclusin en el Catlogo al Comit de Razas de Ganado

y el Plan de Accin Mundial para la Conservacin y Utilizacin Sostenible de los

de Espaa.

Recursos Genticos de Inters Agroalimentario de la FAO, destacando la declaracin


de INTERLAKEN del ao 2007.

2.7.3- Medidas de apoyo a la conservacin, mejora y fomento de las razas


ganaderas en Espaa

Este plan pretende la ordenacin de patrimonio gentico animal espaol,


garantizando la conservacin de las razas en peligro de extincin y la mejora de razas

Con el aumento del nivel de vida de la poblacin y de nuevos hbitos alimentarios

ya consolidadas.

se iniciaron profundos cambios en la explotacin de la ganadera, encaminados a


producir en mayor cantidad y con menores precios los productos de origen animal que

2.8- Criopreservacin

el consumidor demanda. Estos cambios se tradujeron en el desarrollo de la ganadera


intensiva no ligada a la tierra, frente al modelo extensivo tradicional. La intensificacin

La criopreservacin es la conservacin a largo plazo de clulas vivas a bajas

supuso la especializacin zootcnica de un sector de la ganadera, el crecimiento

temperaturas, tales como el punto de ebullicin del nitrgeno lquido (196 C). Estas

censal, el aumento de la oferta de productos de origen animal y el logro de la

temperaturas hacen que disminuya el metabolismo celular, provocando un estado de

competitividad necesaria para una economa de escala, pero tambin comprometi la

inactividad total en las clulas espermticas, del cual slo se recuperan cuando son

supervivencia de algunas razas autctonas caracterizadas por acumular siglos de

descongeladas y llevadas a temperatura ambiente (Watson y Morris 1987).

seleccin natural y manifestar un enorme grado de rusticidad al cruzarlas con otras


forneas con el fin de obtener mayor produccin. Esta evolucin determin la

Uno de los aspectos ms tiles de la criopreservacin es el apoyo a la

necesidad de caracterizar, conservar y mejorar los recursos zootcnicos propiciando la

conservacin de las poblaciones vivas. En este caso, es un complemento de un

creacin de instrumentos relevantes como el Decreto 733/1973 por el que aprueban

programa de conservacin ms amplio, en el cual, la criopreservacin del material

las normas reguladoras del libro genealgico.

gentico es una seguridad en caso de catstrofe, o si un problema gentico aparece


como consecuencia de la acumulacin de genes recesivos nefastos para la poblacin

Las particularidades y las variadas caractersticas geogrficas, climatolgicas e

viva (Crespo Garca, 2003).

incluso culturales de Espaa, hacen que mantenga un alto grado de diversidad


gentica y que exista un amplio abanico de recursos zoogenticos fundamentales para
el

mantenimiento

de

un

adecuado

equilibrio

socio-econmico,

cultural

As, la primera exigencia para la criopreservacin es la disponibilidad de


instalaciones que permitan el almacenamiento de las muestras en nitrgeno lquido.
(Peinado y Poto, 2003).

medioambiental (MARM, 2009c)

37

38

Revisin bibliogrfica

2.8.1- Objetivos de la criopreservacin

Revisin bibliogrfica

poblaciones naturales y de los programas de cra en cautividad. Las especies


amenazadas constituyen con frecuencia poblaciones pequeas y aisladas, en las que

En general, la criopreservacin de material gentico de los animales domsticos

hay falta de flujo gentico. Por otra parte, los programas de cra en cautividad de

puede tener diferentes objetivos. Aunque el objetivo principal de un programa de

especies en peligro de extincin, cuentan en general con pocos individuos fundadores.

conservacin est dirigido a la conservacin del material por largos periodos de

En ambas situaciones son ms frecuentes los cruces entre individuos emparentados.

tiempo, hay tambin objetivos a corto plazo. Los objetivos para la criopreservacin
necesitan ser definidos en trminos de uso futuro del material criopreservado, como
son:

Estos mtodos, son el mejor medio para aumentar la descendencia a partir de


progenitores seleccionados evitando la consanguinidad, pues en poblaciones

Para apoyar poblaciones conservadas en vivo:

pequeas o aisladas en las que los intercambios genticos no existen o son escasos,

1) Como una parte del retroceso gentico que ocurre en la poblacin

se podra originar un incremento de la consanguinidad, con el aumento de aparicin de

viviente -la prdida de la de diversidad allica, provocando la ocurrencia

problemas congnitos.

de combinaciones genticas deletreas-.


2) Aumentar tamao de la poblacin eficaz de poblaciones pequeas y
reducir tendencia gentica.

Por otra parte, el uso de tcnicas reproductivas es muy eficaz para poner en
marchas programas de conservacin y mejora gentica, ya que se puede disminuir los

Reconstruir razas en caso de extincin o prdida de un nmero sustancial

intervalos generacionales.

de animales.

Crear nuevas lneas / razas.

Como parte del retroceso gentico, en el que puede modificar rpidamente

por diferentes factores, entre los que merece la pena mencionar: fisiologa

y/o reorientar, la evolucin / seleccin de poblaciones.

reproductiva, material biolgico escaso y de mala calidad y sensibilidad al estrs

La aplicacin de tcnicas reproductivas en las especies en peligro, se ve limitada

Para la investigacin, especialmente para los puntos primero y tercero,

(Comizzoli y cols., 2000).

generalmente se aplican a las poblaciones que se encuentran en peligro o


la proteccin de pequeas poblaciones. El material gentico es conservado
para garantizar variacin gentica o la supervivencia de una raza.

Para describir las tcnicas reproductivas, en este apartado, nos centramos


primordialmente en las biotecnologas reproductivas punteras que son econmica y
tcnicamente accesibles en la mayora de reas geogrficas.

2.9- Estado del arte en tecnologas reproductivas para la conservacin de


poblaciones amenazadas

2.9.1- Inseminacin artificial

Los programas de conservacin necesitan la ayuda de tcnicas de reproduccin


asistida (criopreservacin de gametos, inseminacin artificial, transferencia de

La tcnica de reproduccin asistida ms utilizada en la conservacin de mamferos


en peligro de extincin es la inseminacin artificial.

embriones, fecundacin in vitro), ya que permiten el crecimiento poblacional de


especies domsticas o salvajes dispersadas geogrficamente y en vas de

En muchas especies, la tcnica y estrategia de inseminacin artificial se ha


mejorado, y el conocimiento sobre la fisiologa, tcnicas de inseminacin, deposicin

desaparicin.

de espermatozoides en el tracto genital de la hembra, ha avanzado durante las ltimas


La utilidad de las tcnicas de reproduccin asistida en el contexto de especies en

dcadas. Sin embargo existen muchas diferencias interespecficas en tcnicas de

peligro de extincin, reside en el hecho de poder facilitar el manejo gentico de

39

40

Revisin bibliogrfica

inseminacin y tasas de preez con semen fresco y congelado (Hiemstra y cols.,


2005).

Revisin bibliogrfica

La transferencia de embriones quirrgica es posible, en principio, en todas las


especies de mamferos. Por el contrario, la transferencia de embriones no quirrgica
slo es posible en el ganado bovino (rutinaria), los caballos y tambin los cerdos,

Holt (2000) menciona que gran parte de los atrasos en inseminacin artificial, son

aunque todava no tan eficiente en estos dos ltimos casos. La eficacia de la recogida

debidos a la falta de estandarizacin de las tcnicas de procesamiento del semen

de embriones no quirrgica en el ganado bovino, y en menor medida en los caballos,

(congelado, refrigerado), no proporcionando resultados aceptables de fertilidad. Las

se puede mejorar mediante la induccin hormonal de la superovulacin.

diferencias entre especies se deben principalmente a diferencias en la fisiologa y la


bioqumica del espermatozoide y tambin, a las variaciones en la anatoma y fisiologa
del tracto reproductor femenino que dan lugar a importantes diferencias en las

A efectos de trasferencia embrionaria, estos pueden ser colectados de una hembra


donante o por el contrario ser producidos in vitro.

caractersticas del transporte espermtico.


La produccin in vitro de embriones, mediante su maduracin y fecundacin de los
En la produccin porcina, el uso de semen congelado presenta muchas

ovocitos, es posible en las principales razas de ganado, aunque la eficacia vara entre

desventajas frente al semen refrigerado, ya que reduce su fertilidad as como su alto

las especies. Los ovocitos inmaduros para este propsito, pueden ser recogidos de

costo por mantenimiento.

animales muertos o por aspiracin de ovocitos inmaduros de donantes vivos por la


tcnica de Ovum Pick-Up.

En la oveja, el uso de la Inseminacin artificial (semen congelado) por


laparoscopa brinda mayor tasa de preez que la cervical, aunque no podemos obviar

2.10- Estado del arte en tecnologas de criopreservacin para la conservacin de

que sta es mucho mas invasiva y laboriosa que la cervical.

especies amenazadas

En el ganado vacuno y cerdos existen infraestructuras que facilitan la recoleccin y


el uso futuro de semen, pero slo en el ganado vacuno el uso de semen congelado ha

Segn la FAO (2010), las tecnologas de criopreservacin, aunque avanzan


rpidamente, slo se han desarrollado plenamente para un puado de especies.

reemplazado el uso de semen fresco o refrigerado. Esto es debido a las grandes


ventajas que presenta la criopreservacin del material seminal sobre los dems

2.10.1- Semen

sistemas de conservacin, como son:


Conservacin prcticamente indefinida en el tiempo.

En los pasados aos se ha conseguido congelar con xito semen de todas las

Eliminacin de riesgos sanitarios.

especies agropecuarias de mamferos, as como de algunas especies de aves

Racionalizacin econmica del eyaculado.

(gallinas, gansos) y peces (FAO, 2010; Hiemstra y cols., 2005; ERFP., 2004; Woelders

Recogida de semen slo en pocas reproductivas favorables.

y cols., 2003). La recoleccin de semen puede llevarse a cabo por medio de vagina

Facilidad de testaje de los sementales.

artificial, electroeyaculacin y lavado de epiddimos. Estos mtodos has sido utilizado

Posibilidad de comercio internacional de dosis.

con xito en animales salvajes como en domsticos. Por otra parte, han sido descritas
tcnicas de recuperacin espermtica pos-coital en rinocerontes y monos, con

2.9.2- Trasferencia de embriones

excelentes resultados tanto en la conservacin de semen como en la obtencin de


cras nacidas por este mtodo (OBrien y Roth., 2000).

Esta es la tcnica ms eficiente para la propagacin de pequeas poblaciones.

41

42

Revisin bibliogrfica

2.10.2- Embriones

Revisin bibliogrfica

unos cuantos laboratorios. La baja fiabilidad y los enormes costos de dichas


tecnologas son dos factores que probablemente limitarn su aplicacin en la

Las tcnicas de conservacin de embriones son de especial inters para la

conservacin de recursos zoogenticos en aos venideros.

crioconservacin de recursos zoogenticos, ya que permiten la plena recuperacin del


2.11- Descripcin de la naturaleza del material a conservar

genoma inicial.

A diferencia de las especies aviares, los embriones de prcticamente todos los

2.11.1- Espermatozoide y plasma seminal

mamferos permiten su congelacin, descongelacin y transferencia posterior a


hembras receptoras para producir progenie. Sin embargo, el uso generalizado de la

El espermatozoide es una clula terminal, cuyo rol principal es el transporte de un

crioconservacin de embriones est limitado a ganado bovino, ovejas y cabras. La

paquete, constituido por el genoma nuclear y el centriolo, hasta el ovocito. Para

obtencin de embriones en cerdos exige el sacrificio de la hembra, y el procedimiento

realizar esta tarea, el espermatozoide est equipado con una batera de estructuras

sigue en fase experimental en especies equinas.

especializadas (una membrana plasmtica que muestra reas delimitadas, orgnulos


con disposicin especfica tales como la vaina mitocondrial, y especializaciones de los

Se ha propuesto una gran variedad de protocolos para congelar y descongelar


embriones de especies pecuarias. Se pueden clasificar en dos categoras principales

mismos tales como el flagelo y el acrosoma) que garantizan la interaccin particular


con el tracto genital femenino y el ovocito y sus envolturas.

segn la rapidez del proceso de congelacin: Proceso de congelacin lenta y tcnica


El semen es la suspensin celular lquida o semigelatinosa que contiene los

de congelacin rpida (vitrificacin).

gametos masculinos (los espermatozoides y secreciones de los rganos accesorios),


2.10.3- Ovocitos

procedentes del aparato reproductor masculino.

En algunas especies de mamferos se pueden producir embriones in vitro, a partir

La proporcin lquida, de dichas secreciones que se forman durante la

de ovocitos madurados recogidos al sacrificio (Galli y cols., 2003) o de hembras vivas

eyaculacin, se conoce como plasma seminal. El principal componente del plasma

de las que se extraen vulos. Dichos ovocitos pueden congelarse durante perodos

seminal es el agua (75%), aunque tambin aparecen sustancias tanto orgnicas como

prolongados antes de la fecundacin in vitro para producir embriones. El

inorgnicas que sirven de protectores nutricionales de los espermatozoides (Salamon

procedimiento de congelacin lenta es actualmente factible en ganado bovino y

y Maxwell, 2000).

potencialmente aplicable a ovejas y cabras, pero el ndice de xitos en la obtencin de


progenie es extremadamente bajo, inferior al 10 % (FAO, 2010). Al igual que los

El efecto del plasma seminal sobre la motilidad de los espermatozoides, su

embriones, el proceso de congelacin de ovocitos se da por una congelacin lenta y

capacidad de supervivencia y la resistencia a los cambios producidos durante el

por vitrificacin.

proceso de preservacin, ha sido estudiado en distintas especies aunque su funcin


an no se comprende totalmente.

2.10.4- Otras tecnologas


Los espermatozoides se forman dentro de los tbulos seminferos de los testculos.
Biotecnologas ms recientes, que incluyen la clonacin, la transgnesis y la
transferencia de material somtico, tienen un gran potencial en aplicaciones futuras a

stos contienen una compleja serie de clulas germinales en desarrollo que finalmente
constituirn los gametos masculinos, altamente especializados (Hafez y Hafez, 2000).

la conservacin de recursos zoogenticos, pero actualmente slo son accesibles para

43

44

Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

Los espermatozoides maduros son clulas alargadas consistentes en una cabeza

mitocondrial, dispuesta en un patrn helicoidal alrededor de las fibras longitudinales de

aplanada portadora del ncleo y una cola que contiene las estructuras necesarias que

la cola es la fuente de energa necesaria para la motilidad espermtica. El axonema es

permiten su movilidad. El espermatozoide entero est cubierto por el plasmolema o

el que da la motilidad al espermatozoide.

membrana plasmtica.
La gota protoplasmtica o citoplasmtica que suele desprenderse de los
El acrosoma o casquete acrosmico, es una estructura de doble pared situada

espermatozoides tras la eyaculacin, est compuesta de citoplasma residual. Aunque

entre la membrana plasmtica y la porcin anterior de la cabeza del espermatozoide

se le considere anormal en los espermatozoides eyaculados de la mayor parte de las

(figura N 4).

especies, puede retenerse en la regin del cuello, donde se conoce como gota
proximal, o cerca del anillo citoplasmtico donde se denomina gota distal.

La cromatina se encuentra en el ncleo. Es un complejo formado por ADN y unas


protenas bsicas llamadas protaminas espermticas. Su dotacin cromosmica es

Los principales componentes qumicos de los espermatozoides son cidos

haploide; el espermatozoide posee la mitad de los cromosomas que el ncleo de la

nucleicos, protenas y lpidos. Cerca de un tercio del peso seco de una clula

clula somtica de la misma especie. La naturaleza haploide de las clulas

espermtica corresponde al ncleo. La cromatina nuclear est constituida en

espermticas se debe a las divisiones celulares meiticas que ocurren durante su

proporciones iguales de ADN y protenas. El casquete acrosmico contiene enzimas y

formacin.

en la cola existen protenas estructurales, enzimas y lpidos.

El extremo anterior del ncleo espermtico est cubierto por el acrosoma, un

Los espermatozoides son ricos en componentes inorgnicos como fsforo,

delgado saco membranoso de doble capa ubicado sobre el ncleo y que se establece

nitrgeno y azufre. La mayor parte del fsforo est asociado al ADN, mientras que el

durante las ltimas etapas de la formacin del espermatozoide. Esta estructura en

azufre se deriva de protenas nucleares bsicas y de los componentes queratnicos de

forma de casquete que contiene acrosina, hialuronidasa y otras encimas hidrolticas,

la cola.

participa en el proceso de fecundacin. El segmento ecuatorial del acrosoma es


importante debido a que es esta parte del espermatozoide, junto con el segmento

Figura N 3. Morfologa del espermatozoide bovino (Hafez y Hafez 2000).

anterior de la regin pos-acrosmica, la que se fusiona inicialmente con la membrana


del ovocito durante la fecundacin.

La cola espermtica est formada por el cuello y los segmentos medio, principal y
caudal (figura N 3). El cuello o segmento conector, forma una placa basal que
embona en una depresin en el extremo posterior del ncleo. La placa basal del cuello
es continua en sentido posterior y tiene nueve fibras gruesas que se proyectan hacia
atrs, a travs de la mayor parte de la cola. La regin de la cola comprendida entre el
cuello y el anillo citoplasmtico es el segmento medio, y el centro de ste, junto con
toda la longitud de la cola, comprende el axonema (Mortimer, 2000). ste como tal se
compone de nueve pares de microtbulos dispuestos radialmente alrededor de dos
filamentos centrales. El axonema y las fibras densas asociadas del segmento medio
estn cubiertos de manera perifrica por numerosas mitocondrias. La vaina

45

46

Revisin bibliogrfica

Figura N 4. Corte sagital de una cabeza espermtica de bovino. (Hafez y Hafez


2000).

Revisin bibliogrfica

No obstante, la tcnica de electroeyaculacin presenta algunos inconvenientes


entre los que podemos mencionar la contaminacin del semen con orina y variabilidad
seminal de las muestras obtenidas.

Estudios realizados por Len y cols. (1991), comparando los dos mtodos de
coleccin de semen, en fresco, encontraron que los obtenidos por electroeyaculacin
se caracterizan por presentar un volumen ms alto, menor concentracin espermtica
y mayor pH, que los obtenidos por vagina artificial. Sin embargo, en la motilidad masal
y motilidad progresiva no se observaron diferencias.

Recientemente, ha sido demostrado que tanto la calidad del semen fresco como
congelado, no es afectada por el mtodo de recuperacin, y que se encuentran un
mayor nmero de espermatozoides estables y funcionales cuando el semen es
recogido por electroeyaculacin. (Marco-Jimnez y cols., 2005).

En relacin al efecto de los dos sistemas de coleccin sobre el efecto de


criopreservacin, hay evidencias que demuestran diferencias significativas, sobre todo
2.12- Mtodos de obtencin del semen bovino

para la recuperacin de la motilidad posdescongelado, atribuyendo mejores valores las


muestras colectadas con vagina artificial. Esto puede ser debido a que los eyaculados

La obtencin de semen es el primer paso dentro de un programa de congelacin,

obtenidos por electroeyaculacin modifican la concentracin de sodio, alterando la

preservacin e inseminacin artificial. Esta primera fase es de vital importancia para la

concentracin e induciendo a la prdida de protenas en el plasma seminal (Marco-

obtencin de muestras de ptima calidad, as como para la adecuada utilizacin de los

Jimnez y cols., 2008). stas tienen importantes efectos sobre la funcin espermtica,

sementales.

como la motilidad, viabilidad y fertilizacin (Brandon y cols., 1999).

La obtencin de semen por medio de vagina artificial es el mtodo ms

2.13- Valoracin de la calidad espermtica del toro

comnmente empleado en la mayora de las especies domsticas, permitiendo la


recogida de eyaculados limpios y normales. Sin embargo, la obtencin de semen por
este mtodo est condicionada a una fase previa de entrenamiento.

La valoracin de la calidad del esperma se emplea, habitualmente, como mtodo


predictivo de los parmetros que caracterizan la viabilidad de la clula espermtica y
de la fertilidad del macho (Gadea-Mateo, 1997; Colenbrander y cols., 2003, citado por

Otro

mtodo

empleado

para

la

recogida

del

semen

de

toros

es

la

Hidalgo, 2004), y aunque el mejor sistema para determinarlo sera estimar el

electroeyaculacin. Este sistema consiste en la aplicacin de una serie de estmulos

porcentaje de gestacin que se obtiene tras inseminar un determinado nmero de

elctricos, mediante el empleo de uno o ms electrodos, variando la secuencia, el

hembras, normalmente se recurre a la evaluacin en condiciones de laboratorio de

nmero y la magnitud del estmulo. La electroeyaculacin se caracteriza por la

una serie de parmetros relacionados con la fertilidad.

estimulacin de vas nerviosas involucradas en el reflejo eyaculatorio o de nervios


motores que inervan las glndulas genitales accesorias y la uretra.

47

48

Revisin bibliogrfica

El anlisis diagnstico del semen de toros, requiere la obtencin mxima de


informacin mediante el examen de unos o varios eyaculados. Tradicionalmente, el

Revisin bibliogrfica

ambientales y destreza del operario. El volumen de cada eyaculado disminuye con las
frecuencias de recogida a lo largo de cada extraccin (Hafez y Hafez, 2000).

estudio de la calidad del esperma se viene desarrollando a travs de una serie de


parmetros macro y microscpicos que se integran en una prueba de valoracin in

El volumen de los eyaculados de toros, segn los datos publicados por distintos

vitro. A pesar de que la correlacin entre estos parmetros y la fertilidad no es

autores, es muy variable. As, hay autores que presentan los siguientes volmenes

definitiva, si ofrece informacin vlida acerca de la calidad seminal, ya que si bien una

medios: Hunter (1987): 4-8 ml; Stalhammar y cols. (1989): entre 5,0-5,5 ml; Marn

muestra de buena calidad no siempre es frtil, una de baja calidad rara vez lo ser

(1994): 2-12 ml; Christensen y cols. (1999): Reporta volmenes de 5,1 y 4,1 para las

(Hidalgo, 2003).

razas Holstein y Jersey respectivamente. Brito y cols. (2002a): 8,2 ml; Asad y cols.
(2004): 14,26 ml; Fuerst-Waltl y cols., 2006 y cols. (2006): 4,87,0 ml; Muio y cols.

Los parmetros comnmente usados para conocer la calidad seminal de un

(2008a): 5,1 ml; Galina y Valencia (2009): 2-10 ml.

eyaculado son: color, volumen, concentracin, motilidad masal, motilidad progresiva,


viabilidad y morfologa -porcentajes de espermatozoides normales y anmalos-

El mtodo comnmente utilizado para medir el volumen, es directamente en el

(Christensen y cols.,1999; Asad y cols., 2004; Palmieri y cols., 2004; Espitia y cols.,

tubo de recogida calibrado en milmetros. Aunque hoy en da, a menudo se determina

2006; Lpez y cols., 2007; Abdel-Khalek y cols., 2008; Latif y cols., 2009).

con mayor precisin en peso, suponiendo que el peso especfico es de 1.0 (Foote,
2002; Brito, y cols., 2002a; Contri y cols., 2010).

2.13.1- Color
2.13.3- Concentracin
El color del semen es el primer factor que se valora, y se debe hacer en el mismo
tubo colector, inmediato a la obtencin. Un semen de buena calidad presenta un color

Existe una variabilidad muy grande en la concentracin de un eyaculado a otro, y

blanco lechoso a un tanto cremoso, y relativamente uniforme, indicativo de alta

de un toro a otro, siendo importante conocer el nmero de espermatozoides por

concentracin. (Salisbury y cols., 1985; Evans y Maxwell, 1990; Bhattacharyya y cols.,

eyaculado, ya que de este parmetro depende el nmero de dosis seminales que se

2009).

obtendrn. As, (Hafez y Hafez, 2000) aporta datos de concentracin de 2X108 en


toros jvenes y 1,8X109 en los maduros. Herrick y Self (1965) mencionan que toros de

Segn Hafez y Hafez (2000), los toros pueden producir semen de color amarillo

alta fertilidad deben de contener concentraciones entre 0,8X109 y 2X109; Orji y cols.

debido a la presencia inocua de riboflavina. Esto, por tanto, no debe de confundirse

(1984) ofrecen medias de 2,16X109; Marn (1994): 0,3-2X109; Hunter (1987): 1,2-1,8;

con un color amarillento por presencia de orina, la cual tiene un olor caracterstico.

Christensen y cols. (1999) obtiene medias de 1,34X109, Brito y cols. (2002a) entre

Deben de desecharse muestras con aspecto lechoso que presenten fragmentos de

1,2X109 y 1,7X109, Palmer y cols. (2005): 0,320X109-0,724X109.

material o coloraciones como rojo o marrn, indicativo de presencia de sangre fresca o


hemolizada.

Existen diferentes mtodos para determinar la concentracin espermtica en el


semen. Una forma puede ser la utilizacin de hemocitmetros, como son las cmaras

2.13.2- Volumen

de Neubauer, Thomas-Zeib y Brker-Trk. stas se basan en realizar una dilucin


(1:100; 1:200) de la muestra de semen con solucin salina formolada para finalmente

El volumen de los eyaculados de toros es un parmetro que presenta una baja

observarse en un microscopio ptico (40X).

repetitividad, ya que ste depende de la edad y condicin del animal, factores

49

50

Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

Otro procedimiento tcnico para determinar la concentracin espermtica es

La evaluacin de la motilidad se realiza con semen puro (motilidad masal), o por el

mediante fotometra. Encontramos equipos que miden la concentracin del semen

contrario cuando ha sido diluido o congelado-descongelado se utiliza la proporcin de

puro, (Spermacue, Minitb, Alemania) a partir de una gota (5 l), as como los que

espermatozoides progresivos, conocida como motilidad progresiva (Evans y Maxwell,

miden por opacidad las muestra (Accucell, IMV, LAigle, France). La valoracin de la

1990; Hafez y Hafez, 2000).

opacidad mostrada por una muestra de semen, requiere la dilucin en solucin salina
formolada, solucin isotnica de citrato o simplemente suero fisiolgico (Muio, y cols.,

La motilidad masal, que es nicamente evaluable en eyaculaciones de mamferos


con concentraciones espermticas muy elevadas, como es el caso de los toros, se

2009; Contri, y cols., 2010).

determina depositando una gota de la muestra seminal sin diluir sobre un porta-objetos
Se debe tener en cuenta que dichos equipos deben estar calibrados en funcin de

atemperado en una placa trmica, y se visualiza sobre la muestra en un microscopio

la especie animal a la que se pretenda medir con este parmetro. Este tipo de aparato,

ptico a 10X. Se evala de forma subjetiva el movimiento de las clulas espermticas

bajo varios puntos de vista, presenta una gran ventaja ya que pueden determinar con

en su conjunto, y se les da una valoracin del 0 al 5.

precisin y gran rapidez la concentracin de una muestra.


2.13.6- Motilidad progresiva
2.13.4- Espermatozoides totales
El mtodo tradicional para determinar la motilidad progresiva consiste en utilizar
Tanto el volumen del eyaculado como la concentracin del esperma son dos

una gota de semen que se deposita entre un porta y un cubre para evaluar el

componentes crticos de la evaluacin del semen, ya que determinan el nmero de

movimiento de los espermatozoides, generando as una pelcula fina que permita

espermatozoides totales obtenidos en un eyaculado. La determinacin exacta de

determinar de forma ms o menos precisa, el nmero de clulas mviles presentes en

ambas variables determina el nmero de dosis y hembras que pueden ser

la muestra, e incluso realizar una valoracin de si el tipo de movimiento observado es

inseminadas. El nmero de espermatozoides totales reportado para toros oscila en

normal o no. Se observan varios campos por muestra utilizando para ello un

torno al rango de 4 - 5,5X109 (Marn, 1984; Marn, 1994; Galina y Valencia, 2009) y el

microscopio ptico con contraste de fases a 100X-200X. La estimacin de dicho

rango mucho ms amplio de Hunter (1987), de 4-14 X109.

parmetro est dada en una escala de 0-100.

2.13.5- Motilidad

La motilidad puede verse alterada tanto por una inadecuada temperatura como por
la presencia de sustancias txicas en el equipo de recoleccin. (lamo-Santana,

La motilidad ha sido uno de los parmetros de la calidad seminal ms estudiados

2007).

en el espermatozoide, al ser sta una de las ms importantes expresiones de la


funcin espermtica, que segn algunos autores, puede ser uno de los factores que
mejor se correlacionan con la fertilidad (Shanis y cols., 1989).

Los datos reportados por Brito y cols. (2002a), sobre la motilidad progresiva en
toros, oscilan en un rango de 58 y 60%; Christensen y cols. (1999) reportan datos de
entre 62 y 64% para la progresiva, mientras que para la masal aportan datos medios

La motilidad se valora mediante las caractersticas del movimiento del semen

de 3,9-5,0. Asad y cols. (2004): 61,290,31%. El mismo autor reporta datos de

segn la proporcin de motilidad progresiva de los espermatozoides en la muestra. La

motilidad masal que oscilan en torno a 4,870,07. Thum y cols. (2002): 69,16,9

valoracin por la onda de movimiento es el sistema ms simple para determinar la

74,76,9; Palmieri y cols. (2004): 67-68%; Amirat y cols. (2004): reportan 54,42,1 y

motilidad del semen fresco.

30,22,2; Espitia y cols. (2006): 47,513,1- 64,020,5; Latif y cols. (2009) ofrecen
valores medios de 66,113,3.

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Revisin bibliogrfica

Para algunos autores, la motilidad espermtica es uno de los parmetros para

Revisin bibliogrfica

2.13.7- Viabilidad

conocer tanto la calidad seminal como la correlacin con la fertilidad. Sin embargo, los
resultados estn limitados tanto por la subjetividad de la prueba como por la elevada

El termino viabilidad espermtica es, generalmente, utilizado para referirse a los

sensibilidad de la variable a la manipulacin. Hasta nuestros das, la motilidad se ha

espermatozoides con membrana plasmtica intacta. Es un factor importante en la

venido desarrollando de forma subjetiva mediante la observacin al microscopio de los

evaluacin de la calidad del semen, ya que una membrana plasmtica intacta es

porcentajes de clulas mtiles. Debido a todo esto se ha trabajo mucho en otras

necesaria para mantener las actividades metablicas intracelulares, e interactuar con

pruebas laboratoriales, como la capacidad de penetracin de esperma a travs del

la zona pelcida y plasmalema de un ovocito para una fertilizacin exitosa (Burks y

mucus cervical o geles de poliacrilamida en tubos capilares, as como, la tcnica de

Sailing, 1992; Bradley, 1999). La rotura de la membrana plasmtica est claramente

filtracin en columnas de Sephadex.

asociada con la perdida de viabilidad celular, pero una membrana plasmtica intacta
no siempre indica que la clula sea viable.

Actualmente, el anlisis seminal clsico ha mejorado mediante la introduccin de


nuevas tcnicas analticas procedentes de otros campos de la investigacin cientfica,

Los procedimientos ms habitualmente utilizado para la valoracin de la vitalidad

As, cada vez ms autores estn utilizando el sistema CASA (Computerized Assisted

son las tcnicas de tincin vital que permiten diferenciar los espermatozoides vivos de

Sperm Analysis) para obtener un valor preciso y objetivo de la motilidad espermtica y

los muertos debido a la permeabilidad de la membrana plasmtica a los colorantes

de la calidad del movimiento de los espermatozoides presentes en la muestra. La

vitales; por lo tanto, aquellas clulas que presentan una membrana plasmtica

incorporacin de estos mtodos informticos atena en gran parte el factor subjetivo

funcional no permiten el paso del colorante, mientras que si est alterada, el colorante

del anlisis seminal, y garantiza una mejor correlacin con la capacidad fecundante del

penetra en el interior de la clula y aparece teida.

espermatozoide.
El mtodo ms tradicional es la tincin con eosina-nigrosina (Who, 1999;
Este sistema ha provisto de interesantes resultados sobre los porcentajes medios

Tartaglione y Ritta, 2004) que tambin se utiliza para la valoracin de las

de motilidad y las diferentes sub-poblaciones de espermatozoides que coexisten en

morfoanomalas; pero algunos autores describen el uso de otras tinciones como el

una misma muestra (Mousa, y cols., 2002; Lamia, y cols., 2004; Muio y cols., 2009;

verde rpido/eosina o la eosina/azul de anilina, el tripn azul/giemsa o el amarillo de

Contri y cols., 2010; Ticiano y cols., 2010).

naftol/eritrosina. Tambin se usan tinciones comerciales como el Spermac.

Esta tcnica es posible utilizarla tanto en semen fresco como en el congelado o


refrigerado.

La evaluacin morfolgica de la integridad de la membrana plasmtica se realiza


usando la ptica de contraste de fases (1000X contando 200 espermatozoides), o la
ptica de contraste diferencial de interferencia o de Nomarski (lamo-Santana, 2007;

Tras todo lo dicho, cabe destacar que hasta el momento no se ha conseguido un

Bradley, 1999; HidalgoOrdez y cols., 2005).

mtodo de evaluacin seminal in vitro, que al utilizarlo slo o en combinacin con otros
sea capaz de predecir de forma segura la capacidad fecundante de una muestra de

El procedimiento muestra una extensin donde aparecen clulas vivas de color

semen. Para Hidalgo Ordez y cols., (2005), la valoracin in vitro de la calidad

blanco sobre un fondo prpura, o teidas de rosa si estn muertas (Iguer-ouada y

seminal es muy importante en la valoracin androlgica de los machos, ya que es el

Verstegen, 2001).

mejor indicador del grado de conservacin del semen congelado-descongelado.


Por otra parte, se han desarrollado mtodos alternativos para evaluar la integridad
de la membrana espermtica. Un mtodo simple para cuantificar la proporcin de

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Revisin bibliogrfica

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espermatozoides con una membrana plasmtica funcionalmente intacta es la prueba

2.13.8- Morfologa

de resistencia osmtica -HOST- (Jeyendran y cols., 1984; Revell y Mrode, 1994). La


prueba consiste en situar los espermatozoides en presencia de un medio de presin

La morfologa espermtica es una caracterstica importante para la inseminacin

osmtica ms baja que la fisiolgica, lo que causa una entrada de agua en la clula en

artificial en toros. La evidencia de una relacin entre morfologa de los

un intento de equilibrar la presin osmtica interna con la del medio externo. Para que

espermatozoides y la fertilidad en los toros ha sido descrita hace muchos aos por

esta respuesta se produzca, la membrana plasmtica del espermatozoide debe estar

diferentes autores (Rao, 1971; Linford, y cols., 1976; citado por Sderquist y cols.,

ntegra y con los mecanismos de intercambio de fluidos funcionando correctamente.

1996).

La entrada de agua provoca en estas clulas un hinchamiento y enrollamiento del

significativas entre la incidencia de algunas anormalidades espermticas y la fertilidad

flagelo. Las clulas con la membrana fsica o funcionalmente daada no experimentan

en toros (Sderquist y cols., 1991). Por lo tanto, cualquier factor que influye en la

cambios en la forma del flagelo. Los valores obtenidos en esta prueba se

incidencia de anormalidades en el esperma en el semen de los toros, tambin podran

correlacionan con otros parmetros de calidad seminal, como la motilidad, la viabilidad

influir en la fertilidad de los mismos.

Recientemente

han

sido

reportadas

correlaciones

estadsticamente

o la morfologa. (Hidalgo-Ordez y cols., 2005).


La valoracin de la morfologa del espermatozoide se basa en la relacin directa
Un segundo mtodo para cuantificar la integridad de la membrana, es la utilizacin
de tinciones fluorescentes. La capacidad discriminatoria de estas tinciones depende de

que haya entre la proporcin de espermatozoides anormales en el eyaculado, el tipo


de defecto morfolgico y su relacin con la fertilidad in vivo de los toros.

la capacidad de las membranas funcionalmente intactas para excluir el complejo


membrana-impermeable. Para la evaluacin de la viabilidad del sustrato membrana-

La evaluacin de las formas anormales permite distinguir los desrdenes de la

permeable se utiliza carboxyfluoresceina diacetato (CFDA), y en relacin al de

espermatognesis (morfoanomalas primarias) y los que se producen durante el

membrana-impermeable se utiliza el yoduro de propidio. Con esta tcnica, se

transito del espermatozoide por el epiddimo o fase de maduracin (anomalas

visualizan los espermatozoides viables de color verde, frente a los muertos que se

secundarias) que en general afectan menos a la fertilidad. Nthling y Irons (2008), en

observan de color rojo anaranjado. La utilidad de estas tinciones se centra

estudios recientes demostraron de manera concluyente que los defectos morfolgicos

principalmente en las muestras congeladas. Tambin pueden ser usadas tinciones de

pueden tener su origen tambin en el transito epidimal, el almacenamiento epidimal,

SYBR-14 en combinacin con yoduro de propidio, para estimar la proporcin de

durante la eyaculacin o despus, producto del manejo del semen, as como por su

espermatozoides vivos en semen (Garner y cols., 1994). Se ha demostrado que existe

estado de congelacin-descongelacin. Otros defectos, cuando se producen por su

una alta correlacin con otras mediciones de la calidad del semen, incluyendo la

propia cuenta y afectan a altos porcentajes de espermatozoides, puede indicar una

motilidad progresiva.

causa hereditaria y tienen un pronstico muy malo (Barth y Oko 1989).

La utilizacin de SYBR-14 o CFDA con yoduro de propidio en combinacin con la

Existen varias clasificaciones de formas anormales, pero en general todas ellas

citometra de flujo puede medir de manera exacta y objetiva la integridad de la

coinciden en considerar como primarias todos los defectos de forma y tamao de

membrana plasmtica del esperma bovino (Bradley, 1999; Gil y cols., 2000).

cabeza y de tracto intermedio, colas (enrolladas o dobladas) y las gotas citoplsmicas


proximales; y como secundarias las cabezas normales separadas, las gotas

En la mayora de los trabajos se considera que un semen es de muy buena calidad

citoplsmicas distales y las colas curvadas (Ott, 1986).

cuando se observan valores por encima de un 80% (Marn, 1984; Marn, 1994).
En el epiddimo del verraco, las gotas citoplsmicas se desplazan desde una
posicin prxima al cuello del espermatozoide hasta una posicin distal en la pieza

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Revisin bibliogrfica

intermedia. La presencia de clulas espermticas con gotas citoplsmicas es de un

un defecto importante las caractersticas primarias que ocurren en un 10-15% o ms

90% en la cabeza del epiddimo (Kaplan y cols., 1984, citado por Gadea-Mateo, 1997),

de la poblacin de espermatozoides y con significado aparente bajo para la fertilidad.

para ir disminuyendo a lo largo del trnsito epididimario (70% en la cola del epiddimo)

Barth y Oko (1989) afirman que los principales defectos de espermatozoides bajo este

y tener unos bajos niveles en el eyaculado (inferior al 15%). Por ello se ha utilizado la

sistema son aquellos que se han correlacionado con problemas de fertilidad.

presencia de gotas citoplsmicas como una valoracin de la madurez espermtica. En


el caso de la gota citoplasmtica proximal se ha visto que en la especie canina afecta
a la fertilidad (lamo-Santana, 2007).

Se puede concluir que la edad, la raza y los efectos estacionales, as como


repetidos y acumulados tratamientos de estrs, podran influir en las caractersticas del
semen del toro, y debe tenerse en cuenta al evaluar y clasificar los toros para los

La presencia de colas en ltigo y en ovillo es el resultado de una alteracin en el

rasgos de la morfologa espermtica. Las medias reportadas para anormalidades

trnsito por el epiddimo que imposibilita el movimiento del espermatozoide (Holt,

espermticas estn en la cabeza (6%), mientras que para el resto solo un 2%

1982, citado por Gadea-Mateo 1997). lamo-Santana (2007) menciona que

(Sderquist y cols., 1996).

las

anomalas provocadas por artefactos de la tcnica pueden llevar a roturas en las


cabezas y colas, as como provocar la aparicin de posturas anormales de los

En la mayora de las especies se verifica que al aumentar la incidencia de

espermatozoides que enmascaran el resultado real, generando un nmero

teratospermia se reduce el potencial reproductivo (Howard y cols., 1991). Esta realidad

inconcebiblemente alto de morfoanomalas. Las alteraciones de la cabeza tales como

puede ser debida a que el espermatozoide morfolgicamente anormal est en

la microcefalia o la macrocefalia, la presencia de colas dobles o cabezas dobles tiene

desventaja frente al estructuralmente normal en el transporte a lo largo del tracto

su origen en una alteracin de la espermatognesis.

reproductivo femenino, su capacidad para completar la fecundacin puede estar


reducida y el riesgo de que se produzca una muerte embrionaria precoz es mayor en

Como se ha sealado en apartados anterior, la tincin habitualmente utilizada para


valorar la morfologa del semen es la Eosina-Nigrosina, (Nthling y Irons, 2008) ya que

los embriones procedentes de un ovocito fecundado por un espermatozoide anormal


(Saacke y cols., 1988, citado por Gadea-Mateo, 1997).

sta, adems de proveer un mtodo fcil de realizar, tambin da informacin de la


viabilidad como integridad de la membrana (Blom, 1950, citado por Nthling y Irons,

2.13.9- Estado del acrosoma

2008).
El acrosoma juega un papel fundamental en la fecundacin, y esta importancia
Segn Barth y Oko (1989), el semen de un toro debe de cumplir con los requisitos

hace que convenga realizar una valoracin especfica del mismo. En un

que generalmente se recomiendan. No ms de 15-20% de los espermatozoides

espermatozoide que tenga el acrosoma en perfectas condiciones se pueden distinguir

afectados por defectos nucleares; no ms de 25% de los espermatozoides afectados

tres regiones claramente diferenciadas en la cabeza: la zona acrosomal, con su borde

por defectos del acrosoma o la cola; y al menos un 75% espermatozoides

apical, la zona postacrosomal y el segmento ecuatorial entre ambas. Las muestras

morfolgicamente normales. Para Ott (1986), la presencia de ms del 20% de formas

seminales con alta proporcin de acrosomas alterados o ausentes suelen tener una

anormales primarias o ms del 30% de formas anormales totales, es suficiente para

fertilidad baja (Saacke y White 1972, citado por Prez-Llano, 1992).

clasificar a un toro como cuestionable o insatisfactorio para la reproduccin. AlMakhzoomi y cols. (2008) reportan datos del 83,7% para las formas normales y menos

El acrosoma contiene varias enzimas, especialmente acrosina e hialuronidasa, que

del 15% de formas anormales, el mismo autor sigue mencionando que el porcentaje

se liberan durante la reaccin acrosmica, justo antes de penetrar en la zona pelcida

de espermatozoides morfolgicamente normales est relacionado positivamente con la

(Watson, 1992). Por tanto, su normalidad estructural es necesaria para que el

fertilidad aunque estos resultados difieren entre sementales. Blom (1968) define como

espermatozoide sea frtil. En este sentido, se ha observado en toros ciertas anomalas

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Revisin bibliogrfica

acrosmicas que estn asociadas a infertilidad o subfertilidad, como el acrosoma


nudoso y el acrosoma rizado (Saacke y cols., 1968, citado por Prez-Llano, 1992).

Revisin bibliogrfica

Estos sistemas se basan en la captura sucesiva de espermatozoides en


movimiento provenientes de un microscopio (50 imgenes por segundo). Estas
imgenes se digitalizan identificando las clulas espermticas que contienen la

Para determinar el estado del acrosoma se han usado desde hace mucho tiempo

primera imagen. Luego se procede al seguimiento de estas clulas en imgenes

diferentes tinciones, entre las que cabe destacar la Eosina-Nigrosina. (Hafez, 2000).

sucesivas y al establecimiento de las trayectorias definitivas. Las trayectorias se

Tambin se utiliza la tincin comercial Spermac. Gil y cols. (2000) determinaron el

procesan matemticamente, por la unin de los puntos correspondientes al centroide

estado acrosomal en toros mediante la utilizacin de tinciones fluorescente.

de la cabeza, obteniendo as unos resultados numricos precisos (Soler y cols., 2008).


El parmetro determinado para cada espermatozoide es la velocidad del movimiento

Sin embargo, la manera ms rpida de determinar el estado del acrosoma en

en base a varios descriptores (Boyers y cols., 1989).

aquellas especies donde el espermatozoide es lo suficientemente grande como para


permitirlo, es fijar la muestra en una solucin de glutaraldehido y visualizar

Con esas trayectorias se calculan, tradicionalmente, una serie de parmetros, tal

seguidamente, de forma directa, la estructura acrosomal en un microscopio con

como lo presenta la figura N 5, donde la lnea roja marca la trayectoria

contraste de fase. Con este sistema distinguimos un borde apical ntido que se

correspondiente a VCL (velocidad curvilnea), la lnea azul se refiere a la VSL

corresponde con el acrosoma, as como las posibles alteraciones del mismo, como

(velocidad lineal) y la trayectoria verde corresponde a la VAP (velocidad media).

cita Quintero-Moreno (2003).


El anlisis se hace al capturar las imgenes de espermatozoides en movimiento,
2.14- Valoracin de la motilidad espermtica mediante el sistema informatizado

previamente diluidos en un medio adecuado y en el microscopio a 100-200 aumentos.

CASA.

Tras la captura, la informacin es guardada hasta su anlisis. Una vez realizado el


anlisis, la informacin obtenida es transferida a un procesador matemtico que

El anlisis computerizado de la motilidad fue propuesto por primera vez por Dott y

fragmenta la motilidad espermtica en diversos descriptores de la motilidad individual

Foster (1979). Desde que se introdujeron en el mercado al principio de los aos 80,

que caracterizan la linealidad, la angularidad del movimiento espermtico y el

originalmente para la evaluacin del semen humano, stos se han ido perfeccionando

desplazamiento de la cabeza del espermatozoide.

y modernizando, a la vez que fueron hacindose ms accesibles, y por consiguiente,


comenzaron a utilizarse en el campo de la ciencia animal, especialmente en la especie
bovina, como en centros de inseminacin e investigacin.

De manera general estos sistemas constan de tres componentes principales: un


microscopio con contraste de fase conectado a una platina atemperada que permite
mantener las muestras a 37C, una cmara de vdeo de alta resolucin conectada a

Ahora bien, los sistemas CASA estn completamente infrautilizados, pues, hasta la

una pantalla de televisin y un software de anlisis de imgenes por ordenador.

fecha, suelen usarse tan solo para reproducir la observacin subjetiva tradicional.
(Soler y cols., 2008). No hay duda que aun as aporta un menor error tcnico y en

2.14.1- Cuantificacin de los movimientos espermticos

muchos casos un ahorro de tiempo importante. Pero la mayor parte de informes que
aportan se limitan al porcentaje de espermas mviles o mviles progresivos, clulas de

Los valores cinemticos determinados para cada espermatozoide cubren la

morfologa normal y concentracin. Ignorando los parmetros ms importantes que

velocidad de circulacin, la anchura de la trayectoria de la cabeza del espermatozoide,

son los datos individuales de cada clula, pues es a partir de los mismo que se puede

y la frecuencia del cambio de direccin de la cabeza del espermatozoide (Mortimer,

hacer una valoracin real de la poblacin espermtica.

2000). Algunos de los parmetros ms utilizados por diversos autores son los
porcentajes de motilidad total o motilidad progresiva.

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Revisin bibliogrfica

En funcin de su progresividad los espermatozoides son clasificados en: estticos,

Revisin bibliogrfica

ndice de oscilacin (WOB): Es la relacin porcentual entre la velocidad

mviles progresivos y mviles no progresivos.

Segn su velocidad los espermatozoides son clasificados en: rpidos, medios,

media y la velocidad rectilnea. WOB = (VAP/VCL) X 100.

Valores medios de otros parmetros:

lentos y estticos.
Amplitud media del desplazamiento lateral de la cabeza del espermatozoide
En funcin de su tipo de velocidad, llmese curvilnea (VCL), velocidad lineal

(ALH): Es el desplazamiento medio efectuado por la cabeza del

(VSL), velocidad media (VAP), se clasifican en: rpidos, medios, lentos.

espermatozoide en su trayectoria curvilnea de un lado a otro de la


trayectoria media o lineal. Medida en m/s.

Segn sus ndices de linealidad, rectitud, oscilacin se clasifican en: rpidos,

Frecuencia de batida de la cabeza (BCF): Es la frecuencia con la cual la

medios, lentos.

trayectoria curvilnea atraviesa la lineal en funcin del tiempo. Medida en


(Hz).

Los parmetros de velocidad que se determinan segn Mortimer (1997), son los
siguientes:

Con todos estos valores queda caracterizada la calidad del movimiento espermtico.

Velocidad Curvilnea (VCL): Distancia total recorrida por la cabeza del

Figura N 5. Parmetros de velocidad determinados por el CASA (Soler y cols.,


2008).

espermatozoide a lo largo de su trayectoria real por unidad de tiempo


(m/s).
Velocidad Rectilnea (VSL): Se determina a partir de la distancia en lnea
recta entre el primer y ltimo punto de su trayectoria, y da la ganancia de
espacio neto en el perodo de observacin. Medida en unidad de tiempo
(m/s).
Velocidad Media (VAP): Distancia recorrida por el espermatozoide a lo
largo de la trayectoria media de circulacin en el periodo de observacin.
Esto es, conceptualmente, el valor de la velocidad ms difcil de entender
porque podra parecer que debera ser similar a la VSL.

Debido a la forma en que la trayectoria influye en los valores de velocidad, estos


son tambin comparables. Los ndices de estas tres velocidades son:
2.15- Valoracin de la viabilidad espermtica mediante la tcnica de citometra
ndice de linealidad (LIN): Es la relacin porcentual entre la velocidad

de flujo

rectilnea y la velocidad curvilnea. LIN = (VSL/VCL) X 100.


ndice de rectitud (STR): Es la relacin porcentual entre la velocidad
rectilnea y la velocidad media. STR = (VSL/VAP) X 100.

La citometra de flujo se ha convertido en una tcnica importante en la evaluacin


espermtica, y es cada vez ms utilizada tanto para la evaluacin de rutina como para
la investigacin en ciencia veterinaria (Martnez-Pastor y cols., 2010). A lo largo de las

61

62

Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

dos ltimas dcadas, la citometra de flujo ha sido una herramienta de gran utilidad

viabilidad espermtica eran el yoduro de etididio y el homodmero de etidio, ya que

para la investigacin de poblaciones espermticas. Se han desarrollado muchos

estos son rpidos en reaccionar y fciles de usar, y pueden ser excitados (488nm) en

mtodos de tincin y combinacin de fluorocromos que permiten analizar una gran

la mayora de citmetros de hoy da.

variedad de funciones espermticas. Entre las caractersticas espermticas ms


comnmente analizadas para el control de la calidad del semen bovino, se incluyen el

En relacin a la identificacin de poblaciones de clulas vivas, se describe al grupo

estudio de la viabilidad espermtica, integridad del acrosoma, la funcionalidad

de

mitocondrial, estado de capacitacin espermtica, marcadores de apoptosis,

carboxifluorescena -CFDA-, diacetato de carboximetilfluorescena -CMFDA-, y

marcadores de estrs oxidativo, valoracin de la actividad mitocondrial y dao en el

diacetato de carboxidimetilfluorescena -CDMFDA- (Garner y cols., 1986; Garner y

ADN

contar

Johson, 1995). Son compuestos que al penetrar la membrana celular se convierten en

espermatozoides y ver el tamao de los mismos. La citometra de flujo, adems, est

carboxifluorescena por la accin de esteraras intracelulares, y al ser excitados a una

siendo utilizada para analizar otros aspectos de los espermatozoides como es la

longitud de onda determinada (488nm) emiten fluorescencia verde, quedando

separacin de espermatozoides X e Y, como mtodo previo para la obtencin de

retenidos intracelularmente por la membrana.

(Mata-Parra,

1997;

Martnez-Pastor

cols.,

2010),

Tambin

la

carboxifluorescena.

En

ste

podemos

mencionar

al

diacetato

de

embriones del sexo deseado (Johnson, 1995).


Una de las combinaciones para identificar espermatozoides vivos-muertos es la
El estudio de la viabilidad espermtica se basa en el anlisis de la integridad de la
membrana plasmtica de los espermatozoides, mediante el uso de dos fluorocromos

utilizacin de yoduro de propidio en unin con fluorocromos del grupo de las


carboxifluorescenas.

combinados. Uno de ellos es capaz de penetrar la membrana plasmtica daada o


degenerada, y por lo tanto, permite identificar las clulas muertas o en proceso de

As, Garner y cols. (1986) propusieron la utilizacin de yoduro de propidio, el cual

degeneracin. Mientras que el otro es capaz de atravesar membranas celulares

tie el ncleo de las clulas muertas como consecuencia de la unin a la doble hlice,

intactas, y por lo tanto, permite identificar poblaciones celulares vivas.

y el diacetato de carboxifluorescena, el cual es capaz de penetrar las membranas


celulares y ser convertido en un componente fluorescente impermeable. Estos autores

El yoduro de propidio es el ms utilizado para identificar clulas muertas. ste

concluyen que los espermatozoides totalmente viables son los verdes, en los que no

compuesto penetra en el espermatozoide con la membrana daada, se une de forma

aparece ningn rastro de rojo. En estos estudios aparece una subpoblacin de

estequiomtrica al ADN de doble cadena, donde se intercala entre la doble hlice, y al

espermatozoides que si bien son verdes, tambin son rojos. Es decir, una

ser excitado por la longitud de onda apropiada (636 nm), emite fluorescencia roja

subpoblacin de espermatozoides que puede tener comprometida su supervivencia.

(Graham, 2001; Martnez-Pastor y cols., 2010). Por otra parte, existen en el comercio
una gran variedad de marcadores fluorescente especficos para clulas muertas con el

Ericsson y cols. (1989) evaluaron, utilizando colorantes similares a los anteriores,

mismo mecanismo de accin. Como son el homodmero de etidio -1 (EthD-1) o Yo-

la relacin que exista en el ganado vacuno entre el nmero de espermatozoides

pro-1. Se ha comprobado que stos son los ms adaptables a la citometra de flujo

muertos o moribundos y el potencial fertilizador del toro. La citometra de flujo detect

clnica en comparacin con las colorantes de la membrana impermeable bisbenzimida

cinco poblaciones en estos animales, observando como en algunos casos exista

(Hoechst 33258), ya que estos provoca un rango ultravioleta y requiere un equipo UV

relacin directa entre estos dos parmetros.

lser (Guillan y cols., 2005).


Merece la pena mencionar tambin otros fluorocromos ampliamente utilizados para
En revisiones recientes de Martnez-Pastor y cols. (2010), encontraron que las ms

identificar espermatozoides vivos, como es el SYBR-14 que es capaz de atravesar la

comunes sondas utilizadas en la impermeabilidad de la membrana para determinar la

membrana intacta y unirse al ADN de los espermatozoides. Es una molcula ms

63

64

Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

estable que las basadas en la actividad de la esterasa intracelular, ya que no tiene que

La elevacin de la temperatura testicular resulta en el aumento del metabolismo y

sufrir trasformaciones para actuar, por lo que se une directamente al ADN, lo que

la demanda de oxgeno, pero el flujo sanguneo testicular est limitado y este aumento

garantiza que dichas partculas que no tienen dicho material gentico no se van a

de la demanda no puede ser suministrado, lo que produce hipoxia, generacin de

marcar. El SYBR-14, por lo general, suele usarse en combinacin con el yoduro de

especies reactivas del oxgeno, y el deterioro de la calidad del semen. La temperatura

propidio (Garner y cols., 1994, Garner, y cols., 1997). Distinguiendo de esta forma dos

testicular se mantiene dentro de lmites ptimos por complejos mecanismos

poblaciones espermticas, una de ellas, clulas muertas cuyas membrana plasmtica

fisiolgicos que afectan al escroto, el cono vascular y los propios testculos. Por lo

son permeables al YP y otra, clulas viables cuyas membranas intactas son

tanto, las variaciones entre los toros en la morfologa de estas estructuras, que podran

impermeables al YP, pero dan paso al SYBR-14 emitiendo fluorescencia verde.

afectar la capacidad de termorregulacin testicular, pueden influir en la calidad y la


produccin de esperma.

Se ha utilizando tambin el colorante Hoechst (33342), y activndolo con luz


ultravioleta

observaron

dos

picos

de

fluorescencia

que

correspondan

El valor de las temperaturas en el da de la recoleccin, durante la maduracin

espermatozoides vivos (poco fluorescentes) y espermatozoides muertos (muy

epididimal o durante la espermatognesis, es en general un efecto importante en la

fluorescentes). Adems, utilizando concentraciones ptimas de este colorante, se ha

produccin y calidad de esperma. La temperatura ambiente en el rango de 5-15 C se

obtenido un tercer pico en el citmetro de flujo, que corresponde a espermatozoides

considera ptima para la produccin del semen (Fuerst-Waltl y cols., 2006).

subviables, los cuales podran ser mviles pero tener disminuida su capacidad de
supervivencia (Keeler y cols., 1983). Segn la bibliografa, la utilizacin de dicho

Dado que la poblacin mundial de ganado se encuentra en diferentes zonas

colorante queda limitada nicamente a longitud de onda de un espectro ultravioleta

climticas, los efectos ambientales por estar relacionados con las condiciones

inferior a 488nm.

climticas han sido investigados intensamente en diferentes razas y pases. En


muchos estudios, las estaciones influyen significativamente en la produccin de semen

2.16- Factores que influyen en las caractersticas seminales

(Stalhammar y cols., 1998), mientras que en otras investigaciones no han revelado un


efecto importante (Brito y cols., 2002b).

El xito de la inseminacin artificial (IA) en el ganado, depende de una serie de


factores extrnsecos como el estado nutricional de las hembras, el xito reproductivo,

En muchas especies silvestres de bvidos, el pico de la estacin de parto es en la

la calidad del semen, la edad, raza y las variaciones estacionales. La comprensin del

primavera y el verano, cuando la temperatura y los suministros de alimentos son

impacto de dichos factores en la probabilidad de xito para el desarrollo de la IA, es de

favorables para criar a la descendencia (Hafez y Hafez 2000). Durante la

importancia bsica en el momento de valorar los ndices reproductivos, que dan

domesticacin, el ganado ha sido seleccionado para evitar el efecto de la

nfasis a los rasgos funcionales como la eficiencia reproductiva (Haugan y cols.,

estacionalidad, lo que les facilita para ovular y concebir todo el ao, aunque el ganado

2005).

bovino, como otras especies, aun es sensible al fotoperiodo (Reksen y cols., 1999).
Estos factores son parcialmente mejorables cuando los animales estn alojados en

El Mantenimiento de la temperatura testicular, 4-5 C por debajo de la temperatura


del cuerpo, es esencial para una

establos con temperatura controlada. Estudios recientes han podido demostrar que

espermatognesis normal en los toros (Waites,

existe una asociacin entre los efectos estacionales, lo que podra estar relacionando

1970; Brito y cols., 2002b; Senger, 2003; Koivisto y cols., 2009). Aunque El estrs por

el fotoperiodo y la calidad espermtica, como es el volumen y la concentracin en los

calor a travs del aislamiento escrotal resulta en una disminucin en el porcentaje de

toros (Sderquist y cols., 1996).

espermatozoides motiles progresivos (Brito y cols., 2002).

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66

Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

As, Haugan y cols. (2005) han podido demostrar en estudios recientes que la

Sderquist y cols. (1991) reportan correlaciones estadsticamente significativas en

poca de recogida de esperma afecta el xito de la IA, encontrando una tasa

algunas incidencias de anormalidades espermticas (cabezas anormales, crteres en

ligeramente ms alta en el periodo entre partos, observada cuando el fotoperiodo iba

la cabeza, gota citoplasmtica proximal) con la edad y fertilidad (TNR 56 das).

en aumento, con intervalos de entre 10 y 13 horas.


Varios autores sealan que la calidad espermtica est relacionada con la
Conocido es el efecto que la estacin del ao tiene sobre la calidad espermtica.

madurez sexual. En el toro, la edad a la pubertad es definida como la edad en la que

As, Janett y cols. (2002) encuentran variaciones altamente significativas tanto en el

su primer eyaculado contiene un mnimo de 50 millones de espermatozoides totales, y

volumen como en el nmero total de esperma y la motilidad en el semen fresco, mayor

presenta al menos un 10% de motilidad progresiva en su primera coleccin (Wolf y

en verano que en invierno, mientras que la concentracin espermtica fue

cols., 1965). Aunque la edad a la pubertad vara en funcin de las condiciones

significativamente menor en verano en comparacin con las otras estaciones. En

ambientales, alimentacin, raza e individuos. As, los toros de raza Holstein alcanzan

cuanto a la morfologa, los espermatozoides normales fueron significativamente

la pubertad a una edad promedio de 41 semanas (Almquist y cols., 1976).

menores en verano que en cualquier otra poca del ao. Dorado (2003) present
aumentos del porcentaje de espermatozoides morfolgicamente anormales durante los

En algunos trabajos se ha comprobado que la calidad seminal de semen colectado

das largos. Estas variaciones estacionales estn asociadas a cambios en las horas de

en toros de edad temprana, difiere de los colectados despus de los 410 das de edad.

luz y variacin de la temperatura (Corteel, 1981).

Tanto la motilidad masal, como la motilidad progresiva, concentracin y morfologa son


significativamente bajas, en comparacin con toros adultos (Picard-Hagen, 2002; Brito

Wildeus y Hammond (1993) encuentran que las variaciones estacionales influyen a

y cols., 2002b). Sin embargo, el manejo y la salud pueden sesgar los resultados para

las caractersticas seminales, especialmente el volumen y concentracin espermtica.

el efecto de la edad. Algunos toros mayores se pueden beneficiar de un tratamiento

Sin embargo para Koisvisto y cols. (2009), en estudios realizado en los trpicos,

preferencial, mientras que un posible estado desfavorable de la salud puede disminuir

encontraron anormalidades morfolgicas, de tipo gota citoplasmtica y cabezas

la cantidad y la calidad del esperma. (Fuerst-Waltl y cols., 2006).

sueltas, durante los meses de verano.


En esa misma lnea, en estudios ms recientes reportados por Fuerst-Waltl y cols.
Por otro lado, la temperatura ambiental elevada ha sido considerada como un

(2006)

se

encontr

que

los

parmetros

seminales

estn

influenciados

importante factor de detrimento en la espermatognesis y en la maduracin epididimal

significativamente por la edad del toro, afectando sobre todo al volumen del eyaculado

de los espermatozoides (Koisvisto y cols., 2009). As, en reas de altas temperaturas

y el nmero total de espermatozoides, que aumenta con la edad, mientras que la

generalmente se observa un incremento de la proporcin de espermas anormales,

concentracin de esperma fue menor en clases de mayor edad.

especficamente de la cola y gota citoplasmtica proximal (Chacn y cols., 1999). Por


otra parte, Brito y cols. (2002) reportaron que la temperatura y la humedad no afecta la

La edad del toro influye sobre la produccin espermtica, la cual aumenta de forma
paralela al desarrollo testicular a medida que crece el animal. El nmero de

produccin y calidad espermtica.

espermatozoides producidos, el volumen y la motilidad por eyaculado, se incrementan


En relacin a la edad de los toros, se ha podido comprobar que a medida que la

desde la pubertad hasta los 3 - 4 aos de vida, que es cuando alcanzan su mximo

edad avanza, se produce, primero una disminucin de formas anormales primarias, lo

valor, lo que se mantiene hasta los 7- 8 aos para luego volver a decaer. (Everett y

cual indica que las posibles alteraciones de la espermatognesis desaparecen, y luego

Bean, 1982, Lpez y cols., 2007).

una disminucin de formas anormales secundarias, lo que refleja que la maduracin


en el epiddimo se produce con normalidad (Folch, 1983).

67

68

Revisin bibliogrfica

Existen, as mismo, diferencias entre genotipos y razas en la sensibilidad a los


factores externos de temperatura y fotoperiodo. Koisvisto y cols. (2009) observaron

Revisin bibliogrfica

demanda de oxgeno, que no puede ser fcilmente suministrada debido a lo limitado


de los testculos en el flujo de sangre (Brito y cols., 2004).

diferencias entre los genotipos Bos taurus y Bos indicus, principalmente en


anormalidades morfolgicas. Asimismo, pudieron comprobar que existan diferencias

Por otro lado, la calidad seminal de los animales domsticos est influenciada

en el porcentaje de eyaculados eliminados antes o despus de la congelacin,

adems por la actividad sexual o frecuencia de recogida de espermas, y el intervalo de

acusando estas diferencias al genotipo Bos taurus.

recogida (Foote, 1978). En los trabajos reportados por Almquist y Amann (1976)
observaron que cuando existe un aumento de la frecuencia de recogida, disminuye el

Dentro de la misma raza, se han observado variaciones individuales significativas

volumen eyaculado, dando lugar a un ligero aumento del porcentaje de

entre machos en cuanto a la calidad y produccin de semen. Corteel (1977) observ

espermatozoides vivos. Sin embargo, la produccin de espermatozoides totales por

en animales de la misma edad y a lo largo de dos aos, diferencias individuales en

unidad de tiempo se produce con mayor frecuencia de recogida (Everett y Bean 1982).

produccin espermtica.
Varios autores confirman el efecto que produce la frecuencia de coleccin sobre
En relacin a las diferencias raciales, Sderquist y cols. (1996) informan que

las caractersticas seminales. Everett y Bean (1982) confirman este hecho, al observar

existen grandes diferencias seminales entre razas, principalmente las de tipo

que el primer eyaculado produce un 78% ms espermatozoides que el segundo.

morfolgica. Muio y cols. (2006), en estudios realizados en razas de aptitud crnica y

Tambin el primer eyaculado produce superiores calidades seminales, como volumen,

lechera, encontraron que stos ltimos presentaban mayor volumen seminal, pero no

concentracin y espermatozoides totales (Fuerst-Waltl y cols., 2006).

mayor valor en la concentracin espermtica. Esto probablemente indica que las


diferencias entre los dos grupos en el volumen del eyaculado, se deban ms a una

Con un incremento del intervalo de coleccin se obtienen ms espermatozoides

diferencia en la cantidad de plasma seminal, emitido por las glndulas sexuales

por coleccin pero pocos eyaculados por unidad de tiempo. Los datos reportados en

accesorias durante la eyaculacin, que a una diferencia en la produccin testicular.

varios estudios tambin demuestran que con intervalos de recogidas entre los 4-6 o
ms das, se aumenta el volumen seminal, concentracin y espermatozoides totales,

Brito y cols. (2002a) encuentran las mismas diferencias para los genotipos Bos
inducus y Bos taurus, aunque el nmero de espermas en el eyaculado fue mayor para

pero no la motilidad espermtica. Los intervalos entre los 2 y 3 das no muestras


diferencias importantes (Everett y Bean 1982).

el Bos taurus.
Para Fuerst-Waltl y cols. (2006) existen diferencias altamente significativas al
El nivel de sensibilidad a la temperatura de los genotipos en la produccin y

aumentar los intervalos de recogida, dando lugar a altos volmenes de eyaculado y

calidad espermtica ha sido estudiado por Chenoweth y cols. (1996), reportando que

nmero de espermatozoides totales. Con valores ms altos para los intervalos de

el genotipo Bos inducus presenta mejores parmetros seminales que el Bos taurus.

recogida de 6-9 das. El intervalo de coleccin tambin se observ que puede afectar a

Dichas diferencias, posiblemente estn influenciadas por las elevadas temperaturas

la concentracin espermtica, con valores ptimos en intervalos de entre 4-9 das. El

(Godfrey y cols., 1990). Skinner y Louw (1966) indican que la calidad del semen se

intervalo de coleccin de 1-6 das dio lugar a los ms altos valores para el porcentaje

deteriora ms drsticamente en Bos taurus y toros mestizos que en toros Bos indicus,

de espermatozoides viables en el eyaculado.

cuando son expuestos a altas temperaturas ambientales. Esta disminucin de la


calidad seminal es posiblemente acusada cuando la temperatura testicular excede los

Los ritmos de recogidas ms frecuentemente empleados en la especie bovina para

lmites fisiolgicos, consecuentemente hay un aumento del metabolismo celular y la

la realizacin de experiencias de larga duracin, son de dos veces en semana con 2


3 das de descanso entre coleccin (Brito y cols., 2002; Haugan, y cols., 2005; Al-

69

70

Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

Makhzoomi y cols., 2008, Muio y cols., 2009); o dos eyaculados por da dos veces

La falta de relacin entre la calidad seminal y la libido de un macho fue puesta de

en semana con un intervalo de descanso de 3 das (Koivisto y cols., 2009); tambin 3

manifiesto por Mateos Rex (1978), quin coincide en afirmar que ambas

4 veces en semana un solo eyaculado (Fuerst-Waltl y cols., 2006); o dos eyaculados

caractersticas deben de ser evaluadas, y que la libido, si bien no est relacionada con

por toros un da a la semana ( Sderquist y cols., 1996; Brito y cols., 2002b; Latif y

la fertilidad, s lo est con el nmero de hembras cubiertas y con el nmero total de

cols., 2009).

cubriciones realizadas, especialmente al comienzo de la temporada. Los toros de


libido alta generalmente dejan ms hembras preadas y ms prontas que toros de

Merece la pena destacar en este apartado, que al margen de todo lo dicho

libido baja, segn Chenoweth (1986).

anteriormente, es de vital importancia para que el semen presente unas caractersticas


biolgicas excelentes, que los sementales se encuentren en perfectas condiciones, y

El uso de toros con mayor libido tambin ha demostrado beneficiar el momento de

el mtodo empleado para la obtencin del mismo se aplique correctamente. Las bases

la concepcin duracin de la estacin de parto, y la homogeneidad de los terneros al

de seleccin de los sementales tiles para extraccin e inseminacin artificial, deben

destete. A pesar de la relevancia de la libido en los toros para la productividad de los

de seguir las mismas normas que para los sementales destinados para monta natural:

hatos ganaderos, stos no son evaluados de manera rutinaria. Muchos toros son

ausencia de enfermedades, buen estado corporal y aplomos correctos. Adems,

descartados o utilizados sin evaluar este carcter (Boyd y cols., 1991; Landaeta-

deben de mostrar buena libido, eyaculados de calidad y potencial gentico propio de la

Hernndez y cols., 2001).

raza.
En muchos estudios, la evaluacin de la libido ha sido encontrada como el mejor
El manejo de estos animales implica el control de los siguientes factores:
alojamiento,

alimentacin,

programas

sanitarios,

lo

que

hemos

descrito

indicador de la fertilidad natural del semental, en comparacin con la evaluacin del


semen (Smith y cols., 1981, citado por Landaeta-Hernndez y cols., 2001).

anteriormente, como es el rgimen sexual (frecuencia e intervalo de eyaculados).


Estudios recientes, indican que la libido es un factor importante que afecta la
2.17- Estudio y evaluacin del comportamiento sexual en los sementales

fertilidad del toro y hay evidencia de que est fuertemente influenciada por factores
genticos (Landaeta-Hernndez y cols., 2001).

La eficiencia de un solo toro sirviendo a un grupo determinado de vacas en


condiciones de monta natural, puede determinarse contando el nmero de preeces al

Quirino y cols. (2004), a fin de evaluar los beneficios potenciales de la libido en los

final de la temporada de apareamiento. Sin embargo, en los programas de

programas de evaluacin gentica con las mediciones testiculares (circunferencia

apareamiento mltiple estos mtodos no pueden ser aplicados, ya que varios toros

escrotal, largo, ancho y consistencia testicular), encontraron que las correlaciones

pueden servir la misma vaca, enmascarando posiblemente la presencia de toros sub-

genticas y fenotpicas observadas entre la circunferencia escrotal y la libido fueron de

frtiles e incluso infrtiles. Si esta situacin no se detecta a tiempo podra dar lugar a

r= 0,43 y r= -0,20, respectivamente. La correlacin gentica obtenida entre la libido

una importante prdida econmica. El 30% de los toros se reportan como incapaces

y las otras mediciones testiculares fueron negativas, lo que indica que los toros con las

de realizar el apareamiento adecuadamente en condiciones de monta natural

mejores libidos presentaron menor largo, ancho y consistencia testicular.

(Chenoweth y cols. 1981). Recientemente se han publicado numerosos trabajos que


ponen de manifiesto la importancia de conocer el comportamiento sexual en el toro,

En funcin de las caractersticas seminales, existe una correlacin gentica alta

como mtodo predictivo de su fertilidad, as como de conocer su relacin con los

entre la libido y el volumen (0,71) y motilidad progresiva (0,51), lo que indica que los

parmetros seminales.

toros con poca libido presentan mejores parmetros de volumen y porcentaje de


motilidad progresiva. Los estudios de morfologa espermtica revelan valores de

71

72

Revisin bibliogrfica

defectos mayores (-0.30), defectos menores (-0,26) y defectos totales (-0,43). Estos

Revisin bibliogrfica

2.17.1- Caractersticas del comportamiento sexual

hallazgos sugieren que un aumento en puntuacin de la libido se traducira en una


disminucin de los rasgos morfolgicos negativos del semen, y los toros con la mejor

Para evaluar la actividad sexual de un macho debemos conocer las caractersticas


del comportamiento sexual normal de la especie; hemos de distinguir claramente la

libido mostraran menos defectos espermticos (Quirino y cols., 2004).

diferencia entre libido y comportamiento copulatorio. Para Chenoweth (1981), la libido


Al igual que con cualquier otro comportamiento, la libido es una respuesta a los

es la capacidad del macho de detectar, seguir y cubrir a una hembra en celo; y el

estmulos endgenos o exgenos, mediada a travs de una variedad de mecanismos

comportamiento copulatorio es el que manifiesta el macho inmediatamente antes,

tanto fisiolgicos como de experiencia adquirida y motivaciones. La expresin de la

durante y despus del servicio. Segn este autor, el comportamiento copulatorio es la

libido es mediada por acontecimientos hormonales, principalmente en las relaciones

expresin ms obvia de la libido, y el estimulo que desencadena dicho

entre los niveles sanguneos de LH o de la testosterona. Aunque al parecer, en toros

comportamiento, tanto en toro como en verraco y morueco, es el reflejo de inmovilidad

no est del todo establecida (Henney y cols., 1990).

de la hembra.

Se han llevado a cabo varios estudios para evaluar las relaciones que existen
entre el comportamiento sexual y los niveles hormonales de los sementales,

En el caso de los rumiantes se pueden distinguir durante el apareamiento


diferentes actos que se describen en los apartados posteriores.

principalmente los de tipo LH y testosterona, pero stos han sido de poca utilidad, ya
que por una parte existen fallos en la precisin y la forma de medirlos, y por otro lado

2.17.2- Actos de cortejo o etograma

existe poca relacin entre los niveles y el comportamiento (Chenoweth y cols., 1979).
Son los actos que realiza el macho para investigar el estado fisiolgico de la
Bindon y cols. (1976), en estudios realizados en toros cebes, compararon los

hembra y provocar en ella el reflejo de inmovilidad. Entre ellos destacan:

niveles de testosterona y hormona LH con el nivel de la libido de los sementales,

El flehmen.

encontrando que dichos parmetros no estaban relacionados entre s. Otros estudios

Lamer y oler la vulva, o la orina de la hembra.

publicados reportan que no existe ninguna relacin entre los niveles hormonales de

Golpes en los flancos.

testosterona y hormona LH, y la libido, en toros de distintas edades (Foote y cols.,

Acoso.

1976). Quirino y cols. (2004), no encuentran en sus resultados diferencias en la

Levantar las patas.

puntuacin de la libido y las edades de los toros.

Flotar la cara contra los flancos de la hembra.


Intentos de monta.

De

acuerdo

con

Chenoweth

(1986),

algunos

toros

pueden

presentar

Goteo y protrusin del pene.

temporalmente deficiencias en la libido por influencias ambientales, o si el estmulo


fuese el inadecuado (p.e. hembras completamente en estro). Adems indica que los

El macho investiga el estado fisiolgico de la hembra realizando todos estos actos

toros jvenes pueden ser sexualmente ms activos que los toros adultos, pero menos

sin orden aparente, excepto el flehmen que suele ocurrir despus de oler la vulva o la

frtiles.

orina de la hembra, y el intento de monta con el que termina el cortejo en el caso de


que la hembra presente reflejo de inmovilidad, lo que induce al macho a pasar a los

Landaeta-Hernndez y cols. (2001), en estudios realizados para conocer el

actos de apareamiento.

comportamiento sexual en toros, encontraron que existe un importante grado de


variacin individual influenciado por la libido del toro.

73

74

Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

2.17.3- Actos de apareamiento

Chenoweth y cols. (1979) proponen un test de libido ms completo, el cual


consiste en exponer a un macho durante 10 minutos a una hembra atada en celo o no

Una vez que la hembra est inmvil se desencadena la secuencia eyaculatoria que

en celo, mediante una puntuacin de 0 a 10. (tabla N 5).

termina con el caracterstico golpe de rin en el momento de la eyaculacin. As se


suceden las etapas

Se ha demostrado que el uso de hembras en celo no es necesario para valorar el

Montas sin intromisin.

comportamiento sexual del toro, estos presentan estmulos estando la hembra atada

Intromisin sin eyaculacin.

adecuadamente. El uso de novillas no estrogenizadas fue considerado satisfactorio

Intromisin con eyaculacin.

para Nwakalor y Ezinma (1989).

2.17.4- Mtodos para evaluar el comportamiento sexual en toros

La prueba debe de realizarse varias veces, en diferentes das y la peor puntuacin


se desecha. Es til para los machos jvenes, ya que permite dar una puntuacin a un

La finalidad de una prueba de comportamiento sexual, es valorar a los machos

macho que no llegue a cubrir. De otra manera se descartaran machos jvenes que en

sexualmente ms activos y detectar machos inactivos, ya que estos representan una

una primera prueba no hubieran desarrollado completamente el comportamiento

fuente de gran prdida.

sexual. La repetividad de la prueba es de 0,67.

El macho que se evala obtiene la puntuacin mxima alcanzada segn su

Para que los resultados sean fiables y el test sea til deber cumplir las siguientes

actividad durante el desarrollo del test.

premisas:
Repetible.
Fcil de interpretar.

Tabla N 5. Puntuacin numrica para la evaluacin global de la libido en toros.


(Chenoweth y cols., 1979).

Correlacionado con los resultados de campo.


Fcil y rpido de realizar.
0

Sin Inters sexual.

Muestra inters sexual en una ocasin.

La evaluacin del comportamiento sexual en toros se ha visto obstaculizada por la

Inters sexual en la hembra en ms de una ocasin.

falta de un mtodo de prueba simple y repetible. Varios procedimientos se han descrito

Bsqueda activa de la hembra con persistente inters sexual.

en la bibliografa, pero en general, todos los autores han utilizado como parmetro

Una monta o intento de monta sin servicio.

mas objetivo el nmero de cubriciones en un tiempo dado y el tiempo de reaccin a la

Dos montas o intentos de monta sin servicio.

primera eyaculacin, distinguindose as, tres tipos de pruebas para evaluar el

Ms de dos montas o intentos de montas sin servicio.

comportamiento sexual (Chenoweth y cols., 1979).

Un servicio y prdida posterior del inters sexual.

Un servicio seguido de inters sexual, incluyendo montas o intentos de montas.

Dos servicios y prdida posterior del inters sexual.

Bajo en costos.

2.17.4.1- Test del libido

10
Es una prueba para toros desarrollada por Osborne y cols. (1971), donde se

Dos o ms cubriciones sin prdida posterior del inters sexual, incluyendo


montas o intentos de montas.

evala la libido del macho hasta su primera cubricin, con una duracin mxima de 5
minutos, utilizando como estmulo una hembra inmovilizada y con celo inducido.

75

76

Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

Varios autores proponen, adems de lo anterior, una serie de categoras para el

prueba de 5 minutos y los obtenidos durante una prueba de campo de 24 horas. As

sistema de puntuacin de la libido de los toros. As, Ologun y cols. (1981) proponen un

mismo, Price (1987) afirma que en general los resultados obtenidos en los tests de

libido alto a las puntuaciones que van de 8 a 10. Makarechian y cols. (1985), libido

capacidad de servicio por toros y moruecos estn correlacionados con su rendimiento

medio a puntuaciones de 3 a 7. Y Chenoweth (1994), libido bajos a puntuaciones que

en el campo.

van del 0 al 2.
Segn la mayora de trabajos consultados, el nmero de servicios por unidad de
Chenoweth y cols. (1979), comparando tres mtodos de conducta de

tiempo es el mtodo potencialmente ms til para evaluar la libido del macho, al ser

apareamiento en 113 toros jvenes toros de carne, vieron que la puntuacin alcanzada

una medida directa del comportamiento que da lugar a la deposicin del semen y ser

por los machos en el test de libido (10 minutos) con una hembra adulta en celo, daban

adems altamente repetible (0.61 a 0.71).

valores de 5,700,25 minutos para un primer test y 6,220,24 minutos para el


segundo. La media para el test de capacidad de servicio en toros en un periodo de 30

2.17.4.3- Tiempo de reaccin

minutos fue 1,140,19 y 1,230,18 respectivamente. La media del tiempo de reaccin


para el primer servicio en el primer test de capacidad de servicio fue de 8,250,95
minutos, y en la segunda prueba fue de 5,710,86 minutos.
2.17.4.2- Test de capacidad de servicio

Es el tiempo transcurrido entre el primer contacto del macho con el estmulo y la


primera cubricin.

Landaeta-Hernndez y cols. (2001), estudiando la precisin de los diferentes


mtodos de evaluacin de la conducta sexual en 26 toros jvenes, encontraron una

Desarrollado por Blockey (1976) para toros, consiste en anotar el nmero de

media para el tiempo de reaccin de 2,381,43 minutos, con una repetibilidad baja

servicios realizado por un toro durante 40 minutos de exposicin a una hembra atada,

(0,04). La progresiva disminucin del tiempo de reaccin fue observada con el

no en celo. Los resultados estuvieron correlacionados con el nmero de hembras en

aumento consecutivo de los tests. Esta prueba ha mostrado estar influenciada por una

celo cubiertas por los mismos machos en estacin sexual (r=0.98). La repetibilidad es

alta variabilidad individual, lo que sugiere que sta puede estar influenciada por otros

de r=0.60.

factores, como genticos, aprendizaje, y/o factores ambientales.

Una de las desventajas de esta tcnica es que los machos que no cubran durante

En el toro, las pruebas realizadas por Chenoweth y cols. (1979), demostraron que

la prueba no alcanzan ninguna puntuacin y pueden ser desechados machos con

el tiempo de reaccin tiene tan baja repetibilidad que no se consider como un mtodo

poca experiencia.

alternativo para valorar la libido. Para Kilgour (1984), el tiempo de reaccin tiene en el
toro muy baja repetibilidad y puede variar si los machos se han estimulado

Estudios recientes sugieren que el nmero total de servicios realizados en un

previamente o si las hembras muestran miedo.

periodo de 10 30 minutos no muestra diferencias en el test. Concluyendo que 10


minutos proporciona informacin comparativa en el comportamiento sexual.

2.18- Principios bsicos para la criopresevacin del semen

Salmon y cols. (1984) -citado por Prez-Llano, (1992)- observaron en moruecos

Desde el descubrimiento del glicerol como agente crioprotector efectivo y del

Merino dArles que un test de 5 minutos era suficiente para poner en evidencia la

establecimiento de las tcnicas bsicas de criopreservacin, el semen de una variedad

existencia de un comportamiento copulatorio eficaz en la mayora de los machos.

de especies se congela y utiliza con xito en la inseminacin artificial. Sin embargo, y

Estos autores encontraron una correlacin de 0.40 (p<0,05) entre los resultados de la

77

78

Revisin bibliogrfica

con excepcin de los bvidos, la utilizacin generalizada de semen congelado no se


ha extendido a las otras especies domsticas (Holt, 2000).

Revisin bibliogrfica

Las clulas congeladas estn sujetas a tensiones que resultan de las interacciones
agua-soluto, que aumentan con la cristalizacin del agua. Durante la congelacin, la
exposicin de clulas al medio hiperosmtico descongelado provoca la salida de agua

La reduccin de la temperatura por debajo de los 37 C y, principalmente, de los 20

intracelular, causando el encogimiento de la clula y la posible entrada de iones. La

C induce una serie de alteraciones de naturaleza biofsica en el espermatozoide

descongelacin involucra una inversin de stos efectos, y el flujo de agua al interior

(Amann y Pickett, 1987). El mayor desafo para las clulas en el proceso de

de la clula puede causar ruptura de la membrana de la clula (Holt, 2000).

congelacin no es resistir a las bajas temperaturas del nitrgeno lquido, sino


mantener la viabilidad en un rango de temperaturas, entre los 15 y 60 C (en el cual

Existe una velocidad de enfriamiento ptima para cada tipo de clula, dependiendo

se producen los mayores daos) que las clulas experimentan por dos ocasiones, es

de su tamao, su relacin de superficie-volumen, su permeabilidad al agua y el

decir, durante la congelacin y durante la descongelacin. A 196 C no se producen

coeficiente de temperatura de esa permeabilidad (De la fuente, 1999).

reacciones trmicas, puesto que debajo de los 130 C no existe agua en el estado
lquido (Mazur, 1984).

La congelacin lenta permite una deshidratacin celular progresiva que provoca un


aumento de la concentracin intracelular de solutos lo que impide la formacin de

Para las clulas espermticas, la tasa ptima de descenso de la temperatura oscila

cristales intracelulares. A medida que el medio extracelular se va congelando las

entre 10 y -100 C/minutos, ya que velocidades superiores o inferiores provocan una

clulas quedan atrapadas en canales de solucin sin congelar, siendo los niveles de

disminucin de la supervivencia (Rodrguez y cols., 1975).

supervivencia espermtica muy altos si permanece sin congelar alrededor del 15% del
agua extracelular (Amann y Pickett, 1987).

Cuando una suspensin de clulas se enfra a menos de 0 C, se forman cristales


de hielo extracelulares, lo cual hace que los solutos se concentren en el agua lquida

En la congelacin rpida, no hay tiempo suficiente para que se produzca el paso

restante. La membrana celular acta como una barrera que impide la diseminacin de

del agua intracelular al medio extracelular y por tanto la deshidratacin. El agua que

los cristales de hielo hacia el interior de los compartimentos intracelulares (Watson,

queda en el interior de la clula se congela en forma de pequeos microcristales que

1979). Las sales no forman parte de los cristales de hielo, de modo que habr una

no daan la clula.

considerable concentracin de sales en la porcin remanente del agua no-congelada.


El aumento del gradiente osmtico a travs de la membrana plasmtica provoca la

Si bien la descongelacin rpida minimiza el dao por efecto de la disolucin, tal

difusin del agua intracelular hacia el ambiente extracelular, causando deshidratacin

proceso hace que se formen grandes cristales de hielo que causan daos mecnicos

de la clula y de la membrana plasmtica (Amann y Pickett, 1987).

graves. Por otro lado, la descongelacin lenta impide la formacin de grandes cristales
de hielo, pero provoca mayores daos por efecto de la disolucin. (figura N 6). De

Si se agregan crioprotectores como glicerol o dimetil sulfxido al medio de

este modo, la rapidez de descongelacin ptima para un tejido dado depende de su

congelacin, es posible que retarde la deshidratacin de las clulas y el consecuente

tolerancia relativa al dao por cristales de hielo y a la toxicidad por efecto de la

dao por el efecto de disolucin (Hafez y Hafez 2000). Por tanto, la deshidratacin

disolucin (Hafez y Hafez 2000).

osmtica, ms que la formacin de hielo intracelular, es la principal causa de las


alteraciones ultraestructurales de la membrana, y una de sus consecuencias es la
prdida de la selectividad de la membrana (Parks y Graham, 1992).

Es, por tanto, importante que el logro de una longevidad celular mxima, requiera
que el ritmo de descongelacin est en concordancia con el ritmo apropiado de
congelacin (Mazur, 1984). Si el ritmo de enfriamiento es rpido, el de calentamiento
tambin lo debe ser; alternativamente, si el ritmo de enfriamiento es lento tambin

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Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

debe serlo el de calentamiento. Las clulas que contienen micro-cristales de hielo

Ca2+ y prdidas de K+ y Mg2+. Por el contrario, los espermatozoides del hombre, aves,

intracelulares deben ser recalentadas muy rpidamente a fin de evitar la re

perro y conejo, no evidencian alteraciones tan marcadas.

cristalizacin de estos pequeos cristales, en grandes cristales que pueden daar las
Algunos constituyentes de la membrana espermtica, son sumamente importantes

clulas (Amann y Pickett, 1987).

en el grado de susceptibilidad de los espermatozoides de las distintas especies al


El proceso de criopreservacin incluye 5 etapas: Dilucin, refrigeracin, adicin del

choque trmico, en tal caso, los fosfolpidos y los cidos grasos. De hecho,

crioprotector, congelacin y descongelacin. Mientras que algunas fases son

espermatozoides de toro, cerdo y morueco, conocidos por su elevada susceptibilidad

relativamente inocuas, otras son muy estresantes, como es el caso de la refrigeracin

al choque trmico, presentan una elevada ratio entre cidos grasos poliinsaturados y

y la congelacin (Watson, 1995). Cada etapa del protocolo ejerce una interaccin

saturados, de aproximadamente 2,5-3,3. Mientras que espermatozoides de conejo y

especial con la estructura, la funcin de la membrana y con el metabolismo celular

hombre presentan una ratio de 1 (Poulos y cols., 1973, citado por Andrade Martins,

(Hammerstedt y cols., 1990).

2005).

Uno de los problemas ms evidentes en los procesos de conservacin del semen,

Los principales daos celulares inducidos por la refrigeracin, incluyen alteraciones

es el conjunto de alteraciones en el espermatozoide, designadas colectivamente como

morfolgicas como ruptura de la membrana plasmtica y acrosmica, degeneracin

choque trmico (Foote, 2002). Dichas alteraciones se traducen en un patrn irregular

acrosomal y lesiones en las mitocondria.

del movimiento, prdida de la motilidad, aumento de la permeabilidad de la


membrana, disminucin del metabolismo, prdida de componentes intracelulares, y

La prdida de las propiedades de selectividad en la permeabilidad de la membrana


es uno de los hechos que ms precozmente se producen en el proceso. Est asociada

disminucin de la produccin energtica (Watson, 1981).

a las fases de transicin de los lpidos de la membrana debidas al choque trmico


El choque trmico provoca en las clulas otros efectos, como alteraciones en la

(Watson, 1981). En el toro, la dilucin y refrigeracin a 5 C provocan edema del

organizacin de los lpidos de la membrana del espermatozoide o fases de transicin

acrosoma en el 50% de los espermatozoides (Jones y Stewart, 1979, citado por

lipdica (Drobnis y cols., 1993). Otro factor tambin correlacionado con la

Andrade Martins, 2005). La actividad respiratoria del espermatozoide disminuye, as

susceptibilidad

como la glucolisis, lo que provoca una reduccin en los niveles de ATP y por ello, la

del

espermatozoide

al

choque

trmico,

es

la

ratio

colesterol/fosfolpidos, habindose observado que una ratio superior a 0,5 confiere

prdida de la motilidad.

una mayor resistencia al choque trmico.


En relacin a los daos sufridos tras la congelacin, la membrana plasmtica y
Debido a este fenmeno, la refrigeracin previa a la congelacin se lleva

acrosomal son ms sensibles que el ncleo y que la porcin intermedia; y en el

habitualmente a cabo con mucha precaucin, de modo que el enfriamiento se realiza

acrosoma, la membrana externa es ms vulnerable que la membrana interna y que su

lentamente, aunque esto no evita que los cambios de temperatura originen

contenido, es decir, que el acrosoma propiamente dicho.

alteraciones en las membranas (Watson, 2000).


En sntesis, podemos mencionar que los daos provocados por el proceso de
La susceptibilidad al choque trmico vara con las especies, considerndose los

congelacin y descongelacin son los siguientes:

espermatozoides de toro y de cerdo entre los ms sensibles, en los cuales se

La deshidratacin celular, que provoca un aumento de la permeabilidad no

manifiesta por marcadas alteraciones en el movimiento de iones, con acumulacin de

selectiva de las membranas celulares a consecuencia de cambios en la


distribucin de sus componentes, especialmente los lpidos, y la formacin

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Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

de pliegues en la membrana, debido a los cambios de volumen, que

Los crioprotectores incrementan la probabilidad de supervivencia celular, pero a

pueden llegar a producir el contacto y la eventual fusin entre membranas

determinadas concentraciones resultan txicos para las clulas, por ello, debe

contiguas.

establecerse un equilibrio entre la mnima cantidad necesaria que provea proteccin

Aumento de la concentracin de solutos intra y extracelulares, los cuales


pueden resultar txicos para la clula.

celular durante el proceso de congelacin-descongelacin, y la mxima cantidad que


no presente efectos txicos para las mismas.

Estrechez de los canales de lquidos extracelulares no congelados, lo que


Un buen crioprotector debe de tener las siguientes premisas:

impide la acomodacin celular en los mismos, provocando la deformacin y

Alta solubilidad.

posibles lesiones celulares (Holt, 2000).

Baja toxicidad a altas concentraciones.


Figura N 6. Alteraciones fsicas de los espermatozoides durante el proceso de
congelacin y descongelacin. Las estrellas representan cristales y
microcristales de hielo. Las flechas representan el movimiento del agua o del
crioprotector (Amann y Pickett, 1987).

Bajo peso molecular para lograr una mayor permeabilidad y para obtener el
mximo efecto coligativo.
Tabla

6.

Crioprotectores

permeables

de

bajo

peso

molecular,

crioprotectores no permeables de bajo peso molecular, 3crioprotectores no

permeables de alto peso molecular.

CRIOPROTECTORES Y SOLUCIONES PARA CONGELACIN


1

CPBP

CNPBP

CNPAP

Glicerol

Galactosa

Polivinilpirrolidona

Etilenglicol

Glucosa

Alcohol Polivinilico

1,2 Propanediol

Sacarosa

Almidn Hidroxietlico

DMSO

Tretalosa

Hialuronidato de Sodio

2,3 Butanediol

Lactosa
Manosa

Otros Polmeros

Metanol
Otros Alcoholes

Otros Azucares

2.19- El papel de los crioprotectores en los diluyentes de congelacin


Los

crioprotectores no permeables, no penetran la membrana plasmtica, y

La funcin de los crioprotectores es la de proteger a las clulas de las lesiones

ejercen su accin en el medio externo. Estos azucares realizan su efecto en el

producidas por la congelacin. En la actualidad existen muchos tipos de protectores

porcentaje de agua sin congelar a bajas temperaturas, y disminuyendo la

(Tabla N 6), que se agrupan segn las posibilidades de penetracin o no en las

concentracin de sales en los canales de agua (Amann y Pickett, 1987).

membranas celulares. Se cree que los crioprotectores actan reduciendo la cantidad


de hielo presente a cualquier temperatura durante la congelacin, moderando as los

El DMSO (dimetilsulfxido) o el glicerol, penetran de forma rpida a travs de la


membrana plasmtica del espermatozoide, llegando al interior del citoplasma celular,

cambios en la concentracin de solutos.

ejerciendo su accin protectora, reemplazando el agua intracelular y disminuyendo el

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Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

estrs osmtico provocado por la deshidratacin, aunque manteniendo el volumen y

un compromiso entre los efectos protectores y los efectos txicos (Watson y cols.,

disminuyendo el punto de congelacin.

1979). Por otra parte, la preservacin de la motilidad y la integridad de las membranas


(plasmtica y acrosomal) exigen concentraciones de glicerol ligeramente distintas.

Los

crioprotectores

no

penetrantes

de

elevado

peso

molecular

actan

osmticamente, promoviendo la deshidratacin celular durante la congelacin, e

En la congelacin de semen de rumiantes como el bovino, ovino y caprino, la

impidiendo la formacin de grandes cristales de hielo en el interior de la clulas

totalidad de los trabajos publicados utilizan el glicerol como el crioprotector principal,

(Watson, 1995). Estos agentes no atenan el efecto de la alta concentracin

con una concentracin optima del 7% (Watson, 1979; Watson, 1995). La

intracelular de solutos (efecto solucin), y, por tanto, son ms efectivos en

concentracin optima de glicerol para la congelacin de semen bovino est tambin

congelaciones rpidas.

influenciada por otros componentes en el diluyente (Woelders, 2003). Basta decir que
las concentraciones de glicerol para la congelacin han sido entre 0,25 M (2,25%) y 1

2.19.1- El glicerol

M (9%), con muchos estudios que demuestren la toxicidad ms all de esta


concentracin (Fahy, 1986).

El glicerol es el crioprotector mas utilizado en los protocolos de congelacin en


todas las especies domsticas. Su descubrimiento como agente crioprotector se debe

2.19.2- La Yema de Huevo

a Polge y cols. (1949), y ha marcado un avance notable en la preservacin del semen,


por medio de la congelacin. Esta sustancia ocupa simultneamente la membrana y

Adems de los crioprotectores mencionados anteriormente, la yema de huevo ha

los compartimentos extra e intracelulares (Mazur, 1984). Sin embargo, Amann y

sido tambin utilizada ampliamente desde muchas dcadas atrs, por su alto poder

Pickett (1987) sugieren que su principal efecto crioprotector se ejerce a nivel extra-

amortiguador. Actualmente varios autores confirman, que se utilizaba en la mayora de

celular. El glicerol aumenta la osmolaridad del medio externo, disminuye la

animales domsticos as como en especies exticas (Holt, 2000).

concentracin de sales, y aumenta el agua extracelular sin congelar a bajas


temperaturas, aumentando los canales de agua descongelada (Amann y Pickett,

Phillips (1939) fue el primer autor en describir el efecto protector que la yema de

1987). Los efectos sobre la osmolaridad celular no son los nicos, el glicerol tambin

huevo tiene sobre la membrana espermtica y acrosoma del espermatozoide frente al

parece ejercer un efecto directo en la permeabilidad de la membrana plasmtica,

choque trmico, siendo todava un constituyente habitual de los diluyentes usados en

disminuyendo su fluidez al formar uniones con las protenas (Parks y Graham, 1992).

la congelacin del esperma bovino. La yema de huevo posee unas fracciones lipdica y
proteica (fosfolpidos, lecitina, cefalina) que han demostrado tener un efecto

Por otra parte, existe consenso en que a pesar de que el glicerol protege las

crioprotector frente al choque trmico durante el proceso de refrigeracin, congelacin

membranas del espermatozoide durante la criopreservacin, tambin ejerce una cierta

y descongelacin. Hecho confirmado por Blackshaw (1954), citado por Andrade

toxicidad celular, que afecta a la membrana plasmtica (Hammerstedt y cols., 1990).

Martins (2005), quien precis que la lecitina era el principal fosfolpido protector.

Las alteraciones resultantes pueden mermar la fertilidad del espermatozoide, aunque


tenga motilidad tras la descongelacin (Watson, 1979) y seguramente una adecuada

El mecanismo por el cual estos fosfolpidos protegen la membrana espermtica no

produccin de energa, ya que puede afectar a otros aspectos importantes (Amann y

es del todo conocido, aunque se cree que pueden prevenir la prdida de fosfolpidos

Pickett, 1987).

que la misma sufre durante el choque fro.

La sensibilidad a los efectos txicos del glicerol vara considerablemente con la

Varios autores confirman la accin protectora de la yema de huevo post-

especie. La concentracin ptima para una determinada especie representa siempre

descongelacin. Mejora la motilidad, la integridad del acrosoma, la supervivencia y la

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Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

fertilidad (Holt, 2000). Estudios recientes con semen de carneros, han demostrado que

En estudios recientes, se ha informado de los riesgos de contaminacin

la yema de huevo tiene un efecto protector de la membrana, al tiempo que mantiene

microbiana que representa el uso de yema de huevo (Thun y cols., 2002). Jimnez y

una motilidad alta post-descongelacin.

cols. (2004), aunque reconocen los efectos beneficiosos de la yema de huevo para la
preservacin espermtica, estn de acuerdo en que representa un riesgo potencial de

Tambin se le atribuyen propiedades protectoras contra los efectos txicos del

contaminacin microbiana para las dems clulas, afectando la calidad de la muestra.

plasma seminal que desestabilizan la membrana del espermatozoide. De modo que, la


cantidad de yema contenida en el diluyente debera ser proporcional a la cantidad de

Mousa y cols. (2002), y Amirat y cols. (2004), consideran que la creciente demanda

plasma seminal en el semen diluido. As, en casos en que el semen est muy diluido

para reemplazar la yema de huevo como componente del diluyente, es debido a la

existe, consecuentemente, una reducida concentracin de plasma seminal y por ello,

presencia

las concentraciones de yema pueden ser reducidas sin impacto negativo en la

espermatozoides, disminuyendo su motilidad. Se han podido observar grandes

fertilidad (Shannon y Curson, 1983).

beneficios cuando se eliminan estas sustancias nocivas de la yema de huevo y se

de

sustancias

en

la

yema

que inhiben

la

respiracin

de

los

adiciona exclusivamente ese agente crioprotector.


La cantidad de yema de huevo comnmente usada como medio de congelacin de
semen, est entre un 15% y un 30%. Estos rangos de concentracin se basan en

Se ha llegado a la conclusin de que la fraccin de las lipoprotenas de baja

resultados obtenidos por varios autores, donde el porcentaje de espermatozoides

densidad, es la principal responsable del efecto criopreservante en la yema de huevo.

motiles post-descongelado son ptimos. Recientemente se ha estandarizado que la

Watson (1979) propuso que los espermatozoides son protegidos por un recubrimiento

proporcin de yema de huevo en los diluyentes comerciales de toros, sea de un 20%

reversible y sugiri que las protenas de la fraccin lipoproteica se unen a la superficie

(Amirat y cols., 2004).

de la membrana, evitando la prdida de fosfolpidos de membrana durante la


criopreservacin.

Dadas las necesidades de control de enfermedades y por consiguiente, la


eliminacin de sustancias biolgicas para la conservacin de material criopreservado,

Se ha sugerido recientemente que las lipoprotenas de la yema de huevo protegen

existe una fuerte tendencia a que la yema de huevo en un futuro prximo sea

a los espermatozoides durante la congelacin-descongelacin, debido a que stas se

sustituida, aunque ya se encuentran en los mercados diluyentes comerciales para

unen a las protenas del plasma seminal presentes en el semen, secuestrndola en su

toros a base de lecitina de soja, como por ejemplo el Bio-ciphos, Bioexcel (IMV,

mayora, y por tanto, impidiendo su efecto negativo sobre la membrana espermtica.

LIagle, Francia).
Se han realizado estudios, como los de Mousa y cols. (2002) y Amirat y cols.
2.19.3- Lipoprotenas de Baja Densidad

(2004), en los que se describe una tcnica para la purificacin de la yema de huevo
por ultracentrifugacin en un gradiente de densidad. De esta forma se obtiene la

Recientemente, se han impuesto barreras sanitarias que impiden que la yema de

fraccin denominada Low-Density Lipoprotein (LDL), y han realizado esfuerzos para

huevo se siga usando como subproducto de origen animal, principalmente cuando el

probar si la fraccin LDL tiene las mismas propiedades protectoras que la yema de

material es distribuido hacia otros pases. Para el comercio internacional se ha

huevo entera.

propuesto el uso de diluyentes con aditivos naturales, como la lecitina de soja


(Jimnez y cols., 2004).

La mayora de estudios consultados reportan un efecto positivo sobre la motilidad


del semen, ya que la protena de baja densidad acta muy bien como amortiguador.

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Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

Amirat y cols. (2004) estudian y comparan la fertilidad despus del proceso de

A raz del descubrimiento de la accin protectora del glicerol, reduciendo el dao

congelacin y descongelacin utilizando yema de huevo entera en diluyente comercial

mecnico durante la congelacin-descongelacin, y la accin de la yema de huevo,

(Optidyl) o LDL, encontrando que no existen diferencias significativas entre ambos,

favoreciendo la fertilidad de los espermatozoides, se han sentado la bases para que

por lo que concluyen que la LDL puede ser utilizada para la conservacin de semen.

las tcnicas de preservacin sean adaptadas a todas las especies de animales


domsticos, influyendo esto en importantes avances.

Mousa y cols. (2002), en ensayos realizados con diluyentes comerciales a base de


yema de huevo (Triladyl 20% YH), demostraron que tanto la motilidad como las
caractersticas del semen descongelado mejoran con una alta significancia para LDL.

Ambos componentes se han usado en la criopreservacin durante ms de 50


aos, destacando su accin sinrgica en la proteccin de la membrana plasmtica (Gil
y cols., 2000).

En cuanto a la concentracin ptima de LDL, los mejores resultados de motilidad


espermtica se obtienen cuando se utiliza el LDL al 8% (Mousa y cols., 2002).

As, la base primordial de los diluyentes de toros, en los que se ha preservado


satisfactoriamente el semen, son los compuestos: Tris-(hidroximetil)-aminometan,

2.20- Diluyentes empleados para la congelacin de semen bovino

glicerol, yema de huevo y azcar (Tris-YE). Foote (1978) observ que dichas
sustancias tampn, en combinacin con yema de huevo y glicerol, favorecan el

Los agentes que constituyen buenos medios de dilucin realizan las siguientes

mantenimiento tanto a 5 C como a -85 C.

funciones:
Aportan nutrientes como una fuente energtica.
Protegen contra el efecto nocivo del enfriamiento rpido.
Son amortiguadores que impiden cambios perjudiciales en el pH, al
formarse cido lctico.

La lista

de diluyentes para congelar semen de toros que ms se citan en la

bibliografa es la siguiente:

BILADYL : Distribuido por Minitub Germany. Consiste en dos fracciones A

y B por paso, con una composicin de TRIS, cido ctrico, glucosa, 20%

Mantienen la presin osmtica apropiada y el balance electroltico.


Inhiben la proliferacin bacteriana.
Incrementan el volumen de semen de modo que ste puede usarse en
mltiples inseminaciones.

yema de huevo, 7% glicerol, agua y antibiticos.

TRILADYL : Distribuido por Minitub Germany. Es similar al Biladyl aunque


su medio de dilucin es a un paso. Su composicin es TRIS, cido ctrico,
azcar, glicerol, yema de huevo, agua y antibioticos.

Protegen a las clulas espermticas durante la congelacin.

BIOCIPHOS : Distribuido por IMV, LAigle, France. Su medio de dilucin es

a un paso y conteniente extracto de soja (Lecitina de soja), reemplazando


En los diluyentes suele agregarse un carbohidrato simple como la glucosa como
fuente de energa para los espermatozoides. Se utiliza la yema de huevo y la leche
descremada contra los choques trmicos, ya que ambas sustancias suelen tener
algunos nutrientes necesarios para la supervivencia de los espermatozoides. Pueden
emplearse diversos tampones o buffers para mantener un pH cercano al neutro y
sustancias para mantener una presin osmtica aproximada de 300 mOsm,
equivalente a la del semen, como el plasma sanguneo o la leche.

la yema de huevo.

BIOXCELL : Distribuido por IMV, LAigle, France. Su medio de dilucin es


a un paso y conteniente extracto de soja.
LACIPHOS: Distribuida por

IMV. Es un diluyente a base de leche

desnatada en polvo que requiere la adicin de agua.

TRIS CONCENTRADO GIBCO BRL: Distribuido por Holland Genetic. Su


concentracin es 5veces mas

que el popular medio TRISBASE.

Comnmente se ha usado en la congelacin de semen bovino aunque


tambin ha sido usado como diluyente de semen fresco.

89

90

Revisin bibliogrfica

2.21- Procesamiento del semen para su congelacin

Revisin bibliogrfica

En revisiones ms recientes, encontramos diferentes protocolos del tiempo de


equilibrado, aunque es de notar que el tiempo ms usado es de 4 horas. As

2.21.1- Tratamiento inicial y proceso de equilibrado

Chistensen y cols. (1999) utilizan un tiempo de equilibrado de 4 horas a 5 C; Gil y


cols. (2000); Amirat y cols. (2004); Muio y cols. (2009); Koivisto y cols. (2009):

Los mtodos de tratamiento del esperma inmediatamente despus de la


recoleccin varan considerablemente. Sobre todo guiados por los mtodos de uso

equilibran 4 horas a 4 C. Muio y cols. (2007): ha llegado a equilibrar hasta 18 horas


4 C; en cambio Mousa y cols. (2002): 1,5 horas a 4 C

que han adaptado diferentes organizaciones, los requisitos para control de la


enfermedad y los protocolos de exportacin de semen. As, muchos pases exigen que

Ticiano y cols. (2010) concluyen que el equilibrado durante el proceso de

todo el semen importado de terceros pases deba de ser tratado bajo un procedimiento

congelacin es esencial para el mantenimiento de la motilidad y la integridad de la

de antibiticos. Normalmente la Normativa Europea (84/407) exige tratar el semen de

membrana plasmtica, encontrando que el tiempo de equilibrado de 4 horas muestra

toros

la mayor viabilidad espermtica, independientemente del tipo de diluyente.

con

diferentes

antibiticos

(Lincomicina,

Espectinomicina,

Tilosina,

Gentamicina).
2.21.2- Envasado
Con base en estos requisitos, los procedimientos varan entre las organizaciones
que participan activamente en el comercio internacional de semen bovino.

Existe escasa bibliografa sobre el mtodo de envasado del esperma congeladodescongelado, sin embargo, si hay algunos estudios en morueco (Maxwell y cols.,

El semen es usualmente diluido de 30 C a 37 C con un medio equilibrador que

1995) que obtienen los mejores resultados de fertilidad con el esperma envasado en

contiene todos los ingredientes bsicos del diluyente de congelacin. La tasa de

pellets. An as, la demanda de mercado hace que otros tipos de envases tomen, hoy

dilucin es aproximadamente de 1:5 (semen/diluyente). Este procedimiento es

por hoy, una mayor importancia, como las pajuelas francesas selladas de 0.25 y 0.5 ml

necesario para proporcionar un medio tampn para los espermatozoides.

con alcohol de polivinilo o por ultrasonidos.

Una vez diluido el esperma es necesario permitir que ste se estabilice, de modo

Los actuales mtodos de envasado de semen de toros se basan principalmente en

que los espermatozoides estn bien protegidos durante el proceso de congelacin-

las mini pajuelas francesas de 0,25 ml. (Christensen y cols., 1999; Gil y cols., 2000;

descongelacin. Durante el equilibrado se produce un descenso de la temperatura del

Thum y cols., 2002; Muio y cols., 2007; Muio y cols., 2009; Contri, y cols., 2010). El

esperma desde los +20-30 C hasta los +5 C, el cual debe realizarse a velocidad

procedimiento ha estado en funcionamiento durante muchos aos, y en general ha

uniforme y durante un periodo de 1,5 a 2 horas (Maxwell y cols., 1995).

funcionado bien para el semen envasado y congelado. Aunque no podemos obviar


que tambin se usan las mini pajuelas de 0,50 ml. (Koivisto y cols., 2009; Ticiano y

Algunos trabajos en toros no observan efectos significativos del tiempo de

cols., 2010).

equilibrado, en relacin a la motilidad pos descongelado y la tasa de fertilidad,


mientras que otros recomiendan, por lo menos, de 4-6 horas en el

tiempo de

Estudios realizados por Clulow y cols. (2008), indican que en la congelacin en

equilibrado. Resultados obtenidos por Dhamy y Shan (1993), demuestran que por lo

pajuelas de 0,25 y 0,50 ml, no se observan diferencias significativas en los parmetros

menos 2 horas de equilibrado a 5 C son esenciales para la congelacin de semen

evaluados despus de la criopreservacin del semen. Para la congelacin de

bovino, obteniendo buenos resultados de fertilidad. Kumar y cols. (1981), investigando

espermatozoides de carnero usando pajuelas de 0,5 ml, han sido reportadas mejoras

el tiempo de equilibrado en relacin a la motilidad pos descongelado, encontraron

de la motilidad pos descongelado, en comparacin con pajuelas de 0,25 ml. (Maxwell y

mejores resultados cuando el semen era sometido a un periodo de 4 horas a 5 C.

cols., 1995). Estos autores plantearon la hiptesis de que la diferencia en el rea de

91

92

Revisin bibliogrfica

Revisin bibliogrfica

superficie, con la tasa de volumen entre los dos tamaos de pajuela, resulta en una

programables a un ritmo de congelacin de 5 C/min entre los +5 C a -10 C; de -40

tasa de congelacin lenta para las pajuelas de 0,50 ml, lo que result beneficioso para

C/min entre los -10 C a -100 C; de -20 C/min entre los -100 C a -140 C. (Muio y

los espermas de carnero.

cols., 2007; Muio y cols., 2009; Contri y cols., 2010). Adems, en la bibliografa
encontramos otras pautas de congelacin, de 5 C/min entre los +5 C a -10 C, y -40

Cochran y cols. (1984) observan que los espermatozoides de caballo toleran una

C/min entre los -10 C a -150 C. (Kommisrud y cols., 1996; Gil y cols., 2000; Mousa y

amplia gama de porcentaje de congelacin, lo que sugiere que las pequeas

cols., 2002). Christensen y cols. (1999) proponen un ritmo de congelacin ms

diferencias entre las tasa de congelacin entre pajuelas de 0,25 y 0,50 ml, puede no

agresivo, de -60 C/min entre +5 C y -120 C, transfiriendo luego a nitrgeno lquido.

contribuir a las diferencia de la viabilidad pos-descongelado.


En relacin a la congelacin en vapores estticos de nitrgeno, algunos centros
2.21.3- Mtodos de Congelacin

an lo siguen utilizando, aunque este sistema presentas grandes desventajas, ya que


las muestras seminales estn sometidas a condiciones incontrolables de congelacin.

Como hemos explicado en apartados anteriores, el proceso de congelacin

Cuando la congelacin se realiza sobre vapores de nitrgeno lquido, el ritmo de

expone a las clulas espermticas a una prdida de agua y a un incremento de la

congelacin vara segn la altura a la que se colocan las pajuelas. En este tipo de

concentracin de solutos intra y extracelulares. La bsqueda de una velocidad ptima

congelacin, la tasa de descenso de la temperatura oscila entre los 150 C/min y 300

de congelacin, para prevenir la formacin de cristales intracelulares y minimizar el

C/min. Thum y cols. (2002) utilizan bajo este sistema, un ritmo de congelacin de -

tiempo de exposicin a la concentracin de solutos, es un hecho de mucha relevancia,

150 C en 7 minutos, con buenos parmetros seminales pos-descongelado.

ya que de ello depende el xito de un proceso de congelacin. La disminucin de la


temperatura debe realizarse de forma ms o menos lenta, con el fin de mantener las

La ventaja de congelar en vapores estticos es que todas las pajuelas en cualquier

caractersticas de las protenas del plasma seminal que interaccionarn con las del

ciclo dado de congelacin, estn sujetas a las mismas tasas de enfriamiento, porque

ncleo espermtico (Mazur, 1984).

las pajuelas estn colocadas a un solo nivel del nitrgeno lquido. En cambio, en los
congeladores programables las pajuelas estn colocadas en ms de un nivel, y ello

Un gran nmero de protocolos de congelacin han sido desarrollados, debido


principalmente a las diferencias observadas entre especies, sin que se haya

contribuye a considerables variaciones en la tasa de congelacin (Vishwanath y


Shannon, 2000).

determinado con exactitud una curva estndar. Esto se debe principalmente a que los
resultados dependen de factores tales como diluyentes, crioprotectores, calidad
seminal (parmetro altamente variable entre individuos), etc (Woelders y cols., 2003).

El uso de vapores de nitrgeno lquido se hace mayormente en cajas de poliespan.


Este sistema es muy parecido al anterior. Las pajuelas son colocadas comnmente a
una altura de 4 cm sobre el nivel de nitrgeno, por un periodo de exposicin de 10

Aunque se han realizados considerables investigaciones para determinar la tasa

minutos (Amirat y cols., 2004). El ritmo de congelacin depende exclusivamente de la

ptima de congelacin y la adaptacin de las curvas de enfriamiento individuales para

distancia que existe entre las pajuelas y el nivel de nitrgeno, siendo por lo general de

cada toro, ha habido muy poco progreso en el sentido prctico (Vishwanath y

60 C/min. Trabajos llevados a cabo por diferentes autores, como Cochran y cols.

Shannon, 2000).

(1984), no han encontrado diferencias significativas en la motilidad pos-descongelado


del semen a distancias variables sobre la superficie del nitrgeno lquido.

El semen de toros, puede ser conservado sobre congeladores de vapores


estticos, vapores de nitrgeno lquido o mediante el uso de congeladores

En la bibliografa encontramos discrepancias entre autores, en lo que respecta al

programables. La mayor parte de los trabajos publicados utilizan congeladores

tiempo de exposicin a vapores de nitrgeno lquido, as como la distancia de

93

94

Revisin bibliogrfica

separacin entre las pajuelas y la superficie del lquido. De esta forma, Tuli y Holtz
(1992), citado por Hidalgo (2004), observan mejor viabilidad espermtica cuando
colocan las pajuelas a una distancia de 2 cm sobre la superficie del nitrgeno lquido
durante 8-9 minutos. Para Vzquez y cols. (1998), la congelacin en vapores de
nitrgeno lquido debe realizarse durante al menos 10 minutos.

95

Material y mtodos

3.1- Material animal

3.1.1- Animales

Este experimento se ha realizado sobre machos de raza bovina Marismea,


localizados en las instalaciones de la Delegacin de Medio Ambiente y Promocin
Agropecuario de la Diputacin de Crdoba. Dichos animales procedan del rebao
propiedad de la Estacin Biolgica de Doana, en la

cual est integrada

la

Asociacin Nacional de Criadores de Ganado Marismeo. Estos animales fueron


cedidos por la Estacin para realizar esta experiencia.

En la actualidad, el rebao de la Estacin es el ms representativo de la raza, al


mostrar los niveles de pureza ms elevados, de acuerdo a los estudios genticos
realizados por nuestro propio grupo de investigacin.

Dado que este tipo de ganado goza de una peculiar libertad dentro del entorno de
Doana, muestra un alto grado de asilvestramiento; ya que, como hemos descrito
anteriormente, existe poco o ningn manejo sobre ellos y por ello se considera una
raza feral.

Fueron capturados 6 becerros jvenes (5 machos y 1 hembra), con edades


comprendidas entre los 6-8 meses de edad, y trasladados al mencionado Centro
Agropecuario de la Diputacin de Crdoba.

III. MATERIAL Y MTODOS

Como criterio de seleccin de los futuros sementales, se tomo en consideracin


aquellos que fuesen los ms representativos de la raza, de acuerdo con sus
caractersticas morfolgicas y genticas; garantizando, as, su mxima repercusin en
la variabilidad gentica de la poblacin.

Uno de lo animales capturados sufri lesiones graves en su adaptacin al manejo


reproductivo y fue descartado. Por ello, para la realizacin de los experimentos, fueron
empleados 4 sementales como donantes de semen para el inicio del banco de
germoplasma de la raza. Los machos tenan edades comprendidas entre los 18 y 23
meses.

98

Material y mtodos

3.1.2- Alimentacin

Material y mtodos

Todos los animales representaban un peligro serio para la integridad del


experimentador hasta que completaron el periodo de adaptacin; por ello, hasta su

Los sementales fueron mantenidos con alimentacin homognea durante todo el

conclusin no se comenz con el trabajo reproductivo especfico.

tiempo que dur el experimento: pienso concentrado (6 kg/animal/da), paja de


cereales ad libitum y heno de cereales y alfalfa (8 kg/animal/da), bloques de minerales
oligoelementos y agua a libre disposicin.

Para esta fase, los animales fueron dejados en libertad en corrales de 20 m2 para
su adaptacin, dndoles un manejo suave y progresivo, con anillas en la nariz y
cuerdas, hasta llegar a su pubertad. Con esto se logr poder acercarse a ellos y

Los animales fueron desparasitados dos veces al ao mediante la aplicacin

facilitar su manejo, ya que se tratan de animales muy agresivos y con instinto salvaje.

intramuscular de 1 cc/50kg de peso vivo de Ivomec. Coincidiendo con el comienzo del


invierno se les suministr un complejo vitamnico, 6 cc Vital forte.

Finalmente, los sementales permanecieron atados toda la fase del experimento,


soltndolos slo para adiestrarlos, as como para realizar las extracciones. Se respet

3.2- Localizacin y periodo del experimento

Las actividades experimentales fueron realizadas en el laboratorio de reproduccin

un espacio entre toros de 4 m2.


3.3.2- Adiestramiento

asistida de la Delegacin de Medio Ambiente y Promocin Agropecuaria de la


Diputacin de Crdoba. La localizacin geogrfica se corresponde con el sur de la
pennsula ibrica, entre las coordenadas 37 53 de latitud norte, 4 46 de longitud

Una vez sometidos al manejo zootcnico convencional, se comenz con la


segunda fase previa: el entrenamiento para la colecta seminal.

oeste y 110m de altitud. El clima es tipo mediterrneo, con un ndice de precipitaciones


de 1034 l/m2. El periodo experimental se realiz durante una etapa de dos aos
(desde enero del 2004 a diciembre del 2005).

Comprende, en primer lugar, un periodo de entrenamiento de los sementales a la


hembra, lo mismo que a la vagina artificial. Esta etapa comenz cuando los animales
fueron pberes, o simplemente cuando mostraron inters por la hembra. Fue

3.3- Adaptacin y adiestramiento

importante que los animales no salieran de su entorno ya que se observ que eran
muy sensibles a cambios de localizacin y de personal que laboraba con ellos. Por lo

3.3.1- Adaptacin

tanto, el adiestramiento se realizaba en el mismo sitio donde permanecan. Con esto


se lograba que los sementales aprendieran de los dems cuando montaban a la

Para la realizacin de dicha experiencia, fue necesario someter a los futuros


donantes a 2 etapas de manejo previo al comienzo de la recogida de las muestras

hembra, desarrollando de esta manera el instinto de competitividad entre ellos y el


deseo de monta.

seminales que dieron lugar a la informacin analizada en el presente trabajo.


Cabe destacar que este tipo de ganado tiene un alto grado de jerarqua social.
La primera de ellas fue la adaptacin al medio domstico; ya que, al tratarse de
animales asilvestrados, ha sido necesario, en primer lugar, dar un tiempo de

Durante las primeras sesiones de entrenamiento, se pretenda slo acostumbrar a

adaptacin seguido de un riguroso plan de domesticacin, el cual ha tomado

los machos a la presencia del personal, lo mismos que para despertarle el inters por

aproximadamente unos 8 meses. En este sentido, se tuvo que descartar un animal ya

la hembra. En todas las sesiones se evitaron realizar ruidos y movimientos bruscos. La

que su grado de agresividad era tan alto que se provoc lesiones graves.

duracin mxima de cada una de ellas fue de 15 minutos, tras lo cual se devolva el
macho a su sitio, tanto si saltaba o no sobre la hembra.

99

100

Material y mtodos

Se consider que los animales haban superado esta fase cuando se superaban
las extracciones con intervalos de 2-3 veces por semanas.

Material y mtodos

momento, el semental estaba cogido por el operario para evitar posibles ataques al
personal que realizaba las extracciones.

Adems, se le dio mucha importancia al comportamiento agresivo, concluyendo

Una vez que el semental realizaba todo el cortejo a la hembra y mostraba intento

tambin que dicha fase estaba superada cuando los sementales dejaban de atacar a

de monta, el operario encargado de la extraccin se introduca al sitio de recogida para

los operarios.

obtener las muestras. Una vez montado el semental sobre la hembra, se desviaba
lateralmente el pene, facilitando la introduccin en la vagina artificial hasta que

Para la recoleccin de semen, empleamos como estmulo sexual una novilla de la


misma raza, no estrogenizada, sujeta a un potro inmvil.

concluan los movimientos plvicos y golpe de rin, que de forma caracterstica


acompaan a la eyaculacin, retirando, entonces, la vagina y desmontndola. Durante
la secuencia de extraccin, se registraba el comportamiento sexual, (etograma, tiempo

3.4- Recoleccin de semen

de reaccin) y el grado de inters por la hembra.

Las muestras de semen, se recogieron utilizando una vagina artificial (Minitb)

Los sementales fueron sometidos a una frecuencia de entre dos y tres recogidas

ajustable para toros. La vagina se compone de un cuerpo de caucho, una camisa de

semanales, obtenindose un slo eyaculado en cada sesin. En todas las recogidas,

ltex, y una vlvula. Una vez montada, se introduce en la estufa de incubacin

siempre se intentaba obtener semen de buena calidad, descartndose las muestras

(Precisterm Selecta) ajustada a 37C y en el momento de usarla se llena con agua

que presentan una calidad seminal insuficiente (volumen < 0,5Ml; concentracin <

caliente a una temperatura entre 45-50C, terminndose de llenar con aire a travs de

0,5X109).

la vlvula hasta conseguir una presin adecuada, que va de acuerdo a las


necesidades de cada semental. A continuacin, en un extremo de la vagina, se le

Figura N 7. Proceso de recela y coleccin seminal.

acopla un cono flexible de ltex y un tubo colector de cristal graduado en mililitros,


(Tubos de 15 ml Pirec) siempre protegido de la luz directa y la temperatura exterior
por una funda termoaislante. Todos los tubos de recogida se colocan en un bao
termosttico (Precisterm Selecta) a 37C para mantener las muestras atemperadas y
evitar que sufran algn deterioro en su calidad que pudiese interferir negativamente en
la posterior tcnica de diluyo-conservacin. La vagina se lubrica en la parte anterior
mediante el uso de un gel estril no espermicida (Priority Care).

Las recogidas de semen se realizaban en el mismo sitio donde permanecan los


sementales; por lo tanto, cada vez que se realizaban extracciones, la hembra era
llevada hasta ese lugar.

La hembra era colocada sobre unas bandas de goma antideslizante y fijada en un

3.5- Comportamiento sexual

brete; sujeta, nicamente, por el cuello (Figura 7). Con la ayuda de un operario, el
semental destinado a la monta era desatado y llevado hasta la hembra. En todo

En los programas de gestin de razas amenazadas, es importante investigar la


conducta sexual de los futuros reproductores para el buen desarrollo de los programa

101

102

Material y mtodos

Material y mtodos

de recuperacin y conservacin. El conocimiento de esta conducta sexual, basada

3.5.1- Tiempo de reaccin o tiempo transcurrido desde que el animal sale al test y

por lo general en el estudio de unos pocos sementales, es deseable en esta raza, ya

realiza la primera cubricin. A los machos que no llegaron a eyacular en los 10

que contribuye al inicio de una lnea de investigacin para conformar las

minutos se les asign como tiempo de reaccin el de la duracin del test. Podemos

recomendaciones necesarias en cuanto a la metodologa a utilizar con estos animales

aclarar que estos casos se registraron muy pocas veces.

que se encuentran, en condiciones naturales, asilvestradas. En esta primera parte de


la tesis, nos planteamos identificar y cuantificar las frecuencias de ocurrencias de los

3.5.2- Descripcin del etograma definida como todas aquellas pautas de

patrones de conducta sexual (etograma), durante la fase de extraccin seminal en la

comportamiento que mostraron los animales antes y durante el tiempo que dura la

hembra; as como

cubricin.

medir el tiempo medio necesario para que se produzca una

eyaculacin a trmino (tiempo de reaccin).


3.6- Caracterizacin seminal de los sementales Marismeos
Para el estudio del comportamiento sexual, el experimento estuvo limitado
enormemente por el alto grado de agresividad de los sementales, demandando unas

Para desarrollar esta caracterizacin seminal de los sementales, nos hemos

instalaciones acordes con este tipo de animales. Por otra parte, result inviable llevar a

planteado, primeramente, conocer el comportamiento de cada una de las variables

cabo todos los ensayos planteados en este apartado ya que se dispona de un

estudiadas a travs de los clculos descriptivos y, como segunda instancia,

reducidsimo nmero de animales.

evaluacin de los efectos fijos de los factores que afectan las variables seminales

la

estudiadas, mediante la aplicacin de modelos multifactoriales.


Con una frecuencia de una vez por semana y durante toda la fase que dur el
experimento, realizamos recogida de la informacin referente al comportamiento

3.6.1- Estudio descriptivo de las caractersticas seminales (macroscpica y

sexual de los sementales, el cual consisti en la exposicin de cada uno de los

microscpica)

machos durante 10 minutos a una hembra no estrogenizada. Normalmente esta


operacin se realizaba en el mismo sitio y con el mismo personal que realizaba las

En esta primera fase del trabajo, pretendemos conocer cules son las
caractersticas naturales del semen de toros de raza marismea, de tal manera que

extracciones seminales.

contribuyamos a determinar la mejor forma de conservar y preservar el material


Toda la informacin recabada era anotada en planillas de campo para luego ser

gentico de la raza. Como segundo objetivo dentro de esta experiencia, se plantea

digitalizada en una hoja de Excel y, posteriormente, analizada con sus respectivos

estudiar el comportamiento de los factores individuales sobre las caractersticas del

tratamientos estadsticos. Para

semen; as como, observar el comportamiento de las caractersticas seminales a lo

la descripcin del etograma, simplemente se

describieron y cualificaron las frecuencias de ocurrencia de las pautas de

largo de un periodo ininterrumpido de extracciones (Meses, aos).

comportamiento de los sementales durante las extracciones. En lo que respecta al


tiempo de reaccin, fueron calculados los valores medios para el conjunto de los

Tras su recogida, cada eyaculado, se traslad, inmediatamente, al laboratorio,

sementales utilizando el procedimiento PROC. MEANS del paquete estadstico SAS.

donde se valoraron una serie de caractersticas macro y microscpicas de cada uno

Versin 8.2 (SAS, 2001).

de los eyaculados, con el objeto de determinar la calidad seminal y valorar la posible


influencia que sta pudiese tener sobre los posteriores procedimientos de

Durante los 10 minutos de duracin del test, las variables observadas fueron las

diluyoconservacin y congelacin del semen; as como en su capacidad fecundante.


De manera rutinaria, se valoraron las siguientes caractersticas:

siguientes:

103

104

Material y mtodos

3.6.1.1- Valoracin macroscpica

Material y mtodos

3.6.1.2.3- Concentracin

3.6.1.1.1- Volumen del eyaculado

La

concentracin

de

los

espectofotmetro (Spermacue

eyaculados

fue

determinada

mediante

un

Minitb), calibrado para la especie bovina con

Se realiz sobre el semen fresco, determinndose el volumen del eyaculado por

determinaciones comparativas de densidad en la cmara de contaje de Brkner. La

observacin directa de los tubos colectores graduados (15 Ml. Pirec) utilizados para

muestra de medicin es semen no diluido. El microprocesor lleva a cabo la medicin

la recogida. Estos tubos de recogida se colocaron, inmediatamente tras la obtencin

mostrando los resultados en pocos segundos. La concentracin se expresa en miles

del eyaculado, en un bao termosttico a 37C (Precisterm. Selecta ) mantenindose

de millones de espermatozoides por ml de eyaculado.

atemperados durante todo el proceso de contrastacin seminal.


3.6.1.2.4- Espermatozoides totales por eyaculados
3.6.1.1.2- Color del eyaculado
Se obtuvo mediante el producto del volumen por la concentracin.
El color del eyaculado tambin se valor directamente en el tubo colector de
recogida, por observacin directa del mismo. Esta valoracin se realiz siempre por

3.6.1.2.5- Vitalidad espermtica mediante la tincin eosina-nigrosina

los mismos observadores y nunca pasados ms de 5 minutos desde la recogida. Se


observaron, adems, posibles irregularidades en cuanto al olor o aspecto que pudiera
presentar algn eyaculado, procedindose a su eliminacin si esto ocurra.
3.6.1.2- Valoracin microscpica

El recuento de espermatozoides vivos se llev a cabo individualmente en cada uno


de los eyaculados recogidos.

Una gota de 5l del colorante, precalentado a 37C, se coloc en el borde de un


portaobjeto y sobre l se aadi otra gota del mismo volumen del semen a analizar y

3.6.1.2.1- Motilidad masal

tambin mantenido en el bao termosttico a 37 C. Una vez mezcladas ambas gotas,


se desliz un portaobjetos, con un ngulo de 30-40, sobre otro portaobjeto, para

Se determin depositando una gota de la muestra seminal fresca sin diluir (5 l)


sobre un porta-objetos atemperado a 37C en una placa trmica y se visualiz la

obtener una extensin que se secaba rpidamente al aire. Se evaluaron 200 clulas,
bajo microscopio ptico (CX 21. Minitb) a 1000X y con aceite de inmersin.

muestra en un microscopio ptico (CX 21. Olympus) a 10X. Se evalu de forma


subjetiva la formacin y progresin de ondas producidas por la masa espermtica en
movimiento en una escala de 0 a 5.

Esta tincin se realiza para obtener el porcentaje de clulas vivas y muertas de


cada muestra analizada, al tiempo que permite el recuento de las formas anormales.
Si el espermatozoide se encuentra muerto, la membrana plasmtica permite el paso

3.6.1.2.2- Motilidad progresiva

de la eosina y la cabeza del espermatozoide aparece teida de color rosa, indicando


una alteracin de la membrana citoplasmtica. En las clulas vivas, la cabeza es de

Se estim el porcentaje de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100). Se


obtuvo mediante observacin en microscopio ptico (CX 21. Olympus) a 100X de una

color blanco, indicando que presentan una membrana funcional, ya que no permite el
paso de la eosina.

gota seminal (5 l) generalmente diluida a 25 X106 dispuesta entre el portaobjetos y


cubreobjetos previamente atemperados en pletina termosttica (HT 200. Minutb) a
37C. El valor de la motilidad progresiva se expres en porcentaje.

105

Para la caracterizacin del semen de los toros marismeos, se colectaron un total


de 212 eyaculados procedentes de los 4 sementales descritos anteriormente. Dichos

106

Material y mtodos

datos se obtuvieron durante un periodo de estudio comprendido entre enero del 2004 y
diciembre del 2005.

Se calcularon los estadsticos descriptivos de tendencia central y de dispersin

Material y mtodos

Tabla N 7. Doble tincin empleada para determinar espermatozoides vivosmuertos y porcentajes de morfoanomalas.

Eosina B azulada

1,25 gr

como son el tamao de la muestra, media, rango, desviacin estndar, coeficiente de

Nigrosina

7,25 gr

variacin y error estndar. Para las caractersticas seminales: volumen, concentracin,

Agua destilada

Hasta 100 ml

espermatozoides totales, motilidad masal, motilidad progresiva, espermatozoides


vivos, espermatozoides muertos. Los resultados se refieren tanto de forma global para
el conjunto de todos los datos, as como para cada uno de los niveles de los siguientes

3.6.2- Anlisis multifactorial de efectos fijos y prueba a posteriori de

factores de variacin: Semental, Mes, Ao.

homogeneidad de medias para las caractersticas seminales de toros


marismeos

Los clculos se desarrollaron, utilizando el procedimiento PROC MEANS del


paquete estadstico SAS. Versin 8.2 (SAS, 2001).

Para llevar a cabo la segunda parte de caracterizacin del semen, se realiz un


estudio sobre la influencia de efectos fijos sobre las caractersticas seminales

3.6.1.3- Porcentaje de formas anormales

(volumen, concentracin, espermatozoides totales, motilidad masal, motilidad


progresiva, espermatozoides vivos, espermatozoides muertos), se aplic un anlisis

Para conocer el porcentaje de formas anormales en los sementales marismeos,


fueron estudiados un total de 81 eyaculados seleccionados al azar. Para llevar a cabo

multifactorial de efectos fijos, desarrollado a travs de un anlisis de la varianza que


incluy como efecto los siguientes factores: Semental, Ao, Mes.

la valoracin de las formas anormales, se evaluaron un mnimo de 200


espermatozoides por muestra, utilizando la misma extensin de eosina-nigrosina que
estaba preparada para la obtencin del porcentaje de vitalidad espermtica. El

El modelo de anlisis de la influencia de los efectos fijos considerados sobre las


caractersticas seminales fue el siguiente:

porcentaje de espermatozoides con formas anormales se determin mediante la


valoracin de las muestras en un microscopio de contraste de fases (CX 21.

Yijk = + SEi + Aj + MEk + ijk

Olympus) a 1000X, bajo aceite de inmersin. Observndose las siguientes formas


anormales:

Donde:

Cabezas sueltas.

Yijk:

Cola ltigo.

Espermatozoides totales, Motilidad masal, Motilidad progresiva, Espermatozoides

Cola flexionada.

vivos, Espermatozoides muertos).

Gota citoplasmtica prxima.

: Media poblacional para las variables estudiadas.

Observaciones

para

variables

dependientes

SEi: Efecto fijo del factor semental.


Los clculos de las formas anormales se llevaron a cabo tanto de forma individual

Aj: Efecto fijo del factor ao.

como para el conjunto de los sementales, mediante el procedimiento PROC. MEANS

MEk: Efecto fijo del factor mes.

del paquete estadstico SAS. Versin 8.2 (SAS, 2001).

ijk: Error residual.

107

108

(Volumen,

Concentracin,

Material y mtodos

La solucin de este modelo se realiz a travs del modelo lineal general, utilizando
el procedimiento PROC. GLM del paquete estadstico SAS Versin 8.2 (SAS, 2001).

Material y mtodos

Yij:

Observaciones

para

variables

dependientes

(Volumen,

Concentracin,

Espermatozoides totales, Motilidad masal, Motilidad progresiva).


: Media poblacional para las variables estudiadas.

As mismo, se realizaron pruebas a posteriori de Duncan para comprobar los

SEi: Efecto fijo del factor semental.

grupos de homogeneidad que se establecan entre los distintos niveles de los factores

EDj: Efecto de la covariable edad.

estudiados.

ij: Error residual.

3.6.3- Efecto de factores inherentes al semental (edad, peso, circunferencia


escrotal), sobre las caractersticas seminales estudiadas

Adicionalmente, mediante un anlisis de regresin lineal se analiz la evolucin de


las caractersticas seminales estudiadas (volumen, concentracin, espermatozoides
totales, motilidad masal, motilidad progresiva), en funcin de la circunferencia escrotal

En la segunda fase de la tesis, pretendemos conocer cmo afectan algunos


factores inherente del semental como son el peso, edad o circunferencia escrotal

(en cm) y peso de los sementales (en kg). El estudio del volumen seminal en funcin
de la circunferencia escrotal se realiz mediante un anlisis de regresin cuadrtica.

sobre las caractersticas seminales estudiadas, considerando de mucha importancia


tomar en cuenta dicho estudio; ya que, en un futuro, pueden contribuir a la seleccin
de futuros sementales, as como conocer el momento ms oportuno para obtener los

La solucin de dicho modelo se realiz, utilizando el procedimiento PROC. GLM y


PROC. REG del paquete estadstico SAS Versin 8.2 (SAS, 2001).

mejores valores espermticos con vista a la preservacin del material seminal.


3.7- Preparacin de diluyentes y procedimiento de preservacin seminal
Durante toda la fase de recogida del semen, se tomaron medidas de circunferencia
escrotal y del peso vivo una vez cada mes; tambin, se tuvo en cuenta la edad de los

3.7.1- Preparacin y almacenamiento del diluyente Biociphos

sementales el da de la extraccin. Tanto el peso con la medida de circunferencia


escrotal se llevaron a cabo en la manga de contencin dotada de una bscula fija. La

Solucin madre de Biociphos Plus (100ml), compuesta de solucin salina

operacin siempre se realiz a la misma hora y con los sementales en ayunas. Las

concentrada adicionada de una mezcla de glicerol (7%), de un sustituto de yema de

medidas de la circunferencia fueron tomadas en centmetros con cinta de plstico

huevo (lecitina de soja) y de antibiticos (Gentamicina, Tylosina, Lyncomicina y

flexible. Para llevar a cabo la medicin, fue necesaria la manipulacin profunda de los

Espectomicina). El diluyente se prepara para su uso de la siguiente manera:

testculos sobre el saco escrotal, midiendo luego el rea de mayor circunferencia.

estudiadas, se realiz un anlisis de la covarianza segn el modelo lineal general. Se

Poner el matraz y el frasco de Biociphos Plus

tapado a bao mara

32/34C durante 15 minutos.

plante un modelo de anlisis que incluy como efecto fijo el semental y, como

covariable, la edad de los mismos.

Verter 400ml de agua bidestilada estril apirgena o de calidad equivalente,


en una matraz de 500 ml (Pobel).

Para poder determinar el efecto de la edad sobre las caractersticas seminales

Verter los 100 m de Biociphos Plus en el matraz que contiene el agua


bidestilada y homogenizar en agitador magntico (Agimatic-N Selecta).

El modelo de anlisis qued establecido de la siguiente forma:

Enjuagar dos veces el frasco de Biociphos Plus con un poco de la solucin


obtenida (no agregar agua) y homogenizar

Yij = + SEi + (ED)j + ij


Donde:

109

110

Material y mtodos

Material y mtodos

Una vez reconstituido el diluyente, se conserva en viales, normalmente

dejando una cmara de aire de aproximadamente 1 cm de longitud en el extremo

tubos falcn de 50 ml (Labcon). a -20C. durante un periodo mximo de 6

abierto de la pajuela, para evitar el contacto directo del semen con el sistema de

meses.

sellado (Figura 8).

La descongelacin del diluyente se realiza sumergiendo los tubos falcn en


bao termosttico (Precisterm. Selecta) a 32/35C, durante 20-25 minutos

Figura N 8. Proceso del Llenado Manual de las Dosis Seminales.

antes de realizar las extracciones.

Una vez descongelado, el diluyente no se vuelve a congelar.

3.7.2- Procedimiento para la preservacin seminal

Tras seleccionar aquellas muestras de semen que presentaron una concentracin


superior de 0,5 x109 espermatozoides/ml, volumen mayor a 0,5ml, una motilidad y una
vitalidad superior al 70%, as como un porcentaje de morfoanomalas menor del 20%,
los eyaculados de cada uno de los sementales fueron sometidos a los procedimientos
de diluyoconservacin que a continuacin se describen.

3.7.2.1- Dilucin del semen

Despus de la recoleccin de los eyaculados, y pasados al laboratorio, estos han


sido diluidos con diluyente comercial Biociphos (IMV, LAigle, France), a temperatura
ambiente en alcuotas de igual volumen seminal, hasta que se le realizaba los clculos
necesarios para determinar el nmero de espermatozoides totales de la muestra. Esto

El sellado de las pajuelas fue llevado a cabo con alcohol polivinl (IMV, LAigle,

con el objetivo de calcular el nmero de dosis de cada eyaculado, as como para

France). Seguidamente, y con la ayuda de un calibrador para pajuelas de 0,25 ml, las

determinar el volumen total de diluyente requerido. El volumen final del diluyente que

dosis fueron colocadas en rampas de congelacin horizontales con capacidad para 70

aadamos se calculaba dividiendo el nmero total de espermatozoides de la muestra

pajuelas de 0,25 ml. Cabe destacar que cada pajuela de 0,25 ml contiene

entre 100 X106, haciendo esto con el nico objetivo de conseguir que cada mililitro de

aproximadamente 25x106 millones de espermatozoides, y que cada una de ella

muestra contuviera 100 X10 millones de espermatozoides. Este procedimiento se

representa una dosis seminal.

realizaba con sumo cuidado para evitar producir un dao masivo a las clulas.
3.7.2.3- Refrigeracin del semen
3.7.2.2- Envasado del semen
Tras aproximadamente 20 minutos de equilibrio a la temperatura ambiente de
Para realizar esta fase, se utilizaron minipajuelas de PVC (IMV, LAigle, France) de

laboratorio (22 C), las muestras pasaron a cmara frigorfica (Frisur) a una

0,25 ml. La operacin se llev a cabo a temperatura de laboratorio (22 C), utilizando

temperatura de 4C, durante 5 horas. Esta fase constituy el periodo de equilibrado,

el sistema de llenado de aspiracin manual, con la ayuda de barquetas, soporte de

que persigue obtener un descenso lento de la temperatura de la muestra, desde

barqueta y peines de aspiracin (IMV, LAigle, France). Las pajuelas se llenaron

temperatura ambiente hasta 4 C. Durante este periodo de equilibrado, se control que

111

112

Material y mtodos

la temperatura de la cmara se mantuviese a 4 C durante todo momento, mediante la

Material y mtodos

3.7.3- Valoracin seminal despus de la criopreservacin

utilizacin de un termmetro de varilla manual.


Tanto la valoracin subjetiva como la valoracin objetiva, fueron estimadas
3.7.2.4- Congelacin y conservacin seminal

utilizando los 19 eyaculados que formaron parte del banco de semen de la raza.

Las muestras fueron sometidas al proceso de congelacin en biocongelador

3.7.4- Descongelacin y estimacin subjetiva de la calidad del semen

programable, Micro Digit-cool. (IMV LAigle, France.), con capacidad para congelar
420 dosis/congelacin. La operacin se llev a cabo de acuerdo a la siguiente rampa

La tcnica de descongelacin consisti en sumergir completamente las pajuelas en

de descenso: de +4C a -10C a velocidad de +5C/min.; de -10C a -100C a una

un bao Termosttico (Precisterm Selecta) a 37C durante 60 segundos.

velocidad de +40C/min.; de - 100C a -140C/min a una velocidad de 20C/min.

Posteriormente, tras el secado de las pajuelas y para evitar sesgos o errores en la

(Figura 9). Posteriormente, las muestras fueron sumergidas en caja de Porexpan con

valoracin de la calidad de las muestras, cada una fue depositada en un tubo

nitrgeno lquido y clasificadas en Visotubos (IMV LAigle, France.) para su posterior

eppendorf de 1,5 ml, sumergido en bao termosttico en seco (Accublack. Labnet),

almacenaje en contenedor de nitrgeno lquido, (B2035. Cryo Diffusion ), hasta el

por un periodo de 5 minutos. Trascurrido dicho periodo, se tomaron 5 l de semen con

momento de su utilizacin.

pipeta y se depositaron en un portaobjeto previamente atemperado en pletina


termosttica (HT 200. Minitb) a 37C. Luego, con la ayuda de un microscopio de

Figura N 9. Representacin esquemtica de la rampa de congelacin. El eje de

contraste de fase (CX 41. Olympus), se valor visualmente la viabilidad y la

Ordenadas (Y) representa el descenso gradual de la temperatura (C) y el eje de

progresividad espermtica. De cada eyaculado congelado, se eligieron, al azar, al

Abscisa (X) representa el tiempo parcial de cada rampa de congelacin, as

menos 3 pajuelas por congelacin/semental, sacando una media general de las tres

como el tiempo total que dura la congelacin.

muestras. La prueba de descongelacin se realiz, tras 24 horas del almacenamiento


en nitrgeno lquido. Aquellas dosis con un porcentaje de espermatozoides motiles
superior al 50 % fueron almacenadas en los contenedores, formando parte del Banco
de Semen de la Raza. Dosis con valores inferiores al referido fueron rechazadas.

Las evaluaciones de la calidad seminal (porcentaje de espermatozoides mtiles y


mtiles progresivos) fueron realizadas por la misma persona a lo largo del
experimento.
3.8- Estimacin objetiva del estado de conservacin del banco de germoplasma
mediante sistemas informticos (CASA y Citmetro de flujo)

En la tercera fase de la tesis se pretende caracterizar de manera objetiva las


calidades seminales del material criopreservado, con el fin de obtener unos valores
precisos y objetivos tanto de las velocidades cinemtica como la calidad del
movimiento de los espermatozoides presentes en la muestra. Por otra parte, mediante
el estudio de cada una de las clulas espermticas, pretendemos conocer el estado de

113

114

Material y mtodos

Material y mtodos

viabilidad y grado de apoptosis del semen criopreservado, as como el grado de dao

de forma global para el conjunto de todos los sementales, as como para el factor de

producido durante el proceso de congelacin.

variacin semental. Por otro lado, se calcularon los valores medios de los parmetros
de la motilidad segn su progresividad en funcin del semental. Los valores calculados

Consideramos de vital importancia la valoracin in vitro del semen ya que es ese el

fueron: motilidad progresiva, motilidad no progresiva y espermatozoides estticos.

mejor indicador del grado de conservacin del semen congelado tras la


descongelacin.

Con el fin de conocer si existan inferencias de los descriptores cinemticos y los


parmetros de la motilidad entre cada uno de los sementales estudiados, se realiz un

3.8.1- Estimacin de la calidad del semen mediante sistema CASA

La calidad del semen (velocidades y motilidad), fue medida usando un sistema

anlisis unifactorial de efecto fijo.

Se llev a cabo un anlisis de varianza simple de efecto fijo sobre:

computarizado de anlisis de esperma (Sistema CASA, ISAS Proiser, Valencia,


Espaa). El anlisis se bas en el examen de 25 imgenes consecutivas digitalizadas,

x Los parmetros de velocidad y descriptores cinemticos

obtenidas de un solo campo, usando un objetivo de contraste de fase de 10X,

x Parmetros de la motilidad segn su progresividad.

(Olympus CX 41, Tokio, Japn), y calentado con la pletina termosttica (37C). El


semen fue cargado en cmaras Lejas de 20 m de profundidad (micro clulas Leja

El modelo simple general queda establecido de la siguiente forma:

16x25. Amsterdam, Holanda). Las imgenes fueron tomadas en un lapso de 1


segundo, la velocidad de captura de cada imagen fue por lo tanto de 1 cada 40

Yij = + SEj + ij

microsegundos. (Figura 10).


Donde:
Con respecto a los parmetros de ajuste para el programa, los espermatozoides
con una velocidad promedio (VAP) <10m/segundo fueron considerados inmviles,

Yij: Observaciones para variables dependientes estudiadas.

mientras que los espermatozoides con una velocidad promedio > 15 m /segundo, se

: Media poblacional para las variables estudiadas.

consideraron mviles. Los espermatozoides con una desviacin <45% de una lnea

SEj: Efecto fijo del factor semental.

recta, se designaron linealmente mviles.

ij: Error residual.

La cinemtica de las muestras seminales fue evaluada despus de un periodo de


criopreservacin de 2 aos.

La solucin de este modelo estadstico, se realiz a travs del modelo general


lineal, utilizando el procedimiento PROC. GLM del paquete estadstico SAS Versin
8.2 (SAS, 2001).

Para llevar a cabo los objetivos propuesto de esta parte del presente trabajo, se
calcularon los estadsticos descriptivos de tendencia central y de dispersin como son:
el tamao de la muestra, media, rango, desviacin estndar, coeficiente de variacin y

Para el clculo de los estadsticos descriptivos se utiliz el procedimiento PROC.


MEANS, del mismo paquete estadstico.

error estndar. Para los parmetros de velocidad y descriptores cinemticos del


semen criopreservado mediante el sistema CASA : velocidad curvilnea, velocidad
rectilnea, velocidad promedio, ndice de linealidad, ndice de rectitud, ndice de
oscilacin, lateral de la cabeza, frecuencia de batido. Los resultados se refieren tanto

115

116

Material y mtodos

Tabla N 8. Parmetros de velocidades medidos por sistema CASA.

Material y mtodos

3.8.2- Evaluacin de la vitalidad espermtica y grado de apoptosis en el semen


criopreservado mediante citometra de flujo

Parmetro

Siglas

Unidad de medida

Velocidad curvilnea

VCL

m/segundo

Velocidad rectilnea

VSL

m/segundo

Velocidad promedio

VAP

m/segundo

ndice de linealidad

LIN

ndice de rectitud

STR

ndice de oscilacin

WOB

Lateral de la cabeza

ALH

Frecuencia de batido

BCF

Hz

Con el fin de conocer el estado del semen y los daos sufridos durante el proceso
de criopreservacin, nos planteamos conocer el porcentaje de clulas espermticas
vivas as como su grado de apoptosis de las 19 congelaciones realizadas y que
forman parte de los 4 sementales donantes.

La utilizacin de marcadores fluorescentes asociada a la citometra de flujo permite


el anlisis objetivo de millares de clulas en un corto espacio de tiempo. La
preparacin de la muestra para citometra de flujo depende del fluorocromo utilizado,
como describimos en el apartado correspondiente.

La evaluacin de los parmetros de viabilidad, as como su grado de apoptosis ha


Figura N 10. Imagen obtenida del anlisis de la motilidad. Segn su velocidad,
los espermatozoide marcados en rojo son los rpidos, los marcados en amarillo
son los estticos, los marcados en verde son los medios y los marcados en azul
son los lentos.

sido realizada mediante la coloracin con yoduro de propidio (IP) y hemodmero de


etidio (Eth). Las muestras han sido procesadas basndonos en la tcnica de Pea y
cols., (2005). Para ello, se ha tomado una alcuota de 250 l de semen descongelado
y rediluido en 1000l de PBS. A continuacin se tom 1 ml de la suspensin
espermtica a la cual se le aadi 3 l de IP y 1 l de Eth. Despus de la
homogeneizacin de la mezcla, la suspensin espermtica se incub a 37C en la
oscuridad durante 16 minutos.

El anlisis de las muestras en citmetro de flujo, fue llevado a cabo en citmetro


EPICS XL (Coulter Corporation, Inc., Miami, FL, USA). Las muestras fueron excitadas
por un lser de Argn a una longitud de onda de 488 nm. (Cyonics, Coherent, Santa
Clara, CA, USA). Los espermatozoides contados por el citmetro, segn presentaran
fluorescencia o no por la combinacin de yoduro de propidio y hemodmero de etidio,
fueron analizados usando el software EXPO 2000. Las subpoblaciones fueron
divididas por cuadrantes, y la frecuencia de cada subpoblacin fue cuantificada. Las
medidas fueron expresadas como porcentaje de clulas que emiten fluorescencia. En
cada alcuota se evaluaron un mnimo de 20000 clulas, a un flujo de 200-300
clulas/segundo.

La utilizacin de las dos zondas de fluorocromos utilizadas, permite diferenciar 4


sub-poblaciones. (Figura 11).

117

118

Material y mtodos

Material y mtodos

Figura N 11. Cuadrantes de las sub-poblaciones espermticas sometidas a

E1 representa espermatozoides apoptticos tardos (IP+ / Eth+).

E2 representan a los espermatozoides muertos o necrticos (IP- / Eth+).

E3 representa espermatozoides vivos. (IP- / Eth-).

E4 representa espermatozoides apoptticos tempranos. Mostrando un

tinciones dobles de Ioduro de Propidio y Hemodmero de Etidio.

incremento en la permeabilidad de la membrana (IP+ / Eth-).

Para llevar a cabo dicha experiencia, se calcularon los valores medios de los
diferentes grados de daos en el semen y clasificados en funcin del semental. Por
otra parte, se realiz un anlisis de varianza simple de efecto fijo sobre la Vitalidad
espermtica y grado de apoptosis.

El modelo simple general queda establecido de la siguiente forma:


Yij = + SEj + ij

3.9- Tratamiento de sincronizacin, induccin de celo e inseminacin artificial

Donde:

3.9.1- Hembras

Yij: Observaciones para variables dependientes estudiadas.

Dada la necesidad de testar el banco de semen in vivo, fue necesario realizar la

: Media poblacional para las variables estudiadas.

experiencia en un lote de 50 hembras de descarte (por edad, productividad, fertilidad,

SEj: Efecto fijo del factor semental.

repetidoras de celo, etc.), de raza frisona.

ij: Error residual.


Las hembras se encontraban alojadas en las instalaciones de la Granja San Julin,
La solucin de este modelo estadstico se realiz a travs del modelo general
lineal, utilizando el procedimiento PROC. GLM del paquete estadstico SAS Versin

(Marmolejo, Jan) conformada en corrales de 200 m2 que disponan de una zona


cubierta y un patio de recreo al aire libre.

8.2 (SAS, 2001).


El proceso de sincronizacin de las hembras se hizo en dos lotes diferentes: El
primer lote estaba compuesto de 25 novillas de descarte en el cual el experimento dio
inicio el 10 de noviembre del ao 2005. El segundo lote estaba formado de 25 vacas
adultas de descarte, en el cual el experimento dio inicio el 08 de febrero del ao 2006.

Previo al inicio de la fase experimental, las vacas se sometieron a un examen de


su estado reproductivo, que inclua una evaluacin externa de la vulva, vagina, y
estado del tero mediante palpacin rectal.

119

120

Material y mtodos

3.9.2- Sincronizacin de celo

Material y mtodos

seminales, fuera el adecuando, ya que haba trascurrido ms de 1 ao de


almacenamiento en los contenedores de nitrgeno.

Se emple el mtodo de induccin y sincronizacin de celo con implantes Crestar


(norgestomet), que permanece alojado en la oreja por 10 das. La aplicacin del

Se determin que, en cada lote de hembras sincronizada, se testara la fertilidad

tratamiento de sincronizacin del celo tuvo lugar en una manga de contencin,

del semen de todos los sementales que se les haban congelado. Por lo tanto, se

habilitada para tal efecto. Una vez que las hembra estaba dentro de la manga fue

inseminaron entre 4 y 6 hembras/semental/lote.

sujetada con cuerdas por el cuello para inmovilizarle la cabeza; luego, con la ayuda de
un operario, se limpi y desinfect la oreja, en el lugar donde se iba a colocar el

3.9.3.2- Hembras

implante.
De las 50 hembras sincronizadas, solamente fueron inseminadas 41 de ellas, ya
El lugar de colocacin del implante fue la cara externa de la oreja, evitando las

que

al

realizarle

una

segunda

exploracin,

fueron

encontradas

hembras

venas subcutneas. En todo momento se evit colocar cerca de la base de la oreja ya

(principalmente novillas), con anormalidades reproductivas, como son: ovarios

que la piel no est muy pegada al cartlago y el implante se podra desplazar durante

infantiles, agenesia ovrica, tambin se encontraron hembras con mala condicin

su permanencia bajo la piel. Una vez elegido el lugar, con la ayuda de un aplicador, se

corporal y poca talla.

introdujo la aguja profundamente bajo la piel, y se deposit el implante. Siempre se


asegur la presencia del implante, pasando el dedo sobre la piel.

En el total de las vacas y novillas, se realiz una inseminacin artificial sin


deteccin de celo 48 horas despus de la retirada del implante. Con la ayuda de dos

Inmediatamente despus de la aplicacin del implante, las hembras recibieron una

operarios, las hembras eran introducidas en la misma manga donde se realiz la

dosis de 2 ml de crestar (Norgestomet 3mg + valerato de estradiol 5mg), va

sincronizacin. Una vez realizada esta operacin se seleccion la dosis seminal del

intramuscular.

contenedor de nitrgeno, descongelado nicamente la dosis que se iba a usar en ese


momento. El proceso de descongelacin se realizo en un kit de descongelacin (IMV

Dos das antes de la retirada del implante, se administr por va intramuscular, 2


ml de prostaglandina (prosolvin) slo al lote de las vacas.

LAigle, France.) con temperatura preestablecida a 37C por periodo de 60 segundos.


Tras el vaciado del contenido de heces en el recto y la limpieza de la vulva con agua y
papel, con una mano se introdujo en la vagina el inyector que contena la dosis

Diez das despus se procedi a la retirada del implante, para ello localizamos la

seminal y con la otra mano, a travs del recto, se condujo el inyector hasta alcanzar el

cicatriz y retiramos el implante por el orificio hecho por el trocar durante la insercin.

cuerpo del tero depositando el semen. Cada hembra recibi una dosis de 25x106 de

Finalmente aplicamos 400 U.I de Foligon (PMSG) por hembra.

esperma contenido en pajuelas de 0,25 ml.

3.9.3- Inseminacin artificial

3.9.4- Diagnstico ecogrfico de gestacin

3.9.3.1- Machos

Para determinar la efectividad de las inseminaciones, se realiz un diagnstico de


gestacin mediante la exploracin ecogrfica del tero, (Sonovet 2000) va rectal, a

Las dosis seminales criopreservadas utilizadas para esta experiencia, provienen de

los 40 das pos inseminacin. Todas las exploraciones fueron llevadas a cabo con las

los mismos donantes que han formado el banco de semen de la raza. Antes del

hembras previamente inmovilizadas; seguidamente, se limpi el recto de las hembras

comienzo de la experiencia, se comprob que el estado general de las dosis

y se lubric el transductor con gel ecogrfico. Conforme introducimos lentamente la

121

122

Material y mtodos

Material y mtodos

sonda, se ejerci presin en direccin ventral, para as poder localizar la vejiga de la

3.10- Fertilidad in vivo y gestin del banco de germoplasma para la

orina que se utiliz como ventana ecognica o punto de referencia y, posteriormente,

recuperacin y multiplicacin de la raza en caso de una catstrofe

el tero. Una vez localizado el tero se realizaron pequeas y suaves rotaciones de la


sonda para identificar la vescula embrionaria. Si no se localiz ninguna vescula
embrionaria, se calific a la hembra como no gestante.

La cuarta y ltima fase de la tesis, tuvo dos objetivos primordiales: el primero,


comprobar la fertilidad in vivo de los eyaculados criopreservados del banco de semen
de la raza Marismea, como medida de apoyo a la recuperacin y preservacin de

3.9.5- Creacin y mantenimiento del banco de semen

La coleccin, procesamiento, envasado y almacenamiento de la muestras fue


llevado a cabo tal como lo hemos descrito en sus respectivos apartados.

esta raza, extremadamente amenazada.

El segundo inters de este apartado ha sido poder, disponer de un nmero


determinado de sementales y dosis seminales, a travs del banco de semen creado,
que permitan garantizar unos niveles de diversidad gentica suficientes ante una

Fueron criopreservadas y almacenadas muestras seminales de 19 eyaculados


procedentes de 4 sementales, repartidos en los dos aos de estudios.

crisis. Disponiendo, adems, de dosis seminales suficientes, que permitan la


reconstruccin de la raza a partir de hembras prximas filogenticamente mediante
retrocruces en caso el de la extincin total de la raza. En ambos casos, el nmero de

Las dosis congeladas fueron identificadas mediante el etiquetado previo al


envasado empleando una maquina de impresin automtica Jet Linx (IMV LAigle,

machos necesarios estar en funcin de la efectividad de la criopreservacin y


especialmente de los resultados de fertilidad.

France). El sistema de codificacin utilizado para las pajuelas fue de izquierda a


derecha, tal como se detalla a continuacin: (del algodn hacia el extremo donde se

De estos ltimos se determinaron los siguientes clculos:

cargan las pajuelas con el semen) nmero de crotal (tres dgitos), nombre del
semental, fecha de congelacin (seis dgitos), especie y raza. A cada semental se le
clasific con un color de pajuelas diferente, tambin se les asign un numero de
canister en el contenedor de almacenamiento. Todo esto con el objetivo de evitar
equivocaciones durante las futuras manipulaciones.

El nmero de dosis necesarias para obtener un becerro, con el semen


criopreservado de nuestro banco.
Nmero de dosis totales necesarias para conseguir la reconstruccin de
una raza mediante retrocruces con hembras de razas afines. Para ello, se
calcul la proporcin de genoma recuperado en las distintas generaciones

Las dosis seminales que forman el banco de germoplasma de la raza, estn

de retrocruce utilizando la formula siguiente:

supervisadas bajo un minucioso control del los niveles de nitrgeno, rellenando los

Gr = 1 - 0,5n-1

contenedores cada 50 das.

Donde:
Gr: es el genoma recuperado.

Siguiendo las normativas del Comit de Reproduccin y Banco de Germoplasma


Animal de Espaa, se ha realizado un duplicado del material conservado, para

n: es el nmero de generaciones de retrocruces trascurrido a partir del


inicio de la reconstruccin.

prevenir una posible catstrofe.


El resultado de esta inferencia nos dio lugar a decidir en qu generacin
consideraramos la raza reconstruida.

123

124

Material y mtodos

La funcin de clculo empleada para obtener el nmero de dosis necesarias se


bas en la metodologa propuesta por Lmker y Simon, (1994).
D = d N (rn-1) / (r-1)

Donde:

D: corresponde a las dosis totales necesarias.


d: nmero de dosis necesarias para obtener un parto.
N: nmero de novillas jvenes frtiles que deseamos tener en la generacin n.
n: generacin en la que se considera la raza restaurada.
r: nmero de inseminaciones estimadas que sern necesarias para obtener una
hija frtil, o inversa del nmero de f que corresponde al nmero de hijas frtiles
esperada por inseminacin.

Los clculos realizados para conocer el nmero de dosis seminales necesarias


para la reconstruccin de la raza por medio de retrocruces, se llevo a cabo tomando
en cuenta los siguientes parmetros reproductivos.
d: 1
N: En este caso, tomamos una decisin en funcin del incremento de la
consanguinidad que estamos dispuestos a asumir por generacin. De tal forma que
siguiendo las recomendaciones tcnicas de aceptar un mximo de incremento de la
consanguinidad menor del 2% por generacin, necesitaremos un mnimo de 25
hembras frtiles en la generacin n.
f= 1/4 = 0,25
r= 1/f = 4,00

125

Resultados

4.1 - Comportamiento sexual: etograma y tiempo de reaccin

Como podemos observar en la grfica N 3, existen trece caractersticas bien


definidas de estos animales en el cortejo sexual de la hembra. Aunque contamos con
cuatros animales, no encontramos diferencias significativas entre ellos, pero s se nota
que el orden de cortejo de las variables descritas cambia entre sementales.

Desde el lugar de alojamiento de los sementales hasta el primer contacto con la


hembra, pudimos notar los primeros signos de libido, los cuales se repiten en todo el
proceso de cortejo de la hembra. As, notamos cmo los sementales muestran signos
de excitacin en un 80% de los casos observados, un 82.5% presenta protrusin de
pene, un 82.5% presenta sntomas de goteo, y un 52% est desconfiado debido a la
presencia humana.

Durante la exploracin a la hembra por parte del semental, pudimos notar que se
desencadenan otras pautas que estimulan tanto a los sementales como a la hembra
misma, para as garantizar el estado de receptividad y completar el servicio. En esta
fase observamos que se producan coces hacia la hembra en 45%, lamido de la vulva,
97.5% y babeo 55% de la veces.

Por otra parte, se pudo observar cmo los patrones de conducta sexual (lamidos
de vulva (97.5%), reflejo flehmen (92.5%), protrusin de pene y goteo (82,5%),
representan los componentes principales del comportamiento sexual, datos similares

IV. RESULTADOS

son observados por diferentes autores, los que afirman que los principales
componentes de comportamiento de exploracin los constituyen el olfateo y flehmen,
ya que stos ayuda a distinguir hembras en celo y proporciona las condiciones
necesarias para un apareamiento satisfactorio. (Chenoweth, 1981; Sankar y Archunan,
2004).

Para las variables desconfiado y distrado obtuvimos unos valores medios de


ocurrencia de 52.5% y 42.5% respectivamente. Como era de esperar en estos casos,
en ms de la mitad de las observaciones se repeta este comportamiento, ya que son
sensibles a los cambios por su condicin de cra en estado natural asilvestrado y que
no estn acostumbrados al manejo y, menos aun, al trato con personas. Siempre
estn muy pendientes del medio y personas que los rodean. Se ha llegado a observar

128

Resultados

Resultados

que existe una gran diferencia en el xito o fracaso en la recogida de datos, al cambiar

Por otra parte, se ha observado que existe predileccin por parte de la hembra a

de personal, lo mismo que al color de ropa de trabajo. Por tal motivo siempre los

los cortejos de algunos sementales, mostrndose en algunos casos hasta rechazos, lo

operarios y vestimenta fueron los mismos.

que repercute negativamente en ocupar un mayor tiempo en completar el tiempo de


reaccin. Cabra pensar por tanto, que los mejores valores sean los ofrecidos por

Grfica N 3. Frecuencias en las manifestaciones de la conducta sexual de los

aquellos animales que menor tiempo utilizaron en realizar la monta, pero no hay que

sementales durante el cortejo de la hembra.

perder de vista que esto slo se constatar cuando en la prctica se complete con una
preez.

Grfica N 4. Tiempo medio de reaccin de los sementales en presencia de la


hembra.

Tambin se han obtenidos datos del tiempo de reaccin de los sementales (tiempo
desde que llegan a la hembra hasta que completan el servicio), obteniendo valores
medios de uno hasta seis minutos, (grfica N 4). Los menores tiempos de reaccin
se obtuvieron cuando se apreci un ambiente con poco ruido y menos trnsito de
personal al momento de las extracciones.
4.2- Caracterizacin seminal de los sementales Marismeos
Como podemos observar en dicha grfica, el minuto tres es donde se present la
mayor frecuencia del tiempo de reaccin, tiempo necesario para realizar el cortejo de

4.2.1- Estudio descriptivo de las caractersticas seminales

la hembra y prepararla para completar la monta. Se pudo notar tambin que, cuando
se producen tres o cuatro intentos de montas, la frecuencia de eyaculado disminuye,
ya que el animal repite continuamente el cortejo y por tanto ocupa mayor tiempo.

129

Para mostrar con ms claridad las posibles causas de las variaciones entre los
parmetros que definen las caractersticas seminales, el estudio de los mismos se ha

130

Resultados

Resultados

realizado organizando los resultados en las siguientes formas: Resultados para el

Con la intencin de poder caracterizar los distintos niveles de produccin seminal

conjunto de los datos, resultados agrupados por semental, resultados agrupados para

estudiada por cada semental, los resultados de cada una de ellas podemos

el conjunto de los sementales y por semental en funcin del ao de extraccin. Para el

observarlos en las tablas N 10, 11, 12 y 13. En dichas tablas, podemos observar

caso de los resultados agrupados por mes, solo se presentan los valores medios de

como existe una constancia patente del volumen seminal de cada uno de los

cada una de las variables estudiadas.

sementales, observando que su volumen seminal gira en torno a los 5 ml.

Basndonos en los valores de las caractersticas seminales estudiadas a lo largo

Dicha constancia no se cumple para el caso de la concentracin seminal donde se

del experimento, la evolucin mostrada por las distintas variables estudiadas en el

puede apreciar una clara superioridad de la concentracin para el semental N 546

conjunto de los sementales se pone de manifiesto en la tabla N 9.

con valor de 1,58x109 (1,058,000 millones/ml), para el resto de los sementales los
niveles de concentracin seminal se mantuvo constante, en torno a 1,00x109.

Es de resaltar el importante nivel de variabilidad observada para todas las


caractersticas seminales estudiadas, como lo demuestran los valores de coeficientes

Como era de esperar, los valores para la variable espermatozoides totales tambin

de variacin, con valores entre 14,67 para espermatozoides vivos y muertos y 49,56

mostr una clara tendencia superior para el semental 546 (7,68X109); ya que como es

para los espermatozoides totales. Esto pone de manifiesto una importante variacin en

sabido, dicha variable est muy condicionada al volumen y concentracin seminal. El

las condiciones del semen y que se debe de tomar en cuenta a la hora de seleccionar

resto de los valores se mantuvieron en cifras que giran en torno a 6,00x109 clulas

eyaculados para la congelacin, ya que un mismo semental puede ofrecer semen de

espermticas.

optimas condiciones como no aptos para congelar, en funcin de distintos


Las cifras mostradas para la motilidad masal son muy buenas, confirmando las

condicionantes.

buenas aptitudes del semen de esta raza. Los valores mximos para esta variable lo
Tabla N 9. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el

mostr el semental N 546 con una motilidad media de 4,20. Para el resto de los

conjunto de los datos.

sementales, los valores fueron constantes mostrando registro de 3,43 para el semental

Variables

Media

Rango

Desviacin
estndar

C.V

Error
estndar

Volumen

212

5,01

10,00

1,90

38,01

0,13

Concentracin

180

1,17

2,74

0,42

35,71

0,03

Espermatozoides/
Eyaculado

180

6,17

14,49

3,05

49,56

0,22

Motilidad Masal

212

3,66

3,5

0,90

24,66

0,06

Motilidad Progresiva

212

77,31

50

11,95

15,46

0,82

Vivos

146

80,76

69,00

11,85

14,67

0,98

N 541, y 3,47 para los sementales 575 y 583 respectivamente.

Los valores medios para la motilidad progresiva de cada uno de los sementales
demuestra que el mayor registro alcanzado fue para el semental N 546 con una
media de 84,03; si bien este valor es el ms alto, podemos notar tambin que existe
una tendencia a una alta calidad seminal de los dems sementales, donde
encontramos valores medios de 74,69 para el semental N 541; 75,42 para el
semental N 575 y para el semental N 583 medias de 74,49.

Al

valorar en su conjunto los dos tipo de motilidades espermticas en los

eyaculados (Masal y progresiva), como paso previo a la criopreservacin, podemos


Muertos

146

19,23

69,00

11,85

14,67

0,98

Concentracin = N Espermatozoides * 10 /ml de Semen. Espermatozoides/eyaculados = Volumen*


Concentracin.

131

asegurar que las muestras seminales presentan caractersticas ptimas para


someterse a los procedimientos de dilucin y conservacin.

132

Resultados

En cuanto a la proporcin de espermatozoides vivos en el eyaculado, podemos


observar que fueron compatibles con la concentracin seminal, la motilidad masal y
progresiva. La media ms alta se encuentra en el semental N 546 con valor de 83,40.

Resultados

Tabla N 11. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el


semental N 546.
Variables

Media

Rango

Desviacin
estndar

C.V

Error
estndar

Volumen

57

4,51

7,00

1,51

33,47

0,20

Concentracin

42

1,58

2,20

0,53

33,83

0,08

Espermatozoides/
Eyaculado

42

7,68

13,40

3,47

45,19

0,53

Motilidad Masal

57

4,20

3,50

0,93

22,05

0,12

Motilidad Progresiva

57

84,03

50,00

11,74

13,97

1,55

Vivos

35

83,4

29,00

7,22

8,66

1,22

Muertos

35

16,60

29,00

7,22

43,51

1,22

Es importante, mencionar que dicho semental tambin registr los valores ms bajos
de espermatozoides muertos en la misma muestra; as, la mejor proporcin de
espermas vivos-muertos la encontramos en este individuo. Para el resto de los
sementales, la media en proporcin de espermatozoides vivos-muertos fue de 81,80
18,19 para el semental N 575; 80,19 19,80 para el semental N 583; 77,81 22,18
para el semental N 541.

Tabla N 10. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el


semental N 541.

Concentracin = N Espermatozoides * 10 /ml de Semen. Espermatozoides/eyaculados = Volumen*


Concentracin.

Variables

Media

Rango

Desviacin
estndar

C.V

Error
estndar

Volumen

49

5,78

7,80

1,92

33,32

0,27

Concentracin

41

0,96

1,00

0,23

23,90

0,03

Espermatozoides/
Eyaculado

41

5,88

13,46

2,76

46,97

0,43

Variables

Media

Rango

Desviacin
estndar

C.V

Error
estndar

Motilidad Masal

49

3,43

3,00

0,71

20,69

0,10

Volumen

47

5,21

8,00

1,78

34,31

0,26

Motilidad Progresiva

49

74,69

40,00

9,86

13,20

1,40

Concentracin

43

1,09

1,14

0,24

22,39

0,03

Vivos

33

77,81

67,00

16,50

21,21

2,87

6,06

10,80

2,70

44,51

0,41

22,18

67,00

16,50

74,42

2,87

Espermatozoides/
Eyaculado

43

Muertos

33

Motilidad Masal

47

3,47

2,50

0,86

24,88

0,12

Motilidad Progresiva

47

75,42

35,00

11,22

14,87

1,63

Vivos

31

81.80

47,00

9,95

12,17

1,78

Muertos

31

18,19

47,00

9,95

54,73

1,78

Tabla N 12. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el

Concentracin = N Espermatozoides * 10 /ml de Semen. Espermatozoides/eyaculados = Volumen*


Concentracin.

semental N 575.

Concentracin = N Espermatozoides * 10 /ml de Semen. Espermatozoides/eyaculados = Volumen*


Concentracin.

133

134

Resultados

Resultados

Tabla N 13. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el

Tabla N 14. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el

semental N 583.

conjunto de los datos en funcin de ao.

Variables

Media

Rango

Desviacin
estndar

C.V

Error
estndar

Volumen

59

4,68

10,00

2,12

45,20

0,27

Concentracin

54

1,09

1,94

0,33

30,58

0,04

Aos

Desviacin
estndar

C.V

Error
estndar

7,10

1,45

32,67

0,11

1,13

2,54

0,38

33,73

0,03

131

5,31

13,90

2,64

49,71

0,23

Motilidad Masal

163

3,53

3,50

0,87

24,75

0,06

Variables

Media Rango

Volumen

163

4,45

Concentracin

131

Espermatozoides/
Eyaculado

Espermatozoides/
Eyaculado

54

Motilidad Masal

59

3,47

3,00

0,84

24,40

0,11

Motilidad Progresiva

59

74,49

45,00

12,05

16,18

1,56

Vivos

47

80,19

63,00

11,73

14,62

1,71

Motilidad
Progresiva

163

76,44

50,00

12,09

15,81

0,94

Muertos

47

19,80

63,00

11,73

59,22

1,71

Vivos

99

80,64

63,00

11,42

14,16

1,14

Muertos

99

19,35

63,00

11,42

59,03

1,14

Volumen

49

6.87

9,50

2,04

29,77

0,29

Concentracin

49

1.28

2,38

0,49

38,39

0,07

Espermatozoides/
Eyaculado

49

8.47

12,17

2,93

34,57

0,41

Motilidad Masal

49

4,10

3,00

0,87

21,25

0,12

Motilidad
Progresiva

49

80,24

45,00

11,13

13,87

1,59

Vivos

47

81,02

69,00

12,83

15,84

1,87

Muertos

47

18,97

69,00

12,83

67,65

1,87

5,30

13,39

2,84

53,64

0,38

2004

Concentracin = N Espermatozoides * 10 /ml de Semen. Espermatozoides/eyaculados = Volumen*


Concentracin.

El comportamiento de las caractersticas seminales a lo largo de los dos aos en


los que se desarroll el presente estudio (tabla N 14), demuestra un aumento en los
valores medios seminales, para el ao 2005 con respecto al 2004.
2005
Cuando se observan las caractersticas seminales por semental en funcin de los
aos de estudios (tablas N 15, 16, 17, 18), podemos encontrar la misma tendencia
que para el conjunto de animales: se observa un aumento de los valores medios
seminales; a excepcin del semental N 546, que muestra una ligera disminucin en el
porcentaje de espermatozoides vivos-muertos con respecto al ao: Encontrando un
84,15 % de vivos y 15,84 % de muertos para el ao 2004, mientras que en ao 2005 la
proporcin de vivos-muertos fue de 81,22% y 18,77%.

135

Concentracin = N Espermatozoides * 10 /ml de Semen. Espermatozoides/eyaculados = Volumen*


Concentracin.

136

Resultados

Resultados

Tabla N 15. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el

Tabla N 16. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el

semental 541 en funcin del ao.

semental 546 en funcin del ao.

Aos

2004

2005

Desviacin
estndar

C.V

Error
estndar

Desviacin
estndar

C.V

Error
estndar

5,70

1,32

26,76

7,00

1,50

34,51

0,21

0,95

1,00

0,23

1,47

2,00

0,47

32,05

0,08

28

4,79

9,80

33

6,90

12,00

2,99

43,34

0,52

Motilidad Masal

36

3,31

Motilidad Masal

48

4,13

3,50

0,94

22,95

0,13

Motilidad
Progresiva

36

1,64

Motilidad
Progresiva

48

83,54

50,00

12,41

14,86

1,79

Vivos

19,68

3,24

Vivos

26

84,15

26,00

6,96

8,27

1,36

15,22

67,26

3,24

Muertos

26

15,84

26,00

6,96

43,92

1,36

4,30

1,25

15,33

0,34

Volumen

5,32

4,10

1,33

25,16

0,44

0,99

0,85

0,23

23,33

0,06

Concentracin

1,96

2,05

0,60

30,65

0,20

13

8,21

10,49

2,79

34,02

0,77

Espermatozoides/
Eyaculado

10,52

12,17

3,78

35,96

1,26

Motilidad Masal

13

3,76

2,00

0,72

19,23

0,20

Motilidad Masal

4,66

2,00

0,70

15,15

0,23

Motilidad
Progresiva

13

77,30

30,00

9,70

12,55

2,69

Motilidad
Progresiva

86,66

20,00

7,07

8,15

2,35

Vivos

11

78,72

67,00

19,59

24,88

5,90

Vivos

81,22

27,00

7,94

9,78

2,64

Muertos

11

21,27

67,00

19,59

92,09

5,90

Muertos

18,77

27,00

7,94

42,33

2,64

Variables

Media Rango

Volumen

36

4,93

Concentracin

28

Espermatozoides/
Eyaculado

Variables

0,22

Volumen

48

4,36

24,50

0,04

Concentracin

33

2,00

41,68

0,378

Espermatozoides/
Eyaculado

3,00

0,67

20,41

0,11

73,75

40,00

9,88

13,40

22

77,36

53,00

15,22

Muertos

22

22,63

53,00

Volumen

13

8,15

Concentracin

13

Espermatozoides/
Eyaculado

Aos

2004

2005

Media Rango

Concentracin = N Espermatozoides * 10 /ml de Semen. Espermatozoides/eyaculados = Volumen*


Concentracin.

Concentracin = N Espermatozoides * 10 /ml de Semen. Espermatozoides/eyaculados = Volumen*


Concentracin.

137

138

Resultados

Resultados

Tabla N 17. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el

Tabla N 18. Estadsticos descriptivos de las caractersticas seminales para el

semental 575 en funcin del ao.

semental 583 en funcin del ao.

Aos

2004

2005

Desviacin
estndar

C.V

Error
estndar

Desviacin
estndar

C.V

Error
estndar

5,70

1,33

29,28

7,10

1,51

37,26

0,22

1,04

1,14

0,26

1,05

1,94

0,28

27,30

0,04

31

5,07

8,63

39

4,52

13,39

2,55

56,56

0,40

Motilidad Masal

35

3,18

Motilidad Masal

44

3,34

3,00

0,79

23,70

0,11

Motilidad
Progresiva

35

1,69

Motilidad
Progresiva

44

73,52

45,00

11,98

16,30

1,80

Vivos

8,36

1,61

Vivos

33

79,48

63,00

12,86

16,18

2,23

6,83

37,38

1,61

Muertos

33

20,51

63,00

12,86

62,70

2,23

5,20

1,58

22,21

0,45

Volumen

15

6,51

9,50

2,60

39,99

0,67

1,21

0,57

0,14

12,07

0.04

Concentracin

15

1,20

1,55

0,42

35,67

0,11

12

8,63

6,81

2,14

24,87

0,62

Espermatozoides/
Eyaculado

15

7,33

8,75

2,59

35,40

0,67

Motilidad Masal

12

4,33

2,00

0,88

20,48

0,25

Motilidad Masal

15

3,86

3,00

0,91

23,67

0,23

Motilidad
Progresiva

12

82,08

35,00

12,33

15,02

3,56

Motilidad
Progresiva

15

77,33

40,00

12,22

15,81

3,15

Vivos

13

81,92

47,00

13,48

16,45

3,73

Vivos

14

81,85

26,00

8,68

10,60

2,32

Muertos

13

18,07

47,00

13,48

74,57

3,73

Muertos

14

18,14

26,00

8,68

47,84

2,32

Variables

Media Rango

Volumen

35

4,55

Concentracin

31

Espermatozoides/
Eyaculado

Variables

0,22

Volumen

44

4,06

24,88

0,04

Concentracin

39

2,20

43,47

0,39

Espermatozoides/
Eyaculado

2,50

0,64

20,17

0,10

73,14

35,00

10,00

13,68

18

81,72

29,00

6,83

Muertos

18

18,27

29,00

Volumen

12

7,12

Concentracin

12

Espermatozoides/
Eyaculado

Aos

2004

2005

Media Rango

Concentracin = N Espermatozoides * 10 /ml de Semen. Espermatozoides/eyaculados = Volumen*


Concentracin.

Concentracin = N Espermatozoides * 10 /ml de Semen. Espermatozoides/eyaculados = Volumen*


Concentracin.

139

140

Resultados

En la tabla N 19, se presentan los valores medio globales de las caractersticas

Resultados

En cuanto a la concentracin seminal, podemos observar que las medias ms altas


se encuentran entre los meses de noviembre, diciembre y enero con valores de

seminales en funcin del mes de extraccin.

1,25x109; 1,43x109 y 1,25x109, respectivamente. El mes con la media ms baja fue


Tabla N 19. Caractersticas seminales medias para el conjunto de los datos en

septiembre con una concentracin de 0,80x109.

Vivos

Muertos

1,25

7,22

3,58

74,34

74,28

25,71

Al observar la motilidad masal y motilidad progresiva en su conjunto, vemos que

Febrero

4,92

1,15

7,08

3,53

77,30

73,85

26,15

ambas se comportan de la misma manera; as, podemos observar cmo el mes de

Marzo

4,28

1,17

5,21

3,64

76,40

75,00

25,00

Abril

4,41

1,16

5,21

3,52

75,46

83,93

16,06

Mayo

5,50

1,10

5,94

3,62

78,70

86,58

13,41

Junio

5,11

1,13

6,03

3,58

74,78

85,28

14,71

Motilidad
Progresiva

4,56

Motilidad
Masal

Enero

Mes

Concentracin

Cuando se observan las medias de la variable espermatozoides/eyaculado, se

Volumen

Espermatozoid
es/Eyaculado

funcin del mes.

puede apreciar cmo los mximos valores se alcanzan en el mes de octubre con
10,38x109, niveles inferiores registraron los meses de marzo y abril, con medias de
5,21x109, para ambos meses.

octubre presenta los mayores registros, tanto para motilidad masal como la progresiva,
acusando valores de 4,20 y 86,00 %, respectivamente. Los valor ms bajo se reflejan
en el mes de septiembre, con registros de 3,00 y 70,00 % para cada caso.

Durante los meses analizados, observamos tambin el porcentaje de esperma


vivos-muerto para el conjunto de todos los sementales; apreciando cmo el mximo y

Julio

5,00

1,19

6,08

3,84

80,00

85,73

14,28

mnimo valor para los vivos-muertos se encuentra en el mes de agosto con un 87,66%

Agosto

3,31

1,31

6,93

4,14

83,92

87,66

12,33

y 12,33 %, respectivamente. El mes que present valores ms bajos en proporcin de

Septiembre

7,50

0,80

6,00

3,00

70,00

82,00

18,00

Octubre

9,50

1,12

10,38

4,20

86,00

78,66

21,33

Noviembre

5,58

1,25

6,50

3,66

74,16

74,00

26,00

Diciembre

5,50

1,43

7,65

3,75

75,00

72,25

27,75

Concentracin = N Espermatozoides * 10 /ml de Semen. Espermatozoides/eyaculados = Volumen*


Concentracin.

vivos-muertos fue diciembre, con 72,25 % y 27,75 %, respectivamente.


4.2.1.1- Porcentajes de formas anormales

En esta ltima parte de la caracterizacin descriptiva del semen de los toros


marismeos, pretendemos reflejar lo que se desprende del estudio de las formas
anormales encontradas en el semen, tanto de forma global como para cada semental.
Se han analizado con mxima profundidad no slo las formas anormales encontradas

En relacin al volumen seminal, encontramos que los mejores registros para dicha

en el semen, sino tambin el porcentaje de ocurrencia para cada caso.

variable se obtuvieron en los meses de septiembre, octubre y noviembre con valores


medios de 7,50 ml, 9,50 ml y 5,58 ml, respectivamente. Adems, es notorio observar

Como se puede observar en el grfico N 5, en la totalidad de los eyaculados

que, a partir de estos tres meses, el volumen seminal tiende a caer ligeramente en los

estudiados las formas anormales no superan el 9 %; As, podemos observar que la

meses de diciembre, enero, febrero, marzo y abril. El peor mes registrado para el

mayor incidencia de formas anormales corresponde a los espermatozoides con cola

volumen seminal fue

de ltigo con un valor medio de 3,84 %. Le siguen, en orden descendente, las cabezas

agosto, registrando una media de 3,31 ml, posiblemente

causado por las condiciones climticas adversas de la regin.

141

142

Resultados

Resultados

sueltas con una media del 2 %, cola flexionada 1,70 % y 1,16 % para las gotas

Grfico N 6. Porcentajes de formas anormales de los eyaculados para el

citoplasmticas.

semental N 541.

Grfico N 5. Porcentajes de formas anormales de los eyaculados para el


conjunto de los Sementales.

Grfico N 7. Porcentajes de formas anormales de los eyaculados para el


Al analizar de forma individual el efecto de las formas anormales sobre el semen,

semental N 546.

observamos que los porcentajes son similares a los descritos para el conjunto de los
sementales. As, podemos ver en los grficos N 6, 7, 8 y 9, cmo las colas de ltigo
se mueven en torno a unos valores mximos de 5,07% correspondiente al semental N
583 y unos mnimos de 2,45% correspondiente al semental N 546. Para el resto de
los sementales, el valor medio encontrado fue de 3,00% para el semental N 541 y
4,33 para el semental N 575.

La forma anormal que menor incidencia tuvo sobre los eyaculados estudiados, fue
la gota citoplasmtica, encontrando valores medios en torno al 1% para todos los
sementales. Lo que demuestra, por una parte, una buena madurez espermtica y, en
segundo lugar, que los intervalos de extraccin fueron los adecuados.

En cuanto al comportamiento de la forma anormal cabeza suelta, encontramos


valores medios muy similares para todos los sementales, en torno a un 2%. Asimismo,
las colas flexionadas mostraron valores de 1,20% y 1,27% para los sementales N
541 y 575, y de 1,92% y 2,10% para los N 546 y 583, respectivamente.

143

144

Resultados

Resultados

y prueba a posteriori de

Grfico N 8. Porcentajes de formas anormales de los eyaculados para el

4.3- Anlisis multifactorial de efectos fijos

semental N 575.

homogeneidad de medias para las caractersticas seminales de toros


marismeos

4.3.1- Volumen del eyaculado

En la tabla N 20, se muestran los valores de F obtenidos en el anlisis. Los


resultados del anlisis de la varianza multifactorial de efectos fijos para el volumen del
eyaculado demuestran que los efectos directos de los factores analizados resultaron
altamente significativos.
Tabla N 20. Anlisis de varianza para la variable volumen del eyaculado.

Fuente de
Variacin

Grfico N 9. Porcentajes de formas anormales de los eyaculados para el

GL

Cuadrados
medios

Valores de F

Pr>F

Ao

209,085

109,81

<.0001

Mes

11

11,994

6,29

<.0001

Semental

9,615

5,04

0,0022

Error

196

1,904

semental N 583.
A continuacin, los grficos N 10, 11 y 12 muestran los resultados obtenidos en
el test de Duncan de comparacin de medias a posteriori, realizadas tras los anlisis
multifactoriales. En ellas se destacan los grupos de homogeneidad establecidos para
cada variable en estudio.

Para el factor semental, hemos podido comprobar que existe una alta variacin
individual entre los ejemplares sobre el volumen del eyaculado a lo largo de todo el
experimento: Se puede apreciar cmo el semental N 541 obtiene el mximo volumen
de semen seguido muy de cerca por el semental N 575. El volumen ms bajo lo
present el semental N 546, igual tendencia present el semental N 583.

Al comparar el volumen del eyaculado con respecto a los meses de estudio, se


puede comprobar que existen variaciones muy marcadas a lo largo de la experiencia.
Es notorio observar la forma en que se agrupan los datos, mostrando claramente la
formacin de tres grupos de homogeneidad: el primero corresponde al mes de octubre

145

146

Resultados

Resultados

que registra el valor ms alto; el segundo corresponde al mes de septiembre; y el

Grfico N 11. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para el volumen

tercero grupo est representado por valores constante en el intervalo de meses que

seminal en funcin del mes.

abraca desde noviembre a agosto.


10

Al analizar las medias de produccin de semen en funcin de los dos aos de

estudio, se puede observar una alta variabilidad del volumen entre los dos aos. Dicha

variacin posiblemente est determinada porque los sementales hayan alcanzado la

madurez sexual as como por la disminucin de su grado de agresividad. As, se


VOLUMEN

puede observar que el ao 2005 fue superior al 2004.

4
3

Grfico N 10. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para el volumen

Seminal en funcin del semental.

1
0
E

5,78

4,68cb

4,51c

4
VOLUMEN

MESES
5,21b

Grfico N 12. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para el volumen


seminal en funcin del ao.

3
2

6
5

0
541

546

575

SEMENTALES

583

6,87a

4,45b

4
VOLUMEN
3
2
1
0
2004

2005
AOS

147

148

Resultados

Resultados

Grfico N 13. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para la

4.3.2- Concentracin seminal

concentracin seminal en funcin del semental.


En el anlisis de varianza para la variable concentracin seminal, se puede
1,4

Tabla N 21. Anlisis de varianza para la variable concentracin seminal.

Fuente de
Variacin

GL

Cuadrados
medios

Valores de F

Pr>F

CONCENTRACIN

resultaron altamente significativos; en cambio, en los meses de estudio no se


encontraron diferencias significativas sobre la concentracin seminal.

1,2

0,8
0,6
0,4

2,219

18,64

<.0001

0,2

Mes

11

0,133

1,12

0,350

Semental

3,107

26,10

<.0001

164

0,119

1,09b

1,09b
0,96b

Ao

Error

1,58a

1,6

apreciar en la tabla N 21 cmo los efectos directos de los factores aos y semental

541

546

575

583

SEMENTALES

La concentracin seminal en funcin del semental, presenta un comportamiento


inverso al del volumen del eyaculado, de forma que el semental que produce el mayor
volumen de semen es el que presenta la menor concentracin seminal y viceversa,

Grfico N 14. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para la

hecho que se cumple en la mayora de las especies de mamferos, donde tambin

concentracin seminal en funcin del mes.

existe una correlacin negativa de estas dos variables. Por lo tanto, podemos apreciar
1,6

en la grfica N 13 cmo existe una moderada variacin individual entre los

1,4

mostr fue el N 546, para el resto de los sementales la concentracin no mostr

1,2

mayores variaciones.

En relacin a la concentracin seminal, podemos observar cmo hemos apuntado


anteriormente la homogeneidad con relacin a los meses de estudio (grfica N 14),
aunque, a modo de ilustracin, podemos observar cmo el mes de septiembre
experimenta los valores ms bajos de concentracin seminal, momento en el que

CONCENTRACIN

sementales, quedando reflejado que el semental que mayor concentracin seminal

1
0,8
0,6
0,4
0,2

inicia un crecimiento progresivo hasta alcanzar en diciembre su pico ms alto sobre el


0

resto de los meses.

La concentracin media de los eyaculados en relacin a los aos de estudio, presenta

un comportamiento paralelo al volumen seminal, de forma que el ao 2005 se


comporta mejor que el 2004. (grfico N 15).

149

MESES

150

Resultados

Resultados

Grfico N 15. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para la

presenta mayor concentracin espermtica es el que presenta mayor cantidad de

concentracin seminal en funcin del ao.

espermatozoides totales (semental N 546); de igual forma, dicha tendencia se cumple


para el semental de menos concentracin seminal, que tambin obtiene uno de los

1,28b

1,3

menores registros para los espermas totales (semental N 541). El resto de los

CONCENTRACIN

sementales present variaciones entre ellos pero en menor medida.

1,25
En referencia al anlisis de los meses de estudio para los espermatozoides totales

1,2
1,15

(grfico N 17), los resultados ponen de manifiesto, al igual que el caso del volumen
seminal, los valores mximos para el mes de octubre, desde donde se produce un

1,13a

descenso en el mes de noviembre para incrementarse progresivamente hasta


mantenerse en valores constantes en los meses de diciembre, enero y febrero. Los

1,1

meses que acusan menor cantidad de espermatozoides corresponden a marzo, abril y


mayo. El resto de los meses experimentan una proporcin de variacin constante.

1,05
2004

2005
En el anlisis del grfico N 18, se observa una alta variacin en la produccin de

AOS

espermatozoides totales en relacin a los aos de estudios. Dicho comportamiento es


similar al que presenta el volumen y la concentracin seminal.
4.3.3- Espermatozoides totales
Grfico N 16. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para los
Con respecto a la variable espermatozoides totales, el anlisis de varianza puso de

espermatozoides totales en funcin del Semental.

manifiesto que los efectos directos de los factores resultaron altamente significativos.

Tabla N 22. Anlisis de varianza para la variable espermatozoides totales.

Fuente de
Variacin

GL

Cuadrados
medios

Valores de F

Pr>F

Ao

407,983

71,65

<.0001

Mes

11

19,370

3,40

0,0003

Semental

55,734

9,78

<.0001

Error

164

5,694

7,68a

8
ESPERMATOZOIDES TOTALES

(Tabla N 22).

7
6

6,06b

5,88b

5,30b

5
4
3
2
1
0

541

546

575

SEMENTALES

Al analizar los grupos de homogeneidad de medias para los espermatozoides


totales en funcin del semental, (grfico N 16), observamos que existe un
comportamiento paralelo al de la concentracin seminal, de forma que el semental que

151

152

583

Resultados

Grfico N 17. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para los

Resultados

4.3.4- Motilidad Masal

espermatozoides totales en funcin del mes.


En el anlisis de varianza para la variable motilidad masal, se puede apreciar

ESPERMATOZOIDES TOTALES

12

(tabla N 23) cmo los efectos directos de los factores ao, mes y semental resultaron
a

altamente significativos.

10
ba

b
b

Tabla N 23. Anlisis de varianza para la variable motilidad masal.

Fuente de
Variacin

4
2
0

GL

Cuadrados
medios

Valores de F

Pr>F

Ao

23,325

38,81

<.0001

Mes

11

1,396

2,32

<.0105

Semental

10,197

16,96

<.0001

Error

196

0,601

MESES

En la comparacin de medias a posteriori de la motilidad masal subjetiva en


funcin del semental, se percibe que los valores fueron compatibles a los de la
concentracin seminal y espermatozoides totales (grfico N 19), siendo el semental
Grfico N 18. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para los
espermatozoides totales en funcin del ao.

ESPERMATOZOIDES TOTALES

nuevo cmo el semental 541 obtiene los menores valores de motilidad, dato que se
cumple tambin al estudiar la concentracin en funcin del semental. Valores idnticos

8,47b

N 546 el que mejor motilidad seminal present. Por otra parte, podemos observar de

obtuvimos para los otros dos sementales en este estudio. Por tanto, podemos concluir

que la motilidad masal est altamente influenciada por el efecto de los sementales.

7
6

5,31a

Al analizar la motilidad masal para el mes de extraccin, los valores medios dieron

lugar a dos grupos de homogeneidad, uno constituido para los meses de octubre y

agosto, donde se obtienen los mejores registros de motilidad y el otro corresponde al

mes de septiembre donde se observa el menor dato de motilidad masal (grfico N

20). Es notorio tambin mencionar que, en el intervalo de meses que van de

noviembre a julio, se refleja una menor variacin de la motilidad, observndose valores


por encima de los tres puntos. Lo que demuestra una buena motilidad masal a lo largo

0
2004

2005

de todo el ao.
AOS

Como viene siendo habitual en este estudio, el efecto de los dos aos de estudio para
la variable motilidad masal, tambin refleja que el ao 2005 supera grandemente al
ao 2004 (grfica N 21).

153

154

Resultados

Resultados

Grfico N 19. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para la motilidad

Grfico N 21. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para la motilidad

masal en funcin del Semental.

masal en funcin del ao.

4,5

4,2

4,21a

3,47b

3,43b

3,47b

MOTILIDAD MASAL

3,5

MOTILIDAD MASAL

4,10b

4,1
4

3
2,5
2
1,5
1

3,9
3,8
3,7
3,6

3,53a

3,5
3,4
3,3

0,5
0

541

546

575

3,2

583

2004

SEMENTALES

2005
AOS

4.3.5- Motilidad progresiva


Grfico N 20. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para la motilidad
masal en funcin del mes.

En el anlisis de varianza para la variable motilidad progresiva, se puede apreciar


en la tabla N 24 cmo los efectos directos de los factores aos y semental resultaron

4,5
4

a
ba

ba

ba

ba

ba

ba

altamente significativos; en cambio, para los meses de estudio, se encontraron


ba

ba

ba

diferencias significativas (p<0,05), sobre la variable estudiada.

MOTILIDAD MASAL

3,5
b

Tabla N 24. Anlisis de varianza para la variable motilidad progresiva.

2,5
2

Fuente de

1,5

Variacin

GL

Cuadrados
medios

Valores de F

Pr>F
0,0010

Ao

1313,267

11,16

0,5

Mes

11

243,045

2,06

0,0246

Semental

1495,115

12,70

<.0001

Error

196

117,722

0
E

MESES

Al valorar la motilidad progresiva, sobre el factor de variacin semental, podemos


observar como los valores son semejantes con los de motilidad masal, aprecindose el

155

156

Resultados

Resultados

gran contraste entre el semental N 546 y el resto de los sementales. Por otro lado,

Grfico N 23. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para la motilidad

tambin se percibe que los valores de motilidad progresiva fueron compatibles a los de

progresiva en funcin del mes.

la concentracin seminal y espermatozoides totales. Por lo tanto, podemos ver cmo


90

los mayores registros fueron para el semental N 546 con una diferencia de diez

80

mencionar que, aunque el resto de sementales presenta valores ms bajos de


motilidad progresiva, exhiben una excelente calidad seminal con valores siempre por
encima del 74%, adems de una escasa variabilidad entre ellos.
Cuando estudiamos la motilidad progresiva, en funcin de los meses de extraccin,
podemos ver que existe un comportamiento similar al de la motilidad total,
posiblemente debido a una relacin total fisiolgica entre ellas. Por lo tanto, podemos
observar en la grfica N 23, cmo los meses de octubre y agosto, obtienen los

MOTILIDAD PROGRESIVA

puntos sobre el resto de los sementales (grfico N 22). Es notable tambin

ba
ba
ba

ba

ba

ba

ba
ba

ba

ba

70
60
50
40
30
20
10

mayores registros de motilidad progresiva, en contraste con el mes de septiembre

donde se observa su menor valor. El resto de los meses (noviembre-julio), la motilidad

progresiva se mantuvo con valores muy buenos, por encima del 75%. En el anlisis

MESES

del grfico N 24, se puede observar una alta variacin en la motilidad progresiva en
relacin a los aos de estudios. Dicho comportamiento es similar al que presenta el
volumen, la concentracin seminal, espermatozoides totales y motilidad masal.
Grfico N 24. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para la motilidad
Grfico N 22. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para la

progresiva en funcin del ao.

motilidad progresiva en funcin del Semental.


81
84,03a

MOTILIDAD PROGRESIVA

84
82
80
78
76

75,42b

74,69b

74,49b

74

MOTILIDAD PROGRESIVA

86

80,20a

80
79
78
77

76,44b

76

72

75

70

74

2004

68

541

546

575

583

2005
AOS

SEMENTALES

157

158

Resultados

Resultados

Grfico N 25. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para los

4.3.6 - Espermatozoides vivos

espermatozoides vivos-muertos en funcin del ao.


En el anlisis de varianza para los espermatozoides vivos se puede apreciar en la
90

significativos; en cambio, en el factor semental no se encontraron diferencias

80

significativas sobre la variable estudiada.

70

Tabla N 25. Anlisis de varianza para los espermatozoides vivos.

Fuente de
Variacin

GL

Cuadrados
medios

Valores de F

Pr>F

ESPERMATOZOIDES
VIVOS - MUERTOS

tabla N 25 cmo los efectos directos de los factores ao y mes resultaron altamente

60
50
40
30
20

Ao

675,575

6,10

0,014

10

Mes

11

489,587

4,42

<.0001

Semental

164,219

1,48

0,222

Error

130

110,835

2004

2005
AOS

Con referencia a la proporcin de espermatozoides vivos-muertos en relacin a los


aos de estudio, podemos observar que el comportamiento sigue la tendencia del
resto de variables estudiadas: donde el ao 2005 mostr mayor proporcin de
espermatozoides vivos y menor espermas muertos que el ao 2004, en el cual se

Grfico N 26. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para los

aprecia una ligera disminucin de estos valores; aunque de forma global ambos aos

espermatozoides vivos en funcin del mes.

ofrecen unos valores extraordinarios en el porcentaje de viabilidad espermticas,


90

normales para el semen de cualquier especie de inters productiva (grfico N 25).

80

Finalmente, en el anlisis de los espermatozoides vivos-muertos en funcin de los


meses de estudio, podemos apreciar cmo existe una concordancia entre los
espermatozoides vivos, la motilidad masal y motilidad progresiva. Se puede observar
cmo el mes de agosto presenta el dato ms alto para las tres variables mencionadas.
En cambio el mes que report menos espermatozoides vivos fue diciembre, aunque
siempre estuvo por encima del 70%. Al analizar los meses de estudio en su conjunto,
podemos observar cmo los intervalos de meses comprendidos de abril hasta
septiembre muestra valores de espermatozoides vivos por encima del 82%, y debajo
del 12% de muertos (grfico N 26), mientras que el intervalo de meses de octubre a

ESPERMATOZOIDES VIVOS

siempre por encima del 80%. El 20 % de esperma muerto estn dentro de los lmites

ba
ba

ba

ba

ba

a
ba

ba

ba
ba

70
60
50
40
30
20
10
0
E

MESES

marzo acusa valores ms bajos, no obstante, siempre mayor del 72% para los vivos y
cerca del 28% para muertos (grfico N 27).

159

ba

160

Resultados

Resultados

Grfico N 27. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para los

Tabla N 26. Anlisis de la co-varianza para las variables seminales estudiadas

espermatozoides muertos en funcin del mes.

en funcin de la edad del semental.

ESPERMATOZOIDES MUERTOS

30

Fuente

a
ba

ba

ba

ba

Variables analizadas

25

ba
ba

Volumen
ba

15

ba

ba
b

10

Concentracin

Espermatozoides
0
E

GL

variacin

ba

20

de

totales

MESES

Motilidad masal

4.4- Efecto de factores inherente al semental (edad, peso, circunferencia

Motilidad progresiva

escrotal), sobre las caractersticas seminales estudiadas

Cuadrados Valores
medios

de F

Pr>F

Edad

314,506

162,75

<.0001

Semental

6,321

3,27

0,022

Error

207

1,932

Edad

2,031

17,48

<.0001

Semental

3,431

29,53

<.0001

Error

175

0,116

Edad

584,359

107,54

<.0001

Semental

58,759

10,81

<.0001

Error

175

5,434

Edad

25,264

42,22

<.0001

Semental

10,878

18,18

<.0001

Error

207

0,598

Edad

1701,533

14,14

<.0001

Semental

1423,256

11,82

<.0001

Error

207

120,372

R2

0,477

0,359

0,432

0,283

0,174

Los resultados del anlisis de la covarianza realizado para el efecto edad

A continuacin, los grficos N 28, 29, 30 y 31 muestran los resultados obtenidos

(regresin lineal y cuadrtica) de los sementales sobre las caractersticas seminales

de la evolucin del efecto de las variables seminales y la circunferencia escrotal tras el

estudiadas, se presentan en la tabla N 26. En ella se puede apreciar cmo, a medida

anlisis de regresin. En ellas se destacan su grado de relacin para cada variable en

que cambia la edad, se da alta significancia en todas las variables estudiadas. En

estudio.

cuanto a los niveles de explicacin de la varianza total, se destaca la gran influencia


de la edad sobre el volumen de semen, espermatozoides totales y concentracin que

Al analizar el efecto de la variacin de la motilidad masal segn la circunferencia

superan cerca del 48%, 43% y 36% respectivamente. El resto de las variables se

escrotal, encontramos una tendencia a la significancia (p<0,06). En la grfica N 28

mantuvieron en niveles de 28% y 17%, correspondiente a motilidad masal y

podemos apreciar claramente cmo la motilidad masal tienden a aumentar de forma

progresiva.

somera a medida que aumenta la circunferencia escrotal; por ello, las correlaciones
obtenidas de estos parmetros es relativamente baja r2 = 0,08.

Cuando estudiamos el efecto de la variacin de la concentracin seminal segn el


crecimiento de la circunferencia escrotal (grfico N 29), encontramos que existe una
alta significancia (p<0,001) para la relacin entre los dos parmetros. Se aprecia un

161

162

Resultados

aumento de la concentracin espermtica a medida que el semental experimenta

Resultados

Grfico N 28. Variacin de la motilidad masal segn la circunferencia escrotal.

cambios en el tamao de la circunferencia escrotal. Las correlaciones obtenidas de


estos parmetros es de r2=0,23.

La relacin entre la variable espermatozoides totales y la circunferencia escrotal se


presenta en el grfico N 30, en ella se puede apreciar que la relacin lineal entre
ambas es de r2= 0,11 con una significancia de (p<0,03). Puede apreciarse, por tanto,
que el nmero de espermatozoides totales aumenta en los sementales para estos
tramos de edad entre los 30 y 42 meses.

La representacin grafica de la evolucin del volumen seminal con la


circunferencia escrotal de los sementales describe una curva con; una fase de
aumento rpida, tanto en el volumen como la circunferencia escrotal que va desde los
25 a 32 centmetros; y una fase de crecimiento lento en el volumen seminal, a partir de
esa circunferencia, hasta alcanzar el valor mximo de volumen con una circunferencia
escrotal de 35 cm. (grfico N 31). La ecuacin que defini dicha relacin fue de tipo
cuadrtica (r2=0,17), significativa para una p<0,007.

Grfico N 29. Variacin de la concentracin seminal segn la circunferencia


escrotal.

En cuanto a la relacin del volumen seminal y el peso del semental, podemos


apreciar que existe una relacin lineal, de forma que ambos parmetros tienden a
aumentar de forma paralela (grfico N 32), por ello el coeficiente de correlacin
obtenida es de r2=0,18 el cual ha sido significativa para una p<0,006.

En

referencia

la

representacin

grafica

en

las

variaciones

de

los

espermatozoides totales de los eyaculados segn el peso de los animales en


kilogramos (grfico N 33), se puede apreciar que se establece una correlacin lineal
significativa entre ambos parmetros, de modo que ambos aumentan de forma
paralela. El coeficiente de correlacin es r2= 0,13 significativo para una p<0,02.

163

164

Resultados

Grfico N 30. Variacin de los espermatozoides totales segn la circunferencia

Resultados

Grfico N 32. Variacin del volumen seminal segn el peso del semental.

escrotal.

Grfico N 33. Variacin de los espermatozoides totales segn el peso del


Grfico N 31. Variacin del volumen seminal segn la circunferencia escrotal.

165

semental.

166

Resultados

4.5- Estimacin objetiva del estado de conservacin del banco de germoplasma


mediante sistemas informticos (CASA y Citmetro de flujo)

Resultados

Con la intencin de poder caracterizar los distintos niveles cinemticos del semen
criopreservado estudiado para cada semental, los resultados de cada uno de ellos
podemos observarlos en las tablas N 28, 29, 30 y 31.

4.5.1- Estimacin de la calidad del semen mediante sistema CASA


Los valores medios para la velocidad curvilnea de cada uno de los sementales,
Para mostrar con ms claridad las posibles variaciones entre los parmetros

demuestran que los mayores registros alcanzados fueron para los sementales N 575

cinticos que definen las caractersticas del semen, los resultados del estudio

y 541 con valores por encima del 50 m/seg de velocidad, el resto de los sementales

descriptivo y de dispersin se han agrupado de dos formas: La primera muestra los

se mantuvieron en unos valores de velocidad medios de 40 m/seg.

resultados para el conjunto de todos los sementales y la segunda presenta de manera


individual el comportamiento de las variables estudiadas en base a cada semental.

La misma tendencia fue mostrada para la variable velocidad rectilnea donde se


puede apreciar cmo los sementales N 575 y 541 fueron los que experimentaron los

Basndonos en los valores del anlisis computarizado de la motilidad del semen


criopreservado a lo largo de la experiencia, los resultados obtenidos para el conjunto
de los datos se ponen de manifiesto en la tabla N 27. En ella podemos resaltar el
importante nivel de variabilidad observada para las tres variables de velocidad y el

valores de velocidad ms altos, en el caso del semental N 583, tambin se comport


de la misma manera, todos con valores por encima de un 20 m/seg de velocidad
rectilnea, el semental N 546 exhibi el menor registro con un valor VSL de 19,25
m/seg.

desplazamiento lateral de la cabeza, lo que pone de manifiesto una importante


variacin en las condiciones del semen criopreservado, posiblemente debido a la
variabilidad observada en el estudio descriptivo del semen en fresco, aunque por otra
parte tambin puede ser debido a diferentes grados de susceptibilidad del esperma al

En cuanto a la velocidad promedio en los eyaculados de cada semental, podemos


observar que fueron compatibles con la velocidad curvilnea y velocidad rectilnea. Las
media ms altas se encuentra en los sementales N 575, 541 y 583 con valores por
encima de 30 m/seg. Igualmente el semental N 546 experiment el registro ms bajo

proceso de congelacin.

con un VAP de 24,82 m/seg.


Tabla N 27. Estadsticos de los parmetros de velocidad y descriptores
Al analizar el porcentaje de los ndices de linealidad, rectitud, oscilacin, para los

cinemticos del semen criopreservado mediante el sistema CASA.

cuatro sementales en estudio, se pone de manifiesto que los machos con mayores
promedios son el N 546 y 583 con registros de LIN 48,85 47,12 %; STR 76,97

Variable

Media

Rango

DE

CV

Error

Velocidad curvilnea

19

49,04

46,60

10,91

22,25

2,50

Velocidad rectilnea

19

22,08

18,70

4,79

21,68

1,09

Velocidad promedio

19

29,38

25,60

6,07

20,66

1,39

ndice de linealidad

19

45,32

17,40

5,09

11,23

1,16

Cuando observamos el efecto de la variable desplazamiento lateral de la cabeza,

ndice de rectitud

19

75,09

14,90

3,95

5,26

0,90

se not que existe una compatibilidad con las tres velocidades estudiadas. As los

ndice de oscilacin

19

60,22

15,80

4,30

7,15

0,98

sementales que mayor valor presentaron fueron los N 575 y 541 con 4,41 3,70 m.

Lateral de la cabeza

19

3,66

2,90

0,81

22,29

0,18

el semental que menor registro presento fue el 546 con 2,70 m.

Frecuencia de batido

19

10,14

4,40

1,22

12,02

0,27

167

75,50 %; WOB 63,42 62,17 % respectivamente. El resto de los sementales


experimentaron unos valores de LIN de 44,06; y 42,81% para el nmero 541 y 575,
STR 73,82 y 74,63% y un WOB de 59,68 y 57,23%.

168

Resultados

Resultados

La variable frecuencia de batido se mostr compatible con los ndices estudiados

Tabla N 30. Estadsticos de los parmetros de velocidad y descriptores

(LIN, STR, WOB), obteniendo los mejores resultados con los sementales N 546 y 583

cinemticos del semen criopreservado mediante el sistema CASA. Semental N

con valores de 10,47 y 10,57 Hz. El de menor registro fue para el N541 con 9,80 Hz.

575.
Variable

Media

Rango

DE

CV

Error

Tabla N 28. Estadsticos de los parmetros de velocidad y descriptores

Velocidad curvilnea

54,03

23,20

8,03

14,87

3,28

cinemticos del semen criopreservado mediante el sistema CASA. Semental N

Velocidad rectilnea

23,11

11,50

4,19

18,12

1,71

Velocidad promedio

31,08

15,30

5,07

16,32

2,07

ndice de linealidad

42,81

12,20

4,57

10,67

1,86

6,06

1,84

541.
Variable

Media

Rango

DE

CV

Error

Velocidad curvilnea

51,66

28,90

11,52

22,31

5,15

ndice de rectitud

74,63

11,00

4,52

Velocidad rectilnea

22,62

11,10

4,58

20,28

2,05

ndice de oscilacin

57,23

8,70

2,92

5,11

1,19

Velocidad promedio

30,66

14,90

6,17

20,13

2,76

Lateral de la cabeza

4,41

1,10

0,45

10,26

0,18

ndice de linealidad

44,06

7,70

3,23

7,34

1,44

Frecuencia de batido

9,88

3,90

1,37

13,93

0,56

ndice de rectitud

73,82

4,40

1,59

2,15

0,71

ndice de oscilacin

59,68

8,00

3,29

5,51

1,47

Lateral de la cabeza

3,70

1,70

0,69

18,82

0,31

Tabla N 31. Estadsticos de los parmetros de velocidad y descriptores

Frecuencia de batido

9,86

3,20

1,28

13,03

0,57

cinemticos del semen criopreservado mediante el sistema CASA. Semental N


583.
Variable

Media

Rango

DE

CV

Error

Tabla N 29. Estadsticos de los parmetros de velocidad y descriptores

Velocidad curvilnea

47,60

16,30

6,77

14,24

3,38

cinemticos del semen criopreservado mediante el sistema CASA. Semental N

Velocidad rectilnea

22,72

13

5,58

24,55

2,79

546.

Velocidad promedio

29,80

14,10

5,80

19,48

2,90

Variable

Media

Rango

DE

CV

Error

ndice de linealidad

47,12

15,60

7,11

15,09

3,55

Velocidad curvilnea

39,72

34,70

14,27

35,93

7,13

ndice de rectitud

75,50

14,20

6,79

8,99

3,39

Velocidad rectilnea

19,25

14,30

5,94

30,86

2,97

ndice de oscilacin

62,17

9,10

4,26

6,86

2,13

Velocidad promedio

24,82

18,40

7,57

30,50

3,78

Lateral de la cabeza

3,45

0,60

0,26

7,66

0,13

ndice de linealidad

48,85

9,40

4,48

9,17

2,24

Frecuencia de batido

10,57

2,20

0,92

8,74

0,46

ndice de rectitud

76,97

3,30

1,42

1,84

0,71

ndice de oscilacin

63,42

10,60

5,22

8,24

2,61

El anlisis de la varianza propuesto para estudiar los posibles efectos de los

Lateral de la cabeza

2,70

1,60

0,71

26,36

0,35

sementales sobre la dinmica espermtica del semen, resultaron en la observacin de

Frecuencia de batido

10,47

3,20

1,43

13,66

0,71

una homogeneidad estadsticamente significativa para las variables estudiadas (tabla


N 32), con la excepcin de las diferencias significativas puntuales en la variables
ALH, por parte de los sementales (p<0,002). grfico N 34.

169

170

Resultados

Resultados

Tabla N 32. Anlisis de varianza del efecto de los sementales sobre la dinmica

4.5.1.1- Evaluacin de la motilidad segn la progresividad del semen

espermtica.

criopreservado.

Variables
VCL
VSL
VAP
LIN
STR
WOB
ALH
BCF

Fuente de
variacin

GL

Cuadrados

Valores de

medios

Semental

179,76

Error

15

106,94

Semental

13,86

Error

15

24,76

Semental

36,43

Error

15

36,96

Semental

36,13

Error

15

23,89

Semental

8,06

Pr>F

1,68

0,213

0,56

0,649

0,99

0,425

significativas entre los distintos sementales.

1,51

0,251

Tabla N 33. Valores medios de los parmetros de progresividad del semen

0,47

0,707

2,50

0,099

Error

15

17,14

37,11

Error

15

14,85

Semental

2,43

Error

15

0,31

Semental

0,66

Error

15

1,65

7,77

0,40

desplazamiento lateral de la cabeza en funcin del semental.

DESPLAZAMIENTO LATERAL DE LA
CABEZA

progresiva segn el semental fueron estables para todos ellos, mostrando la poca
variabilidad que existe entre sementales. As mismo, no se observaron diferencias

0,002

0,754

Grfico N 34. Prueba de homogeneidad de medias a posteriori para el

espermatozoides estticos (tabla N 33). Los valores medios para la motilidad

criopreservado mediante sistema CASA.

Semental

Motilidad

Motilidad no

progresiva

progresiva

Estticos

541

20,00 7,44

41,89 16,44

38,11 20,00

546

22,15 9,45

33,41 18,77

44,42 26,20

575

20,93 5,38

56,31 9,61

22,74 9,60

583

21,01 2,94

55,05 17,91

23,93 18,16

Valor p>

ns

ns

ns

Sementales

Espermatozoides

En cuanto a la motilidad no progresiva, tampoco se observaron diferencias

4,41a

4,5

El movimiento progresivo de los eyaculados se obtuvo valorando tres parmetros


cinticos distintos, como son la motilidad progresiva, motilidad no progresiva y los

significativas entre los distintos sementales, aunque se puede apreciar cmo los
mayores valores son para los sementales N 575 y 583 con medias de 55,05 y

3,70ba

3,45bc

3,5

56,31%. El semental que experiment menor motilidad no progresiva fue el N546 con
media de 33,41%, seguido del N 541 con valor de 41,89%.

2,70c

2,5

As mismo, en los espermatozoides estticos, no aparecieron diferencias

significativas entre los distintos sementales, aunque se puede apreciar cmo el

1,5

semental N546 expone los mayores valores medios con un 44,42%, seguido muy de

cerca del semental N 541 con medias de 38,11%. Los sementales N 575 y 583

0,5

ofrecen los valores ms bajos de espermatozoides estticos, 22,74 y 23,93%,

541

546

575

583

respectivamente.

SEMENTALES

171

172

Resultados

Resultados

4.5.2.- Evaluacin de la vitalidad espermtica y grado de apoptosis en el semen

Tabla N 34. Doble tincin para la deteccin de espermatozoides vivos

criopreservado mediante citometra de flujo.

muertos, cambios en la integridad de la membrana y cambios tempranos en la


permeabilidad

Con el propsito de poder cuantificar el nivel de dao que han sufrido las clulas

de

la

membrana

espermtica

durante

el

proceso

de

criopreservacin.

espermticas durante el proceso de criopreservacin, se han propuesto distintos


niveles de dao segn se deriva del anlisis del citmetro. Se han estudiado los

Sementales

IP + / Eth +

niveles para cada semental, los resultados de cada uno de ellos podemos observarlos

541

en la tabla N 34.

546
575

1,31 1,71

Al analizar los porcentajes de espermatozoides vivos para cada uno de los


sementales, encontramos que no se observan diferencias individuales significativas

IP - / Eth +

IP - / Eth -

IP + / Eth -

0,61 0,59

2,68 6,42

24,95 8,85

71,76 9,31

0,02 0,05

2,75 2,93

25,95 19,67

71,25 17,08

ba

4,90 4,22

26,78 5,26

67,00 5,96

0,13 0,05

42,66 26,38

54,23 28,38

ns

ns

ns

583

3,00 2,26

Valor p>

<0,05

para este parmetro, aunque podemos notar cmo se aprecia una ligera variabilidad
entre los sementales, siendo el rango de valores medios individuales entre un 24,95 y
un 42,66%.

4.6- Fertilidad in vivo y gestin del banco de germoplasma para la recuperacin


y multiplicacin de la raza en caso de una catstrofe.

El porcentaje de espermatozoides apoptticos no estuvo influenciado por los


diferentes sementales; por lo tanto, no se mostraron diferencias estadsticamente

Del total de eyaculados que forman el banco de germoplasma de la raza, fueron

significativas para este nivel. Podemos apreciar cmo en este nivel se concentra la

seleccionados 41 dosis seminales para realizar una prueba de campo, con el fin de

mayor carga espermtica del total de la muestra, lo que hace pensar en la alta

valorar la fertilidad in vivo de los mismos (tabla N 35 y 36).

susceptibilidad del semen al proceso de congelacin. Los valores medios oscilan en el


rango de 54,23 al 71,61%.

De las cuarenta y una hembras inseminadas, veinte quedaron gestantes. El


examen ecogrfico de las hembras gestantes confirm la existencia de viabilidad fetal,

Los valores medios de espermatozoides necrticos no se apreciaron diferencias

buena implantacin placentaria y la ausencia de patologas que pudiesen

significativas entre los distintos sementales. Se aprecian valores que oscilan entre 0,13

comprometer la progresin de la gestacin. Por lo tanto la fertilidad media obtenida en

y 4,90%.

este estudio fue del 48,78% (20/41).

Al analizar la posible influencia de los porcentajes de espermatozoides apoptticos


tardos sobre los distintos sementales, se encontraron diferencias significativas
(p<0,05), con valores mnimos de 0,02% para el semental N 546 y valor mximo de
3,00 % para el semental N 583.

173

174

Resultados

Resultados

Tabla N 35. Tasa de fertilidad in vivo en novillas tras el proceso de inseminacin

Tabla N 36. Tasa de fertilidad in vivo en vacas tras el proceso de inseminacin

con semen criopreservado.

con semen criopreservado.

Nmero

Novilla

Colocacin

Toro

Fecha

Diagnstico

observacin

nmero

de

utilizado

inseminacin

de

Nmero

Vaca

observacin

nmero

Colocacin

Toro

Fecha

de

utilizado

inseminacin

implante

Diagnstico
de
gestacin

implante

gestacin

6965

08/03/2006

583

20/03/2006

Vaca

440

08/03/2006

546

20/03/2006

Vaca

871

08/03/2006

546

20/03/2006

Vaca

2320

08/03/2006

575

20/03/2006

Preada

3522

08/03/2006

541

20/03/2006

Preada

4462

08/03/2006

541

20/03/2006

Preada

4614

08/03/2006

541

20/03/2006

Preada

5109

08/03/2006

546

20/03/2006

Vaca

5127

08/03/2006

546

20/03/2006

Vaca

10

5485

08/03/2006

541

20/03/2006

Vaca

11

6653

08/03/2006

583

20/03/2006

Preada

12

8917

08/03/2006

575

20/03/2006

Preada

13

9813

08/03/2006

546

20/03/2006

Preada

14

9827

08/03/2006

583

20/03/2006

Vaca

15

9855

08/03/2006

541

20/03/2006

Vaca

16

18944

08/03/2006

575

20/03/2006

Vaca

17

25329

08/03/2006

541

20/03/2006

Preada

18

4140

08/03/2006

575

20/03/2006

Preada

19

4241

08/03/2006

546

20/03/2006

Vaca

20

7600

08/03/2006

546

20/03/2006

Preada

21

5118

08/03/2006

583

20/03/2006

Vaca

22

9849

08/03/2006

575

20/03/2006

Preada

23

9901

08/03/2006

583

20/03/2006

Preada

2900

10/11/2005

575

22/11/2005

Preada

1904

10/11/2005

541

22/11/2005

Preada

2866

10/11/2005

546

22/11/2005

Vaca

1700

10/11/2005

583

22/11/2005

Preada

2843

10/11/2005

541

22/11/2005

Vaca

2887

10/11/2005

546

22/11/2005

Preada

2889

10/11/2005

541

22/11/2005

Vaca

2855

10/11/2005

575

22/11/2005

Vaca

1679

10/11/2005

583

22/11/2005

Vaca

10

1704

10/11/2005

541

22/11/2005

Preada

11

2857

10/11/2005

546

22/11/2005

Preada

12

2848

10/11/2005

575

22/11/2005

Vaca

13

1673

10/11/2005

583

22/11/2005

Preada

14

1750

10/11/2005

583

22/11/2005

Preada

15

1689

10/11/2005

575

22/11/2005

Vaca

16

2815

10/11/2005

546

22/11/2005

Vaca

17

2819

10/11/2005

575

22/11/2005

Vaca

18

534

10/11/2005

546

22/11/2005

Vaca

175

176

Resultados

Resultados

De acuerdo con estos resultados de preez, nos hemos planteado conocer las

partir de ah la recuperacin del genoma es escasa, especialmente a partir de la

necesidades de nuestro banco, conforme a los objetivos planteados anteriormente.

generacin octava en la que ya alcanza y tiende a estabilizarse el 99%. Por lo tanto

Con la finalidad de facilitar los clculos y mejorar el entendimiento del proceso, se

asumimos que la sexta generacin se puede considerar la raza como restaurada

decidi aproximar la tasa de preez al 50%.

(n=6).

En primer lugar, se calcul el nmero de machos necesarios para garantizar un

En relacin a la cantidad de material gentico para ser criopreservados para la

incremento de la consanguinidad por generacin menor al 2%, lo que corresponde a

reconstruccin de una poblacin de 25 hembras y por ende 25 machos en edad

un tamao efectivo de la poblacin mayor de 40. El tamao efectivo de la poblacin

reproductiva (Ne = 50), podemos notar tambin que el numero de dosis necesarias

determinar la tasa de prdida de variacin gentica, este hecho est condicionado

aumenta rpidamente a medida que aumenta el nmero de generaciones. As,

por el nmero de machos y hembras que conforman la poblacin (tabla N 37).

atendiendo a las recomendaciones tcnicas internacionales de preservar material


gentico de 25 machos, podemos extrapolar las dosis necesarias de cada uno de los

El material almacenado en el banco de semen se recomienda que provenga de al

donantes (tabla N 38).

menos 25 machos fundadores no emparentados, que debern garantiza el


mantenimiento de, al menos, (en el material almacenado) el 98% de heterocigosidad

Tomando en cuenta que la raza queda restaurada en la sexta generacin,

de la poblacin donante en el momento de la reconstruccin, un valor considerado

podemos notar que necesitaramos una cantidad de 7.650 dosis seminales, lo que

como un compromiso aceptable entre los costos y los objetivos de conservacin.

supondra una cantidad de 306 dosis por semental, para asegurar la menor prdida de
biodiversidad.

Tabla N 37. Nmero de machos necesarios para la recuperacin de la poblacin


amenazada.

De acuerdo con los clculos y las cifras obtenidas, la situacin actual del banco de
semen de los toros Marismea es la siguiente (tabla N 39).
Tamao de la poblacin

Total

Incremento de

Tabla N 38. Nmero de dosis necesarias para la reconstruccin de la raza a

la endogamia*

travs de retrocruce.

Machos

Hembras

Ne

100

95

19

2,63

100

10

90

36

1,38

Nmero de generaciones (n).

100

20

80

64

0,78

100

30

70

84

0,59

50

25

25

50

1,00

Porcentaje de genoma
recuperado a la generacin
n+1

40

15

25

37,5

1,33

* Endogamia por generacin asumiendo apareamientos al azar.

En la tabla N 38 podemos apreciar que los beneficios de la restauracin de la

Media (1-0,5n-1)

0,88

0,94

0,97

0,98

0,992

Nmero de hembras frtiles


por generacin (f = 0,25).

1916

4050

7650

16850

33910

Nmero de machos (25)

76,64

162

306

674

1356

raza a partir de retrocruces utilizando las dosis seminales crioconservadas sobre


hembras de razas filogenticamente prximas son muy grandes, hasta llegar a la
sexta generacin (98% del genoma original en la reconstruccin de la poblacin). A

177

178

Resultados

Tabla N 39. Nmero actual de dosis seminales del banco de semen de la raza
Marismea.

N semental

Nmero de dosis
congeladas

Ao de
congelacin

Nmero de
sementales a
incrementar

Nmero de
dosis a
incrementar

541

1.955

2004-2005

24

-5695

546

2.000

2004-2005

23

-3695

575

2.017

2004-2005

22

-1678

583

2.127

2004-2005

21

+449

1736

541

2009

20

+990

8689

491

2009

19

+1481

8691

554

2009

18

+2035

8693

373

2009

17

+2408

8695

619

2009

16

+3027

1937

375

2010

15

+3402

1940

275

2010

14

+3677

1945

394

2010

13

+4071

1958

336

2010

12

+4407

1960

345

2010

11

+4752

Total

Total

sementales = 14

dosis = 12402

Total
sementales a
incrementar = 11

179

Discusin

5.1- Comportamiento sexual

Como se ha mencionado en numerosas ocasiones a lo largo de la redaccin del


presente trabajo, la raza Marismea es una poblacin feral o asilvestrada. Esto quiere
decir que su comportamiento, al menos el inicial, en el adiestramiento conlleva una
serie de dificultades aadidas que constituyeron uno de los principales retos
experimentales en la presente tesis.

Toda la sistemtica de adiestramiento ha tenido que ser desarrollada de manera


original por nuestro equipo; en algunas ocasiones, con operaciones que pusieron en
peligro la integridad del equipo investigador.

No podemos olvidar que la actitud reproductiva del semental es un factor


importante en la reproduccin de la especie bovina, ya que un slo toro es
generalmente utilizado con numerosas vacas. Por lo tanto, la evaluacin de la actitud
reproductiva antes del apareamiento es de vital importancia para lograr el xito
reproductivo, muy especialmente en una raza feral como sta. Este tipo de pruebas se
han utilizado ampliamente para este propsito en los ltimos 50 aos (Hoflack y cols.,
2006).

Una herramienta indispensable en la seleccin de toros con vistas a su utilizacin


reproductiva o como candidatos a donantes de material para la criopresevacin de su
material gentico, son las pruebas de la libido y la capacidad de servicio. En ella se

V. DISCUSIN

pueden evitar seleccionar toros que son incapaces o poco aptos para el servicio.

Para evaluar la libido, la observacin de la actitud reproductiva en condiciones


naturales es la va ms eficiente, aunque otras pruebas descritas en la bibliografa
pueden ser utilizadas perfectamente, como es el caso de los ensayos en corrales con
nmero de hembras restringidas (Landaeta-Hernndez y cols., 2001).

En nuestro estudio, los mtodos mencionados anteriormente no ha sido posible


llevarlos a cabo, ya que como hemos apuntado en los apartados correspondientes se
trata de una raza de ganado en estado asilvestrado (feral), hecho que nos limit
mucho el desarrollo de los trabajos de comportamiento convencionales.

182

Discusin

Discusin

El alto grado de agresividad de los sementales, demandaba alta especialidad del

Chenoweth y cols., (1984), midiendo el efecto del comportamiento sexual sobre la

personal en el manejo as como unas instalaciones adecuadas a este tipo de

raza y edad en toros de actitud crnica, no encontraron interacciones entre la edad y la

animales. Esto ocasionaba un aumento considerable de la necesidad de personal. Por

raza, concluyendo que estos factores no modifican el comportamiento sexual. Aunque

otra parte, tenamos otro problema aadido, con

estos mismos autores mencionan que existe cierta tendencia significativas de la edad

las restricciones sanitarias

provocadas por la convivencia de estos animales con especies salvajes.

con el nmero de montas encontrando mayor nmero de montas para los toros de 1 y
2 aos que los de 3 o mayores. Probablemente esto es debido a que los toros jvenes

Chenoweth (1986) propone otro mtodo para medir la libido, que perfectamente
podra llevarse a cabo, como es la medicin del tiempo de reaccin. Este se puede

tienen menor experiencia en la conducta de apareamiento que los adultos, por lo que
necesitan montar ms veces.

evaluar cuando el semen es recogido mediante la vagina artificial.


Landaeta-Hernndez y cols., (2001) midiendo el tiempo de reaccin en 8 pruebas
Anzar y cols., (1993) concluyen que el tiempo de reaccin es un mtodo objetivo

consecutivas en toros jvenes, observaron que el tiempo de reaccin decrece

para medir la libido de los sementales, especialmente el de aquellos donde el manejo

progresivamente, del mismo modo que se incrementa el porcentaje de toros en

sea un obstculo.

completar el servicio, aunque no fueron observadas correlaciones significativas entre


las pruebas.

Ya ceidos a nuestro estudio se debe indicar que en el minuto tres es donde se


present la mayor frecuencia del tiempo de reaccin, que como se apunt es el tiempo

En esa misma lnea, hemos podido observar en nuestra experiencia que, cuando

necesario para realizar el cortejo de la hembra y prepararla para completar la monta.

se producen tres o cuatro intentos de montas, la frecuencia de eyaculado disminuye ya

Supone un tiempo promedio muy aceptable cuando los comparamos con los trabajos

que el animal repite continuamente el cortejo, empleando por tanto, un mayor tiempo

de otros autores. As Landaeta-Hernndez y cols., (2001), estudiando la precisin de

de reaccin.

los diferentes mtodos de evaluacin de la conducta sexual en 26 toros jvenes de


raza Hereford y Angus, encontr una media para el tiempo de reaccin de 2,381,43
minutos.

En nuestro estudio, aunque no se midi el efecto de la edad sobre el tiempo de


reaccin, entre otras razones porque las diferencias de edad eran escasas, pudimos
notar que el tiempo de reaccin estaba altamente influenciado por el ruido ambiental

Hoflack y cols., (2006), en estudios llevados a cabo en 91 toros jvenes Holstein

en el momento de hacer las extracciones; as, se registraron los menores tiempos de

para evaluar la libido, encontraron un tiempo medio de reaccin de 150.32334,61

reaccin cuando haba un ambiente de profundo silencio y calma. Dicho

segundos, lo que equivale a algo ms de 2 minutos. Los mismos autores comparan el

comportamiento se repiti consecutivamente durante toda la experimentacin, dando

tiempo medio de reaccin en toros Azul Belga clasificados por grupos de edades,

lugar a que slo uno de los sementales se socializara con las personas, el resto

encontrando que el tiempo de reaccin no est influenciado con la edad (p<0,06)

siempre mostr un comportamiento de animales asilvestrados.

aunque la tendencia es presentar una reaccin ms lenta a medida que aumenta la


edad de los toros; de esta forma, ofrece un tiempo de reaccin de 175,18 segundos

Por otra parte, en nuestra experiencia, se observ que existe predileccin por parte

para toros menores de 24 meses, 186,60 segundos correspondiente a edades de 24-

de la hembra (maniqu) a los cortejos de algunos sementales, mostrndose en algunos

48 meses y 335,67555,67 para aquellos toros mayores de 48 meses. Finalmente,

casos hasta rechazos, lo que repercuti en un mayor tiempo de reaccin.

Hoflack, y cols., (2006), cuando evaluaron la libido de toros jvenes de las dos razas
(Holstein y Azul Belga), no encontraron diferencias significativas tanto para el tiempo
de reaccin como para el entusiasmo para la monta.

183

Los datos publicados por Chenoweth y cols., (1984), en cuanto al tiempo de


reaccin, son inferiores a los encontrados por nuestro estudio; dicho autor reporta

184

Discusin

Discusin

unos tiempos de reaccin de 1,80,3 minutos para la raza Angus y 1,40,2 minutos

Por otra parte, en nuestros trabajos, hemos observado un alto grado de

para la raza Hereford. Estos resultados, bajo nuestro punto de vista, no pueden ser

dominancia entre los sementales, si bien estos animales estn separados por espacios

comparados con los nuestros ya que este tipo de raza ha sido seleccionada por largos

vitales entre ellos, se ha apreciado el establecimiento de un orden jerrquico entre

periodos, y la presin de seleccin se ha basado, en muchos casos, en la conducta

ellos.

reproductiva de los sementales.


Por observacin visual, hemos podido comprobar que el macho que ejerce de
Por el contrario, la raza Marismea slo ha estado sometida a un proceso de
seleccin natural.

dominante tarda ms tiempo en realizar la monta. Los machos sumisos ocupan menos
tiempo de reaccin, dicho comportamiento es propio de los animales salvajes, donde
el instinto por llegar a copular una hembra se hace necesario hacerlo en un tiempo

Por otra parte, no debemos olvidar que estas razas son domsticas y

muy reducido cuando la subordinacin los apremia.

seleccionadas por su docilidad y manejo, y que han aprendido a convivir con las
personas, por tanto, es de suponer que presentan menores registros en el tiempo de

A pesar de que la dominancia y la masculinidad no son sinnimos en toros,

reaccin que las razas asilvestradas, cuyo problema radica en el cambio de entorno al

muchos estudios en razas vacunas explotadas en rgimen extensivo, creen que la

someterlas al manejo.

mayora

de

los

toros

dominantes

son,

por

lo

general,

los

ms

activos

reproductivamente. Dicha aseveracin se contradice con los trabajos publicados por


En la relacin entre el comportamiento sexual y las caractersticas seminales de
los sementales, diferentes autores como Silva-Mena y cols., (2000)y Farin y cols.,

Chenoweth, y cols., (1981), donde se constat que no hubo relacin entre las
puntuaciones del comportamiento sexual y la dominancia.

(1989) aludieron la poca o ninguna relacin existente entre ambas caractersticas y


sugirieron que ambos parmetros deben de medirse de manera independiente para
as examinar, de manera objetiva, la capacidad reproductiva de los sementales.

Alguna controversia existe sobre los efectos de dominacia y sumisin en el


comportamiento reproductivo de los carneros.

Anzar y cols., (1993), en estudio de comportamiento sexual en bfalos,

Bourque M. (1967) en su estudio ilustra claramente estos efectos, en el que se

encontraron que no existen correlaciones significativas entre el comportamiento sexual

observa una estrecha relacin en un grupo de ovejas confinadas, donde se aprecia

y calidad de semen. Llegando a afirmar que toros con excelentes comportamiento

que los carneros dominantes tienden a realizar la mayora de los servicios y evitar que

sexual podran llegar a producir semen de mala calidad.

otros machos puedan cubrir. Sin embargo, tales efectos de dominancia no se han
encontrado en otros estudios con ovinos.

En los trabajos llevados a cabo por Silva-Mena y cols., (2000) sobre el


comportamiento sexual (libido, capacidad de servicio y tiempo de reaccin) de toros y

De forma general, atendiendo a nuestros resultados sobre el comportamiento

la fertilidad, reportaron la inexistencia de correlaciones significativas entre los dos

sexual de toros Marismeos, y teniendo en cuenta las referencias internacionales a

parmetros. Aunque sus estudios reportaron un alto grado de correlacin del

este respecto, todas ellas centradas en razas domsticas, podemos decir que la

comportamiento con la edad, los resultados de dicho trabajo sugieren que, tanto la

naturaleza asilvestrada modifica sustancialmente los patrones del comportamiento

libido como la capacidad de servicio, son tiles para estimar el potencial de

sexual de los toros, entendiendo a los Marismeos como modelo.

apareamiento de los toros con menos potencial de actividad sexual pero no como
Observamos que los toros asilvestrados establecen patrones de dominancia,

mtodo predictivo de fertilidad.

aunque estos no afectan para nada la eficiencia reproductiva de los animales. As

185

186

Discusin

Discusin

mismo, los tiempos de reaccin se alargan con respecto a las razas domsticas. Pero

Al analizar nuestros resultados con los reportados por Muio y cols., (2006) en la

lo ms definitorio es que la agresividad natural de los sementales se mantiene en el

raza bovina autctona Rubia Gallega, encontramos que, tanto la calidad como la

tiempo, incluso tras largos periodos de extracciones.

produccin espermticas, son muy semejantes. Pudiendo asegurar que las


caractersticas seminales de los toros Marismeos, estn dentro de los parmetros

5.2- Caractersticas seminales

normales cuando es comparada con otras razas autctonas.

Al comparar los valores medios de las caractersticas seminales de los sementales

Cuando comparamos los datos seminales de nuestros experimentos con toros de

Marismeos con otras razas bovinas autctonas, podemos observar que son similares

razas especializadas podemos notar que existen grandes diferencias en la cantidad de

a los obtenidos en la raza Alistana-Sanabresa por Snchez Garca y cols., (1992), en

semen producido, no as en las dems caractersticas seminales. As Muio y cols.,

condiciones de trabajos similares a las nuestras.

(2006), reporta volmenes seminales de 6 a 9,30 ml, para los toros Frisones menores
a 3 y mayores de 3 aos respectivamente. La concentracin espermtica, sin

En cambio, al comparar nuestros resultados con otras razas como la Vianesa y

embargo, fue mayor en los eyaculados de toros Marismeos.

Sayaguesa observamos un mejor comportamiento de stas, especialmente en lo que


respecta al volumen de eyaculado con valores de 5,86 y 5,50 respectivamente frente a

Cuando valoramos la calidad seminal masal como progresiva, observamos que

los 5,01 de nuestros toros. La concentracin se mostr tambin superior para estas

nuestros sementales presentan una mayor densidad seminal que los frisones. Por lo

dos razas, as la Vianesa exhibe una concentracin de 1,37X109 y de 1,41X109 para la

tanto, los valores medios alcanzados para los sementales Marismeos son superiores

Sayaguesa, frente a los 1,17X109 de la Marimea. En cambio, cuando comparamos la

a los reportados por Muio y cols., (2006) en toros Frisones.

motilidad masal de estas dos razas con la Marismea, podemos observar que sta
supera a la Vianesa y Sayaguesa en ms de 1,5 puntos.

Cole y Cupp 1984, reportan que los toros de razas lecheras producen eyaculados
de mayor volumen que los de raza de aptitud crnica. Los resultados del presente

Nuestros resultados se comportaron de manera superior a los mostrados por este

estudio confirman este hecho. Esto probablemente indica que las diferencias entre las

mismo autor cuando los comparamos con los sementales de raza Cachena y

dos razas en el volumen del eyaculado se deban ms a una diferencia en la cantidad

Caldelana. Los sementales Cachena particularmente mostraron volmenes medios de

de plasma seminal emitido por las glndulas sexuales accesorias durante la

4,47ml una motilidad masal de 1,87 y la concentracin seminal de 1,10X109. Respecto

eyaculacin, que a una diferencia en la produccin testicular.

a los sementales Caldelana tambin mostraron valores ms bajos que los nuestros,
registrando valores de 4,50 ml en el volumen y 2,00 para la motilidad, en cambio la
concentracin mostr valores ligeramente superiores a los nuestros, 1,44X109.

Corteel (1981) indica que el plasma seminal corresponde a, aproximadamente, el


70% del total del volumen del eyaculado. Por tanto, los cambios en volumen de
eyaculado son debidos, principalmente, a cambios en las cantidades de fluidos

Muio y cols., (2009), en estudios de caracterizacin del semen de toros en la raza

secretadas por el epiddimo y las glndulas accesorias.

Asturiana de los Valles, encontraron valores medios en la produccin de semen


idnticos a los nuestros, con valores de volumen de 5,0 ml y una concentracin de

Prez-Llano (1992), en estudios realizados en machos cabros, encuentra

1,30X109, aunque nuestros resultados resultaron inferiores en la calidad seminal,

correlaciones positivas entre los niveles de testosterona y volumen seminal, aludiendo

aportando valores de motilidad progresiva de un 94,7%.

que, durante la estacin reproductiva (verano y otoo), los niveles de testosterona son
altos; el volumen aumenta y, a la vez, disminuye la concentracin por un aumento de
la cantidad de plasma seminal. Mientras que en primavera, la concentracin del

187

188

Discusin

Discusin

eyaculado es mxima; es decir, la secrecin de plasma seminal es mnima, lo que


coincide con bajos niveles de testosterona en plasma.

En relacin al porcentaje de espermatozoides vivos y muerto, nuestros resultados


se situaron en unos valores medios de 80,76 para vivos y 19,24 correspondiente a los
muertos. Al comparar estos resultados con los reportados por Palmer y cols., (2005),

En sntesis, podemos decir que el bajo volumen espermtico encontrado en los

observamos que nuestros datos son superiores en ms de 4% para vivos y menos del

sementales Marismeos cuando los comparamos con las razas especializadas, indica

6% para muertos. En esa misma lnea, los datos publicados por Fuerst-Waltl. (2006),

solamente la existencia de diferencias raciales entre ellos, lo cual es comprensible y

tambin

justificable cuando se compara las diferencias de volumen y la circunferencia escrotal

espermatozoides vivos de un 65,8%.

fueron

inferiores

los

nuestros,

aportando

valores

medios

de

entre ambos. Cuando realizamos el mismo proceso con otras razas autctonas
espaolas escasamente seleccionadas, nuestros resultados se encuentran en los
promedios. Por todo esto, podemos concluir que en proceso selectivo de los bovinos

Similares resultados a los nuestros han obtenido Bhattacharyya y cols., (2009), con
valores medios de 80,7% para vivos y 19,3% para los muertos, en toros cebuinos.

especializados se han incorporado criterios de seleccin relacionados con la aptitud

Marn (1994), considera que el esperma de rumiantes es de muy buena calidad

sexual de los machos, cosa comprensible si tenemos en cuenta el gran mercado

cuando se observan valores por encima de un 75-80% de espermatozoides vivos. Por

internacional de semen de estas razas selectas, que convierte a la dosis seminal en un

lo

producto comercial de alto valor agregado.

espermatozoides vivos-muertos estn entre los valores normales descritos por la

tanto

podemos

concluir

que

nuestros

resultados

en

la

proporcin

de

bibliografa.
Cuando comparamos el comportamiento de las caractersticas seminales de
nuestros ensayos con diferentes genotipos como el Ceb y el Romosinuano

De manera general, podemos decir que, de acuerdo a nuestros resultados, las

encontramos que nuestros resultados son exponencialmente superiores a los

caractersticas seminales de los toros Marismeos se encuentran dentro de los rangos

reportados por Espetia y cols., (2006), aportando valores medios del volumen de 3,80

mostrados por las razas autctonas espaolas; mostrando stos ciertas diferencias a

ml, concentracin seminal de 0,68X109 y una motilidad progresiva de 53,8%. Para el

la baja frente a las razas internacionales especializadas en algunos parmetros

caso de la raza Romosinuano los valores medios encontrados por los mismos autores

cuantitativos, como el volumen de eyaculado, y al alza en algunos parmetros de

fueron de 2,3ml para volumen, 0,30X109 correspondiente a la concentracin y un 64%

calidad, como el ratio entre espermatozoides vivos y muertos en los eyaculados.

de motilidad progresiva.
Con respecto a lo reportado en razas crnicas del mbito latinoamericano, la raza
Los datos publicados por Palmieri (2004), en estudios con la raza Costea con
Cuernos colombiana

tambin confirman este hallazgo, encontrando valores

espermticos medios de menor calidad, que los reportados por nuestros estudios.

Chenoweth y cols. (1996), reportan variaciones entre los genotipos Bos tauros y

Marismea, as como el resto de razas autctonas espaolas, mostr un mejor


comportamiento general que las razas cebuinas y criollas explotadas en ambiente
tropical.
5.2.1- Espermatozoides con formas anormales

Bos indicus, confirmando la baja produccin y calidad espermtica de los indicus.


En la totalidad de los eyaculados estudiados de los sementales Marismeos, las
Brito y cols., (2002a), encuentran las mismas diferencias para los genotipos Bos

formas anormales no superaron el 9%. Podemos observar en los resultados que las

inducus y Bos taurus, aunque el nmero de espermas en el eyaculado fue mayor para

morfoanomalas ms comunes en los eyaculados corresponden a espermatozoides

el Bos taurus.

con cola de ltigo, cabezas sueltas, cola flexionada y gotas citoplasmtica.

189

190

Discusin

Discusin

As, podemos observar que la mayor incidencia de formas anormales corresponde

Barth y cols., (1992) afirman que un grado moderado de formas anormales en la

a los espermatozoides cola de ltigo con un valor medio de 3,84%; les siguen, en

cabeza, como la estrechez o una forma ligeramente piriforme, en ausencia de otras

orden descendente, las cabezas sueltas con una media del 2 %, cola flexionada 1,70%

alteraciones en el espermiograma, pueden no ser perjudiciales para la fertilidad de los

y apenas el 1,16 % para las gotas citoplasmtica.

toros; sin embargo, el grado extremo de formas anormales como la forma de la cabeza
piriforme en gran proporcin lleva a una reduccin significativa de la fertilidad.

El valor medio del porcentaje de espermatozoides morfolgicamente anormales


registrada en nuestra experiencia fue inferior a los observados por otros autores (SilvaMena y cols., 2000; Thun y cols., 2002; Brito y cols., 2002a; Brito y cols., 2002b;

La baja proporcin de cabezas sueltas tampoco influye negativamente en la


fertilidad de los sementales.

Palmieri y cols., 2004; Palmer y cols., 2005; Espetia y cols., 2006; Bhattacharyya y
lamo-Santana (2007) menciona que las anomalas ocasionadas por artefactos de

cols., 2009).

la tcnica pueden provocar roturas en las cabezas y colas, as como la aparicin de


Los datos reportados por Muio y cols., (2009), en sementales Asturianos de los
Valles, son muy similares a los encontrados en nuestra experiencia. As, estos autores

posturas anormales de los espermatozoides que enmascaran el resultado real,


generando un nmero anormalmente alto de morfoanomalas.

reportan un porcentaje de formas anormales de un 9,7%.


Pea (2004) describe que, en ocasiones, las morfoanomalas secundarias
Sderquist y cols., (1997), encuentra porcentajes de formas anormales con valores
muy parecidos a nuestro estudios, reportando medias que van del 6% al 8,3% en

observadas en las muestras pueden ser consecuencia de fallos en la espermiognesis


o bien de errores de manipulacin por parte del tcnico.

toros lecheros de raza sueca.


Vilakazi y Webb (2004), en estudios de las morfologas seminales llevadas a cabo
Para Evans y Maxwell (1987), el esperma de rumiantes no debe de presentar ms

en toros de diferentes edades, encontraron que el porcentaje de espermatozoides

ser

normales y los principales defectos de espermatozoides se vieron afectados

considerados normal y con buena capacidad fertilizante. En esa misma lnea, Oettl

significativamente por la edad de los toros. Toros de 36 a 48 meses de edad

(1993) apunta que, cuando la proporcin de espermatozoides morfolgicamente

mostraron una morfologa de los espermatozoides mejor que los toros de ms de 72

normales es inferior al 60%, la fertilidad se encontr afectada negativamente.

meses o menores de 36 meses de edad.

de

un

15-20%

de

espermatozoides

morfolgicamente

anormales

para

Los datos publicados por Sderquist y cols., (1997) sobre la incidencia de formas

En nuestros estudios, hemos podido comprobar que las formas anormales ms

anormales en toros de razas Suecas, encontraron que la mayor incidencia de formas

comunes representan los defectos menores o secundarios que, desde el punto de

anormales estaban en la cabeza (6%), pero que en la dems categoras restantes

vista la calidad seminal, son las que menos importan.

(anormalidades de cola, pieza media, gota citoplasmtica) se mantuvieron en valores


medios entre el 1-2%. As, los resultados del presente estudio fueron muy similares a

En sntesis, podemos concluir que el porcentaje de formas anormales encontrado

los reportados por Sderquist y cols., (1996) donde hablan de un porcentaje medio de

en nuestro estudio es claramente mejor que los reportados por la mayora de la

formas anormales de un 12,3% y la mitad de estas anormalidades corresponden a

literatura consultada. La proporcin de formas anormales encontrada es tan baja que

defectos de la cabeza de los espermatozoides.

no representa un peligro para valorar la motilidad espermtica y tampoco compromete


la fertilidad del semen, tanto si se va a usar para monta natural como tambin para
cripreservarlo.

191

192

Discusin

5.3- Anlisis multifactorial de efectos fijos que influyen sobre las caractersticas
seminales de toros marismeos

Discusin

Como datos relevantes en nuestro estudio, hemos podido comprobar cmo


aument hasta un 37% la cantidad de espermatozoides totales del primero al segundo
ao de estudio. Tambin cabe mencionar que el volumen seminal experiment un

En nuestro estudio, slo hemos experimentado con los efectos fijos directos del
ao de extraccin seminal, mes de extraccin y el efecto del semental, sin tener en

aumento de hasta el 35%,

aunque la concentracin seminal experiment menos

cambios entre los aos de estudios, s se pudo ver que acus un aumento de un 12%.

cuenta las interacciones entre factores. Esto ltimo con la intencin de simplificar al
mximo el modelo, teniendo en cuenta el reducido nmero de datos que se manejan

Los

cambios

producidos

en

las

variables

de

calidad

seminal

tambin

en estudios seminales como el presente. Adems, al realizarse el experimento en

experimentaron aumentos del primer al segundo ao de estudio, aunque fueron menos

condiciones muy homogneas entre los toros, los efectos de dichas interacciones no

acentuados si los comparamos con los de las caractersticas de produccin: as, la

eran previsibles.

motilidad masal experiment un aumento del 14% y la motilidad progresiva, un 5%.

En general, todos los efectos testados resultaron significativos, a excepcin del

Por otra parte, en los estudios llevados a cabo para comprobar el efecto de la edad

efecto fijo del mes de extraccin, que no influy de manera significativa sobre la

sobre las caractersticas seminales de nuestros sementales, hemos podido comprobar

concentracin seminal, queriendo esto decir que este parmetro no se ve influido por

las diferencias altamente significativas para todas las variables estudiadas (tabla N

las oscilaciones de temperatura y fotoperiodo en nuestras latitudes de clima

25). Pudindose constatar que, los valores medios de cada variable, aumentan a

subtropical templado.

medida que el semental cambia de edad. As lo observaron Muio, y cols., (2006) en


su estudio sobre la raza Rubia Gallega, en la que encontr una alta significancia del

Respecto al factor ao de estudio, hemos podido comprobar, mediante la

efecto edad sobre el nmero total de espermatozoides y la motilidad masal, siendo

comparacin de medias, que existen diferencias muy marcadas en cuanto a la

superior en sementales mayores de tres aos. Por el contrario, estos autores no

produccin y a la calidad de todas las variables seminales estudiadas; as, el ao 2005

encontraron diferencias significativas en el volumen, concentracin y tampoco en las

se comport superior respecto al ao 2004. Dicha variacin, posiblemente, est

motilidad progresiva.

determinada por los sementales que hayan alcanzado la madurez sexual


(condicionado por el efecto edad), as como por haber alcanzando un alto grado de

Los resultados observados en nuestro estudio confirman los encontrados por

adiestramiento, lo que les condiciona para que su agresividad natural no los estrese

Stalhamar y cols., (1989) y Sderquist y cols., (1996), que investigaron la influencia de

reproductivamente, centrndose ms en realizar la copula antes que preocuparse por

la edad de bovinos europeos sobre las calidades del semen y constataron que la edad

permanecer en posicin de ataque y alejado de los operarios.

del toro afecta significativamente al volumen seminal, concentracin, espermatozoides


totales, motilidad y las anormalidades espermticas.

Este aumento de la produccin y calidad espermtica es un hecho constatado en


otras especies, como reporta por Prez Llano, (1992) en un estudio con sementales

Fuerst-Waltl y cols., (2006), tambin encontraron un efecto significativo de la edad

caprinos, en el que encuentra una gran mejora de las caractersticas seminales de un

en relacin a las caractersticas seminales, llegando a afirmar que la edad produce un

ao a otro, en los mismo sementales. La autora sigue mencionado que este aumento

gran impacto en la calidad del semen de los toros.

puede ser debido a los efectos del crecimiento y edad de los sementales. Zubieta
(1990), en estudios con sementales murciano-granadinos, tambin confirman este

Estudios llevados a cabo en otras latitudes, como es el caso de los trpicos,

hecho: Observa que, tanto el aumento de la produccin espermtica como la calidad

tambin confirman que la edad influye de manera directa en la calidad de semen, as

seminal, mejoran significativamente con la edad y el crecimiento del semental.

193

194

Discusin

Discusin

Silva y cols., (2009), reportan un aumento del volumen, motilidad, concentracin y

valorar y seleccionar los sementales por sus caractersticas seminales. Por tanto,

cantidad media de dosis producidas por eyaculado en sementales de razas cebuinas.

podemos recomendar que una buena seleccin en sementales Marismeos sera la de


aquellos animales que hayan alcanzado al menos los tres aos de edad, momento en

En nuestro trabajo, hemos podido constatar que el porcentaje de varianza

el cual podremos inferir sobre el semental catalogndolo como apto o no apto.

explicada arrojado por nuestro modelo, es superior al reportado por Corteel (1977):
As, vemos que las variables de produccin seminal (volumen, concentracin,
espermatozoides

totales),

estn

representadas

por

valores

del

Cuando analizamos el efecto de los meses de extraccin seminal sobre las

coeficiente

caractersticas seminales, podemos observar como en el mes de octubre se obtienen

determinativo del 48%, 36% y 43%, respectivamente. En cambio las variables de

los mejores valores seminales, tanto en produccin como en calidad, a excepcin de la

calidad seminal (motilidad masal y progresiva) arrojaron valores del 28% y 17%. Lo

concentracin donde se experimenta mejores registros para el mes de diciembre,

que muestra, en general, una excelente eficiencia de los modelos matemticos

hecho que era de esperar que sucediera, ya que es sabido que existe una correlacin

empleados.

inversa del volumen seminal con la concentracin, caso contrario existe entre la
relacin del volumen seminal y los espermatozoides totales, donde se aprecia un

Lpez y cols., (2007), en un estudio llevado a cabo en toros para evaluar registros

paralelismo entre ambas.

de produccin de semen, encontraron que la edad de los toros afect


significativamente a todas las variables estudiadas. La calidad y cantidad espermtica

Los datos encontrados por nuestro estudio, sobre las calidades de semen en

se incrementaron desde la pubertad hasta los tres o cuatro aos, que es cuando

funcin del mes, concuerdan con los apuntes sealados por Caldern (2004), al

alcanzaron sus mximos valores, mantenindose hasta los siete u ocho aos para

describir la distribucin de los partos de las vacas del parque nacional de Doana en

luego decaer.

condiciones naturales: as, dicho autor confirma que en las vacas que forman la
llamada tropa del coto, los partos ocurren en el 82,5% de las veces en los cinco

Picard-Hagen (2002) y Brito y cols., (2002b), han comprobado que la calidad

meses que van de febrero a junio, quedando slo un 17,5% para parir en los otros

seminal colectada en toros de edad temprana difiere de los colectados despus de los

siete meses. Por lo que, tomando en cuenta que los meses de gestacin en una vaca

410 das de edad. Tanto la motilidad masal, motilidad progresiva, concentracin, y

son de nueve meses, podemos inferir que los meses de mejor calidad seminal

morfologa son significativamente bajas, en comparacin con toros adultos.

coinciden con la poca de cubriciones de las vacas.

En relacin a la edad de los toros, Folch (1983) ha podido comprobar que, a

En estudios llevados a cabo por Lazo (1992) sobre la distribucin de los partos en

medida que la edad avanza, se produce, primero, una disminucin de formas

el Parque Nacional de Doana, se encontr que los meses de abril, mayo y junio, fue

anormales

donde se concentraron la mayor cantidad de partos.

primarias;

lo

cual

indica

que

las

posibles

alteraciones

de

la

espermatognesis desaparecen, y luego, una disminucin de formas anormales


secundarias; lo que refleja que la maduracin en el epiddimo se produce con
normalidad.

Al observar las calidades espermticas producidas a lo largo del estudio, hemos


podido comprobar cmo las dos motilidades (masal, progresiva) tienen un
comportamiento muy similar, posiblemente, debido a una relacin fisiolgica total entre

El efecto de la edad sobre las variaciones espermticas, es un reflejo de las

ellas.

variaciones en las condiciones fisiolgicas de los toros que, como es sabido, se


manifiestan por un incremento en la cantidad y calidad espermtica desde la pubertad

Por otra parte, hemos podido observar una alta concordancia entre los valores

hasta la madurez sexual; hecho que debemos de tener muy en cuenta a la hora de

medios obtenidos de espermatozoides vivos y las dos variables de calidad seminal:

195

196

Discusin

Discusin

As, podemos remarcar que el mes de agosto fue el que experimento mayor

esto sea debido a las buenas condiciones ambientales que favorecen la

proporcin de espermatozoides vivos, aunque en la grfica (N 26) se puede apreciar

espermatognesis.

que, en los intervalos de meses que van de abril a septiembre, los porcentajes de
Fuerst-Waltl y cols., (2006) encuentran que el valor de las temperaturas en el da

esperma vivo sobrepasan el 80%.

de la recoleccin, durante la maduracin epididimal o durante la espermatognesis es


Cuando comparamos los meses en los que he han observado los mejores valores

en general un efecto importante en la produccin y calidad del esperma. La

medios del porcentaje de espermatozoides vivos, con los meses de cubriciones de las

temperatura ambiente en el rango de 5-15C se considera ptima para la produccin

vacas en condiciones naturales reportados por Lazo (1992), encontramos una clara

del semen.

correspondencia: As, en nuestro estudio, los meses de mayo, junio, julio y agosto se
corresponden con los mejores meses de esperma viable, los mismos meses que

Al analizar el efecto del factor semental sobre las caractersticas seminales,

reportan estos autores en los que salen a celo las vacas. Caldern (2004) afirma que,

pudimos observar una alta variabilidad individual sobre las caractersticas productivas

el 82,2% de las vacas de la tropa del Cotos y el 50% de la tropa de Guadiamar,

y de calidad, aunque los espermatozoides vivos no experimentaron diferencias

quedan preadas en los meses que van de mayo a septiembre, los mismo meses

significativas entre los sementales.

donde encontramos los mejores valores medios de esperma vivos en nuestro estudio.
Cabra pensar que existe una incompatibilidad de estos hechos si tomamos en cuenta

Al comparar el conjunto de sementales empleados en nuestro estudio, pudimos

las condiciones tan adversas que existen en estos meses (clima, alimento etc), pero

observar que todos obtienen unas caractersticas seminales ampliamente aceptables,

no debemos olvidar que los partos, por norma general en este tipo de animales, al

aunque hemos podido comprobar de manera detallada como ciertos individuos

igual que en las especies salvajes, se producen cuando hay mayor disponibilidad de

superan a otros en cada una de las variables analizadas.

alimento.
En el anlisis de comparacin de medias de todas las variables estudiadas,
Caldern (2004) confirma que existen diferencias marcadas en la ocurrencia de los

pudimos notar la superioridad del semental N 546 con el resto de los sementales: la

partos entre unas tropas y otras; este hecho es debido a la diferencia en la

variacin de la concentracin, espermatozoides totales, y las dos motilidades, son las

disponibilidad de alimento en las zonas que pasta cada tropa: as, donde existe mayor

que

disponibilidad de alimento por mayor tiempo, los partos se distribuyen a lo largo de

homogeneidad en los valores obtenidos. En contraposicin a estas diferencias,

todo el ao; caso contrario ocurre con zonas con poca disponibilidad de alimento por

podemos apuntar tambin que el semental que experiment mayor volumen seminal,

todo el ao: aqu, los partos tienden a concentrarse, mostrando una tendencia a la

(N541), es el que presenta los menores registros del resto de variables, hecho que

estacionalidad. Por lo tanto, podemos decir que las caractersticas reproductivas estn

era asumible que sucediera, ya que es conocido la poca relacin fisiolgica que existe

altamente influenciadas por los ecosistemas de las zonas pastables, aunque esto no

entre el volumen y las dems variables productivas espermticas.

acusan mayores diferencias, en el resto de los sementales se apreci una

afecta de manera directa a la calidad del semen producido por los sementales.
Segn la bibliografa consultada, existe una amplia respuesta de las caractersticas
Al comparar nuestros estudios con la bibliografa internacional, encontramos que

seminales sobre el factor individuo: as lo demuestran los trabajos publicados por

nuestros resultados son muy similares a los reportados por Silva y cols., (2009) en el

Corteel (1977); Stalhammar y col., (1989); Al-Makhzoomi y col., (2008); Latif y col.,

porcentajes de espermatozoides muertos en el mismo periodo. Tambin hemos

(2009), en los que se demuestra que, tanto la produccin como la calidad seminal,

encontrados datos muy parecidos en el porcentaje de espermatozoides totales,

estn condicionadas por un efecto individual.

coincidiendo que el mes de octubre es superior al resto de los meses. Probablemente

197

198

Discusin

Sderquis (1991) y Al-Makhzoomi y col., (2008) reportaron que el efecto de la edad


afecta significativamente la viabilidad espermtica, hecho que en nuestros estudios no

Discusin

escrotal con la produccin seminal, adems de no encontrar ninguna relacin de la


circunferencia con la calidad espermtica (p>0,05) r2=0,03.

se ha llegado a cumplir, quizs debido a la poca variabilidad de la edad entre los


individuos, ya que, como hemos descrito anteriormente, este hecho est muy

Neville y col., (1988) no reportan ninguna correlacin significativa entre la

relacionado con la edad de los sementales. Los trabajos publicados por Alamo-

circunferencia escrotal y la produccin y calidad seminal en toros, mientras que

Santana (2007) demuestran que las diferencias individuales en las caractersticas

algunos otros autores reportan correlaciones negativas entre la circunferencia escrotal

seminales pueden deberse a que los machos de su estudio pertenecan a diferentes

y la calidad del semen (Palasz y col., 1994). Para Thompson, y col., (1992), la

razas y presentaban distintas edades. Asimismo, varios autores defienden la teora de

circunferencia escrotal no es un factor de prediccin preciso de la motilidad

que la produccin espermtica depende de la cantidad de parnquima testicular

espermtica, lo mismo que de la morfologa.

presente y ste es un carcter individual.


Prez-Llano (1992), estudiando el efecto de la circunferencia escrotal sobre las
En nuestros trabajos, hemos podido observar tambin que el efecto del

caractersticas seminales en dos razas de caprinos, encontr una alta significancia de

temperamento agresivo de los sementales afecta de manera directa la produccin y

la regresin de la circunferencia escrotal sobre las variables productivas espermticas,

calidad del semen. Aunque este hecho no lo podemos comprobar estadsticamente,

acusando mayor grado de correlacin en la variable espermatozoides totales.

podemos aventurarnos a asegurar que los sementales que se socializan y no


muestran agresividad son los que mejores valores seminales ofrecen.

Al comparar los resultados publicados por Espitia y cols., (2006) y Latif, y cols.,
(2009), podemos observar que tambin los resultados obtenidos por ellos son

5.4- Efecto de factores inherentes al semental (peso, circunferencia escrotal),

similares a los nuestros, aunque dichos autores presentan unos coeficientes de

sobre las caractersticas seminales estudiadas

determinacin mayores: as, podemos sealar un r2>0.60 para la circunferencia


escrotal y el volumen seminal. Esto puede ser debido al efecto de la heterosis de los

Al analizar los resultados obtenidos en el anlisis de regresin del efecto de la

sementales, ya que en ambos casos los estudios se llevaron a cabo con sementales

circunferencia escrotal sobre las variables seminales, pudimos observar una alta

cruzados, o a una mayor cantidad de informacin disponible; pero, en cualquier caso,

significancia de los coeficientes de regresin entre el aumento de la circunferencia y

nuestros modelos demostraron su eficacia estadstica correctamente.

las caractersticas productivas del semen. En cambio, apenas hemos encontrados


tendencias significativas de la circunferencia con las caractersticas de calidad

Por otra parte, consideramos que el efecto de la edad sobre las correlaciones de la
circunferencia escrotal con la produccin del semen es muy determinante, as lo

seminal.

demuestran muchos autores que determinan un coeficiente de determinacin muy alto


Estas asociaciones de la circunferencia escrotal con las caractersticas seminales,

en toros menores de 3 aos. En nuestros resultados podemos decir que se cumple

estn en corcondancia con los resultados obtenidos por Gibson y col., (1985), aunque

esta teora ya que, como podemos observar en la tabla 31, en los primeros meses de

en dicho estudio encontraron regresiones significativas de la circunferencia con las

estudio se observa un crecimiento rpido de la circunferencia escrotal a la vez que

calidades seminales y porcentajes de espermatozoides vivos, cosa que en nuestro

aumenta el volumen seminal, mantenindose dicha tendencia hasta llegar a los niveles

estudio, como hemos adelantado, no ocurri.

mximos de produccin seminal con una circunferencia escrotal de 35 centmetros,


para luego bajar de esos niveles.

Los datos publicado por Brito y col., (2002) y Latif y col., (2009) son muy similares
a los nuestros, mostrando una regresin altamente significativa de la circunferencia

199

200

Discusin

Discusin

Prez-Llano (1992) afirma que las altas correlacin entre la circunferencia escrotal

De acuerdo a los resultados obtenidos, asumimos que las correlaciones positiva

y la produccin espermtica, y ms especficamente el volumen seminal, no depende

encontradas entre las caractersticas productivas seminales y el peso, guardan un

nicamente de la produccin de espermatozoides por el testculo, sino tambin de la

gran paralelismo con las mostradas por la edad y el desarrollo testicular de los

produccin de plasma seminal por las glndulas sexuales accesorias. En razas

sementales sobre los mismos parmetros seminales; sin olvidar el efecto del estado

especializadas, la produccin del volumen seminal es muy alta si las comparamos con

nutricional de los machos. As lo reportan Morris y col., (1989), que encuentra un

las razas autctonas.

coeficiente de correlacin altamente significativo entre la circunferencia escrotal, la


edad y el peso, en lnea con los criterios de armona corporal ya mencionados. Espitia

Segn la bibliografa consultada, la medida de circunferencia escrotal mnima

y col., (2006) argumentan que es natural que este hecho se exprese, ya que el

aceptable en toros es de 32 cm. Neville, y cols., (1988) reportaron que toros con

crecimiento del dimetro testicular va acompaando a la curva de crecimiento del

circunferencia escrotal menor a los 32 cm, son considerados insatisfactorios para

animal, lo que es ms manifiesto en la poca de mayor potencial de crecimiento.

propsitos reproductivos. Latif, y cols., en su trabajo publicado en 2006, concluyen

Presumiblemente, consideramos que el aumento de peso de los sementales favorece

que los sementales con edades de 18 meses o ms y con una circunferencia escrotal

el crecimiento de la circunferencia escrotal, lo que redunda de manera positiva en las

mayor a 30 cm, tienen un buen rendimiento en sus caractersticas seminales.

reservas espermticas epididimales, lo mismo que en las reservas extragonadales.

Otros autores como Thompson, y col., (1992), observaron que las circunferencias

Del estudio del efecto de la circunferencia escrotal sobre las caractersticas

escrotales menores a 29 cm en toros, obtienen valores inaceptables en el porcentaje

seminales estudiadas, podemos concluir que la circunferencia escrotal solamente ha

de espermatozoides normales y tambin baja produccin espermtica. Por otra parte,

afectado a la produccin espermtica cuantitativa de los sementales Marismeos; en

mencionan que la medida de 32 cm tiene un bajo valor predictivo para determinar

cambio, en la calidad espermtica, apenas se nota una ligera tendencia a la

degeneraciones patolgicas y testiculares.

significancia en la variable motilidad masal, y no se aprecia ninguna significancia en la


motilidad progresiva.

De todos modos, consideramos que las medidas de la circunferencia escrotal,


tienen que seguir en criterio general de la armona general; por tanto, las medidas

Podemos decir por tanto, que en los toros Marismeos, la circunferencia escrotal

mnimas y mximas debern guardar una cierta proporcin con el tamao corporal y,

puede ser utilizada como criterio para la seleccin de sementales con alto potencial

por ello, no recomendamos fijar unos valores extremos muy radicales para este

reproductivo. En la prctica, este sera uno de los principales criterios de seleccin

parmetro.

para elegir a los jvenes toros del Parque Nacional de Doana mantenidos en libertad
para ser capturados e introducirlos en el programa de conservacin ex situ. Sin bien

En relacin al efecto del peso del semental sobre las caractersticas seminales,

no recomendamos su utilizacin como criterio nico.

hemos podido comprobar, segn los resultados obtenidos, un efecto significativo del
peso corporal sobre la produccin espermtica; especialmente, sobre el volumen y los

5.5- Estimacin de la calidad del semen mediante sistema CASA

espermatozoides totales, es donde se encuentran las regresiones ms claras. Este


hecho ha sido contrastado por otros autores como Len y col., (1991) y Latif., y col.,

La motilidad espermtica es una de las ms importantes caractersticas asociadas

(2006) donde encuentran diferencias significativas entre los parmetros seminales y el

con la capacidad fertilizante del semen, siendo reconocida como esencial para el

tamao y peso corporal.

transporte de los espermatozoides a travs del tracto reproductivo femenino. Desde el


punto de vista biolgico, slo los espermatozoides viables pueden transportar
informacin gentica intacta, siendo por tanto los potencialmente fecundantes.

201

202

Discusin

Discusin

En los resultados que hemos obtenido sobre la calidad seminal del semen fresco

progresivos, como indican los mayores registros alcanzados en las variables VCL y

de cada uno de los sementales incluidos en el trabajo, hemos podido comprobar la

ALH, junto con los bajos registros alcanzados en LIN, STR y un valor moderado de

existencia de diferencias significativas entre ellos. No obstante, tras la descongelacin,

BCF (tabla N 30). Muio y cols., (2008b) en estudios llevado a cabo sobre la

a partir de los resultados obtenidos del CASA, podra suponerse que existiese un

identificacin de subpoblaciones espermticas en sementales de la raza Frisona,

cierto grado de variabilidad individual en la congelabilidad del semen; en cambio, al

encontraron que ms del 15% de estas poblaciones corresponden a espermatozoides

valorar el semen criopreservado de todos los sementales, hemos podido comprobar

llamados hiperactivos. Abaigar y col., (1999) sugieren que, cantidades considerables

que no existen tales diferencias entre ellos o, al menos, stas no son estadsticamente

de datos, apoyan la hiptesis de que ningn eyaculado de mamfero constituye una

significativas, a excepcin de la variable ALH.

poblacin heterognea de espermatozoides en el que coexisten

subpoblaciones

funcionalmente diferentes.
Dentro de cada uno de los sementales, los valores medios calculados por el
sistema CASA, prcticamente fueron similares para todos.

Los estudios realizados por varios investigadores en eyaculados de mamferos de


todas las especies han identificado, utilizando los sistemas de CASA, la existencia de

Los resultados del estudio mediante el sistema CASA de las caractersticas


seminales del semen criopreservado, nos revelaron en trminos totales que existe una

subpoblaciones espermticas definidas por las caractersticas de movimiento


especfico.

alta progresividad en los valores cinticos, como son los ndices de linealidad, rectitud
y oscilacin (tabla 27).

Al analizar los valores cinticos de los sementales 541 y 583 (tabla 28, 31)
podemos notar que ambos sementales se mantuvieron con valores medios en los

En cambio tambin se observa que existe una baja actividad espermtica, como lo

parmetros de velocidad, lo mismo que en los ndices de progresividad.

demuestran los datos de las variables de velocidad (VCL, CSL, VAP). Al observar los
valores medios de la cintica espermtica de cada uno de los sementales, podemos

Al comparar nuestros resultados con los reportados por diferentes autores

ver que tambin experimentan la misma tendencia; se pueden observar, por tanto, los

(Januskauska y cols., 2002; Ballester y cols., 2007; Muio y cols., 2008; Muio y cols.,

mayores valores medios en los ndices de linealidad, rectitud y oscilacin.

2008b; Muio y cols., 2009; Contri y cols., 2010; Ticiano y cols., 2010) encontramos
que los parmetros cinticos son superiores a los encontrados por nosotros.

Cuando analizamos al semental N 546, podemos decir que es el que mejores

Presumiblemente, creemos que estas diferencias tan marcadas en los parmetros

calidades seminales en fresco presenta, as lo demuestra a lo largo de todo el

cinticos del semen se deben a que estamos ante una raza de ganado donde no ha

experimento; en cambio, al analizar las caractersticas del semen criopreservado

habido, hasta la fecha, ningn proceso selectivo artificial, al contrario de lo que ocurre

mediante el analizador CASA, podemos ver que es el que experimenta los valores

en las grandes razas especializadas internacionales, que llevan largos periodos de

espermticos de ms baja velocidad relativa -como lo indican las variables VCL, VSL y

seleccin. En las razas de ganado vacuno, por ejemplo, uno de los criterios de

VAP (tabla 29)-, aunque tambin podemos apuntar que es el semental que expres los

seleccin en los toros donantes de semen son las excelentes caractersticas

valores ms alto de progresividad como lo muestra las variables LIN, STR, WOB y

seminales, inferidas con las ms modernas metodologas.

baja ALH. Muio y cols., (2008b), en estudios de subpoblaciones espermticas en


toros, reportan hasta un 28% de la poblacin espermtica total para este grupo.

Por otra parte, consideramos de vital importancia reconocer que las diferencias tan
marcadas en la cinemtica seminal de los trabajos consultados corresponden a

En el caso particular del semental N 575, podemos mencionar que ste presenta

ensayos llevados a cabo en un periodo de criopreservacin muy corto (30-60 das); en

la mayor actividad espermtica pero la menor proporcin de espermatozoides

cambio, en nuestro caso, los datos mostrados de las calidades del semen

203

204

Discusin

Discusin

criopreservado corresponden a muestras seminales almacenadas por un periodo

pautas especficas de movimientos. Las caractersticas de la motilidad de las cuatro

mayor a un ao.

subpoblaciones de espermatozoides son prcticamente las mismos que las


observadas en los toros Holstein (Muio y cols., (2008). Los resultados actuales

Alamo-Santana (2007), en estudios llevados a cabo para conocer la motilidad

indican que una estructura de cuatro subpoblaciones de espermatozoides puede ser

espermtica del semen criopreservado en la especie canina, observ que la motilidad

una caracterstica comn de los eyaculados de la especie bovina y que la fase de

postdescongelacin comenzaba a manifestar un ligero descenso en aquellas

enfriamiento de la crioconservacin parece ser el determinante de la calidad del

valoraciones realizadas a partir de los 4-6 meses de almacenamiento.

semen post descongelacin.

En la especie caprina, se han realizado diferentes estudios que han confirmado

En el anlisis de varianza realizado en el presente trabajo, para discriminar el

que al aumentar el tiempo de conservacin en nitrgeno lquido, se produca una

efecto de los sementales sobre la dinmica espermtica no encontramos diferencias

reduccin significativa de la motilidad espermtica y se incrementaba el porcentaje de

significativas a excepcin de la variable ALH, donde pudimos notar unos valores

morfoanomalas; disminuyendo, por tanto, la viabilidad del semen y, en consecuencia,

medios significativos para cada uno de ellos. Los ms bajos los experimenta el

su capacidad de fertilizacin (Leboeuf y cols., 2000). No obstante, tanto en la especie

semental N 546 y el mayor valor es para el semental N 541. Dicho valor alto, en este

caprina como en la bovina, se ha obtenido descendencia tras realizar inseminaciones

tipo de variable, tiene un efecto detrimental sobre la calidad del semen ya que se ha

con semen congelado durante muchos aos, si bien no queda absolutamente claro el

observado una reduccin de los valores de velocidad en el semen. Andrade-Martins

nmero de dosis seminales empleadas para conseguir ese resultado.

(2005), en estudios llevados a cabo con semen de perros, encuentra diferencias entre
sementales tambin en la variable ALH.

Leboeuf y cols., (2000) defienden la teora de que el descenso en los valores de la


motilidad, conforme aumenta el tiempo de almacenaje, podra deberse a que, si bien la
criopreservacin

seminal

ralentiza

el

metabolismo

celular,

no

lo

Este hecho tambin ha sido observado por Tardif y cols., (1997) en el semen

detiene

bovino conservado a 5C. ALH es una medida de las desviaciones laterales de la

completamente, razn por la cual este gasto lento pero continuo de energa termina

cabeza del espermatozoide sobre su trayecto medio de progresin y aumenta durante

por provocar la muerte celular y, por tanto, un detrimento en la calidad seminal post-

la hiperactivacin, ya que est probada la ocurrencia de alguna capacitacin en la

congelacin.

refrigeracin del semen (Watson, 1995).

Especial atencin merecen los estudios recientes de subpoblaciones espermticas

Los trabajos reportados por Muio, y cols., (2009) en muestras seminales despus

mediante anlisis discriminativos de las velocidades presentes en el eyaculado,

del proceso de congelacin-descongelacin, muestran que las poblaciones que mayor

llegando a la conclusin que existen diferentes subpoblaciones espermticas que

prdida de motilidad presentan son aquellas que presentan una hiperactividad de

resisten perfectamente el proceso de congelacin-descongelacin. Pea (2004)

movimientos (altos valores ALH) en el proceso de enfriamiento; por lo tanto, no

defiende la idea de que debe existir una pequea subpoblacin de espermatozoides

pueden sobrevivir a la congelacin. En general, una mayor ALH no se desea, ya que

cuya membrana es especialmente resistente a la criopreservacin, sobreviviendo a

denota menor calidad del esperma y puede interferir con la progresin del ciclo celular,

todos los procedimientos de manipulacin y congelacin seminal con bajas

como lo demuestran Arruda, y cols., (2003), y tambin Ticiano, y cols., (2010).

concentraciones de Ca2+ intracelular.


Los trabajos de Bailey y cols., (1994) mostraron una clara correlacin entre los
Estudios llevados a cabo por Muio, y cols., (2009) en toros de la raza Asturiana

valores del ALH y los niveles de Ca2+ intra-celular del espermatozoide descongelado y

de los Valles confirman la existencia de cuatro subpoblaciones espermticas con

el flujo de Ca2+, lo que podra predecir la fertilidad en esta especie; al encontrar

205

206

Discusin

Discusin

reduccin de fertilidad en la presencia de niveles de Ca2+ intracelulares superiores a

congeladas las muestras: algunos componentes en el diluyente hacen que aumente la

los del espermatozoide fresco.

viscosidad del medio y que, por ende, reduzca las velocidades del espermatozoide
como ha sido observado en los eyaculados bovinos (Hirai y cols., 1997).

Pea y cols., (2004), realizando un estudio sobre los beneficios del Equex sobre la
concentracin de Ca2+ intracelular, proponen como posible explicacin a la mejora

Teniendo en cuanta los resultados cinticos espermticos de los sementales

observada en la calidad seminal post-congelacin que, aquellas membranas que no se

Marismeos, se puede observar que, en trminos generales, la calidad del semen

encuentran protegidas por la adicin de Equex en el diluyente, se despolarizan y la

criopreservado presenta unos parmetros adecuados; si bien, se aprecia que los

clula muere probablemente porque la bomba de Ca

2+

no es capaz de controlar el

paso de calcio extracelular al interior de la clula, disminuyendo la concentracin del

descriptores de velocidades y la motilidad progresiva se han visto afectado por el largo


periodo de almacenamiento.

mismo.
5.6- Evaluacin de la vitalidad espermtica y grado de apoptosis en el semen
Con referencia a la valoracin de los parmetros de progresividad segn el efecto

criopreservado mediante citometra de flujo

del semental, pudimos observar que no se experimentan diferencias significativas


entre ellos, lo que nos lleva a determinar que todos los sementales se comportaron de

Como es reconocido ampliamente, la congelacin y descongelacin provocan

igual manera ante el proceso de congelacin, dicho de otra forma, experimentan las

graves daos a los espermatozoides. La formacin de grandes cristales de hielo

mismas alteraciones durante el proceso de congelacin. Dichas alteraciones se

dentro de la clula y la presencia de estrs osmtico durante la congelacin-

traducen en un patrn irregular del movimiento, prdida de la motilidad, aumento de la

descongelacin son dos de los mayores factores relacionado con los daos en la

permeabilidad

criopreservacin (Mazur, 1984).

de

la

membrana,

disminucin

del

metabolismo,

prdida

de

componentes intracelulares y disminucin de la produccin energtica (Watson, 1981).


Las buenos valores de la motilidad durante el proceso de congelacin fue mostrado

Sin embargo, en los ltimos aos, se han caracterizado otros factores asociados a

por la variable motilidad total (motilidad progresiva ms no progresiva) que arroja unos

la criopreservacin , entre los que podemos mencionar: la fase de transicin en el

valores medios que oscilan entre 55 y 77% (tabla 33).

plasmolema, daos oxidativos, envejecimiento prematuros, cambios de capacitacin


(Watson, 2000), aumento considerable en la proporcin de espermatozoides con

Cuando comparamos nuestros valores espermticos de progresividad con el resto

acrosomas reaccionados (Medeiros y cols., 2002) y alteraciones de la membrana

de la bibliografa podemos observar que son, por lo general, comparables al resto de

plasmtica, todos mencionados como efectos deletreos que, definitivamente, afectan

los trabajos: as, Contri y cols., (2010) aportan valores medios de motilidad total de

la viabilidad espermtica (Martn y cols., 2004).

71,83% aunque en el porcentaje de motilidad progresiva el mismo autor obtuvo valores


superiores a los nuestros. La misma tendencia es observada al comparar los

Ms recientemente, el fenmeno de la apoptosis ha sido identificado en las

resultados aportados por Ticiano y cols., (2010), donde se muestra que nuestros

poblaciones espermticas. Esto explica no slo la muerte celular, sino tambin los

resultados son mayores en cuanto a la motilidad total pero, en cambio, la motilidad

diferentes grados de daos sutiles en la clula que la mayora de las poblaciones

progresiva es menor en nuestro estudio. Dicho efecto pueden ser debido, como hemos

espermticas experimentan en el proceso de congelacin. La apoptosis constituye un

apuntado anteriormente, al largo periodo de almacenamiento de las muestras que

universal y estricto proceso fisiolgico de muerte celular que puede estar dividido en

redunda de manera negativa sobre la motilidad espermtica, especialmente la

tres fases: induccin, ejecucin y degradacin.

progresiva (Alamo-Santana, 2007). Por otra parte, pensamos que las diferencias en
estas comparaciones son debidas a la viscosidad del medio diluyente en que son

207

208

Discusin

Discusin

La mitocondria juega un importante papel durante la fase de ejecucin: Despus

Los patrones de fluorescencia observados en nuestro experimento pueden ser

de la induccin de la apoptosis, se abren los poros mitocondriales lo cual conduce a la

observados en la tabla 34: en ella podemos apreciar cmo el patrn de mayor

liberacin de factores pro-apoptticos de la mitocondria, resultando una disminucin

expresin

del potencial de membrana mitocondrial (Ravagnan y cols., 2002; Martin y cols., 2004;

espermatozoides con alto incremento de la permeabilidad de la membrana plasmtica

Martin y cols., 2007).

o los llamados poblaciones apoptticas en fase temprana. Dicha situacin era la

lo

experimenta

el

grupo

IP+/Eth-;

el

cual,

corresponde

los

esperada ya que, como hemos apuntado anteriormente, los mayores daos que
La fertilizacin envuelve un proceso complejo y, para ser capaz de completar sus

produce el proceso de congelacin-descongelacin se dan a nivel de la membrana del

funciones, las clulas espermticas necesitan, adems, alcanzar el lugar de

esperma. Martin y cols., (2004) apuntan que, entre los mayores daos ocurrido en el

fertilizacin, penetrar el ovocito y activar el desarrollo embrionario.

proceso de criopreservacin, se encuentra la disminucin de la motilidad y los cambios


en la membrana plasmtica, incluyendo la capacitacin espermtica o reaccin

En el proceso de fertilizacin estn implicados mltiples orgnulos del

acrosmica.

espermatozoide como son: membrana plasmtica, el acrosoma, la mitocondria y el


flagelo.

Los patrones de fluorescencia observados en nuestro experimento coinciden con


los referenciados en los trabajos de Macas Garca y cols., (2009), en los que

El estatus funcional de los distintos compartimentos del espermatozoide puede ser


evaluado mediante tincin con el fluorocromo apropiado.

encuentran que el mayor patrn de expresin lo experimenta el grupo de


espermatozoides apoptticos que corresponde a los espermatozoides con membrana
espermtica modificada.

La evaluacin simultnea del estado funcional de compartimentos como las


mitocondrias y la membrana plasmtica est justificada en el hecho de que, para

Los resultados aportados por Ortega-Ferrusola y cols., (2009) en estudios con

mantener su capacidad fertilizante, el espermatozoide debe ser viable, mvil y

semen de caballos, mostraron la existencia de altos patrones de apoptosis en el

mantener la integridad de las membranas (Fraser y cols., 2002). Adems, pueden ser

semen criopreservado. La proporcin de espermatozoides con alta permeabilidad de

utilizadas determinadas combinaciones de fluorocromos para evaluar la integridad

membrana se incrementa, tambin, despus de la criopreservacin con rangos que

estructural y funcional de distintas membranas simultneamente, lo que aumenta la

oscilan entre un 7,8 a 19,4%.

probabilidad de predecir la capacidad fertilizante.


Cuando observamos el patrn de expresin correspondiente a espermatozoides
En este experimento, se ha testado la asociacin de dos sondas fluorescentes

con baja permeabilidad de la membrana (vivos), podemos observar que se obtienen

para determinar el estado de conservacin del banco de germoplasma de sementales

unos valores medios buenos; as, podemos ver que estn en una horquilla de 25 a

Marismeos, utilizando protocolos previamente validados para la determinacin del

50% despus de la congelacin/descongelacin. Ortega-Ferrusola y cols., (2008)

estado de viabilidad, necrosis y apoptosis, todo mediante la determinacin del estado

utilizando las mismas sondas fluorescentes a fin de conocer el grado de dao

de la membrana espermtica (Pea y cols., 2005; Ortega-Ferrusola y cols., 2008). Tal

producido durante el proceso de congelacin en el semen de caballo, encontraron un

como ha sido demostrado para otras especies, la coloracin doble con yoduro de

40% de espermatozoides sin alteraciones de la membrana. Por otra parte Ortega-

propidio y hemodimero de etidio permite la cuantificacin de 4 subpoblaciones

Ferrusola y cols., (2009), en estudios ms recientes, encuentran que el patrn de

espermticas.

fluorescencia (IP- / Eth-) que corresponde a los espermas vivos y sin aparentes daos
de membrana se encontraban en un rango de 29,8 a 53%, con descensos
significativos de 20,5 a 30,4% comparado con el semen fresco.

209

210

Discusin

Discusin

El patrn de expresin que corresponde a los espermatozoides necrticos, en el

espermatozoides necrticos y apoptticos en diferentes fases. Es, en parte, normal

presente estudio, fueron muy bajos si los comparamos con los datos publicados por

que suceda ya que, como hemos apuntado, es propio del comportamiento de toda

Macas-Garca y cols., (2009) y Ortega-Ferrusola y cols., (2008) en los cuales reportan

clula espermtica sometida al proceso de criopreservacin. Podemos asegurar, por

unos valores medios de 18 y 15% respectivamente. Anzar y cols., (2002) presentaron

tanto, que la calidad del semen de nuestro banco de germoplasma se encuentra en

valores de espermatozoides necrticos en toros de un 10-22%, mientras que en

buen estado de conservacin como veremos en un epgrafe posterior.

nuestros resultados, todos los sementales estn en valores por debajo del 5%, esto
posiblemente sea debido a las buenas caractersticas seminales del semen en fresco,

Los dos mtodos objetivos (CASA y Citometra de flujo) propuestos y empleados

aunque a juzgar por lo descrito anteriormente, presentan una gran susceptibilidad al

para conocer el estado de conservacin del banco de germoplasma en la presente

proceso de criopreservacin.

tesis pueden ser considerados como una herramienta til y aplicable para predecir el
estado de conservacin de las muestras; por otra parte, al ser usadas con otros

La presencia de marcadores apoptticos en el semen de los toros Marismeos no

ensayos de calidad seminal, se pueden reducir los riesgo de utilizar toros de baja

es un hecho aislado; Anzar y cols., (2002) reportaron los primeros resultados de

fertilidad que repercutan negativamente en los programas de conservacin de razas

apoptosis en el semen de toros, confirmando que este efecto no slo se produce en el

en peligro de extincin.

semen criopreservado sino tambin en el semen fresco, aunque los mayores


incrementos en espermatozoides con apoptosis pueden llegar a ms del 40% durante

5.7- Fertilidad in vivo y gestin del banco de germoplasma para la

el proceso de criopreservacin.

recuperacin y multiplicacin de la raza en caso de una catstrofe

Martin y cols., (2004) apuntan que los espermatozoides presentan algunas

La inseminacin artificial, es una tcnica de la biotecnologa reproductiva que ha

caractersticas de apoptosis antes de la criopreservacin y que su proporcin aumenta

hecho posible el uso de semen de toros seleccionados en poblaciones de hembras

exponencialmente despus de la criopreservacin -como consecuencia de la muerte

con fines reproductivos. Esto ha contribuido de manera significativa a la mejora de la

celular y el aumento de la permeabilidad de la membrana, observadas despus de la

calidad gentica de los rebaos, principalmente, en aquellas razas de ganado de

criopreservacin- por tanto, no puede ser exclusivamente debido a la formacin de

inters econmico y productivo.

hielo, sino tambin debido a un hipottico proceso de apoptosis.


En el caso de las razas en peligro de extincin, esta herramienta ha jugado un
Martin y cols., (2007) en estudios realizados en semen de toros, encontraron que

papel trascendental en los programas de conservacin y multiplicacin de estas

las diferentes caractersticas de apoptosis aparecen sucesivamente a travs de los

pequeas poblaciones, esto ha contribuido a hacer uso de aquellos sementales

diferentes pasos en el proceso de criopreservacin: as, encuentran que la dilucin del

mejores dotados, adems de difundir el alto acervo gentico.

semen bovino en el medio de criopreservacin induce a una rpida e importante


disminucin del potencial de la membrana mitocondrial, lo mismo ocurre durante el

Un requisito previo para el mejor uso de este material gentico es la obtencin de

tiempo de equilibrado. El incremento de la permeabilidad de la membrana y la

una fertilidad aceptable despus de la inseminacin artificial. Por esta razn, tanto la

viabilidad del semen slo pueden observarse y cuantificarse despus de completar el

deteccin de la normalidad del semen a travs de distintas tcnicas laboratoriales

proceso de criopreservacin/descongelacin.

como la evaluacin de la fertilidad del toro, son esenciales para el xito en los
programas de conservacin, como tambin lo son para la industria ganadera.

Por tanto, podemos concluir que los valores observados en las poblaciones del
semen

criopreservado

inducen

la

aparicin

211

de

algunas

caractersticas

de

212

Discusin

Por otra parte, es conveniente apuntar que esas tasas de fertilidad se encuentran
bajo la influencia de varios factores que pueden sobreestimar el resultado. Al-

Discusin

de hembras normales, los resultados esperables seran siempre superiores a este


porcentaje.

Makhzoomi y cols., (2008) y Christensen y cols., (1999) mencionan que entre estos
factores est la fiabilidad de los sistemas de control del celo, la poca del ao, la

Entendemos que estos resultados han sido muy buenos, ya que estaramos en

categora de las vacas inseminadas, la zona, el inseminador, la raza, el semental, la

torno a las dos inseminaciones para conseguir una gestacin, cifras muy vlidas en el

ubicacin de la explotacin, si es novilla/vaca, el numero de inseminaciones, la raza

bovino, en el cual, en sistemas rutinarios, este parmetro se encuentra entre 1,2 y 1,4

del semental y la calidad del semen, entre otras. Alabar y cols., (2002) mencionaron

inseminaciones.

que el efecto ms influyente en los ndices de fertilidad corresponden, sin lugar a duda,
Observando el contexto internacional, nuestros resultados son superiores a los

al efecto de la ganadera.

reportados por Corbet y cols., (1999) en la raza Brahman, con ndice de fertilidad del
Por otro lado, como hemos apuntado ampliamente en los apartados anteriores, en

33%, utilizando el mismo programa de sincronizacin. Tambin obtuvimos resultados

el proceso de criopreservacin/descongelacin del esperma, intervienen una serie de

superiores a los ndices de fertilidad aportados por Mareca, y cols., (2007) en estudios

factores que causas daos irreversibles a las clulas espermticas, dichos cambios

llevados a cabo para testar la fertilidad (40%) del semen criopreservado de la raza

influyen de una manera directa sobre el xito o fracaso de una gestacin. De ah que

autctona Bovino Patagnico.

debemos siempre tomar en cuenta la buena calidad seminal.


Cuando comparamos nuestros resultados con los datos publicados por AlExiste una correlacin lgica entre la calidad laboratorial del semen y su capacidad

Makhzoomi y cols., (2008), encontramos que son ligeramente superiores a los

fecundante real, pero a pesar de lo obvio que resulta, pocos estudios se han realizado

nuestros, presentando unos valores que van de 58 al 72%. En dicho estudio tambin

en el mundo para establecer la verdadera calidad seminal entendida como su

encontraron un alto grado de correlacin en los ndices de fertilidad entre sementales,

capacidad para conseguir una gestacin viable.

tambin respecto a los porcentajes de espermatozoides normales.

Para nosotros, resulta esencial este parmetro ya que lo necesitamos para

Nuestros resultados en el ndice de fertilidad tambin fueron inferiores a los

conocer con exactitud la dimensin, en trminos de sementales y dosis por semental,

mostrados por Haugan y cols., (2005), que encontraron un ndice de fertilidad del

que debe tener el banco para garantizar la conservacin ex situ de una raza.

72.5% con semen de toros de distintas razas Los estudios llevados a cabo por Gil y
cols., (2000) utilizando el mismo diluyente de congelacin que el de nuestra

Por esta razn, introdujimos en el diseo de la presente tesis un experimento

experiencia, encontraron un ndice de fertilidad superior al nuestro (69%) en la raza

especfico para acceder al conocimiento de la capacidad fecundante de nuestros

sueca. Christensen y cols., (1999), observando el efecto del semental y raza sobre del

recursos criopreservados.

ndice de fertilidad, encuentran valores que van de 63,5 al 69% en toros de la raza
Jersey y Holstein.

Los resultados que obtuvimos en esta experiencia fueron muy satisfactorios; sobre
todo teniendo en cuenta que trabajamos con hembras de descarte (vacas, novillas), en

Thun y cols., (2002), comprobando la relacin entre el efecto del tipo de diluyente y

la que el motivo ms frecuente para dicho desecho era algn problema reproductivo.

la raza de semental (Pardo suizo, Holstein y Simmental), encontraron un ndice de

El ndice de fertilidad obtenido en nuestro estudio cuando inseminamos con semen

fertilidad entre el 60-66% para el semen criopreservado empleando el mismo diluyente

congelado fue del 48,78%. Considerando, por todo lo dicho este valor como el lmite

que el de nuestra experiencia. Los mismos resultados han obtenido Van Wagtendonk

inferior de la capacidad fecundante del banco; es decir, que aplicado en una poblacin

y cols., (1999) en estudios llevados a cabo en toros de la raza Holstein, comparando el

213

214

Discusin

Discusin

efecto de diluyente (TRIS y Biociphos Plus) con la fertilidad, encontrando un ndice de

La investigacin mediante la utilizacin real de semen criopreservado con hembras

fertilidad del 64% para el mismo diluyente y protocolo de congelacin empleado en

de poblaciones no amenazadas, puede jugar un papel crucial en el conocimiento de la

nuestra experiencia.

fertilidad real de nuestros bancos de germoplasma;

de esta manera, se puede

conocer el estado de la fertilidad del mismo de forma actualizada, dato que


En mltiples revisiones llevadas a cabo sobre el efecto del semental, raza, poca
de congelacin, medios de congelacin etc. sobre los ndices de fertilidad, se ha

consideramos imprescindible a la hora de desarrollar programas de recuperacin y


multiplicacin de una determinada raza en caso de una catstrofe.

demostrado que existen diferencias significativas entre individuos; as, por ejemplo, lo
demuestra los trabajos publicados por Kommisrud y cols., (1996); Christensen y cols.,

En nuestra experiencia, este concepto lo hemos llevado a la prctica, conociendo

(1999); Haugan y cols., (2005) y Al-Makhzoomi y cols., (2008). En nuestro caso en

de forma real la capacidad fecundante de nuestro banco. Esto nos ha permitido, por

este apartado slo nos hemos centrado en testar la fertilidad del banco de semen en

una parte, calcular de manera precisa el momento en que podemos recuperar nuestra

su totalidad y no por sementales. Pudimos comprobar que, en todos los sementales

raza en caso de una catstrofe y, por otro lado, partiendo del hecho de que

utilizados, se han podido obtener hembras gestantes.

necesitamos la mxima variabilidad gentica en la reconstruccin de dicha raza, saber


el nmero de fundadores que formarn el banco de semen, as como el nmero de

Tambin merece la pena mencionar que estamos ante una raza de ganado donde
apenas se conocen datos reproductivos en la conclusin de

dosis de cada uno de ellos.

este trabajo hemos

obtenido la primera informacin sobre la caracterizacin reproductiva de la raza, as

Por lo tanto, desde el punto de vista gentico, a lo que queremos llegar es a que

como los primeros datos de fertilidad con semen congelado, siendo estas

mediante esta forma de conservacin (semen congelado), podamos conservar la

informaciones de gran vala para la elaboracin del programa de conservacin ex situ

mxima diversidad gentica posible, manteniendo germoplasma de la mxima

para la raza en estudio. Consideramos, por tanto, que es un punto de partida para

variabilidad disponible en la poblacin fundadora.

desarrollar mayores estudios, y as obtener mejores resultados.


Con ello pretendemos colaborar intensamente en el manteniendo del tamao
De acuerdo a todo lo aportado hasta ahora en este trabajo, hemos podido
constatar que el conocimiento del comportamiento sexual, la caracterizacin de las

efectivo de la poblacin, optimizando el sistema de apareamiento y favoreciendo el


flujo gentico.

variables seminales, el efecto de factores fijos que interfieren en la produccin y


calidad seminal, adems del estado de criopreservacin de las muestras seminales,

En muchos trabajos, como los de Lmker y Simon, (1994); Danchi-Burge y cols.,

son indispensables para los esquemas de gestin aplicables en el programa de

2001 y Gandini y cols., 2007; se recomienda que el material almacenado en el banco

conservacin llevado a cabo en esta raza.

de semen provenga de al menos 25 machos fundadores no emparentados, que


debern garantizar el mantenimiento de al menos (en el material almacenado) el 98%

5.8- Situacin del banco de germoplasma

de heterocigosidad de la poblacin donante en el momento de la reconstruccin.


Los trabajos publicados por Hiemstra y cols.,(2005) encuentran que un numero de

El desarrollo de todos los estudios descritos en el presente trabajo supone una

25 donantes para llevar a formar el banco de germoplaplasma, puede demandar una

herramienta til en la conservacin de razas en peligro de extincin, tanto en la raza

gran tarea, ya que la mayora de las razas en estado de conservacin, tienen un

en estudio como un modelo para las dems razas en situacin parecida.

nmero reducido de sementales y, difcilmente, llega a esas cifras.

215

216

Discusin

Discusin

En nuestro trabajo, el mayor problema en este respecto ha sido el tipo de manejo

En concordancia con las recomendaciones de la literatura, el estado de nuestro

que se realiza en esta raza, ya que, como hemos apuntado anteriormente, los

banco es muy positivo, ya que hasta ahora tenemos almacenado 14 sementales ms 6

animales solamente son recogidos una vez por ao. Por otra parte, presenta tambin

que estn en fase de elaboracin. Por otra parte, debemos aclarar que, en nuestro

el inconveniente de de ser una raza feral o asilvestrada. En los trabajos llevados a

estudio, el volumen de dosis seminales por semental est muy dimensionado, ya que

cabo por Crespo Garca (2003) para la creacin del banco de germoplasma de las

hasta la fecha tenemos un 162% ms de dosis de lo que recomiendan los estudios

razas bovinas Tudanca y Monchina, se reporta que el mayor problema encontrado

citados anteriormente.

para completar el nmero de donantes ideal (25 machos), ha sido tambin el manejo,
ya que los animales se encuentran estabulados solamente en las campaas de

Si tomamos en consideracin el nmero actual de sementales que integran nuestro

saneamiento, lo que ha reducido en gran medida la posibilidad de obtencin de semen

banco e igual nmero de hembras a inseminar, podemos garantizar que el incremento

del mayor nmero de animales posible.

de la consanguinidad por generacin ser menor que el 2% en el momento hipottico


de de la reconstruccin de la raza.

Por otra parte, merece la pena mencionar que en muchos programas de creacin
de bancos, los resultados se ven afectados grandemente por los mtodos utilizados

Cuando comparamos el estado de nuestro banco de germoplasma con otras

para las extracciones seminales, as como a la poca respuesta de cierto tratamiento en

experiencias, como las de Crespo Garca (2003) en razas bovinas autctonas de

el manejo de los sementales.

Cantabria, podemos notar que van en consonancia con los objetivos que nos hemos
planteado; as, dicha autora, ya ha conseguido la finalizacin del banco de las dos

Maijala y cols., (1984) consideran que la seleccin de animales dentro de cada

razas de vacuno cntabras. Para la raza Tudanca se ha conseguido completar el

raza de inters es una consideracin importante en la construccin del banco de

banco de semen de 23 animales, lo que supone un 92 % de la previsin establecida

germoplasma; por tanto, esta seleccin debe basarse en la obtencin de un nmero

para esta raza autctona, y para la raza Monchina se han conseguido obtener 20.012

suficiente de animales con alta variabilidad gentica para asegurar la mayor captura

dosis seminales de un total de 10 sementales.

de alelos fundadores; de esta forma, la prioridad inicial es almacenar el semen


congelado por lo menos de 25 toros no emparentados. El mismo autor sigue

Los trabajos reportados por Snchez Garca y cols., (1992), para la preservacin

mencionado que, siempre que sea posible, los toros deben ser seleccionados al azar,

de los recursos genticos bovinos gallegos por medio de la creacin de un banco de

de preferencia de ser elegidos inmediatamente despus del nacimiento para que no se

germoplasma, tambin son comparables a nuestro trabajo; ellos reportan la conclusin

permita sesgos en las muestras.

del banco de germoplasma correspondiente a 26 sementales de raza Cachena, 19


Caldelana, 7 Limiana, 13 Vianesa, 13 Frieiresa. El total de dosis seminales de todas

Crespo Garca (2003) y Tamargo y cols., (2009), en los trabajos llevados a cabo en
programas de conservacin, recomiendan que, dentro de los objetivos propuestos, se

las razas almacenadas en el centro de reproduccin de Fontefiz, sobrepasan las cifras


de 500.000 (Rivero y cols., (2001).

deba seleccionar 25 sementales y elaborar un total de 500 dosis por semental.


Tamargo y cols., (2009), en los trabajos llevados a cabo para el establecimiento del
Algunos autores como Simon (1984) consideran que el material criopreservado

banco de recursos zoogenticos de la raza bovina Asturiana de la Montaa, reportan

debe de garantizar las dosis suficientes para permitir el nacimiento de, al menos, 20

que el banco ha quedado establecido en 35.529 pajuelas cropreservadas de 32

progenies por toro.

sementales.

217

218

Discusin

En sntesis, podemos apuntar que la situacin actual de nuestro banco est en


fase de finalizacin si tomamos en cuenta el nmero de sementales donantes ya
criopreservados. A la finalizacin del presente trabajo, disponemos de un nmero de
20 donantes (14 referidos en los resultados, ms 6 en fase de elaboracin), por tanto,
el banco de semen de la raza bovina Marismea, se encuentra finalizado en el 80%.

219

Conclusiones

1.- El mtodo de manejo y adiestramiento desarrollado en la presente tesis para esta


raza tan singular, consigui contrarrestar las peculiaridades de esta raza feral hasta
permitir el trabajo rutinario en reproduccin asistida.

2.- En el estudio del comportamiento sexual, se observa que la mayor parte de los
parmetros estudiados se encuentran en los rangos de la especie. Slo el tiempo de
reaccin fue mayor generalmente influido por el ruido ambiental que afecta en exceso
a una raza de este tipo.

3.- Hemos observados un alto grado de jerarqua entre los sementales, aunque esta
no afect a los parmetros etolgicos generales, en los que los animales se mostraron
muy homogneos. Por lo que la dominancia no supuso un aumento de la eficiencia
sexual.

4.- El comportamiento sexual de los toros Marismeos puede ser utilizado como
criterio de seleccin de los toros con vistas a facilitar el trabajo en el centro de colecta
y gestin del germoplasma, pero nunca como mtodo predictivo de su calidad seminal
y fertilidad.

5.- Las caractersticas espermticas del semen Marismeo presentan unos excelentes
valores espermticos, parmetros muy semejantes a las dems razas. Aunque el
porcentaje de formas anormales en el semen fresco de los sementales Marismeos
ofrece menor ndice de anomalas, esto probablemente es debido a la nula seleccin

VI. CONCLUSIONES

artificial desarrollada sobre ellos y a una clara adaptacin a la vida salvaje, que obliga
a una buena calidad reproductiva general para asegurar la participacin de los genes
de los sementales en las futuras generaciones.

6.- La influencia de efectos fijos (Semental, Ao, Mes) resultaron tener un efecto
altamente significativo sobre las variables espermticas estudiadas, lo que pone de
manifiesto, por un lado, una importante diversidad reproductiva de los machos y, por
otro, una estacionalidad y anualidad muy marcadas y lgicas en una raza
tremendamente ambiental como la Marismea.

7.- En el estudio de lo de factores inherentes al semental (edad, peso, circunferencia


escrotal), se observa que la edad tiene una influencia altamente significativa sobre las

222

Conclusiones

variables cuantitativas y cualitativas del semen; en cambio, el peso y la circunferencia


escrotal slo muestran efecto altamente significativo sobre las variables cuantitativas.
Por tanto, estos parmetros deben tenerse muy en cuenta a la hora de elegir los
machos a enviar al centro de colecta.

8.- Del estudio sobre el estado de conservacin del banco de germoplasma


desarrollado con el sistema CASA y el citmetro de flujo, podemos asegurar las
buenas condiciones de preservacin del semen obtenido en el presente trabajo; si
bien, hemos encontrado unos patrones bajos en los ndices de velocidad y unos
ndices altos de apoptticos en diferentes fases. En parte, es normal que sucedan ya
que, como es sabido, es propio del comportamiento de toda clula espermtica
sometida al proceso de criopreservacin.

9.- La utilizacin de hembras de razas no amenazadas, incluso de desecho, para


testar la capacidad fecundante del semen criopreservado de raza amenazadas, se ha
demostrado como un mtodo muy eficaz para evaluar la eficiencia de los recursos y
para la calcular la dimensin de los bancos.

10.- Utilizando toda la informacin recabada de los estudios anteriores y en


consonancia con las recomendaciones de muchos expertos, la dimensin de nuestro
banco se establece en 25 sementales, con unas 306 dosis por semental para un total
de 7650 dosis.

11.- Nuestro banco de semen est concluido, ya que disponemos de un total de 12402
dosis de 14 Sementales, disponiendo en la actualidad de otros 6 en progresin, por
tanto, podemos decir que el banco de semen de la raza bovina marismea, se
encuentra en un 80% de su ejecucin en estos momentos. Esto supone una garanta
de conservacin ex situ para la raza.

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