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TP n..
Les colorants
Extraction, sparation, identification et synthse
Placer dans un mortier un peu de sable, ajouter quelques feuilles bien vertes (pinards par
exemple) coupes en petits morceaux.
Broyer sec les feuilles (destruction des parois cellulaires)
Ajouter trs peu dalcool 90 pour solubiliser certaines substances et continuer broyer
doucement pendant 5 minutes
Dans un bcher, verser la solution contenue dans le mortier.
La solution obtenue est dite chlorophylle brute .
Sur une bande de papier chromatographie (papier Wattman) dposer une distance
denviron 2 cm du bas une dizaine de gouttes de solution de chlorophylle brute en laissant
scher aprs dpt chaque goutte.
Attention ne pas toucher le papier sur la zone de migration
Suspendre le papier chromatographie laide dun crochet fix sur un bouchon, dans une
prouvette ferme contenant 5 mL dluant (ther de ptrole 85 %, actone 10 %, cyclohexane 5%).
Vrifier que la tache ne baigne pas dans lluant.
Placer un cache opaque autour de lprouvette durant toute llution.
Stopper llution quand lluant arrive environ 1 cm du bord suprieur.
Questions
a) Rappeler le rle dune chromatographie.
b) Pourquoi le dpt ne doit-il pas tremper dans lluant ?
c) Faire un schma annot lchelle du chromatogramme obtenu.
d) Combien de pigments contient la solution de chlorophylle brute ? Justifier.
3) ABSORBANCE DE LA SOLUTION DE CHLOROPHYLLE
Principe du spectrophotomtre :
Un spectrophotomtre est un appareil qui permet de dterminer pour diffrentes longueurs donde la
proportion de lumire absorbe par une solution.
Nous allons raliser le spectre dabsorption A = f() de la chlorophylle brute, c'est--dire tracer la
courbe de labsorbance de la solution de chlorophylle en fonction de la longueur donde de la lumire.
Lopration de remplissage de la colonne conditionne lefficacit de la sparation. Il ne faut pas quil y ait de bulles ou de
zone sans phase stationnaire car on aurait alors des chemins prfrentiels nuisant une bonne sparation des composs.
Pendant la phase dlution avec le solvant on veillera galement ne pas asscher la partie suprieure de la phase fixe.
A laide celui-ci, introduire la silice dans la colonne ; il ne doit pas se former de bulles dair !
silice
coton
Quel est lintrt de ce type de chromatographie par rapport celle sur couche mince ?
2.
A laide dun spectrophotomtre, on souhaite tracer les spectres dabsorption A=f() du sirop de menthe et des 2 colorants
issus de la sparation prcdente.
Raliser ces spectres.
Interprter les courbes obtenues : quel(s) colorant(s) contient le sirop de menthe ?.
Dans un erlenmeyer de 125 mL, verser 0,20 g de 2-nitrobenzaldhyde, 4 mL dactone et 10 mL deau distille.
Attention : La soude est prpare par dissolution de 8 g de soude en pastille dans 100 mL deau. Il faut porter
gants et lunettes pour manipuler cette solution.
La solution passe de la couleur jaune fonc une couleur plus sombre. Lindigo prcipite.
Laver avec 5 mL dthanol. Laisser scher le solide ou le passer ltuve vers 120C.
1re S
TP n4
CORRECTION
Les colorants
Extraction, sparation, identification et synthse
Une chromatographie permet de sparer et didentifier les constituants dun mlange homogne.
b) Pourquoi le dpt ne doit-il pas tremper dans lluant ?
Xanthophylle
Chlorophylle a
Chlorophylle b
Les spectres dabsorption montrent que les 2 types de chlorophylle absorbent les couleurs bleue
et rouge. La lumire transmise est donc verte.
b) Expliquer la couleur du carotne.
La chromatographie sur couche mince (CCM) permet de sparer les constituants dun mlange et
de les identifier (par comparaison avec des substances connues quon fait migrer en mme temps
que lchantillon analyser ou par mesure du rapport frontal et comparaison avec les RF de
substances connues). En revanche on ne peut pas rcuprer les constituants du mlange aprs
sparation.
La chromatographie sur colonne permet la sparation mais pas lidentification directe des
constituants du mlange. On peut en revanche recueillir des quantits non ngligeables des
constituants afin de raliser des analyses ensuite.
3.
A laide dun spectrophotomtre, on souhaite tracer les spectres dabsorption A=f() du sirop de menthe et des 2 colorants
issus de la sparation prcdente.
Raliser ces spectres.
Fraction jaune
Fraction bleue
sirop brut
Le colorant jaune contenu dans le sirop de menthe est de la tartrazine (les spectres se superposent)
Le colorant bleu est du bleu patent. (on remarque quils nont pas t parfaitement spars)
400
400
650
650
BBT
Remarque : dautres colorants jaune et bleu existent avec des spectres qui se ressemblent mais qui ne
sont pas superposables.
III / Synthse de lindigo
Dans un erlenmeyer de 125 mL, verser 0,20 g de 2nitrobenzaldhyde, 4 mL dactone et 10 mL deau distille.
Agiter trs vivement laide dun agitateur magntique.
Attention : La soude est prpare par dissolution de 8 g de soude en pastille dans 100 mL deau. Il faut porter
gants et lunettes pour manipuler cette solution.
1. Quels sont les dangers lis la soude ?
Par dfinition,
Do
n 0,2
V 0,1
n
V
or
n(NaOH)
m(NaOH)
8
M (NaOH) 40
= 0,20 mol.
= 2,0 mol.L-1.
3. Quelle est la couleur de lindigo obtenue ? Bleu fonc (utilis pour les jeans)
Lindigo est-il soluble dans leau ? Non. Sil tait soluble dans leau (ou lthanol) on ne pourrait pas
utiliser ces solvants pour effectuer le rinage des cristaux sur le filtre Buchner.
L'quation de la raction s'crit :
On donne les masses molaires : 2-nitrobenzaldhyde : 151 g.mol-1 ; indigo : 262 g.mol-1.
n(NBA)
m(NBA) 0,2
1,3.10
La quantit de matire dindigo espre sera de n(indigo)
2
6,6.10 4 mol
m(Produit obtenu)
m(Produit espr)