UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Y FARMACIA

COMPARACIN DEL MTODO DE CROMATOGRAFA LQUIDA

DE ALTA RESOLUCIN (HPLC) Y EL MTODO DE TITULACIN
POTENCIOMTRICA CIDO-BASE PARA LA CUANTIFICACIN
DE ALENDRONATO UTILIZADOS EN EL LABORATORIO
NACIONAL DE SALUD

MARILYN DEL ROSARIO VALDS PREZ

QUMICO FARMACUTICO
Guatemala, Marzo del 2006.

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Y FARMACIA

COMPARACIN DEL MTODO DE CROMATOGRAFA LQUIDA

DE ALTA RESOLUCIN (HPLC) Y EL MTODO DE TITULACIN
POTENCIOMTRICA CIDO-BASE PARA LA CUANTIFICACIN
DE ALENDRONATO UTILIZADOS EN EL LABORATORIO
NACIONAL DE SALUD

INFORME FINAL DE TESIS

Presentado por:
MARILYN DEL ROSARIO VALDS PREZ
Estudiante de la carrera de
QUMICO FARMACUTICO
Guatemala, Marzo del 2006.

NDICE

TEMA

Pag.

1. RESUMEN---------------------------------------------------------------------

2. INTRODUCCIN-------------------------------------------------------------

3. ANTECEDENTES------------------------------------------------------------

4. JUSTIFICACIN-------------------------------------------------------------

14

5. OBJETIVOS-------------------------------------------------------------------

15

6. HIPTESIS--------------------------------------------------------------------

16

7. MATERIALES Y MTODOS----------------------------------------------

17

8. RESULTADOS---------------------------------------------------------------

29

9. DISCUSIN DE RESULTADOS------------------------------------------

35

10. CONCLUSIONES------------------------------------------------------------

37

11. RECOMENDACIONES-----------------------------------------------------

38

12. EFERENCIAS BIBLIOGRFICAS---------------------------------------

39

13. ANEXOS-----------------------------------------------------------------------

42

1. RESUMEN
El presente trabajo de investigacin compar los mtodos de titulacin potenciomtrica
cido-base y la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC) utilizados para la
cuantificacin de alendronato de sodio, mtodos utilizados en el Laboratorio Nacional de
Salud.

Para la comparacin se evalu el tiempo, costos, precisin, exactitud y la

concordancia entre ambos mtodos analticos.

En el trabajo se analiza una muestra homognea de tabletas de Alendronato de sodio, a
la cual se le cuantifica el principio activo por medio de los mtodos de titulacin
potenciomtrica cido-base y HPLC. Los anlisis se llevan a cabo en la Unidad de FsicoQumico de Medicamentos del Laboratorio Nacional de Salud.
Adems, se determina la precisin, exactitud, concordancia, costo y tiempo de los
mtodos utilizando como medida estadstica el coeficiente de varianza, coeficiente de
correlacin y el coeficiente de concordancia o correlacin intraclase (Rc).

Entre los

resultados se encontr una mayor precisin para el mtodo de titulacin potenciomtrica y

no existe diferencia significativa para la exactitud de ambos mtodos;

tambin se

determin que ambos mtodos son comparables al encontrarse un Rc = 0.82.

Con

respecto a tiempo y costo es preferible utilizar el mtodo de titulacin potenciomtrica ante

el de HPLC, por presentar la ventaja comparativa de ser tres veces ms econmico que con
el HPLC. Por lo que segn los resultados encontrados ambos mtodos son equivalentes y
sustituibles uno con otro al utilizarse para la cuantificacin de Alendronato en tabletas.

2. INTRODUCCIN

Los bisfosfonatos se conocen desde hace ms de 100 aos, pero slo en la ltima
dcada se ha demostrado un efecto benfico en el tratamiento de la osteoporosis. Son
sustancias anlogas al pirofosfato y tienen una estructura caracterstica, P - C P, que les
permite adherirse a los cristales de hidroxiapatita; por ello, en la actualidad son
medicamentos utilizados para combatir la osteoporosis.
Recientemente se ha introducido, adems del anterior, un nuevo bisfosfonato, que es
un aminofosfonato 100 veces ms potente y menos txico que el Etidronato y que no
interfiere con la mineralizacin sea en dosis teraputicas; es el Alendronato de Sodio.
Para el control de calidad fsico-qumico del Alendronato, especialmente la
cuantificacin de ste principio activo en la forma de tabletas, el Laboratorio Nacional de
Salud (LNS) utiliza la metodologa de titulacin cido-base, la cual es una metodologa
validada, sin embargo, actualmente se est utilizando un nuevo mtodo, aplicado a la
cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC), de la cual se carecen de datos analticos
comparativos de otros anlisis que se realicen en otros laboratorios y que sirvan para
comparar las ventajas y desventajas de los resultados que se obtienen en ambos. Es hasta
el ao 2,005 que la Farmacopea Estadounidense (USP XXVIII) publica la monografa
oficial del cido Alendrnico y del Alendronato de Sodio en tabletas (que ser oficial en
julio del 2,006), que es la forma farmacutica ms comercializada y pueda tenerse un
mtodo de referencia.

3. ANTECEDENTES
3.1 BISFOSFONATOS:
Los bisfosfonatos son anlogos del pirofosfato, en los cuales el enlace P-O-P ha
sido reemplazado con un enlace P-C-P no hidrolizable por las fosfatasas.

stos

retardan la formacin y disolucin de cristales de hidroxiapatita dentro y fuera del

sistema esqueltico del ser humano.
Los principales bisfosfonatos aprobados en E.E.U.U. para uso clnico son: El
etidronato de sodio (bisfosfonato de primera generacin), risedronato, tilodronato y
Alendronato de sodio (bisfosfonato de segunda generacin) (1, 2 y 3).

Bisfosfonatos y su Potencia
Bisfosfonato

R1

R2

Potencia

Clodronato

Cl

Cl

10

Etidronato

OH

CH3

Pamidronato

OH

(CH2)2NH2

Alendronato

OH

(CH2)3NH2

Neridronato

OH

(CH2)5NH2

Olpadronato

OH

(CH2)2N(CH3)2

>100-<1000

Ibandronato

OH

(CH2)2N(CH3)(CH2)4CH3

>1000->10000

Risedronato

OH

CH2-3-piridina

>1000-<10000

Zolendronato

OH

CH2-imidazol

>10000

>100-<1000
100

Estructura qumica del cido pirofosfrico

3.2

ALENDRONATO:
3.2.1 PROPIEDADES FARMACOLGICAS:
El Alendronato es un bisfosfonato de segunda generacin, primer frmaco
que no slo previene la prdida de calcio en el hueso, sino que origina su
endurecimiento. Se trata de un potente inhibidor de la resorcin sea, pero a
diferencia del etidronato

(bisfosfonato de la primera

generacin)

no inhibe la mineralizacin sea.

En el hombre, una dosis oral de 10 mg de Alendronato es tan eficaz como
la dosis de 1500 mg de Etidronato, siendo aquel de 100 a 1000 veces ms
potente que ste; a la vez, reduce la hipercalcemia en las enfermedades seas
tumorales, osteoporosis, etctera

(1 y 20)

3.2.1.1 Mecanismo de accin:

Acta igual que los dems bisfosfonatos. Al unirse a las sales de
calcio, el Alendronato bloquea la transformacin de fosfato clcico a
hidroxiapatita y, por lo tanto, inhibe la formacin, agregacin y
disolucin de cristales de esta ltima sustancia en el hueso.

Mientras

que la inhibicin de los cristales de hidroxiapatita puede explicar los

efectos del frmaco sobre la inhibicin de la mineralizacin sea
observada en dosis altas, no explica sus efectos sobre la resorcin sea.

No se conoce el mecanismo por el cual los bisfosfonatos inhiben esta

resorcin (20).
3.2.1.2 Farmacocintica:
El Alendronato se absorbe poco (slo un 7 %) por la va oral; su
absorcin se reduce an ms al ingerirlo con los alimentos,
especialmente con aquellos que

contienen calcio u otros cationes

polivalentes (calcio, magnesio y otros).

Tiene mucha afinidad por los

huesos y se retiene en el cuerpo por perodos largos.

cambios en la orina.

Se excreta sin

Se une en un 78% aproximadamente a las

protenas del plasma (3 y 20).

3.2.1.3 Usos y Administracin:
Se utiliza en las siguientes patologas:

Neoplasma maligno de los huesos.

Hiperparatiroidismo.

Osteoporosis

(tratamiento

prevencin

en

mujeres

post-

menopusicas).

Polimiositis y dermatomiositis.
Su administracin puede ser oral o intravenosa.

3.2.1.4 Posologa:
La dosis recomendada es de 10 mg una vez al da para mujeres y
hombres.

Las mujeres posmenopusicas deben tomar una dosis nica

semanal de 70 mg para el tratamiento de osteoporosis y como profilaxis

de 35 mg semanal.

Para adultos con enfermedad de Paget en los

huesos, la dosis recomendada es de 40 mg diarios por 6 meses y el

tratamiento puede repetirse en un lapso de tiempo no mayor de seis
meses (3).
3.2.1.5 Efectos Adversos:

Irritacin local de la mucosa de la parte superior del aparato

digestivo (esofagitis y lceras o erosiones esofgicas).

3.2.1.6 Interacciones:

La absorcin oral del Alendronato puede ser nula si el frmaco es

administrado dentro de las dos horas siguientes al desayuno.
Tan slo un zumo de naranja o un caf pueden afectar la
absorcin del Alendronato.

Por lo menos hay que dejar que transcurran 30 minutos antes de

administrar un segundo frmaco o un anticido.

La administracin concomitante de Alendronato con suplementos

vitamnicos, minerales o medicamentos que contengan sales de
calcio, hierro, aluminio o magnesio, interfieren con la absorcin
oral del frmaco.

Personas que consumen medicamentos antagonistas H2 son ms

propensos a sufrir de los efectos adversos (20).

3.2.1.7 Contraindicaciones:

Anormalidades en el esfago, como estenosis, acalasia u otra

que retrase el vaciamiento de este conducto.

Imposibilidad de permanecer en posicin sentada erguida o en

bipedestacin durante al menos 30 minutos.

Hipersensibilidad a cualquier componente del producto.

Hipocalcemia y en pacientes con aclaramiento de creatinina <35

ml/min (4).

No en nios con hipocalcemia (20).

No administrar a embarazadas (20).

3.2.1.8 Presentaciones:

Tabletas de 5, 10, 35 y 70 mg.

Solucin inyectable de 70 mg.

3.2.1.9 Sobredosificacin:

Tras la administracin de una dosis oral nica, se apreci una

letalidad significativa en ratas y ratones hembras al aplicar 552

mg/kg (3.256 mg/m2) y 966 mg/kg (2.898 mg/m2) (equivalentes

a dosis orales humanas de 27.600 y 48.300 mg), respectivamente
(20)

3.2.2

PROPIEDADES FSICO-QUMICAS DEL ALENDRONATO:

3.2.2.1 cido Alendrnico:
Nombre qumico:

cido Aminohidroxibutiliden-difosfnico.

Frmula molecular:

C4H13NO7P2.

3.2.2.2 Alendronato de Sodio:

Nombre Qumico:

(4- amino-1 hidroxibutilidene) difosfonato

trihidrato.
Frmula molecular:

C4H12NNaO7P2. 3H2O.

Peso molecular:

325.1 g/mol.

Caractersticas fsicas:

Polvo fino blanco, soluble en agua, insoluble

en diclorometano, muy poco soluble en alcohol metlico. Una solucin

al 1% en agua tiene un pH de 4-5
3.3

(5)

REACTIVOS DE DERIVATIZACIN:
La derivatizacin puede ser llevada a cabo antes de la separacin. Debe ocurrir
cuantitativamente para producir productos sencillos para cada aminocido, el reactivo
no debe interferir. Es probable que la derivatizacin genere productos que son ms
parecidos el uno al otro; de cualquier modo, la alta selectividad de separacin de los
sistemas cromatogrficos implica que raramente haya problemas. La derivatizacin
precolumna puede ser llevada a cabo automticamente justo antes de la separacin.
La derivatizacin tras la separacin requiere, en general, una complejidad
instrumental mayor.

Los instrumentos comerciales a menudo necesitan ser

optimizados para alcanzar sensibilidad de deteccin ms alta (23).

3.3.1

9-Fluoroenilmetil cloroformato (FMOC-Cl):

El FMOC-Cl reacciona con grupos amino para formar derivados
carbamados altamente fluorescentes y estables. Este agente altamente reactivo,
originalmente y todava usado como grupo amino protector en sntesis de
pptidos, fue aplicado como un agente derivatizante en precolumna para anlisis
de aminocidos.

El FMOC-Cl reacciona con todos los aminocidos a pH

alcalino y temperatura ambiente para producir derivados aminoacdicos

altamente estables.
Durante la reaccin con FMOC-Cl, los productos de hidrlisis del
reactivo que se forman tienen fluorescencia parecida a la de los derivados
aminoacdicos. Estos productos interfieren en la separacin por cromatografa
de fase reversa a menos que sean eliminados por el disolvente orgnico de
extraccin, antes de aplicar la muestra a la columna de cromatografa de fase
reversa. Una versin automatizada de este procedimiento de derivatizacin ha
sido desarrollada y comercializada.
Betnr y Foldi solucionaron el problema de las interferencias por la
elucin de grandes picos de FMOC-Cl y sus productos de hidrlisis, FMOCOH, que son eludos en la misma regin cromatogrfica que muchos de los
aminocidos FMOC, por derivatizacin del volumen de exceso FMOC-Cl con
una amina hidrofbica.

El derivado resultante es eludo ms tarde en el

cromatograma despus de todos los aminocidos FMOC (22 y 25).

3.4

CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA RESOLUCIN:

En la actualidad la cromatografa liquida de alta resolucin (HPLC) ha llegado
a ser una de las tcnicas del laboratorio moderno ms importantes como herramienta
analtica para separar y detectar compuestos qumicos, utilizada en una diversidad de

campos.

Da a da aumentan los requerimientos de confiabilidad de los datos

analticos y de eficiencia en el flujo de trabajo de laboratorio, para un desarrollo ms

rpido de nuevas drogas,

mejorar la seguridad de los alimentos y cumplir con

estndares ms altos en las regulaciones.

El HPLC no se encuentra limitado por la volatilidad o la estabilidad trmica de la
muestra; es capaz de separar macromolculas y especies inicas, productos naturales
lbiles, materiales polimricos y una gran variedad de otros grupos polifuncionales de
alto peso molecular.

La separacin cromatogrfica en HPLC es el resultado de las

interacciones especficas entre las molculas de la muestra con ambas fases, mvil y
estacionaria.

Tales interacciones esencialmente no existen en la fase mvil para la

cromatografa de gases.

Ofrece una gran variedad de fases estacionarias, lo que

permite una mayor gama de estas interacciones selectivas y ms posibilidades para la

separacin (6 y 21).
Las razones de la popularidad de esta tcnica son su sensibilidad, fcil
adaptacin a las determinaciones cuantitativas exactas, idoneidad para la separacin
de especies no voltiles o termolbiles y sobre todo, su gran aplicabilidad a sustancias
que son de primordial inters en la industria, en muchos campos de la ciencia y para
la sociedad en general.

Algunos ejemplos de estos materiales incluyen los

aminocidos, protenas, cidos nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, drogas,

terpenoides, plaguicidas, antibiticos esteroidales, especies organometlicas y una
cierta variedad de sustancias inorgnicas (7).
3.4.1 Mtodos de Filtracin de Solventes en HPLC
Hay tres mtodos comunes que se utilizan hoy para la filtracin previa de
los solventes en HPLC :
Filtro a la entrada del solvente
Filtracin al vaco
Filtracin en lnea

3.4.2 Mtodos de Desgasificacin de solventes en HPLC

Existen cuatro mtodos comunes usados para desgasificar solventes en
HPLC previos a su uso:
Sonificacin
Burbujear Helio
Desgasificacin electrnica en la lnea del flujo
3.4.3 Los tipos de detectores en HPLC se clasifican en:

Detectores basados en una propiedad de la fase mvil. Ejemplo:

Detector de ndice de Refraccin

Detectores basados en una propiedad de la sustancia a separar. Ejemplo:

Detector de Fluorescencia, Detector Ultravioleta (Diodos).

3.4.4 Derivatizacin
Existen dos tendencias:

Pre-Columna.

Post-Columna.

3.4.5 Problemas ms comunes encontrados en HPLC:

Esta es una lista de los problemas normalmente encontrados en HPLC,
sus posibles causas y cmo solucionarlos.

Presin alta.

Prdida de la resolucin.

Picos hendidos.

Variacin en los tiempos de retencin.

Variaciones de la lnea base.

3.5

Lnea base con mucho ruido.

Picos falsos (Detectores Electroqumicos y de Fluorescencia)

Baja o ninguna presin (21).

TITULACIN POTENCIOMTRICA CIDO-BASE:

La titulacin es un mtodo volumtrico que lleva a cabo una reaccin cidobase, utilizando para ello una disolucin patrn, un potencimetro con medidor de
voltaje y un indicador cido base para que la determinacin del punto final sea ms
exacto.
Este mtodo volumtrico analiza la cantidad de sustancia de forma indirecta, ya
que mide el volumen de la disolucin patrn que tiene una concentracin conocida
para que reaccione con el constituyente buscado.

A ste proceso se le denomina

valoracin.
El cido (en agua) reacciona con una base hidrxido de sodio (NaOH) solucin
valorada en agua, como sigue:
cido-H+ (ac) + NaOH (ac)

Cmo ocurre?

CH3COONa (ac) + H2O (l)

Primero, una cierta cantidad

del cido es pipeteado

volumetricamente y llevado al interior de un matraz erlenmeyer.

Luego, desde una

bureta, es adicionada lentamente una solucin de hidrxido de sodio de normalidad

conocida.

Reaccionando inmediatamente gotas de hidrxido de sodio con cido de

acuerdo a la reaccin. La titulacin procede lentamente hasta el punto donde todo el

cido ha reaccionado.

A esto se le llama punto equivalencia.

El punto de equivalencia puede ser apreciado por efecto de un color llamado

punto final.

El punto final de la titulacin es observado de incoloro a rosa

(fenolftalena). Para notar el efecto del color se adiciona gotas de fenolftalena antes

de la titulacin. La fenolftalena es uno de muchos indicadores cidobase.

Los

indicadores cido-base tienen la especial propiedad para formar compuestos de

diferentes colores, dependiendo si es un reactivo cido o bsico.

Es suficiente

conocer que la fenolftalena con NaOH en solucin forma un compuesto prpura.

Fenolftalena (ac) + Base (ac)

Compuesto prpura (solucin rosada)

As, durante la titulacin, el NaOH reacciona primero al cido del matraz.

todo el cido presente reacciona con el NaOH.
tornndose de color rosado.

3.6

Si

Este reacciona con la fenolftalena

Siendo ste un buen indicador para el punto final (8 y 25).

ESTUDIOS PREVIOS:
No se han encontrado estudios referentes propiamente al anlisis cuantitativo de
Alendronato; en comparacin de mtodos, se citan los siguientes:
3.6.1

Santisteban, 2003, realiz el estudio Evaluacin de la Eficiencia de los

Mtodos de Espectrofotometra Infrarrojo y HPLC para la Cuantificacin de
Tiamina, Piridoxina y Cianocobalamina en Soluciones Inyectables.

En ste

trabajo se evaluaron los costos, tiempo y consumo de reactivos necesarios para

la realizacin de ambos mtodos, cuando se analizan muestras de stas
vitaminas en soluciones inyectables (9).
3.6.2

Mata,

2003,

realiz

el

estudio

Comparacin

del

mtodo

espectrofotomtrico de fosfomolibdovanadato y el mtodo de titulacin

potenciomtrica cido base para la cuantificacin de fosfatos en detergentes en
polvo.

Donde se comparan y demuestran las ventajas que presenta el uno

sobre el otro con respecto a precisin, confiabilidad, reproducibilidad, ahorro de

tiempo y costos (10).

3.6.3 Figueroa, 2000, realiz el estudio Comparacin de la reproducibilidad de dos

mtodos para la determinacin de azcares reductores en el jugo de caa de
azcar. Demuestra la importancia de los mtodos comparativos al descubrir
cual de los mtodos es ms reproducible (11).
3.6.4

Cordn, 1995, realiz el estudio Comparacin de dos mtodos alternativos

para la cuantificacin de sodio y potasio en sales de rehidratacin oral,
fabricadas en el laboratorio de produccin de medicamentos (LAPROMED) de
la facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia.

Encontr que para esa

determinacin la fotometra de llama y el electrodo selectivo de iones son

tcnicas equivalentes (12).
3.6.5 Vargas, 1994, realiz el Estudio comparativo de dos mtodos ( mtodo por
cromatografa de gas (CG) y mtodo por electrodo selectivo de flor) para
determinar flor en crema dental.

ste trabajo comprar dos mtodos de

anlisis para determinar flor en cremas dentales por CG (mtodos propuesto

por la Comisin Guatemalteca de Normas) y el mtodo por electrodo selectivo
de flor. Se concluye en que el mtodo de gas es ms preciso que el otro, pero
presentando ambos exactitud aceptable; adems calcul el costo de cada mtodo
en lo que a tiempo y enseres se refiere (13).

4. JUSTIFICACIN
El presente trabajo propone evaluar las ventajas y desventajas en cuanto a tiempo de
anlisis, costos, precisin y exactitud en los resultados del mtodo de titulacin
potenciomtrica cido-base, utilizado de forma ordinaria y eficaz en el Laboratorio
Nacional de Salud (LNS) y compararlo con el mtodo de cromatografa lquida de alta
resolucin (HPLC) que es el mtodo oficial segn la USP XXVIII, utilizando para ello
cierto nmero de anlisis de la misma muestra.
Al culminar el estudio comparativo de ambos mtodos, los resultados de ste
permitirn al LNS, como laboratorio nacional de referencia, utilizar un mtodo analtico
cuantitativo confiable en las muestras de Alendronato que en el futuro se reciban,
obteniendo con ello un respaldo que ampare la utilizacin del mtodo con respecto al otro.

5. OBJETIVOS
4.1

General:
Comparar el mtodo de cromatografa lquida de alta resolucin y el mtodo de
titulacin potenciomtrica cido-base en el anlisis cuantitativo de Alendronato,
en cuanto a ventajas, desventajas, tiempo, costos, precisin y exactitud.

4.2

Especficos:
Evaluar la eficiencia del mtodo de titulacin potenciomtrica cido-base frente
a la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC) en la cuantificacin de
Alendronato en tabletas.

Establecer tiempos reales de anlisis al utilizar ambos mtodos analticos.

Calcular los costos de anlisis de ambos mtodos analticos.

Determinar la precisin del HPLC y la titulacin potenciomtrica cido-base en

la cuantificacin de Alendronato.

Evaluar la exactitud de los resultados obtenidos al implementar ambos mtodos

a las muestras de Alendronato.

Comparar los datos obtenidos de ambos mtodos y especificar ventajas y

desventajas de cada uno.

6. HIPTESIS
El anlisis cuantitativo de Alendronato en tabletas por el mtodo de titulacin
potenciomtrica cido-base reduce el tiempo empleado en el anlisis, baja los costos de
operacin, es preciso y exacto en los resultados, por lo que genera resultados confiables
como los del mtodo de cromatografa lquida de alta resolucin.

7. MATERIALES Y MTODOS
7.1

UNIVERSO DE TRABAJO Y MUESTRA:

Se trabaj en la unidad de Fsico-Qumico de Medicamentos del Laboratorio
Nacional de Salud, utilizando una muestra homognea de tabletas de Alendronato
luego de su anlisis y con dictamen por parte del Laboratorio Nacional de Salud.
El mtodo de anlisis fue la Titulacin cido-Base y la Cromatografa Lquida de
Alta Resolucin.

7.2

RECURSOS:
7.2.1 Recursos Humanos:

Autor:

Br. Marilyn del Rosario Valds Prez.

Asesora:

Licda. Julia Amparo Garca Bolaos.

Co-asesora:

Licda. Millie Elizabeth Cruz Aguilar.

7.2.2 Recursos Institucionales:

Biblioteca Central de la Universidad de San Carlos de Guatemala.

Biblioteca de la Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia de la

Universidad de San Carlos de Guatemala.

Biblioteca de la Universidad del Valle de Guatemala.

Biblioteca de la Universidad Francisco Marroqun.

Centro Guatemalteco de Informacin de Medicamentos (CEGIMED).

Seccin de Fsico-Qumico de Medicamentos del Laboratorio Nacional de

Salud.

7.2.3 Recursos Materiales:

7.2.3.1

Equipo:

Cromatgrafo Lquido de Alta Resolucin, Hewlett Packar, Agilent,

serie 1100 con detector de diodos DE33220791.

7.2.3.2

Impresora Hewlett Packard Laser Jet 1100.

Balanza analtica Metler Toledo, AE260 Delta Range

Ultrasonido Branson 5510.

Bomba de Vaco Millipore 18739

Computadora Hewlett Packard, vectra VE.

Sostenedor de Buretas con base de porcelana.

Centrfuga.

Potencimetro Termo Orion model 410A+.

Materiales:
Columna para HPLC L-21, de 250 mm de largo y 4.1
diametro.

Filtros cartucho de 0.45 m.

Filtros Wathman No. 5.

Papel pH.

Esptula

Varilla de agitacin.

Membranas hidroflicas 0.45 m.

Papel bond para impresora.

7.2.3.3

Cristalera:

Balones de aforo de 5, 10, 25, 50, 100 y 1000 mL.

Erlenmeyer de 250, 500 y 1000 mL.

Beacker de 400 mL.

m de

Pipetas volumtricas de 1, 2, 4, 5, 10 y 25 mL.

Probetas de 50,100 y 1000 mL.

Kitazato de 1000 mL.

Bureta de 10 mL.

Morteros con pistilo de porcelana.

Tubos de polipropileno para centrfuga de 50 mL.

7.2.3.4

7.3

Reactivos:

Agua desmineralizada.

Hidrxido de Sodio Titrisol (NaOH) 0.01 N.

Indicador Fenolftalena TS.

Agua grado HPLC.

Acetonitrilo grado HPLC.

Citrato de sodio dihidratado (C6H5Na3O7.2H2O).

Fosfato de sodio dibsico anhidro (Na2HPO4).

cido fosfrico (H3PO4) al 85 %.

9-Fluorenilmetil cloroformato (C15H11ClO2)= FMOC.

Borato de Sodio decahidratado (Na2B4O7.10 H2O).

Metanol grado HPLC (CH3OH).

Cloruro de metileno (CH2Cl2).

Estndar de Alendronato.

PROCEDIMIENTO:
7.3.1

Seleccin de la Muestra y Recoleccin de Datos:

Se seleccion una muestra homognea de tabletas de Alendronato las
cuales tenan igual fecha de manufactura, vencimiento y nmero de lote a la vez
que se dispuso de un nmero de tabletas suficiente para poder realizar la

cantidad de anlisis necesarios para que el estudio presentara significancia

estadstica.

7.3.2

Anlisis de Muestra:
7.3.2.1

Mtodo de Cromatografa Lquida de Alta Resolucin (HPLC): (17)

7.3.2.1.1 Se prepararon las siguientes soluciones:
a.

9-Fluorenilmetil cloroformato al 0.1%:

- Pesar 25 mg. De FMOC en un matraz volumtrico seco
de 25 mL.
- Disolver y diluir con acetonitrilo hasta el aforo.
- Mezclar bien.

b. Buffer de borato de sodio 0.1 M (pH original ~ 9.3):

- Disolver 38.1 g. de borato de sodio decahidratado en
900 mL de agua aproximadamente.
- Diluir con agua hasta 1000 mL. y mezclar bien.
c. Diluyente:
Solucin

amortiguadora

de

citrato

fosfato

(C6H5Na3O7.2H2O 0.05 M, Na2HPO4 0.05 M, pH 8.0):

- Disolver 14.7 g de citrato de sodio dihidratado y 7.05 g.
de fosfato dibsico de sodio anhidro en 900 mL. de
agua.
- Ajustar el pH a 8.0 con cido fosfrico.
- Diluir con agua hasta 1000 mL y mezclar bien.

d. Citrato de sodio 0.1 M:

- Pesar 29.4 g de citrato de sodio dihidratado en un
recipiente adecuado.
- Disolver en 1000 mL de agua y mezclar bien.
e. Fase Mvil (acetonitrilo:metanol:solucin amortiguadora
de citrato y fosfato, 20:5:75):
Mezclar perfectamente:
- 200 mL. de acetonitrilo
- 50 mL de metanol
- 750 mL de solucin amortiguadora de citrato y fosfato.
7.3.2.1.2 Condiciones cromatogrficas:
Columna:

Empaquetada

L-21,

4.1m

de

tamao de partcula, 250 mm de

largo.
Volumen de inyeccin: 50 l.
Flujo:

1.0 mL./minuto.

Detector:

Absorbancia en UV a 266 nm.

Temperatura:

35 C.

Tiempo de corrida:

10 minutos.

7.3.2.1.3 Preparacin de estndar:

a. Solucin concentrada del estndar:
-

Pesar 19.6 mg del estndar de referencia de

Alendronato de sodio en un matraz volumtrico de 25
mL.

Disolver y diluir con citrato de sodio 0.1 M hasta la

marca del aforo, mezclar bien, para dar una solucin

de 0.784 mg/mL. de Alendronato de sodio en citrato

de sodio 0.1 M.
b. Solucin de estndar al 50%:
-

Preparar una dilucin 1 en 2 de la solucin de trabajo

del estndar en citrato de sodio 0.1 M.

Pipetear volumetricamente 5 mL a un matraz

volumtrico de 10 mL.

Diluir con citrato de sodio 0.1 M hasta aforar, para

dar un concentracin de 0.392 mg/ml.

7.3.2.1.4 Preparacin de la muestra:

a. Solucin madre:
-

Pesar en conjunto 20 tabletas de Alendronato y

calcular el peso promedio.

Triturar en un mortero las tabletas y pesar el

equivalente a 20 mg de Alendronato.

Llevarlos cuantitativamente a un matraz volumtrico

de 25 mL.

Diluir con citrato de sodio 0.1 M hasta la marca del

aforo.

Agitar y sonificar la solucin por 5 minutos.

b. Solucin de trabajo:
-

Tomar una alcuota de 5 mL de la solucin madre a

un matraz volumtrico de 10 mL

Aforar con citrato de sodio 0.1 M, mezclar bien y

filtrar con papel Wathman No.5.

7.3.2.1.5 Derivatizacin de la molcula:

Pipetear a un tubo de centrfuga de polipropileno de 50

mL y en el siguiente orden:

BLANCO

ESTANDAR [ ]

ESTANDAR

MUESTRA

50%

5 mL de agua

5 mL St. [ ]

5 mL St. a 50 5 mL de Sol.
%

madre

5 mL de borato 5 mL de borato 5 mL de borato 5 mL de borato

de sodio

de sodio

de sodio

de sodio

4 mL de FMOC

4 mL de FMOC

4 mL de FMOC

4 mL de FMOC

Mezclar en un agitador de vrtice durante ~ 30 segundos

(la mezcla manual no basta).

Dejar en reposo los tubos a temperatura ambiente durante

25 minutos desde el momento de adicin del reactivo de
FMOC.

Agregar 25 mL de cloruro de metileno, agitar durante 30

a 45 segundos aproximadamente. Aflojar el tapn para
liberar la presin del tubo y volver a apretar el tapn.

Centrifugar durante 10 minutos ( ~ 1500 p.m.).

Trasladar una porcin de la capa acuosa superior a un vial

de muestra para realizar el anlisis por HPLC. Tener
cuidado en no agregar cloruro de metileno residual al vial
para HPLC.

7.3.2.1.6 Adecuacin del sistema y procedimiento:

a. Encender el aparato y esperar a que se estabilice, dejando
correr para ello la fase mvil.
b. Inyectar un blanco que ha sido derivatizado y proceder
con su cromatografa por alrededor de 25 minutos.
c. Inyectar la solucin de trabajo del estndar que ha sido
derivatizada, repetir 5 veces sta inyeccin.
d. Inyectar la solucin estndar al 50% sometida a
derivatizacin. Inyectar por duplicado la solucin de
trabajo de la muestra sometida a derivatizacin.

7.3.2.1.7 Clculos:
(Au)(Ws)(Du)(P)(F)(100) = % de Alendronato (eq. a

Acido Alendrnico.)

(As)(Ds)(N)(LC)
Donde:
Au =

rea del pico de Alendronato en el cromatograma de trabajo

de la muestra.
As =

rea del pico del Alendronato en el cromatograma de trabajo

del estndar.
Ws=

Peso del estndar de referencia de Alendronato de sodio en

mg.
P =

Pureza del estndar de referencia de Alendronato de sodio

expresada como una fraccin decimal.

Du =

Factor de dilucin de la muestra.

Ds. =

Factor de dilucin del estndar.

LC=

Cantidad terica en mg/tableta.

F =

Factor de conversin de la sal de sodio al cido libre = 0.919.

N =

Nmero de tabletas empleado:

Ensayo de muestra compuesta = 10
Uniformidad de contenido = 1.

7.3.2.2

Titulacin Potenciomtrica cido-Base:

7.3.2.2.1 Preparacin de la muestra:
Pesar en conjunto 20 tabletas y calcular el promedio
del peso de una tableta.
7.3.2.2.2

Triturar las tabletas en un mortero.

Valoracin del principio activo:

Pesar el equivalente de 10 mg de Alendronato.
Transferir cuantitativamente a un matraz erlenmeyer de 250
mL, adicionar 50 mL de agua desionizada y sonificar durante
10 minutos, agregar tres gotas de fenolftalena y titular con
solucin de hidrxido de sodio 0.01 N en el potencimetro
hasta que haga el viraje de pH correspondiente. Anotar el
volumen de NaOH gastado. Cada mililitro de hidrxido de
sodio 0.01 N es equivalente a 2.711 mg de alendronato
sdico.

7.3.2.2.3

Realizar un blanco, adicionando 50 mL de agua

desionizada y tres gotas de fenolftalena, titular con solucin
de hidrxido de sodio 0.01 N en el potencimetro hasta que
haga el viraje de pH correspondiente.

Anotar el volumen

gastado de NaOH y realizar los clculos como se indica en el

siguiente inciso.

7.3.2.2.3

Clculos:
% = [(Vmta Vbco)(Eq)(FN)(303.1/325.12)(Pmta)/100].
Donde:
Vmta =

Volumen de NaOH 0.01 N de la muestra.

Vbco =

Volumen de NaOH 0.01 N del blanco.

Eq

Equivalente 2.711 mg/ml.

FN

Factor de normalidad NaOH 0.01 N.

303.1 =

Peso molecular de alendronato base.

325.12 =

Peso molecular de alendronato sdico.

Pmta =

Peso de la muestra en mg.

100

Peso promedio terico.

7.3.3 Diseo Estadstico:

7.3.3.1

Precisin:
Se midi el grado de concordancia entre los valores obtenidos al
aplicar el mtodo analtico a una muestra homognea de concentracin
conocida, establecindola en base a la repetibilidad y reproducibilidad
de los resultados.
7.3.3.1.1 Repetibilidad:
Se determin por el grado de variacin que se obtuvo
al aplicar cada mtodo por el mismo analista. La muestra
homognea se analiz por el mismo analista doce veces; se
calcul la media, desviacin estndar y coeficiente de
varianza.

7.3.3.1.2 Reproducibilidad:
Se determin por el grado de variacin que se obtuvo
en los resultados, al ser aplicados los mtodos por cuatro
analistas diferentes.

Cada analista efectu cuatro veces el

anlisis. La variante en las condiciones de anlisis fue el da

de elaboracin del anlisis.

La reproducibilidad en los

mtodos se determin por la media, desviacin estndar y

coeficiente de varianza.
7.3.3.2

Exactitud:
La muestra homognea fue analizada por ambos mtodos y por el
mismo analista realizando para ello, una curva de calibracin que
incluy

cinco

concentraciones

diferentes,

tomando

como

concentracin al 100% la utilizada para la determinacin de

repetibilidad en la prueba de precisin segn sea el mtodo analtico.
Se determin por el grado de concordancia entre el valor experimental
obtenido por el mtodo instrumental y el valor terico. Los resultados
se analizaron calculando el promedio, desviacin estndar y
coeficiente de correlacin lineal (r) de los porcentajes obtenidos por
ambos mtodos, aceptando como mnimo un r = 0.997 y r2 = 0.995
para ambos mtodos (14, 15 y 16).

7.3.3.3

Prueba de comparacin de mtodos:

Se evaluaron los mtodos por medio del coeficiente de
correlacin intraclase, midiendo la concordancia entre ellos. Donde el
resultado >0.75 se tom como un resultado positivo para la
comparacin de los mtodos y <0.75 negativo para la comparacin. El
coeficiente de correlacin intraclase esta dado por la siguiente frmula:

RC =

SA2 +

SB2

( S A-B )2

SA2 + SB2 ( XA XB )2
Donde:
SA = Desviacin estandar de los resultados obtenidos por el mtodo
de titulacin potenciomtrica.
SB = Desviacin estandar de los resultados obtenidos por el mtodo
de HPLC.
XA =

Promedio de los resultados obtenidos por el mtodo de

titulacin potenciomtrica.

XB = Promedio de los resultados obtenidos por el mtodo de HPLC.

8. RESULTADOS

8.1

PRECISIN
8.1.1 Repetibilidad
Tabla 8.1.1.1 Resultados obtenidos por anlisis de Alendronato por HPLC

MUESTRA
M1
M2
M3
M4
M5
M6
M7
M8
M9
M10
M11
M12

PESO
(g)
0.1009
0.1019
0.1068
0.1001
0.1044
0.1024
0.1004
0.1033
0.1004
0.1034
0.1061
0.1012

5392.33008
5457.06152
5226.91797
4881.98389
5319.80127
5395.98389
5420.27881
5320.52148
5179.08984
5401.65674
5577.31982
5402.47070

Promedio =
Des. St. =
Coef. Var.=

102.2
2.8579
2.7966

REA

PORCENTAJE
(%)
105.1
105.3
96.2
99.7
99.7
103.1
105.3
100.5
100.7
102.5
103.2
104.8

Tabla 8.1.2.1 Resultados obtenidos por anlisis de Alendronato por Titulacin

Potenciomtrica cido-Base.

MUESTRA
M1
M2
M3
M4
M5
M6
M7
M8
M9
M10
M11
M12

PESO
VOLUMEN PORCENTAJE
mL
%
(g)
0.0491
4.15
100.2
0.0508
4.25
99.4
0.0506
4.25
99.7
0.0500
4.25
100.7
0.0500
4.30
102.2
0.0501
4.20
99.5
0.0509
4.35
101.7
0.0509
4.40
102.9
0.0500
4.25
100.9
0.0493
4.25
102.4
0.0498
4.26
101.5
0.0513
4.35
100.9
Promedio =
Desv. St. =
Coef. Var.=

101.0
1.1679
1.1565

8.1.2 Reproducibilidad:
Tabla 8.1.2.1 Resultados obtenidos de anlisis de Alendronato por HPLC

MUESTRA

PESO

M1
M2
M3
M4

REA

0.1016
0.1020
0.1010
0.1005

4989.17676
5341.48828
5030.30176
3945.92285

Promedio =
Des. St. =
Coef. Var.=

98.4
3.3998
3.4554

RESULTADO
96.8
103.2
98.2
95.4

Tabla 8.1.2.2 Resultados obtenidos de anlisis de Alendronato por

Titulacin Potenciomtrica cido-Base

ANALISTA
A-1
A-2
A-3
A-4

PESO
VOLUMEN PORCENTAJE
(g)
(mL)
(%)
0.0509
4.40
110.4
0.0511
4.35
108.6
0.0504
4.35
110.1
0.0502
4.45
113.3
Promedio =
Des. St. =
Coef. Var.=

110.6
1.9471
1.7605

8.2 EXACTITUD:
Tabla 8.2.1 Curva de calibracin del anlisis de estandar de Alendronato por el
mtodo de HPLC

ESTANDAR

REA

St-60 %
St-80 %
St-100 %
St-120 %
St-140 %

547.39
1226.70
1938.47
2525.14
3334.92

CONCENTRACIN
[ mg/ml ]
0.1012
0.2024
0.3036
0.4048
0.5060

0.9991
0.9982

547
1227

r =
r2 =

0.1
0.2

Tabla 8.2.3 Curva de calibracin de estandar de Alendronato por el mtodo de

Titulacin Potenciomtrica cido-Base.

St.
1
2
3
4
5
r =
r2 =

VOLUMEN Cantidad de St.

(mL)
(g)
1.90
5.0440
3.35
10.0880
5.15
15.1320
7.10
20.1760
8.53
25.2200
0.9986
0.9972

547
1227

0
0

8.3 COMPARACIN DE LOS MTODOS:

Tabla 8.3.1 Resultados obtenidos de anlisis de Alendronato por Titulacin
Potenciomtrica cido-Base
RC =

SA2 +

SB2

( S A-B )2

SA2 + SB2 ( XA XB )2
Rc =8.1676
8.1676

+
+

1.3640
1.3640

(2.8561)2
(1.4400)2

6.68
8.09

> 0.75 = MTODOS COMPARABLES

< 0.75 = MTODOS NO COMPARABLES

8.4 TIEMPO
Grfica 8.4.1

Tiempo necesario
Necesario para
para Realizar
Tiempo
realizar la
la
Cuantificacin
de
Alendronato
cuantificacin de Alendronato

Tiempo en Horas

25
20
15
10
5
0
1

10

25

Cantidad de Muestras
HPLC

Titulacin

50

100

0.82532
>0.75

8.5 COSTO
Grfica 8.5.1
COSTOS PARA LA CUANTIFICACIN DE
Costos para la cuantificacin de
ALENDRONATO

Valor Aprox. en Q.

Alendronato

18000
16000
14000
12000
10000
8000
6000
4000
2000
0
1

10

25

Cantidad de Muestras

HPLC

Titulacin

50

100

9. DISCUSIN DE RESULTADOS
En la presente investigacin se compararon los mtodos de cromatografa lquida de
alta resolucin (HPLC) y la titulacin potenciomtrica cido-base, utilizados para el
anlisis qumico cuantitativo de Alendronato; evaluando la precisin, exactitud,
concordancia, tiempo y costo de ambos mtodos.
La precisin de ambos mtodos se determin de acuerdo a la repetibilidad y
reproducibilidad en sus resultados, utilizando como medida estadstica el coeficiente de
varianza resultante del anlisis de ambos mtodos a una muestra homognea.

En los

resultados se muestran los datos de precisin obtenidos en la investigacin donde se

observa que el coeficiente de varianza de los mtodos de titulacin potenciomtrica y
HPLC es de 1.16 y 2.79 para la repetibilidad y de 1.79 y 3.46 para la reproducibilidad,
respectivamente.

Manifestndose un coeficiente de varianza mayor para el mtodo de

HPLC que para la titulacin potenciomtrica, lo que indica que los datos por HPLC tienden
a estar en un rango de valor mayor que para el mtodo potenciomtrico. Cabe mencionar
que estos resultados se deben a que en la realizacin de la cuantificacin de Alendronato
por HPLC aumenta la manipulacin de la muestra por parte del analista, desde el perodo
que se pesa la muestra (y se agregan los reactivos de derivatizacin), hasta que se coloca en
el sistema cromatogrfico; por otro lado, el mtodo potenciomtrico es ms directo y breve
en lo que a obtencin de resultados se refiere.
La exactitud se midi por medio de los factores de correlacin (r), el cual indica que
la proporcin con la que aumentan las concentraciones en un mtodo debe ser directamente
proporcional a la medida de su respuesta. En el caso del HPLC su respuesta se mide por
medio de reas y en el caso de la titulacin por medio de volumen gastado. Se realiz una
curva de calibracin con el estandar de Alendronato para cada mtodo, donde se
compararon los r obtenidos.

El factor de correlacin encontrados para HPLC y

Titulacin fue de 0.999 y 0.998, respectivamente; este dato demuestra que el mtodo de
HPLC es 0.1% ms exacto que el mtodo de Titulacin, pero ambos estn arriba del

mnimo permitido (0.997). Por lo que la Titulacin potenciomtrica presenta exactitud

aceptable para la cuantificacin de Alendronato.
Se midi el coeficiente de correlacin de concordancia o intraclase (Rc) obteniendo
un valor de 0.82532 (tabla 8.3.1), lo cual indica que ambos mtodos son equivalentes,
sustituibles y comparables al ser mayor de 0.75 el valor obtenido. El coeficiente de
correlacin de concordancia se utiliza para comparaciones, ya que da una respuesta a la
reproducibilidad de las medidas de dos variables.
Con respecto al tiempo y nmero de muestras a analizar por ambos mtodos, el
mtodo de titulacin potenciomtrica utiliza el 30 % del tiempo necesario para analizar una
muestra por HPLC y que aunque el nmero de muestras aumente la razn del tiempo se
mantiene constante, por lo que la utilizacin de un equipo cromatogrfico con
automuestreador inclusive, no favorece el tiempo para la obtencin de resultados.
Al evaluar el costo de los mtodos utilizados en el mtodo de HPLC el costo del
anlisis es mayor que en la titulacin potenciomtrica, no tomando en cuenta que la
disponibilidad y mantenimiento del equipo de HPLC es tambin mayor que la de un
potencimetro.

En la grfica 8.5.1 se expone cmo los costos no se compensan al

aumentar el nmero de muestras a 100 y cmo es que el mtodo potenciomtrico se

mantiene en un 30% por debajo de lo que significa utilizar el mtodo de HPLC.
Por lo tanto, el mtodo de titulacin potenciomtrica cido-base demuestra que es
comparable al mtodo de HPLC, presentando el primero mayor ventaja al ser un mtodo
sencillo, directo, de elevada precisin, aceptada exactitud, breve y econmico, por lo que
con el mtodo potenciomtrico se obtienen resultados confiables y equivalentes al HPLC.
Con estos resultados se demuestra que la hiptesis planteada es verdadera, y as se propone
la titulacin potenciomtrica cido-base como un mtodo eficiente para el control de
calidad de Alendronato en tabletas.

10. CONCLUSIONES
10.1

El mtodo de titulacin potenciomtrica cido-base es eficiente para el

anlisis qumico cuantitativo de Alendronato en tabletas a comparacin del
mtodo de cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC).

10.2

La utilizacin de la titulacin potenciomtrica para la cuantificacin de

Alendronato disminuye el tiempo a un 30% del necesario para el mtodo
por HPLC.

10.3

El mtodo de titulacin potenciomtrica cido-base genera menos costos de

anlisis que el generado por el mtodo de HPLC para la cuantificacin de
Alendronato.

10.4

El rango de variabilidad en los resultados para la cuantificacin de

Alendronato es mayor en el mtodo de HPLC que en la titulacin
potenciomtrica, lo que demuestra que el mtodo potenciomtrico es ms
preciso.

10.5

La exactitud de los mtodos de titulacin potenciomtrica y HPLC no tienen

diferencia significativa y cumplen con los lmites mnimos permitidos.

10.6

Los mtodos de titulacin potenciomtrica cido-base y HPLC utilizados

para la cuantificacin de Alendronato de Sodio son comparables,
equivalentes y sustituibles.

10.7

El mtodo de titulacin potenciomtrica cido-base presenta mejores

ventajas en cuanto a tiempo y costo que el de HPLC para el anlisis qumico
cuantitativo de Alendronato.

10.8

Los resultados en el anlisis cuantitativo de Alendronato en tabletas por el

mtodo de titulacin potenciomtrica cido-base son confiables y sustituibles
con los del mtodo de HPLC.

11. RECOMENDACIONES
11.1

Implementar y validar el mtodo de titulacin potenciomtrica cido-base para la

cuantificacin de Alendronato de sodio dentro de la Unidad de Fsico-Qumico de
Medicamentos del Laboratorio Nacional de Salud, como mtodo oficial para ste
principio activo por ser un mtodo comparable al de HPLC y con el cual se obtienen
resultados confiables, rpidos y econmicos.

11.2

Continuar la investigacin en la comparacin de mtodos analticos aplicados a

otros principios activos, ya que permite encontrar alternativas de anlisis ante
metodologas complejas y que proporcionan mejores ventajas sobre costo, tiempo,
exactitud y precisin; sin afectar la calidad de los resultados.

12. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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18. CATLOGO MERCK, Reactivos Productos Qumicos. 2,000. Alemania. Merck
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20. Instituto Qumico Biolgico, OMC, Vademecum, Farmacos de la A a la Z,
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http://www.iqb.es/cbasicas/farma/

21. Red Latinoamericana de Qumica, Cortez Ruben, Cromatografa Lquida de Alta

Eficiencia.

Disponible

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http://latina.chem.cinvestav.mx/RLQ/tutoriales/

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22. Burriel, Oscar, at. ol., Derivatizacin pre-columna frente a post-columna., 2003,
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General, 2004, Espaa. Disponible en:
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25. Qumica Nova Vol. 28, Christian Fernandes; Rodrigo Souza Leite; Fernando Mauro
Lanas, Universidad de Sao Paulo, Brazil, 2005,Bisfosfonatos: Sintesis, Anlisis
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http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S0100-40422005000200019&script=sci_arttext&tlng=pt

en:

13. ANEXOS

ANEXO 1
GRFICA 1.1

CURVA DE CALIBRACIN PARA LA

CUANTIFICACIN DE ALENDRONATO POR "HPLC"
4000.0
3500.0
3000.0
St-60 %

Area

2500.0

St-80 %

2000.0

St-100 %
St-120 %

1500.0

St-140 %

1000.0
500.0
0.0
0.00

0.10

0.20

0.30

0.40

Concentracin en mg/mL

0.50

0.60

GRFICA No. 1.2

CURVA DE CALIBRACIN PARA

LACUANTIFICACIN DE
ALENDRONATO POR TITULACIN
POTENCIOMTRICA

Cantidad de muestra en mg.

30.0
25.0
20.0

St.1

15.0

St.3

St.2
St.4

10.0

St.5

5.0
0.0
0.0

2.0

4.0

6.0

Volumen gastado en mL

8.0

10.0

ANEXO 2
Calculos realizados para la cuantificacin de Alendronato por HPLC:

Calculos

realizados

para

potenciomtrica cido-base:

la

cuantificacin

de

Alendronato

por

titulacin

_________________________________
Marilyn del Rosario Valds Prez
Autora

_________________________________
Licda. Julia Amparo Garca Bolaos
Asesora

_________________________________
Licda. Millie Cruz
Co-Asesora

_________________________________
Licda. Lillian Irving Antilln, M.A.
Directora

_________________________________
M.Sc. Gerardo Leonel Arroyo Cataln
Decano