ÌÁÑÉÁ

ÍÔÁÏÕÍÔÁÊÇ
ÅñãáóôÞñéï
ÂéïëïãéêÞò
×çìåßáò
Åðßêïõñç
ÊáèçãÞôñéá
YäáôéêÜäéáëýìáôáêáéÐñùôåÀíåòYäáôéêÜäéáëýìáôáêáéÐñùôåÀíåò
ÉïíôéóìüòýäáôïòêáépH
Ê=
[Ç+] [ÏÇ-]
H
H
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H
H O
H
H
O
H
H O..
+
1 8 10-16 Êeq [Ç2Ï]
55,5 .Êeq =Êw =[Ç+] [ÏÇ-]
[Ç2Ï] =55,5 ÌéïíôéêüãéíüìåíïíåñïýÊw =1 .10-14 (25.)
pH =log10 (1/[H+]) =-log10 [H+]
1.8 .10 Ê=
[Ç+] [ÏÇ-]
H
H
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H
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1.8 .10
pH êáéâéïëïãéêÜõãñÜ1ÌÍáÏÇïéêéáêÞáììùíßáðëÜóìááßìáôïò, äÜêñõá, ENY
14
13
12
11
10
9
8
ïõäÝôåñï1ÌHCl
ãÜëá, óÜëéïêõôïäéÜëõìáìõéêþíêõôôÜñùíãáóôñéêüýãñüìðýñáîýäé, cola
÷õìüòëåìïíéïý7
6
5
4
3
2
1
0
pH êáéâéïëïãéêÜõãñÜ1ÌÍáÏÇïéêéáêÞáììùíßáðëÜóìááßìáôïò, äÜêñõá, ENY
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6
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4
3
2
1
0
ÏîÝá-âÜóåéò(êáôÜBronsted-Lowry)
ÏîýÇ+ +ÂÜóçCH3-COOH Ç+ +CH3-COO-
ÏîéêüïîýÏîéêüÍÇ4
+ Ç+ +ÍÇ3
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ÉüíáììùíßïõÁììùíßá
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[H+] [A-]
[HA]
Ka: öáéíïìåíéêÞóôáèåñÜéóïññïðßáòpKa =-log10 Ka =log10 (1/Ka)
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Êáìðýëåòôéôëïäüôçóçò8
10
9
12
11
13
14
[ÇÁ] >[Á] [ÇÁ] <[Á]
7
6
1
0
4
3
2
5
ÉóïäýíáìáÏÇpH
Êáìðýëåòôéôëïäüôçóçò8
10
9
12
11
13
14
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7
6
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4
3
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5
ÉóïäýíáìáÏÇpH
ÅîßóùóçHenderson -Hasselbalch
Ka =
[H+] [A-]
[HA]
[H+] =Ka
[HA]
[A-]
log [H+] =log Ka +log
[HA]
[A-]
..
.
[ ]
-log [H+] =-log Ka +log
[HA]
[A-]
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[HA]
[A-]
.
[A-]
..
.
[ ]
-log [H+] =-log Ka +log
[HA]
[A-]
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[HA]
[A-]
.
ÂéïëïãéêÜñõèìéóôéêÜäéáëýìáôáÑõèìéóôéêÞäñÜóçóôïêõôôáñüðëáóìáH2PO4
-HPO4
--+H+
CH2 H
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HC
N
N
H
CH +
C
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ÑõèìéóôéêÞäñÜóçóôïáßìáCO2 (g) CO2 (d) H2CO3 HCO3
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--+H+
CH2 H
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N
H
CH +
C
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êåõóçäéáâßâáóçíåõñéêþíìçíõìÜôùí
ÂáóéêÝòéäéüôçôåòðñùôåúíþíãñáììéêÜðïëõìåñÞäïìçìÝíááðüìïíïìåñÞáìéíïîÝùíáíáäéðëþíïí
ôáéóåôñéóäéÜóôáôåòäïìÝòÏÇNÇC
O
ðåñéÝ÷ïõíðïëëÝòëåéôïõñãéêÝòïìÜäåòáëëçëåðéäñïýíìåôáîýôïõòêáéìåÜëëáâéïëïãéêÜìáêñïì
üñéáÜëëåòåßíáéÜêáìðôåòêáéÜëëåòåýêáìðôåòÏÇSÇNÇ2
NÇ2 OH
C
O
ÂáóéêÝòéäéüôçôåòðñùôåúíþíãñáììéêÜðïëõìåñÞäïìçìÝíááðüìïíïìåñÞáìéíïîÝùíáíáäéðëþíïí
ôáéóåôñéóäéÜóôáôåòäïìÝòÏÇNÇC
O
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üñéáÜëëåòåßíáéÜêáìðôåòêáéÜëëåòåýêáìðôåòÏÇSÇNÇ2
NÇ2 OH
C
O
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ìïÜíèñáêáÁìéíïîÝá: ôáóõóôáôéêÜôùíðñùôåúíþíL éóïìåñÝòD éóïìåñÝòCá: ÷åéñüìïñöïÞáóý
ììåôñïÜôïìïÜíèñáêá
ÓôåñåïúóïìåñÞ
áëáíßíçò

L-ãëõêåñáëäåàäçD-ãëõêåñáëäåàäçD-áëáíßíçL-áëáíßíç
ÁìéíïîÝáìåìéêñÝò, ìçðïëéêÝòõäñüöïâåòR ïìÜäåòÃëõêßíçgly, G
Áëáíßíçala, A
ÁìéíïîÝáìåìéêñÝò, ìçðïëéêÝòõäñüöïâåòR ïìÜäåòÃëõêßíçgly, G
Áëáíßíçala, A
ÁìéíïîÝáìåìçðïëéêÝòõäñüöïâåòR ïìÜäåòÂáëßíçval, V
Ëåõêßíçleu, L
ÉóïëåõêßíçIle, I
Ìåèåéïíßíçmet, M
ïìÜäáèåéïáéèÝñá2ï÷åéñüìïñöïêÝíôñïÁìéíïîÝáìåìçðïëéêÝòõäñüöïâåòR ïìÜäåòÂáëßíçval,
V
Ëåõêßíçleu, L
ÉóïëåõêßíçIle, I
Ìåèåéïíßíçmet, M
ïìÜäáèåéïáéèÝñá2ï÷åéñüìïñöïêÝíôñï
Áìéíïîý÷ùñßòåëåýèåñçáìéíïìÜäáÐñïëßíçpro, P
éìéíéêÞïìÜäáÁìéíïîý÷ùñßòåëåýèåñçáìéíïìÜäáÐñïëßíçpro, P
éìéíéêÞïìÜäá
ÁìéíïîÝáìåáëåéöáôéêÝòõäñïîõëéêÝòR ïìÜäåòÓåñßíçser, S
Èñåïíßíçthr, T
ÁìéíïîÝáìåáëåéöáôéêÝòõäñïîõëéêÝòR ïìÜäåòÓåñßíçser, S
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Ôõñïóßíçtyr, Y
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ÖÜóìáôááðïññüöçóçòáñùìáôéêþíáìéíïîÝùíðüóâåóçò(Ì-1 cm-1 )
ìÞêïòêýìáôïò(nm)
óõíôåëåóôÞòáðÖÜóìáôááðïññüöçóçòáñùìáôéêþíáìéíïîÝùíðüóâåóçò(Ì-1 cm-1 )
ìÞêïòêýìáôïò(nm)
óõíôåëåóôÞòáð
Áðïññüöçóç
öùôüò
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ìüñéá:
ï
íüìïò
Lambert-Beer
¸íôáóçðñïóðßðôïõóáòáêôéíïâïëßáò¸íôáóçìåôáäéäüìåíçòáêôéíïâïëßáòÌïíï÷ñùìÜôïñáòÁíé÷
íåõôÞòÐçãÞöùôüòÊõøåëßäáäåßãìáôïò
É0
å
: óõíôåëåóôÞò
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Á
= log = åcl
c : óõãêÝíôñùóç
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É
ÁìéíïîýìåóïõëöõäñõëéêÞïìÜäáÊõóôåÀíçcys, C
ÁìéíïîýìåóïõëöõäñõëéêÞïìÜäáÊõóôåÀíçcys, C
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ëöéäéêüòäåóìüòêõóôåÀíçïîåßäùóçêõóôåÀíçêõóôåÀíçêóôßíçïîåßäùóçáíáãùãÞ
ÁìéíïîÝáìåâáóéêÝòR ïìÜäåòNH2
ÃïõáíéäéêÞïìÜäáËõóßíçlys, K
Áñãéíßíçarg, R
Éóôéäßíçhis, H
NH2H2N
C +
ÍC
CC
ÍHH
H H
ÉìéäáæüëéïNH2
ÃïõáíéäéêÞïìÜäáËõóßíçlys, K
Áñãéíßíçarg, R
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NH2H2N
C +
ÍC
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H H
Éìéäáæüëéï
ÁìéíïîÝáìåêáñâïîõëéêÝòêáéêáñâïîõëáìéäéêÝòR ïìÜäåòÁóðáñôéêüasp, D
Ãëïõôáìéêüglu, E
Áóðáñáãßíçasn, N
Ãëïõôáìßíçgln, Q
ÁìéíïîÝáìåêáñâïîõëéêÝòêáéêáñâïîõëáìéäéêÝòR ïìÜäåòÁóðáñôéêüasp, D
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Ãëïõôáìßíçgln, Q
O ðåðôéäéêüòäåóìüòðåðôéäéêüòäåóìüò(áìéäéêüò)
O ðåðôéäéêüòäåóìüòðåðôéäéêüòäåóìüò(áìéäéêüò)
Ïðåðôéäéêüòäåóìüòåßíáéåðßðåäïò
ÌÞêçäåóìþíðåðôéäéêïýåðéðÝäïõÌÞêçäåóìþíðåðôéäéêïýåðéðÝäïõ
ÃùíßåòðåñéóôñïöÞòöêáéøÏóôåñéêüòáðïêëåéóìüòêáèïñßæåéôéòåðéôñåðüìåíåòãùíßåòöêáéøêá
èþòêáéôéòåðéôñåðüìåíåòáíáäéðëþóåéòìéáòðïëõðåðôééêÞòáëõóßäáòÃùíßåòðåñéóôñïöÞòöêáé
øÏóôåñéêüòáðïêëåéóìüòêáèïñßæåéôéòåðéôñåðüìåíåòãùíßåòöêáéøêáèþòêáéôéòåðéôñåðüìåíå
òáíáäéðëþóåéòìáòðïëõðåðôéäéêÞòáëõóßäáò
Ðåðôéäéêïßäåóìïßtrans êáécis
N
N
N
C
C
CC
Ca
C
C
N C CaCaCa
Ðåðôéäéêïßäåóìïßtrans êáécis
N
N
N
C
C
CC
Ca
C
C
N C CaCaCa
trans êáécis ìïñöÝòäéðåðôéäßïõ×-Pro
N
N
NC
Ca C
N
NC Ca
aCa
trans êáécis ìïñöÝòäéðåðôéäßïõ×-Pro
N
N
NC
Ca C
N
NC Ca
aCa
ÐïëéêüôçôáðïëõðåðôéäéêþíáëõóßäùíáìéíïôåëéêüáìéíïîýêáñâïîõôåëéêüáìéíïîýêáôÜëïéðá(
1ï)
ÐïëéêüôçôáðïëõðåðôéäéêþíáëõóßäùíáìéíïôåëéêüáìéíïîýêáñâïîõôåëéêüáìéíïîýêáôÜëïéðá(
1ï)
ÂáóéêÜ÷áñáêôçñéóôéêÜðïëõðåðôéäéêþíáëõóßäùíÓôáèåñüôìÞìá: êýñéááëõóßäáÞêïñìüòÌåôáâ
ëçôüôìÞìá: ïéðëåõñéêÝòáëõóßäåòÐïëõðåðôéäéêÞáëõóßäáÞðñùôåÀíç: 50 -2000 êáôÜëïéðáÏ
ëéãïðåðôßäéïÞðåðôßäéï: <50 êáôÜëïéðáÂáóéêÜ÷áñáêôçñéóôéêÜðïëõðåðôéäéêþíáëõóßäùíÓô
áèåñüôìÞìá: êýñéááëõóßäáÞêïñìüòÌåôáâëçôüôìÞìá: ïéðëåõñéêÝòáëõóßäåòÐïëõðåðôéäéêÞá
ëõóßäáÞðñùôåÀíç: 50 -2000 êáôÜëïéðáÏëéãïðåðôßäéïÞðåðôßäéï: <50 êáôÜëïéðá
ÐñùôåúíéêÝòäïìÝòÐñùôïôáãÞòäïìÞ
7åõôåñïôáãÞòäïìÞÔñéôïôáãÞòäïìÞÔåôáñôïôáãÞòäïìÞáëëçëïõ÷ßááìéíïîÝùíá-Ýëéêáðïëõðåðô
éäéêÞáëõóßäáðñùôåÀíçìåõðïìïíÜäåòÐñùôåúíéêÝòäïìÝòÐñùôïôáãÞòäïìÞ
7åõôåñïôáãÞòäïìÞÔñéôïôáãÞòäïìÞÔåôáñôïôáãÞòäïìÞáëëçëïõ÷ßááìéíïîÝùíá-Ýëéêáðïëõðåðô
éäéêÞáëõóßäáðñùôåÀíçìåõðïìïíÜäåò
Çáëëçëïõ÷ßááìéíïîÝùíôÞòâüåéáòéíóïõëßíçòFrederick Sanger (1918-)
ÊÜèåðñùôåÀíçÝ÷åéìéááðüëõôáêáèïñéóìÝíçêáéìïíáäéêÞáëëçëïõ÷ßááìéíïîÝùíÂñáâåßáNobel
óôçÂéï÷çìåßá1958, äïìÞéíóïõëßíçò1980, áëëçëïý÷éóçDNA
ÁáëõóßäáÂáëõóßäáÇáëëçëïõ÷ßááìéíïîÝùíôÞòâüåéáòéíóïõëßíçòFrederick Sanger (1918-)
ÊÜèåðñùôåÀíçÝ÷åéìéááðüëõôáêáèïñéóìÝíçêáéìïíáäéêÞáëëçëïõ÷ßááìéíïîÝùíÂñáâåßáNobel
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ÁáëõóßäáÂáëõóßäá
ÐñùôïôáãÞòäïìÞÇãíþóçôÞòðñùôïôáãïýòäïìÞòåßíáéáðáñáßôçôçãéá
Êáôáíüçóçôïõìç÷áíéóìïýäñÜóçò
7çìéïõñãßáðñùôåúíþíìåíÝåòéäéüôçôåò
Êáôáíüçóçôùíìç÷áíéóìþíáíáäßðëùóçòôùíðñùôåúíþíìì
Óõó÷ÝôéóçìåôáëëáãìÝíùíðñùôåúíþíìåíïóÞìáôá(ìïñéáêÞðáèïëïãßá)
ÁðïêÜëõøçôçòåîåëéêôéêÞòéóôïñßáò(ìïñéáêÞðáëáéïíôïëïãßá)
ÐñùôïôáãÞòäïìÞÇãíþóçôÞòðñùôïôáãïýòäïìÞòåßíáéáðáñáßôçôçãéá
Êáôáíüçóçôïõìç÷áíéóìïýäñÜóçò
7çìéïõñãßáðñùôåúíþíìåíÝåòéäéüôçôåò
Êáôáíüçóçôùíìç÷áíéóìþíáíáäßðëùóçòôùíðñùôåúíþíìì
Óõó÷ÝôéóçìåôáëëáãìÝíùíðñùôåúíþíìåíïóÞìáôá(ìïñéáêÞðáèïëïãßá)
ÁðïêÜëõøçôçòåîåëéêôéêÞòéóôïñßáò(ìïñéáêÞðáëáéïíôïëïãßá)
H äïìÞôÞòá-Ýëéêáò5,4 A
3,6 õðïë.
áìéíïîÝùíáìéíïîÝùí1,5 A
H äïìÞôÞòá-Ýëéêáò5,4 A
3,6 õðïë.
áìéíïîÝùíáìéíïîÝùí1,5 A
Éäéüôçôåòá-åëßêùíÏó÷çìáôéóìüòá-ÝëéêáòáðïèáññýíåôáéáíõðÜñ÷ïõíóõíå÷üìåíááìéíïîÝáìå
áñíçôéêÜÞèåôéêÜöïñôéóìÝíåòR ïìÜäåòáíõðÜñ÷ïõíóõíå÷üìåíááìéíïîÝáAsn, Ser, Thr êáéL
eu
üðïôåõðÜñ÷åéPro ÞGly
Ïó÷çìáôéóìüòá-ÝëéêáòåõíïåßôáéáíèåôéêÜêáéáñíçôéêÜöïñôéóìÝíááìéíïîÝááðÝ÷ïõíìåôáîýô
ïõòêáôÜôñßáõðïëåßìáôááíõäñüöïâááìéíïîÝááðÝ÷ïõíìåôáîýôïõòêáôÜôßáõðïëåßìáôáÉäéüôçô
åòá-åëßêùíÏó÷çìáôéóìüòá-ÝëéêáòáðïèáññýíåôáéáíõðÜñ÷ïõíóõíå÷üìåíááìéíïîÝáìåáñíçôéê
ÜÞèåôéêÜöïñôéóìÝíåòR ïìÜäåòáíõðÜñ÷ïõíóõíå÷üìåíááìéíïîÝáAsn, Ser, Thr êáéLeu
üðïôåõðÜñ÷åéPro ÞGly
Ïó÷çìáôéóìüòá-ÝëéêáòåõíïåßôáéáíèåôéêÜêáéáñíçôéêÜöïñôéóìÝíááìéíïîÝááðÝ÷ïõíìåôáîýô
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7ïìÞóõóðåéñùìÝíïõóðåéñÜìáôïò7ïìÞóõóðåéñùìÝíïõóðåéñÜìáôïò
ÇäïìÞôÞòâ-ðôý÷ùóçò3,5 A
ÇäïìÞôÞòâ-ðôý÷ùóçò3,5 A
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ÐáñÜëëçëçâ-åðéöÜíåéáÐáñÜëëçëçâ-åðéöÜíåéá
ÌéêôÞâ-åðéöÜíåéáÌéêôÞâ-åðéöÜíåéá
ÓôñéììÝíçâ-åðéöÜíåéáÓôñéììÝíçâ-åðéöÜíåéá
ÓôñïöÞÁíáóôñïöÞòÞâ-óôñïöÞÓôñïöÞÁíáóôñïöÞòÞâ-óôñïöÞ
ÔñéäéÜóôáôçäïìÞìõïóöáéñßíçò45 .35 .25 A
70% á-Ýëéêåò8 á-ÝëéêåòÌåôáöïñÝáòÏ2 óôïõòìõòìçðïëéêÜáìéíïîÝá(phe,
met, val, leu) óôïåóùôåñéêüöïñôéóìÝíá(glu, asp, lys,
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7ïìéêÝòðåñéï÷Ýòðñùôåúíþí7ïìéêÝòðåñéï÷Ýòðñùôåúíþí
ÁíáãùãÞäéóïõëöéäéêþíäåóìþíÐåñßóóåéáâìåñêáðôïáéèáíüëçòðñùôåÀíçðñùôåÀíçÁíáãùãÞäéóï
õëöéäéêþíäåóìþíÐåñßóóåéáâìåñêáðôïáéèáíüëçòðñùôåíçðñùôåÀíç
ÁíáãùãÞêáéáðïäéÜôáîçñéâïíïõêëåÜóçò8Ìïõñßáòêáéâ-åñêáðôïáéèáíüëçÖõóéêÞñéâïíïõêëåÜó
çÁðïäéáôáãìÝíç, áíçãìÝíçñéâïíïõêëåÜóçâ-ìåñêáðôïáéèáíüëçÁíáãùãÞêáéáðïäéÜôáîçñéâïí
ïõêëåÜóçò8Ìïõñßáòêáéâ-åñêáðôïáéèáíüëçÖõóéêÞñéâïíïõêëåÜóçÁðïäéáôáãìÝíç, áíçãìÝíçñ
éâïíïõêëåÜóçâ-ìåñêáðôïáéèáíüëç
ÅðáíÜêôçóçôñéôïôáãïýòäïìÞòÏéäéóïõëöéäéêïßóõìâÜëëïõíóôçóôáèåñïðïßçóçôçòèåñìïäõíáì
éêÜðñïôéìþìåíçòäïìÞòß÷íçâ-ìåñêáðôïáéèáíüëçòÖõóéêÞñéâïíïõêëåÜóçáíáêáôåìÝíçñéâïíïõ
êëåÜóçðñùôåÀíåò-óõíïäïß(chaperones)
âïçèïýíôéòðïëõðåðôéäéêÝòáëõóßäåòíááðïêôÞóïõíôçóùóôÞäéáìüñöùóçÅðáíÜêôçóçôñéôïôáãï
ýòäïìÞòÏéäéóïõëöéäéêïßóõìâÜëëïõíóôçóôáèåñïðïßçóôçòèåñìïäõíáìéêÜðñïôéìþìåíçòäïìÞò
ß÷íçâ-ìåñêáðôïáéèáíüëçòÖõóéêÞñéâïíïõêëåÜóçáíáêáôåìÝíçñéâïíïõêëåÜóçðñùôåÀíåò-óõíï
äïß(chaperones)
âïçèïýíôéòðïëõðåðôéäéêÝòáëõóßäåòíááðïêôÞóïõíôçóùóôÞäéáìüñöùóç
7éáãñáììáôéêÞáðåéêüíéóçôçòáðïäéÜôáîçòÎåäéðëùìÝíçìÝíçðñùôåÀíç], %
ÁíáäéðëùìÝíç[Áðïäéáôáêôéêü]
[ÎåäéðëùìÇáíáäßðëùóçìéáòðñùôåÀíçòãßíåôáéìåôçìïñöÞüëáÞôßðïôåêáéåßíáéáðïôÝëåóìáóõí
åñãåéáêÞòìåôÜðôùóçò¸ôóéáðïöåýãåôáéçóõóóþñåõóçìéóäéðëùìÝíùíðñùôåúíþíìÝóáóôïêýôôáñ
ï
7éáãñáììáôéêÞáðåéêüíéóçôçòáðïäéÜôáîçòÎåäéðëùìÝíçìÝíçðñùôåÀíç], %
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ï
ÏìïéïðïëéêÝòôñïðïðïéÞóåéòáìéíïîÝùíêïëëáãüíïðñïèñïìâßíçãëõêïðñùôåúíåòÑýèìéóçåíæõì
éêÞòåíåñãüôçôáòÏìïéïðïëéêÝòôñïðïðïéÞóåéòáìéíïîÝíêïëëáãüíïðñïèñïìâßíçãëõêïðñùôåúí
åòÑýèìéóçåíæõìéêÞòåíåñãüôçôáò
Åîåñåõíþíôáò
ôéò
ðñùôåÀíåò

ôéò
ðñùôåÀíåò
×ñùìáôïãñáößáäéÞèçóçòóåðçêôÞóùìáôßäéïõäáôáíèñáêéêïýðïëõìåñïýòìéêñÜðñùôåúíéêÜìüñé
áäåßãìáðñùôåÀíçòðçêôÞìïñéáêïýáðïêëåéóìïýêáôåýèõóçñïÞòìåãÜëáðñùôåúíéêÜìüñéá×ñùìáô
ïãñáößáäéÞèçóçòóåðçêôÞóùìáôßäéïõäáôáíèñáêéêïýðïëõìåñïýòìéêñÜðñùôåúíéêÜìüñéáäåßãì
áðñùôåÀíçòðçêô
ìïñéáêïýáðïêëåéóìïýêáôåýèõíóçñïÞòìåãÜëáðñùôåúíéêÜìüñéá
ÉïíôïáíôáëëáêôéêÞ÷ñùìáôïãñáößáÈåôéêÜöïñôéóìÝíåòðñùôåÀíåòäåóìåýïíôáéóåóùìáôßäéáìå
áñíçôéêüöïñôßïêáñâïîõìåèõëéêÞïìÜäá
7éáéèõëï-
áìéíïáéèõëéêÞïìÜäáêõôôáñßíçÞáãáñüæçêõôôáñßíçÞáãáñüæçáñíçôéêÜöïñôéóìÝíåòðñùôåÀíåò
åêëïýïíôáéðñþôåòðñùôåÀíçðñùôåÀíçóõãêÝíôñùóçÜëáôòóõãêÝíôñùóçÜëáôïòáñéèìüòêëáóìÜôù
íáñéèìüòêëáóìÜôùíó÷åôéêÞðïóüôçôó÷åôéêÞðïóüôçôáåíåñãüôçôáåíåñãüôçôáÉïíôïáíôáëëáêô
éêÞ÷ñùìáôïãñáöáÈåôéêÜöïñôéóìÝíåòðñùôåÀíåòäåóìåýïíôáéóåóùìáôßäéáìåáñíçôéêüöïñôßïê
áñâïîõìåèõëéêÞïìÜäá
7éáéèõëï-
áìéíïáéèõëéêÞïìÜäáêõôôáñßíçÞáãáñüæçêõôôáñßíçÞáãáñüæçáñíçôéêÜöïñôéóìÝíåòðñùôåÀíåò
åêëïýïíôáéðñþôåòðñùôåÀíçðñùôåÀíçóõãêÝíôñùóçÜëáôòóõãêÝíôñùóçÜëáôïòáñéèìüòêëáóìÜôù
íáñéèìüòêëáóìÜôùíó÷åôéêÞðïóüôçôó÷åôéêÞðïóüôçôáåíåñãüôçôáåíåñãüôçôá
×ñùìáôïãñáößáóõããÝíåéáòÐñùôåÀíçðïõäåóìåýåéãëõêüæçóõíäÝåôáéóôçíïìïéïðïëéêÜóõíäåäå
ìÝíçãëõêüæç(G) ôùíêüêêùíÐñïóèÞêçãëõêüæçò(G)
ÐñïóèÝôùíôáòäéÜëõìáãëõêüæçò(G) çðñùôåÀíçáðïäåóìåýåôáéáðüôçóôåñåÜöÜóç×ñùìáôïãñáöß
áóõããÝíåéáòÐñùôåÀíçðïõäåóìåýåéãëõêüæçóõíäÝåôáéóôçíïìïéïðïëéêÜóõíäåäåìÝíçãëõêüæ(G
) ôùíêüêêùíÐñïóèÞêçãëõêüæçò(G)
ÐñïóèÝôùíôáòäéÜëõìáãëõêüæçò(G) çðñùôåÀíçáðïäåóìåýåôáéáðüôçóôåñåÜöÜóç
ÇëåêôñïöüñçóçóåðçêôÞSDS-
ðïëõáêñõëáìéäßïõìßãìáìáêñïìïñßùíçëåêôñïöüñçóçðïñþäçòðçêôÞêáôåýèõíóççëåêôñïöüñçóç
òÇëåêôñïöüñçóçóåðçêôÞSDS-
ðïëõáêñõëáìéäßïõìßãìáìáêñïìïñßùíçëåêôñïöüñçóçðïñþäçòðçêôÞêáôåýèõíóççëåêôñïöüñçóç
ò
ÉóïçëåêôñéêüòåóôéáóìüòäéÜëõìááìöïëõôþíåíóùìáôþíåôáéóôçíðçêôÞçëåêôñïöüñçóçáìöïëõô
þíåãêáèéóôÜìéáâáèìßäùóçpH
ðñïóèÞêçäéáëýìáôïòðñùôåúíþíêáéçëåêôñïöüñçóçåêíÝïõåëáôôïýìåíïpH
ÏéðñùôåÀíåòåóôéÜæïíôáéóåäéáöïñåôéêÜóçìåßá,
áíÜëïãáìåôïpI ôïõòÉóïçëåêôñéêüòåóôéáóìüòäéÜëõìááìöïëõôþíåíóùìáôþíåôáéóôçíðçêôÞçë
åêôñïöüñçóçáìöïëõôþíåãêáèéóôÜìéáâáèìßäùóçpH
ðñïóèÞêçäéáëýìáôïòðñùôåúíþíêáéçëåêôñïöüñçóçåêíÝïõåëáôôïýìåíïpH
ÏéðñùôåÀíåòåóôéÜæïíôáéóåäéáöïñåôéêÜóçìåßá,
áíÜëïãáìåôïpI ôïõò
ÐñþôçÐñþôçäéÜóôáóçäéÜóôáóçIóïçëåêôñéêüòIóïçëåêôñéêüòåóôéáóìüòåóôéáóìüòEëáôôïýìåí
ïEëáôôïýìåíïpIpIÇëåêôñïöüñçóçäýïäéáóôÜóåùí
(åýôåñçäéÜóôáóç(åýôåñçäéÜóôáóçSDSSDS--PAGEPAGEEëáôôïýìåíïEëáôôïýìåíïM.B.M.B.
EëáôôïýìåíïEëáôôïýìåíïpIpIÐñþôçÐñþôçäéÜóôáóçäéÜóôáóçIóïçëåêôñéêüòIóïçëåêôñéêüòåó
ôéáóìüòåóôéáóìüòEëáôôïýìåíïEëáôôïýìåíïpIpIÇëåêôïöüñçóçäýïäéáóôÜóåùí
(åýôåñçäéÜóôáóç(åýôåñçäéÜóôáóçSDSSDS--PAGEPAGEEëáôôïýìåíïEëáôôïýìåíïM.B.M.B.
EëáôôïýìåíïEëáôôïýìåíïpIpI
7éóäéÜóôáôççëåêôñïöüñçóçðñùôåúíþí7éóäéÜóôáôççëåêôñïöüñçóçðñùôåúíþíE. coliE.coli
Ðåðôßäéï: Ala-Gly-Asp-Phe-Arg-Gly
Yäñüëõóç óå 6N HCl, óôïõò 110°C ãéá 24h
(éá÷ùñéóìüò ìå éïíôïáíôáëëáêôéêÞ ÷ñùìáôïãñáößá
Aíß÷íåõóç ìå íéíõäñßíç Þ öèïñåóêáìßíç
Ðñïóäéïñéóìüò óýóôáóçò óå áìéíïîÝá
Íéíõäñßíç Öèïñåóêáìßíç Áìéíï-ðáñÜãùãï
×ñùìáôïãñáöéêÞ Ýêëïõóç ðåðôéäéêïý õäñïëýìáôïò
×ñùìáôïãñáöéêÞ Ýêëïõóç ìßãìáôïò ðñüôõðùí áìéíïîÝùí
¼ãêïò Ýêëïõóçò
Áðïññüöçóç
pH 3.25
0.2 M êéôñéêü íÜôñéï
pH 4.25
0.2 M êéôñéêü íÜôñéï
pH 5.28
0.35 M êéôñéêü íÜôñéï
(Ala, Arg, Asp, Gly2, Phe)
O2N
NO2
F
NH2
CH
R1
C
O
N
H
CH
R2
C
O
N
H
CH
R3
C
O
+ O
NH
CH
R1
C
O
N
H
CH
R2
C
O
N
H
CH
R3
C
O
O2N O
NO2
:Öèïñéïäéíéôñïâåíæüëéï Tñéðåðôßäéï HF
Aíåýñåóç áìéíïôåëéêïý áìéíïîÝïò I
NH CH
R1
C
O
O2N
NO2
O
NH3
+
CH
R2
C
O
O
NH3
+
CH
R3
C
O
O
+ +
¼îéíç Yäñüëõóç
(6N HCl, 100°C, 24h)
DNP-áìéíïîý
(äéíéôñïöáéíõëéùìÝíï áìéíïîý)
Eëåýèåñá áìéíïîÝá
7éá÷ùñéóìüò êáé
ôáõôïðïßçóç ìå
÷ñùìáôïãñáößá ëåðôÞò
óôéâÜäáò
N
CH3H3C
S
OO
Cl
H2N
H R1 H
N
O R2 H
O
N
H
H R3 H
N
O
N
CH3H3C
S OO
HN
H R1 H
N
O R2 H
O
N
H
H R3 H
N
O
ÐïëõðåðôßäéïN-Dansyl ðåðôßäéïAíåýñåóçáìéíïôåëéêïýáìéíïîÝïòII
N
CH3H3C
S
O
O N
H
R1
C
H
COOH
H3
N R
3
H
COOH C+H3
N R
2
H
COOH C+
Dansyl ÷ëùñßäéïN-Dansyl áìéíïîýEëåýèåñááìéíïîÝáYäñüëõóç+ +
7éìåèõëáìéíï-
íáöèïëïóïõëöïíõëï-
÷ëùñßäéïXñùìáôïãñáöéêüòðñïóäéïñéóìüòN
CH3H3C
S
OO
Cl
H2N
H R1 H
N
O R2 H
O
N
H
H R3 H
N
O
N
CH3H3C
S OO
HN
H R1 H
N
O R2 H
O
N
H
H R3 H
N
O
ÐïëõðåðôßäéïN-Dansyl ðåðôßäéïAíåýñåóçáìéíïôåëéêïýáìéíïîÝïòII
N
CH3H3C
S
O
O N
H
R1
C
H
COOH
H3
N R
3
H
COOH C+H3
N R
2
H
COOH C+
Dansyl ÷ëùñßäéïN-Dansyl áìéíïîýEëåýèåñááìéíïîÝáYäñüëõóç+ +
7éìåèõëáìéíï-
íáöèïëïóïõëöïíõëï-
÷ëùñßäéïXñùìáôïãñáöéêüòðñïóäéïñéóìüò
O R O OR NH
C
O
N
H
C
CH2
H
CC
O
N
H H
C
OR
CH2
S
CH3
CH2N
H
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CH3 SCN
+C
O
N
H
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H
C
O
CH2
O
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(éÜóðáóçðïëõðåðôéäéêþíáëõóßäùí(éÜóðáóçðïëõðåðôéäéêþíáëõóßäùíTñõøßíçXõìïôñõøßíçC
O
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H H
C
OR
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+
NH
NH3C
+
NH(CH2)ÞÞÞLys Arg
Trp
Phe Tyr
OH
N
H
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C
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H
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OR
C
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H
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N
H H
C
OR
NH3(CH2)4
+
NH
NH3C
+
NH(CH2)ÞÞÞLys Arg
Trp
Phe Tyr
OH
N
H
CH2
Aíåýñåóç
äéóïõëöéäéêþí
äåóìþí

ÝêèåóçóåÝêèåóçóåHëåêôñïöüñçóçóåðñþôçäéÜóôáóçHëåêôñïöüñçóçóåðñþôçäéÜóôáóçHëåêôñïö
üñçóçìåôÜáðüÝHëåêôñïöüñçóçìåôÜáðüÝõðåñìçñìõãêéêïîýõðåñìçñìõãêéêüïîý
NH2
CHR1
N
C
S
Öáéíõëéóïèåéïêõáíéêü+
N
CHR1
C O
NH
NH
C S
H
N
C S
NH
C
C
R1
H
O
ÖáéíõëèåéïûäáíôïúíéêüðáñÜãùãïáìéíïôåëéêïýáìéíïîÝïò-
XñùìáôïãñáöéêüòXñùìáôïãñáöéêüòäéá÷ùñéóìüòêáéäéá÷ùñéóìüòêáéôáõôïðïßçóçôáõôïðïßçóç
AíåýñåóçðñùôïôáãïýòäïìÞòêáôÜEdman (I)
CHR1
C O
N
CHR2
C O
H
N
CHR3
C O
H
CHR2
C O
N
CHR3
C O
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C O
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CHR3
C O
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N
CHR1
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NH
C S
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C S
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ÖáéíõëèåéïûäáíôïúíéêüðáñÜãùãïáìéíïôåëéêïýáìéíïîÝïò-
XñùìáôïãñáöéêüòXñùìáôïãñáöéêüòäéá÷ùñéóìüòêáéäéá÷ùñéóìüòêáéôáõôïðïßçóçôáõôïðïßçóç
AíåýñåóçðñùôïôáãïýòäïìÞòêáôÜEdman (I)
CHR1
C O
N
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SS
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B
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-
SO3
-
SO3
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SO3 SO3
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SO3 SO3
3
-
Xõìïôñõøßíç( )Tñõøßíç( )
IíóïõëßíçSO3
-
GI
F
SO3
-
FVNQHLCGSHLVEALY
-
Ðñïóäéïñéóìüò
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YTPKA
LVCGERGFF
FVNQHLCGSHLVEALYLVCGER
SO3
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-
FVNQHLCGSHLVEALY
SO3
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SO3
-
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SO3
-SO3
-
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ÖáóìáôïìåôñßáìÜæáò(MALDI-TOF)
Matrix-assisted laser desorption ionization -time of flight
Åêñüöçóç-éïíôéóìüòáðüìÞôñáìÝóùëÝéæåñ--÷ñüíïòðôÞóçòMatrix-assisted laser desorpti
on ionization time of flight
åêñüöçóç-éïíôéóìüòáðüìÞôñáìÝóùëÝéæåñ ÷ñüíïòðôÞóçòÖáóìáôïìåôñßáìÜæáò(MALDI-TOF)
Matrix-assisted laser desorption ionization -time of flight
Åêñüöçóç-éïíôéóìüòáðüìÞôñáìÝóùëÝéæåñ--÷ñüíïòðôÞóçòMatrix-assisted laser desorpti
on ionization time of flight
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ÁðïôýðùóçðåðôéäéêÞòìÜæáò(peptide mass fingerprinting)
ÅêôïìÞðñùôåÀíçòáðüðçêôÞçëåêôñïöüñçóçòÅðþáóçìåôñõøßíçêáéìÝôñçóççòìÜæáòôùíðåðôéäßù
íìåöáóìáôïìåôñßáìÜæáòMALDI-TOF
ÓõëëïãÞðñùôåÀíçòáðüóôÞëç÷ñùìáôïãñáößáòÐáñáãùãÞðåðôéäßùíìååðþáóçìåôñõøßíçöáóìáôïì
åôñßáìÜæáòMALDI TOF
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ðïóüôçôáÓýãêñéóçôéìþíìåáíôßóôïé÷åòðåðôéäßùíìåãíùóôÞáëëçëïõ÷ßááìéíïîÝùíêáôáôåèçìÝ
íùíóåâÜóåéòäåäïìÝíùíÔáõôïðïßçóçêáéáðïìüíùóçôïõáôßóôïé÷ïõãïíéäßïõ1çöáóìáôïìåôñßáì
Üæáò-
ðñïóäéïñéóìüòìÜæáòðåðôéäßùí
7éÜóðáóçðåðôéäéêþíäåóìþíãéáêÜèåðåðôßäéï2çöáóìáôïìåôñßáìÜæáò-
ðñïóäéïñéóìüòôÞòìÜæáòôùííÝùíèñáõóìÜôùíðïóüôçôám/z (ëüãïòìÜæáòðñïòöïñôßï)
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ÇðáñáãùãÞìïíïêëùíéêþíáíôéóùìÜôùíåðéôõã÷Üíåôáéìåôç÷ñÞóçõâñéäùìÜôùí. Ôáõâñéäþìáôáð
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OXHMEIA, TOMOÓI ÐANEÐIÓTHMIAKEÓEK7OÓEIÓKPHTHÓÐáñáãùãÞìïíïêëùíéêþíáíôéóùìÜôùí
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Western

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ïíáíôßóùìáEðþáóçìåäåõôåñåýïíáíôßóùìáóõíäåäåìÝíïåÝíæõìïóõíäåäåìÝíïìåÝíæõìïÐñïóèÞê
çõðïóôñþìáôïò
Elisa-enzyme linked immunosorbent assay
Þ áëëéþò åíæõµï-óõíäåäåµÝíç µÝôñçóç áíïóïðñïóñüöçóçò
Þáëëéþò Þáëëéþò åíæõìïåíæõìï--óõíäåäåìÝíçìÝôñçóçáóíïíóïóðñðïóïñüñöçöóçóòõíäåäåìÝíçì
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Elisa

¸êðëõóç¸êðëõóç¸êðëõóç¸êðëõóç¸êðëõóç¸êðëõóçÐçãáäÐçãáäÜêéÜêéêáëõììÝíïìåêáëõììÝíïìå
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Çôá÷ýôçôáðáñáãùãÞò÷ñþìáôïòÇôá÷ýôçôáðáñáãùãÞò÷ñþìáôïòåßíáéáíÜëïãçðñïòôïðïóüôïýåßí
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ãçðñïòôïðïóüôïýáíôéãüíïõðïóüôïýáíôéãüíïõ
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