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VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR

La VSG consiste en medir la velocidad con la que sedimentan los glbulos rojos
provenientes de una muestra sangunea, que previamente hemos obtenido va
venosa y mezclado con un anticoagulante, en un periodo determinado. Se
calcula midiendo la distancia entre la superficie del menisco correspondiente a
la columna eritrocitaria y la parte superior de la columna de nuestra muestra
de sangre y despus dividiendo el resultado por el tiempo (en nuestro caso 1
hora a pesar de que lo aconsejable es esperar un mnimo de dos horas). La
Velocidad de Sedimentacin Globular es una prueba inespecfica, es decir,
suele ser una prueba complementaria que no nos da un diagnstico concreto,
pero la vez muy sensible, es decir, corresponde a un dato que se altera en
nuestro organismo con mucha facilidad.

VSG: Depende de: La diferencia de densidad ente hemates y el plasma


Viscosidad del plasma Concentracin y tamao de los hemates
Temperatura ambiente Se observan valores altos de VSG en: Embarazo
Crecimiento Envejecimiento Artritis reumatoide Polimialgia reumtica
Tuberculosis Inflamacin Se observan valores bajos de VSG en: Policitemias
Alteraciones eritrocitarias Hipofibrinogenemia
Material:
- Sangre total.
- Solucin anticoagulante (citrato trisdico 109 mmol/L).
- Pipeta de eritrosedimentacin (pipeta de Westergreen) longitud 300 mm y
calibre 2,5 mm.
-Soporte que inmovilice la pipeta en posicin vertical.
-Cronmetro.

Mtodo: 1-Se procede a la extraccin de sangre venosa al compaero,


siguiendo los consecuentes pasos aprendidos con anterioridad en otras
prcticas, y mezclndola seguidamente con anticoagulante (proporcin
4sng:1antic). 2-A partir de la muestra llenamos la pipeta Westergreen hasta
que la sangre alcance el enrase, es decir, los 0mm. 3-Colocamos la pipeta en el
soporte procurando que quede estrictamente vertical a temperatura ambiente
y durante 60 minutos. 4-Al cabo de una hora se mide la distancia que hay entre
el lmite superior y el menisco correspondiente a la columna. El valor de la
distancia, expresado en mm corresponde a la VSG durante la primera hora.
Interpretacin de los resultados: -La VSG en nios es inferior a 15 mm. -En
adultos varones la VSG es menor de 14 mm. -En mujeres adultas es menor de
20 mm. Por lo tanto hay que tener en cuenta que vara en funcin de la edad y
del sexo y que existen condiciones fisiolgicas que tambin pueden variar los
valores obtenidos de VSG.

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN
La velocidad de sedimentacin es un examen hematolgico que no est incluido en el desarrollo de un hemograma; sin embargo, es una prueba
muyimportante por su gran sensibilidad, pues resulta normal en las enfermedades funcionales, as como en los procesos inactivos o estrictamente locales.
7.1 MTODO DE WESTERGREN
NFundamento
Este examen mide la tendencia de los eritrocitos a sedimentar, al colocar
sangreanticoagulada
en
un
tubo
en
posicin
vertical.
Se
lee
macroscpicamente lacolumna de plasma al cabo de una hora de reposo.
Materiales
-Tubos de Westergren.
-Soporte para tubos de Westergren.
Procedimiento
En un tubo que contiene 0,5 ml de anticoagulante citrato de sodio al 3,8%
seextrae sangre venosa, se mezcla mediante movimientos rotatorios sobre
unasuperficie lisa.Se vierte mediante una pipeta Pasteur o una jeringa de metal
en el tubo deWestergren, el cual tiene una graduacin de 0 a 200 mm de arriba
hacia abajoy presenta ambos extremos abiertos.La sangre debe llenarse hasta
la marca cero, se coloca en posicin verticalsobre una gradilla especial que
obtura ambos extremos.
Resultados
Medir los milmetros descendidos de glbulos rojos mediante la columna
deplasma por encima del paquete globular.
Valores de referencia
Hombres:1 - 10 mm de altura/hora
Mujeres:3 - 14 mm de altura/hora
MTODO DE WINTROBEFundamento

Al igual que el mtodo de Westergren, este mtodo mide la tendencia de


loseritrocitos a la sedimentacin al colocar sangre anticoagulada en un
tubopequeo. Se lee la columna de plasma al cabo de una hora de reposo.
7.2.1 Procedimiento
El mismo que para el mtodo de Westergren.
7.2.3 Resultados
Medir los milmetros descendidos de glbulos rojos mediante la columna
deplasma por encima del paquete globular.
7.2.4 Valores de referencia
Hombres:0 - 5 mm/horaMujeres:0 - 10 mm/hora
Manual de tcnicas bsicas para un laboratorio de salud. OPS, N 2
manual de TEC. BASICAS HEMATOLOGIA.pmd10/05/2005, 14:12

ALBMINA
MTODO COLORIMTRICO VERDE DE BROMOCRESOL
La albmina es una protena globular que puede ser definida por cinco
caractersticas:
1) es soluble en sulfato de amonio 2.03 mol/L a 23C y a pH superior a 6,
cuando es dializada contra agua destilada;
2) la migracin de la protena en un campo electrofortico es 6.0 unidades de
movilidad de Tiselius buffer de barbital en el cual una unidad de movilidad es
10-5 cm2 .V-1.seg-1;
3) el peso molecular es aproximadamente 66,000 daltons y sedimenta a una
velocidad de 4.5 S;
4) no posee carbohidratos y
5) la albmina es el componentes principal del suero humano normal.
La albmina humana ha sido aislada y purificada hasta el punto de poder
determinar su secuencia. Est formada por 584 aminocidos y el peso
molecular calculado para esta secuencia es 66,248 daltons. La protena tiene
diversas funciones; desempea un papel importante en el mantenimiento de la
presin osmtica coloide de la sangre, en el transporte de varios iones, cidos
y hormonas y en la nutricin. Los valores bajos de albmina pueden explicar la
toxicidad de algunos frmacos en niveles bajos cuando slo se mide la
concentracin total de stos en suero. En los sueros hipoalbuminmicos, la
forma libre (activa) de la droga puede ser mucho mayor que en los sueros con
niveles normales de albmina, debido a la gran diferencia en la capacidad de
unin entre los dos tipos de sueros. La mayor cantidad de droga libre puede
causar entonces, una respuesta txica. En la desnutricin, los niveles
plasmticos de albmina disminuyen mucho ms que los de la
gammaglobulina. Otras de las funciones importantes de la albmina es el
mantenimiento del 75% de la presin osmtica coloide del plasma. Las
alteraciones de los niveles sricos de albmina pueden tener origen en un gran
nmero de secuelas patolgicas y en consecuencia no son especficas, aunque
s resultan tiles para evaluar el estado del paciente. La hiperalbuminemia
usualmente es atribuible a deshidratacin o hemoconcentracin. La
hipoalbuminemia en general se debe a
1) hemodilucin,
2) sntesis inferior a la prdida y

3) enfermedades que causan una gran prdida de albmina. La hemodilucin


puede ser causada por el desequilibrio de electrlitos.
La menor sntesis puede ser atribuida a la incapacidad para obtener nutrientes
debido a una desnutricin, malabsorcin o a una incapacidad del hgado para
la sntesis de albmina ocasionadas por enfermedades como hepatitis crnica o
aguda. Con frecuencia los niveles bajos de albmina son debidos a grandes
prdidas como en el caso de sndrome nefrtico, enteropata con prdida
proteica o lesiones cutneas exudativas. Si grandes reas de la superficie
cutnea estn destruidas se producen severas prdidas por ellas. El esfuerzo
fsico, hipertensin, infeccin del tracto urinario y la enfermedad cardaca
congestiva puede tambin aumentar la excrecin urinaria de albmina. Los
mtodos de fijacin de colorantes son los ms usados para la determinacin de
albmina srica. La albmina tiene la propiedad de fijarse a una amplia
variedad de aniones orgnicos, incluyendo molculas complejas de colorantes.
Las tcnicas de fijacin de colorantes, se basan en un desplazamiento del
mximo de absorcin del colorante cuando est unido a la albmina. Este
desplazamiento permite que el color resultante sea medido en presencia de un
exceso de colorante, lo cual junto con la alta afinidad de fijacin con la
albmina permite que todas las molculas de esta protena tomen parte de la
reaccin.
Se ha empleado una gran variedad de colorantes incluyendo naranja de metilo,
cido 2-(4- hidroxiazobenceno)benzoico, verde de bromocresol y prpura de
bromocresol. La reaccin con verde de bromocresol se lleva a cabo usualmente
a pH 4.2-4.5 y se mide a 620 630 nm. La Asociacin Americana de Qumica
Clnica recomend un mtodo con verde de bromocresol. En este
procedimiento la absorbancia del verde de bromocresol unido a la albmina se
mide a 628 nm en un buffer de succinato. La prpura de bromocresol reacciona
con la albmina a pH 5.2 y su desplazamiento de color se mide a 603 nm.
Existen tambin refractmetros clnicos que cuentan con escalas graduadas
para medir la concentracin de protenas totales. .
FUNDAMENTO DEL MTODO
Prueba colorimtrica en la que la albmina se combina con el verde de
bromocresol a determinado pH producindose un cambio de color del
indicador, de amarillo verdoso a verde azulado.
PREPARACIN
MUESTRA CLNICA
Suero o plasma
MATERIAL Y REACTIVOS

Material necesario 5 tubos de ensaye de 13 X100mm.


Micropipeta de 1.0 mL. 1 Micropipeta de 10L.
Puntas para micropipeta.
Gradilla.
EQUIPO F
otmetro con filtro de lectura de: 630 nm.
Centrfuga
CONTENIDO DEL EQUIPO
Reactivo Solucin de Verde Bromocresol a pH 4.2
Estndar Albmina 5.0 g/dL
PREPARACIN Y ESTABILIDAD
El reactivo est listo para su uso. Ser estable hasta su fecha de caducidad. Se
recomienda protegerlo de la luz.
PROCEDIMIENTO

Mezclar y esperar 10 minutos a temperatura ambiente.


Ajustar el aparato a cero con el blanco y efectuar las lecturas de las densidades
pticas del estndar y muestra a 630 nm. La coloracin es estable durante 1
hora.
RESULTADOS

Lmite de Seguridad Biolgica


Suero: de 3.5 a 5.0 g/dL C
ONTROL DE CALIDAD SPINTROL.

Normal y Patolgico.
Sueros control valorados. 5.3

PROTENAS TOTALES MTODO COLORIMTRICO - "BIURET"


Protenas sricas en la evaluacin de la funcin heptica. Para la sntesis de las
protenas sricas se requiere un hgado sano en plenas funciones, excepto en
el caso de las gamma globulinas. El hgado tiene la capacidad de duplicar la
produccin y salida de protenas durante las enfermedades asociadas con
prdida de protenas. En consecuencia, no debe sorprender que las mediciones
de protenas totales no se alteren sino hasta que haya ocurrido una
disminucin extensiva de la funcin heptica. La albmina se disminuye en la
enfermedad heptica crnica y generalmente se acompaa por un incremento
en las globulinas beta y gamma, debido a la produccin de IgG e IgM en la
hepatitis crnica activa y de la IgM e IgA en la cirrosis biliar o alcohlica
respectivamente. Se debe hacer nfasis en que estas inmunoglobulinas no son
producidas en el hgado sino por las clulas plasmticas del sistema
reticuloendotelial.
Se puede facilitar la identificacin de estas subclases de gamma globulinas
mediante la inmunoelectroforesis. Sin embargo, una disminucin en la
albmina srica no es especfica para la enfermedad heptica, puesto que la
albmina tambin disminuye en la malabsorcin, la desnutricin, la
enfermedad renal, el alcoholismo y las enfermedades malignas. La fraccin
alfa1 de las globulinas sricas se disminuye en la enfermedad heptica crnica
y cuando esta fraccin est ausente, o casi, indica que una deficiencia en la
alfa1-antitripsina puede ser la causa de la enfermedad heptica. Las protenas
sricas, globulina alfa2 y beta se aumentan en la ictericia obstructiva. Este
incremento en la alfa2-globulina y la beta globulina en la ictericia obstructiva
est asociada con interferencias en el metabolismo normal de las lipoprotenas.
Por consiguiente, no se puede hacer claramente el fenotipo de un desorden
lipdico en presencia de enfermedad heptica. El uso del colesterol de alta
densidad para evaluar el riesgo de la enfermedad coronaria se obvia en los
pacientes con enfermedad heptica alcohlica, obstruccin biliar y necrosis

heptica aguda. El hgado produce los factores de coagulacin y estos pueden


disminuir significativamente en la presencia de enfermedad heptica.
El fibringeno plasmtico est presente normalmente en una concentracin de
2 a 4 g/L. Una disminucin en el fibringeno plasmtico indica una enfermedad
heptica severa y est asociada con concentraciones disminuidas de otros
factores de coagulacin, especialmente la protrombina. Puesto que la sntesis
de la protrombina ocurre en el hgado, y requiere de la vitamina liposoluble K,
se puede incrementar el tiempo de protrombina, en la enfermedad obstructiva
biliar, la cirrosis o necrosis heptica, la falla heptica, el sndrome de Reye, los
abscesos hepticos, la deficiencia de vitamina K y la hepatitis. Se puede
diferenciar la enfermedad intraheptica asociada con una disminucin en el
factor de coagulacin, de la enfermedad obstructiva intraheptica con una
absorcin disminuida de vitamina K, observando la respuesta del tiempo de
protrombina a la administracin exgena de vitamina K.

FUNDAMENTO DEL MTODO


Los grupos -CO-NH- unidos entre s dan una reaccin con formacin de color
violeta con las sales cpricas en medio alcalino, siendo la ms representativa y
simple la que da con el Biuret -NH2-CO-NH-CO-NH2. Es en la actualidad el
mtodo colorimtrico ms exacto y simple para la determinacin de protenas
totales.
PREPARACIN
MUESTRA CLINICA
Suero, plasma.
MATERIAL Y REACTIVOS
Material necesario 5 tubos de ensaye de 13 X100mm.
Micropipetas de 1.0 mL.
1 Micropipeta de 10L.
Puntas para micropipeta.
Gradilla.
Fotmetro termostable a 37C con filtro de 540 nm.
CONTENIDO DEL EQUIPO

ESTABILIDAD
A temperatura ambiente la estabilidad es hasta la fecha de caducidad indicada
en el envase. PROCEDIMIENTO
TECNICA

M
ezclar e incubar 15 min a 30-37C.
Dejar enfriar 5 minutos a temperatura ambiente. Leer, frente al blanco de
reactivo, a 540 nm. Coloracin estable 30 minutos.
RESULTADOS

Linealidad
El mtodo es lineal hasta valores de 15 g/dL (150 g/L)
Lmite de Seguridad Biolgica Recin nacidos : 5.2 - 9.1 g/dL Nios (hasta 3
aos) : 5.4 - 8.7 g/dL Adultos : 6.7 - 8.7 g/dL
CONTROL DE CALIDAD
SPINTROL. Normal y patolgico.

EXAMEN DIRECTO MICROSCPICO


Fundamento.
Buscar, principalmente en muestras frescas, la presencia de formas evolutivas
mviles de parsitos de tamao microscpico (trofozotos, quistes de
protozoos: Entamoeba histolytica, Giardia lamblia, Balantidium coli, etc.; as
como larvas o huevos de helmintos: Strongyloides stercoralis, Ancylostoma
duodenale, Necator americanus, Trichostrongylus sp., Paragonimus, Fasciola,
etc.).
Materiales
Lminas portaobjetos.
Laminillas cubreobjetos.
Aplicador de vidrio o madera.
Microscopio ptico.
Marcador de vidrio.
Suero fisiolgico
Solucin de lugol
Verde brillante
Rojo neutro
Procedimiento.
Colocar en un extremo de la lmina portaobjeto una gota de suero fisiolgico y,
con ayuda de un aplicador, agregar 1 a 2 mg de materia fecal, emulsionarla y
cubrirla con una laminilla cubreobjeto.
Colocar en el otro extremo de la lmina portaobjeto, una gota de lugol y
proceder a la aplicacin de la muestra fecal como en el prrafo anterior.
Con el suero fisiolgico, los trofozotos y quistes de los protozoarios se
observan en forma natural, y con lugol, las estructuras internas, ncleos y
vacuolas.
En algunos casos, se recomienda el uso de colorantes vitales, debido a que no
alteran la actividad del trofozoto. Los ms usados son verde brillante 0,2% y
rojo neutro 0,01%. 5.2.4 Observacin
Observar al microscopio a 10X 40X. No es aconsejable usar objetivo de
inmersin (100X), pues se puede ensuciar el microscopio.

Recorrer la lmina siguiendo un sentido direccional, ejemplo: de derecha a


izquierda, o de arriba a abajo.
Resultado En un formato y en el cuaderno de registro correspondiente, se
anotar el nombre de la especie del parsito y su estadio evolutivo, indicando
la densidad (nmero de formas parasitarias por campo microscpico)
expresado en cruces