TERAPIA CON GENES

Concepto
La terapia gnica humana (TG) es la administracin
deliberada de material gentico a un paciente humano
con la intencin de corregir un defecto gentico
especfico, es decir, la insercin de material gentico
en clulas de un organismo reemplazando alelos
mutados por genes con la fusin deseada, con el fin de
tratar o prevenir el desarrollo de una enfermedad.
La Terapia gnica es un formulario de la
terapia que implica el insertar de uno o ms
genes correctivos que se han diseado en el
laboratorio, en el material gentico de las
clulas de un paciente para curar una
enfermedad gentica.
La expresin del nuevos gen o genes puede
entonces alterar la transcripcin de la DNA o
del ARN usada a las protenas de la sntesis y
por lo tanto para corregir la enfermedad. La
Terapia gnica todava est en los escenarios
experimentales y su uso es por lo tanto no
todava disperso.

Procedimiento de la terapia gnica

Uno de los primeros obstculos de la terapia
gnica es introduccin acertada del gen
corregido en las clulas humanas. Una Vez Que
est introducido, el gen necesita ser
incorporado en el material gentico de esas
clulas.
Algunas de las enfermedades principales que
son investigadas actualmente en estudios de
la terapia gnica incluyen:
Fibrosis qustica
Anemia de la Clula falciforme
Hemofilia
Distrofia Muscular

 Cncer
Uno de los vectores principales usados para
llevar genes modificados en las clulas es el
virus. Los Virus asocian a una clula huesped y
transfieren generalmente su material gentico
viral en l. Despus asumen el control la clula
y utilizan los componentes de la clula para
hacer las copias del virus.
Los Cientficos pueden modificar estos virus de
modo que contengan el solamente material
gentico teraputico y no viral pero todava
conservan su capacidad contagiosa para poder
transferir la DNA beneficiosa en las clulas
huesped.
Los vectores De uso general incluyen
adenovirus, virus adeno-asociados, los
retroviruses y el virus del herpes simple.
Tipos de terapia gentica
Terapia gnica somtica: se realiza sobre las clulas
somticas de un individuo, por lo que las
modificaciones que implique la terapia slo tienen
lugar en dicho paciente.

Terapia in vivo: la transformacin celular tiene

lugar dentro del paciente al que se le administra la
terapia. Consiste en administrarle al paciente
un gen a travs de un vehculo (por ejemplo un
virus), el cual debe localizar las clulas a infectar. El
problema que presenta esta tcnica es que es muy

difcil conseguir que un vector localice a un nico

tipo de clulas diana.

Terapia ex vivo: la transformacin celular se lleva a

cabo a partir de una biopsia del tejido del paciente y
luego se le trasplantan las clulas ya transformadas.
Como ocurre fuera del cuerpo del paciente, este tipo
de terapia es mucho ms fcil de llevar a cabo y
permite un control mayor de las clulas infectadas.
Esta tcnica est casi completamente reducida a
clulas
hematopoyticas
pues
son
clulas
cultivables,
constituyendo
as
un
material
trasplantable.

Terapia gnica germinal: se realizara sobre las clulas

germinales del paciente, por lo que los cambios
generados por los genes teraputicos seran
hereditarios. Por cuestiones ticas y jurdicas, sta
clase de terapia gnica no se lleva a cabo hoy en da.
Vectores en Terapia Gnica
Virus
Todos los virus son capaces de introducir su material
gentico en la clula husped como parte de su ciclo
de replicacin. Gracias a ello, pueden producir ms
copias de s mismos, e infectar a otras clulas. Algo
comn a la mayora de estrategias con virus es la
necesidad de usar lneas celulares "empaquetadoras"
o virus helpers, que porten los genes que les

eliminamos a nuestros vectores y que permiten la

infeccin[1], [2].
Algunos tipos de virus insertan sus genes fsicamente
en el genoma del husped, otros pasan por varios
orgnulos celulares en su ciclo de infeccin y otros se
replican directamente en el citoplasma, por lo que en
funcin de la terapia a realizar nos puede interesar uno
u otro. Algunos ejemplos son los retrovirus,
adenovirus, los virus adenoasociados, los herpes virus
y los vectores virales.

Retrovirus: El genoma de los retrovirus est

constituido por ARN de cadena sencilla, en el cual se
distinguen tres zonas claramente definidas: una
intermedia con genes estructurales, y dos
flanqueantes con genes y estructuras reguladoras.
Cuando un retrovirus infecta a una clula husped,
introduce su ARN junto con algunas enzimas que se
encuentran en la matriz, concretamente una
proteasa, una transcriptasa inversa y una integrasa.
La accin de la retrotranscriptasa permite la sntesis
del ADN genmico del virus a partir del ARN. A
continuacin, la integrasa introduce este ADN en el
genoma del husped. A partir de este punto, el virus
puede permanecer latente o puede activar la
replicacin masivamente. Para usar los retrovirus
como vectores vricos para terapia gnica
inicialmente se eliminaron los genes responsables
de su replicacin y se reemplazaron estas regiones
por el gen a introducir seguido de un gen marcador.

Adenovirus: Los adenovirus presentan un genoma

de ADN bicatenario, y no integran su genoma
cuando infectan a la clula husped, sino que la
molcula de ADN permanece libre en el ncleo
celular y se transcribe de forma independiente. Esto
supone que el efecto posicional o la mutagnesis
por insercin no se dan en estos vectores, lo cual no
quiere decir que no tengan otros inconvenientes.
Adems, debido al hecho de que en su ciclo natural
se introducen en el ncleo de la clula, pueden
infectar tanto clulas en divisin como clulas
quiescentes.

Virus Adenoasociados (AAV): Los AAV son virus

pequeos con un genoma de ADN monocatenario.
Pueden integrarse especficamente en el cromosoma
19 con una alta probabilidad. Sin embargo, el AAV
recombinante que se usa como vector y que no
contiene ningn gen viral, solo el gen teraputico, no
se integra en el genoma. En su lugar, el genoma
vrico recombinante fusiona sus extremos a travs
del ITR (repeticiones terminales invertidas),
apareciendo recombinacin de la forma circular y
episomal que se predice que pueden ser la causa de
la expresin gnica a largo plazo.

Las desventajas de los sistemas basados en AAV

radican principalmente en la limitacin del tamao de
DNA recombinante que podemos usar, que es muy
poco, dado el tamao del virus. Tambin el proceso de
produccin e infeccin resultan bastantes complejos.

No obstante, como se trata de un virus no patgeno en

la mayora de los pacientes tratados no aparecen
respuestas inmunes para eliminar el virus ni las clulas
con las que han sido tratados.

Herpes virus: Los herpes virus son virus de ADN

capaces de establecer latencia en sus clulas
husped. Tienen la ventaja de poder incorporar
fragmentos de DNA exgeno de gran tamao (hasta
unas 30 kb). Adems, aunque su ciclo ltico lo
realizan en el lugar de infeccin, establecen la
latencia en neuronas, las cuales estn implicadas en
numerosas enfermedades del sistema nervioso, y
son por ello dianas de gran inters.

Vectores virales: Los vectores virales tienen

poblaciones naturales de clulas husped que ellos
infectan de manera eficiente. Sin embargo, algunos
tipos celulares no son sensibles a la infeccin por
estos virus. La entrada del virus a la clula est
mediada por protenas de su superficie externa (que
pueden formar parte de una cpside o de una
membrana). Estas protenas interaccionan con
receptores celulares que pueden inducir cambios
estructurales en el virus y contribuir a su entrada en
la clula por endocitosis.

Mtodos no virales

DNA Desnudo: Este mtodo consiste en la

inyeccin de plsmidos de DNA desnudos (o sea, no
recubiertos) los cuales contienen la informacin

gentica deseada y son capases de entrar a las

clulas y restablecer la funcin deseada. Este es el
mtodo de transfeccin no viral ms simple que
existe, y aunque ha mostrado algunos resultados
positivos la expresin aun continua siendo muy baja
en comparacin con otros mtodos, lo que ha
llevado a una investigacin con mtodos ms
eficientes de transformacin, tales como la
electroporacin, la sonicacin, o el uso de la
biobalstica, que consiste en disparar partculas de
oro recubiertas de ADN hacia la clula utilizando
altas presiones de gas.

Oligonucletidos: El uso de oligonucletidos

sintticos en la terapia gnica tiene como objetivo la
inactivacin de los genes implicados en el proceso
de la enfermedad.

Cromosomas artificiales
La creacin de cromosomas humanos artificiales
(HACs) estables es una de las posibilidades que se
trabaja en la actualidad como una de las formas de
introducir ADN permanentemente en clulas somticas
para el tratamiento de enfermedades mediante el uso
de la terapia gnica. Presentan una elevada estabilidad,
adems de permitir introducir grandes cantidades de
informacin gentica.

Lipoplexes: El vector de ADN puede ser cubierto

por lpidos formando una estructura organizada,
como una micela o un liposoma. Cuando la

estructura organizada forma un complejo con el ADN

entonces se denomina lipoplexe. Hay tres tipos de
lpidos: aninicos, neutros o catinicos, al ser los
aninicos y los neutros txicos los catinicos son
los ms utilizados. stos, debido a su carga positiva,
interaccionan con el ADN, que presenta carga
negativa, de tal forma que facilita la encapsulacin
del ADN en liposomas. El uso de lpidos catinicos
mejoraba la estabilidad de los lipoplexes, adems,
como resultado de su carga, interactan tambin
con la membrana celular, permitiendo la endocitosis
como la principal va por la que las clulas absorben
los lipoplexes. Una vez dentro de la clula el
endosoma debe de romperse y liberar la carga de
ADN si esto no ocurre, es eliminado. Los lipoplexes
tiene como desventaja una baja eficiencia en esta
etapa por lo que requieren de la ayuda de otros
lpidos como desestabilizadores de la membrana del
endosoma.
Mtodos hbridos
Debido a las deficiencias de muchos de los sistemas
de transferencia gnica se han desarrollado algunos
mtodos hbridos que combinan dos o ms tcnicas.
Los virosomas son un ejemplo, y combinan liposomas
con el virus inactivado VIH o el virus de la gripe.

Dendrmeros:
Un
dendrmero
es
una
macromolcula muy ramificada con forma esfrica o
variable. Su tamao est en la escala nanomtrica y

su superficie puede ser funcional de muchas formas

y de sta derivan muchas de sus propiedades. En
particular, es posible construir un dendrmero
catinico, es decir, con carga superficial positiva. De
esta forma, interacciona con el cido nucleico,
cargado negativamente, y formar un complejo que
puede entrar por endocitosis en la clula.
Clulas diana
Las clulas diana se seleccionan en funcin del tipo de
tejido en el que deba expresarse el gen introducido, y
deben ser adems clulas con una vida media larga.
Igualmente, se debe tener en cuenta si la diana celular
es una clula en divisin o quiescente. Las clulas
diana ideales seran las clulas madre, puesto que la
insercin de un gen en ellas producira un efecto a
largo plazo. Debido a la experiencia en trasplante de
mdula sea, una de las dianas celulares ms
trabajadas son las clulas madre hematopoyticas.
Otras dianas celulares con las que se ha trabajado son:
Linfocitos,
clulas
del
epitelio
respiratorio,
Hepatocitos,
Fibroblastos
drmicos
y
clulas
musculares.
Aplicacin de la Terapia Gnica en humanos
La aplicacin ms controversial y polmica de la
tecnologa de los transgenes es la que respecta a la
terapia gnica humana, es decir, el tratamiento y alivio
de las enfermedades genticas humanas mediante la
adicin de genes silvestres exgenos para corregir la

funcin defectuosa de las mutaciones. En los seres

humanos puede utilizarse dos tipos bsicos de terapia
gnica: la somtica y la germinal.
La terapia gnica somtica es hasta ahora la que posee
dismiles aplicaciones en ya no pocas enfermedades
tales
como:
Fibrosis
qustica,
Enfermedades
lisosomales, hipercolesterolemia, melanomas malignos
(cncer), Inmuno Deficiencia Combinada Grave,
Distrofia Muscular Duchene, Beta Talasemia, VIH/SIDA,
entre otros.
1.

http://individual.utoronto.ca/titanium/Gene_Therapy.pdf

2.

http://www.nhmrc.gov.au/_files_nhmrc/publications/attachments/e4.pdf

3.

http://catalogue.pearsoned.co.uk/samplechapter/0131010115.pdf

4.

http://www.musc.edu/humanvalues/pdf/gene-therapy.pdf

5.

http://www.japi.org/february_2013/06_ra_human_gene_therapy_a.pdf

6.

http://www.conversations.canterbury.ac.nz/resources/genetics/genetherapy-info.pdf