Beruflich Dokumente
Kultur Dokumente
Maracaibo, Venezuela
Resumen
La hidrlisis bsica de la goma de Acacia tortuosa facilit la separacin de tres fracciones
oligmero-protena mediante cromatografa de gel permeacin (GPC). La comparacin de los
perfiles de elucin de la goma cruda original y de la goma hidrolizada evidenci una estructura
polidispersa representada por dos fracciones tipo arabinogalactn-protena (AGP). La hidrlisis cida de estas fracciones, aisladas y caracterizadas por tcnicas cromatogrficas (PC y
HPLC), demostr el posible compromiso entre arabinosa e hidroxiprolina como unidades internas, posiblemente involucradas en el enlace carbohidrato-protena.
Palabras clave: Acacia tortuosa; arabinogalactn-protena; gel filtracin; goma.
Introduccin
El estudio de exudados gomosos, productos naturales de gran complejidad, ha
sido de gran inters. La creciente aplicacin
de las gomas en las industrias alimentaria,
farmacutica, cosmtica, textil y vitcola
(1,2), entre otras, se basa en su capacidad
de modificar las propiedades reolgicas de
los sistemas acuosos en los cuales intervienen. Se han aprovechado tradicionalmente
sus usos como espesantes (3), emulsificantes (4), gelificantes (5) y clarificantes (6). Actualmente, se han descrito implicaciones
nutricionales de las gomas, tales como: efectos gastrointestinales, absorcin de lpidos y
protenas, agentes hipocolesterolmicos y
efectos antitumorgnicos (7).
En Venezuela, se ha evidenciado la
existencia de especies productoras de gomas (8). Se han publicado estudios fisico-
278
El objetivo principal de esta investigacin consiste en caracterizar fracciones oligmero-protena de la goma de Acacia tortuosa, con el propsito de indagar acerca de
la naturaleza del enlace carbohidrato-protena.
Materiales y Mtodos
Origen y coleccin de la goma
La muestra estudiada se obtuvo mediante la prctica de una herida a nivel del
tallo de la especie de Acacia tortuosa. La produccin del polmero tuvo lugar en perodos
variables (8-15 das), posterior a la estimulacin de la planta. La goma cruda se sec en
una estufa a 110C.
Hidrlisis alcalina de la goma
Se disolvieron los ndulos de la goma
cruda (5g) en solucin saturada de Ba (OH) 2
(200 mL) a temperatura ambiente por 2 h.
Se hidroliz la mezcla a 100 C por 8 h. La
solucin obtenida se neutraliz con H2 SO4
1M, se filtr y se obtuvo una solucin de
goma de color caracterstico, la cual se liofiliz posteriormente (Equipo LABCONCO
FREEZE ONE).
Obtencin de los perfiles de elucin
de la goma cruda e hidrolizada por
cromatografa gel permeacin (GPC)
Se emple una columna de vidrio (30 x
1 cm) empacada con FRACTOGEL TSK-HW-65 (s). Con la muestra liofilizada se prepar una solucin acuosa de la goma hidrolizada (100 mg/ 10 mL), se tom una alcuota (0,3 mL) y se agreg a la columna, previamente empacada con el material poroso; se
us como eluyente una solucin de NaCl
0,1M. Se tomaron alcuotas (2 mL), a una velocidad de elucin de 3,5mL/h. Se determin la presencia de carbohidrato y protena
por mtodos espectroscpicos visible y ultravioleta, respectivamente (29). Las curvas
de absorcin correspondientes se obtuvieron al graficar absorbancia versus volumen
279
de elucin (mL). Este barrido permiti obtener, en las mismas condiciones, los perfiles
de elucin de la goma cruda original.
Se colectaron tres fracciones que eluyeron en los intervalos determinados: 1630mL (fraccin 2), 34-38mL (fraccin 3) y
40-44mL (fraccin 4), las cuales se seleccionaron segn los mximos de absorbancia
observados en los perfiles de elucin de las
fracciones glucdica y proteica de la goma
sometida a hidrlisis bsica. Las tres fracciones se redujeron en volumen y se desecaron para su posterior estudio.
Caracterizacin de las distintas
fracciones aisladas de la goma
hidrolizada
Hidrlisis cida: La muestra (mg), obtenida por evaporacin del solvente de las
fracciones, se disolvi en cido trifluoractico (TFA 0,1M) hasta obtener un concentracin especfica (5mg/mL). Seguidamente se
calent por 1h a 100C. Se extrajo una alcuota (2 mL), la cual se redujo en volumen.
El resto de la solucin se ajust a una concentracin 2M de TFA; y se calent por 6h a
100C. Se extrajo otra alcuota y se redujo
en volumen. El calentamiento continu a
100C y se repiti el mismo procedimiento
con tiempos de hidrlisis de 15 y 24h. Finalmente, se obtuvieron 4 alcuotas de cada
fraccin aislada por hidrlisis con TFA.
Mtodos cromatogrficos:
1. Determinacin cualitativa de carbohidratos: A cada una de las alcuotas obtenidas en la hidrlisis de cada fraccin oligmero-protena con TFA se determin el contenido de carbohidratos por el mtodo del fenol-sulfrico (29). Los azcares hidrolizados se identificaron por cromatografa de
280
Resultados y Discusin
1.2
ABSORBANCIA
1.4
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0
10
20
30
40
50
60
281
1.8
1.6
ABSORBANCIA
1.4
1.2
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0
10
20
30
40
50
60
Figura 2. Comparacin de los perfiles de elucin de la fraccin proteica de la goma original cruda
e hidrolizada
de Acacia tortuosa.
2
1.8
1.6
ABSORBANCIA
1.4
1.2
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0
10
20
30
40
50
60
y proteica
282
1.8
2
1.6
1.4
ABSORBANCIA
ABSORBANCIA
1.2
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0
10
20
30
40
50
60
VOLUMEN DE ELUCIN (m L)
y proteica
Tabla 1
Carbohidratos identificados por PC, a partir de las fracciones AGP aisladas por GPC
Tiempo de Hidrlisis
(h)
Fracciones
2
A. Glc
A. Glc
A. Glc
A. Glc, Gal
A. Glc
A. Glc
15
A. Glc, Gal
A. Glc
A. Glc, Gal
24
cen a la serie Gummiferae. Los azcares perifricos liberados (cido glucurnico y galactosa), se han descrito en la goma original
de Acacia tortuosa (30) como integrante del
oligosacrido ms abundante.
El anlisis cromatogrfico por HPLC y
PC muestra los aminocidos presentes en
las distintas fracciones sometidas a hidrlisis cida, Tabla 2. Se requiri 24 h en la fraccin 2 para observar la presencia de cido
asprtico (Asp), cido glutmico (Glu), histidina (His), arginina (Arg) y valina (Val);
mientras que en la fraccin 3 se observa la
liberacin de His. y Arg. a las 6 h de hidrlisis, a las 15 h comienza a liberarse Val. y finalmente, a las 24 h se muestra la hidroxi-
283
Tabla 2
Aminocidos identificados por PC y HPLC, a partir de las fracciones AGP aisladas por GPC
Tiempo de Hidrlisis
(h)
Fracciones
2
His, Arg
15
24
acido asprtico (Asp), acido glutmico (Glu), arginina (Arg), hidroxiprolina (Hyp), histidina (His), valina (Val).
Por otra parte, los aminocidos liberados por hidrlisis cida de la fraccin 2 son
los mismos que se describen como perifricos para las fracciones 3 y 4. La ausencia de
Hyp en las alcuotas obtenidas a partir de la
hidrlisis cida de la fraccin 2, podra relacionarse con el hecho de que la hidrlisis
cida no fue suficiente para liberar los aminocidos ms internos debido a la complejidad de dicha fraccin.
Referencias Bibliogrficas
1. ZATZ JL. Ind Eng Chem Prod Res Dev 23:
12-16, 1984.
2. BAICLN S. Rev Agroqumica y Tecnologa de alimentos 27: 545-555, 1987.
Agradecimiento
9. LEN DE PINTO G., MARTNEZ M., ORTEGA S., VILLAVICENCIO N., OCANDO E.
284
12. MARTINEZ M., LEN DE PINTO G., ALVAREZ S., GONZLEZ DE TROCONIS N.,
OCANDO E., RIVAS C. Biochem Sist and
Ecol 23: 843-848, 1995.
B i o ch e m S y s t
795-797,1993.
and
Ecol
21