Se prepararon las siguientes extracciones, los clculos se encuentran en

anexos.
1. Amilasa: Se tomaron aproximadamente 4 mL de saliva humana y se
diluyeron con 4 mL de una solucin de NaCl 0.1 M.
2. Ureasa: 20 gr de frijol y cebada se remojaron desde un da antes y se
trituraron con 100 mL de amortiguador de fosfatos 0.1 M pH 7
conteniendo 0.2 M de NaCl. El extracto es separado mediante una gasa.
3. Peroxidasa 20 gr de coliflor se macharon con 100 mL de amortiguador de
fosfato de potasio 0.2 M pH 7.5 conteniendo 0.3 M de NaCl, el extracto
es separado mediante una gasa.
4. Catalasa: 20 gr de hgado de res se homogenizaron con una licuadora en
100 mL de amortiguador de fosfatos 0.1 M pH 7.5. Se separa mediante
una gasa las enzimas extradas.
5. Polifenol oxidasa. 20 gr de manzana se macharon en 100 mL de
amortiguador e3 fosfatos 0.1 M pH 6.5 conteniendo 0.2 M de NaCl.
El Dr. Aldo Amaro Reyes proporciono una muestra problema con una enzima
desconocida para identificarla con las pruebas.
Se efectuaron las pruebas tanto para las muestras de enzima conocida como
para la desconocida simultneamente, junto con el blanco conteniendo agua
en lugar de la muestra de enzima, quedando as:
Tubo 1: Un blanco conteniendo amortiguador y substrato, pero con la
enzima reemplazada por agua.
Tubo 2: Uno con amortiguador, substrato y una alcuota de solucin
patrn de la enzima conocida que se prob.
Tubo 3: Otro que contena amortiguador, substrato y una alcuota
apropiada de la enzima desconocida.
CATALASA: En el ensayo para le enzima, se adicionaron 0.2 mL de la catalasa
conocida o de su muestra desconocida a 2 mL de perxido de hidrogeno al 3%.
Nota: Una lenta formacin de hidrogeno puede ocurrir en el blanco, esto es
causado por contaminacin con metales y no debe ser tomado como ensayo
positivo.
PEROXIDASA: En el ensayo para le enzima se adiciono 2 o 3 gotas de
guayacol al 1% en etanol a un volumen de 0.5 mL de la peroxidasa conocida o
de la desconocida y luego una gota de perxido de hidrogeno al 3%.
UREASA: Para la deteccin de la enzima, se colocaron unos cuantos cristales
de urea en un tubo limpio y se disolvi en casi 2 mL de agua desionizada. Se
adicion 2 o 3 gotas de rojo de fenol al 0.1% (en agua) y 0.10 0,20 mL de la
ureasa conocida o de la muestra desconocida Se repiti usando fenolftalena al
0.1% (en alcohol) como indicador y observar el cambio de color de claro a rosa.
AMILASA: En un vaso de precipitados de 100 mL se puso almidn,
aproximadamente 3 gr y 2 mL de agua, luego se procedi a calentar la mezcla
con agitacin constante hasta que tenga la consistencia de un gel espeso. Se

adicionaron 3 gotas de agua, amilasa o la muestra desconocida en la superficie

del gel. No mezclar. Se observ la cantidad del lquido en la superficie del gel
despus de 4-10 minutos con el blanco.
POLIFENOL OXIDASA: Se prepar una solucin de catecol (45 mM) se prepar
disolviendo 0.050 g de catecol en 100 mL de amortiguador de fosfatos 0.1 M
pH 6.
Se disolvi el catecol por agitacin suave para no acelerar la oxidacin no
enzimtica causada por el O2. Se adicion 1 mL de la solucin de catecol a 3
tubos y se agregaron 0.1 mL de agua al blanco, 0.1 mL de la enzima conocida
al 2do tubo y 0.1 mL de la enzima desconocida al 3 er tubo