UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA

Instituto de Qumica
ARARAQUARA / SP

12 Cromatografia em Camada
Delgada
Franco Zavarizi
Luiz Joaquim de Alencar Jnior
Caroline Varella Rodrigues
Natlia Gaspar Alves
Thiago Luis Canozza Rocha
Thiago dos Santos Luccas

Prof. Dr. Jos Eduardo de Oliveira

Prof. Dr. Leonardo Pezza

Prof. Juliana Rodrigues

Cromatografia
um processo de separao e quantificao no qual os componentes
da amostra so arrastados por uma fase mvel atravs de uma fase
estacionria.
Durante a passagem da fase mvel sobre a fase estacionria, os
componentes da mistura so distribudos entre as duas fases, de tal
forma que cada um dos componentes seletivamente retido pela fase
estacionria, resultando em migraes diferenciais destes
componentes, ou seja, os componentes da amostra tm diferentes
velocidades ao passarem pela fase estacionria.

Mtodos Cromatogrficos

CP: Cromatografia em Papel

CCD: Cromatografia em Camada Delgada
CGL: Cromatografia Gasosa Lquida
CGS: Cromatografia Gasosa Slida
CSS: Cromatografia Supercrtica Slida
CSFL: Cromatografia Supercrtica da Fase Lquida
CLL: Cromatografia Lquida Lquida
CLS: Cromatografia Lquida Slida
CE: Cromatografia de Excluso
CLFL: Cromatografia Lquida de Fase Ligada
CTI: Cromatografia por Troca Inica
CB: Cromatografia por Bioafinidade

CROMATOGRAFIA EM CAMADA
DELGADA (CCD)
A CCD consiste na separao dos componentes de uma mistura atravs
de migrao diferencial sobre uma camada delgada de adsorvente (fase
estacionria) retido sobre uma superfcie plana (geralmente placas de
vidro). Esse processo de separao est fundamentado, principalmente
no fenmeno de adsoro. A CCD oferece vantagens como fcil
compreenso e execuo, separaes em breve espao de tempo,
versatilidade e baixo custo.

O que adsoro?
Consiste em fenmenos fsicos e/ou qumicos
que fazem com que uma substncia acumule-se
sobre a superfcie de outra.

Os adsorventes mais utilizados na

CCD
1- SLICA (SiO2)
A slica empregada na separao de compostos lipoflicos como
aldedos, cetonas, fenis, cidos graxos, aminocidos, alcalides,
terpenides e esterides, usando o mecanismo de adsoro.

Figura 1: estrutura da slica

2- ALUMINA (Al2O3)
A alumina geralmente empregada na separao de compostos
lipoflicos e, pelo fato de poder ser preparada com caractersticas
cida, neutra e alcalina, bastante til na separao de substncias
que apresentam variaes dessas caractersticas.

TCNICAS GERAIS DA CCD

- PREPARAO DAS PLACAS
- ATIVAO DAS PLACAS
- SELEO DA FASE MVEL
- APLICAO DAS AMOSTRAS NAS CROMATOPLACAS
- REVELAO DOS CROMATOGRAMAS
- APLICAES DA CCD
- FATOR DE RETENO

Preparao das placas:

Preparao por espalhamento:

Existem diversas formas de se preparar uma placa cromatogrfica,

seja manualmente ou com emprego de espalhadores. Independente do
mtodo escolhido, a preparao sempre se inicia com a limpeza da
placa de vidro utilizando detergente, soluo sulfocrmica e gua
corrente. Quando no se dispe de um aplicador, existem outras
formas bastante simples de preparar a placa. Uma delas consiste em
preparar a suspenso do adsorvente no solvente adequado e,
mantendo-se a placa de vidro na posio horizontal transferir a
suspenso para a superfcie da placa, espalhando-se de maneira
uniforme. Repousa-se a placa em superfcie horizontal e deixa-se
secar ao ar. A dificuldade encontrada nesse processo a obteno de
superfcies uniformes.

Quando se pretende preparar placas bem uniformes e com

espessuras definidas, necessrio o uso de espalhadores.
Eles so encontrados no mercado em tipos e marcas
diferentes. Seu funcionamento consiste em manter as
placas fixas em um suporte e, sobre elas, fazer deslizar
um recipiente contendo a suspenso do adsorvente.
Enquanto o recipiente desliza, deixa escoar a suspenso,
atravs de uma fenda regulvel existente ao longo de sua
base.

Figura 2: Vista expandida do

espalhador mostrando sua seqncia
de montagem .

Figura 3: Vista em perspectiva.

Placas pr-fabricadas:
Placas cromatogrficas pr-fabricadas, dos adsorventes mais
utilizados, esto disponveis no mercado h algum tempo. Apesar de
terem custo bem mais elevado, dispensam a fase de preparao e
so bem mais uniformes e homogneas, o que melhora a separao.
A camada de adsorvente est depositada sobre uma lmina de
material plstico, alumnio ou vidro. So pr-cortadas, geralmente
nos tamanhos 5 x 20 cm e 20 x 20 cm, e com a espessura da
camada de adsorvente variando entre 0,1 a 2,0 mm.

Ativao das placas:

A ativao consiste em aquecer as placas em temperaturas
relativamente elevadas, por tempo prolongado. Isto aumenta o seu
poder de adsoro.
Este processo promove a remoo de vapor dgua e outros resduos
possivelmente adsorvidos na placa.
Slica e alumina so ativadas a 105-110C por 30 a 60 minutos.
O tempo e a temperatura so fatores importante nesse processo,
dependem do adsorvente utilizado.

Seleo da fase mvel:

Na escolha da fase mvel, considera-se a natureza qumica das
substncias e a polaridade da fase mvel, tomando-se como base a
srie eulotrpica do solventes, que so ordenados segundo suas
polaridades, que esto relacionadas com seu poder de eluio.
Pequenas variaes na composio da fase mvel levam a grandes
alteraes no deslocamento das manchas.
Colocando-se manchas da amostra sobre uma cromatoplaca e
gotejando sobre cada umas delas diferentes solventes, observa-se
deslocamentos concntricos das substncias, obtendo assim
informaes da capacidade de deslocamento de diferentes
solventes, dando uma idia do poder eluente da fase mvel.

Figura 4: Aplicao da amostra na cromatoplaca.

Aplicao das amostras nas cromatoplacas:

As amostras so aplicadas nas cromatoplacas na forma de solues,
em solventes bastante volteis, que possam ser facilmente eliminados
aps a aplicao. Deve-se levar em conta o limite de deteco do
revelador, pois se ele no detectar a amostra deve-se aumentar sua
concentrao na placa. No devem ser utilizadas solues muito
diludas pois exigem a aplicao de um volume muito grande de
amostra.
Para a aplicao da amostra utilizam-se micropipetas ou
microsseringas que permitem determinar a quantidade de substncia
colocada na placa. Quando no exige-se a quantidade precisa de
amostra a ser colocada, utilizam-se capilares de vidro, ou aplicadores
automticos.
As gotas devem ser aplicadas 1,5 a 2,0 cm acima da borda inferior
para que no fiquem mergulhadas na fase mvel quando a placa for
colocada na cuba. A distncia entre cada gota de aproximadamente
1,0 cm para que se evite o contato entre as gotas.

Figura 5: Aplicao da amostra na cromatoplaca.

Cuba Cromatogrfica:
Em seguida, a placa introduzida cuidadosamente em uma cuba
fechada contendo o solvendo indicado, com a extremidade
voltada para baixo. O nvel do solvente dever ficar abaixo dos
pontos de aplicao das amostras. Durante a ascenso do
solvente o sistema fica fechado para que a atmosfera esteja
saturada pelo vapor do solvente. Facilita-se a saturao
colocando-se um pedao de papel de filtro na parede interna da
cuba. A cromatoplaca dever ser retirada da cuba somente
quando o solvente atingir um limite pr-determinado na parte
superior da placa (cerca de 1 cm).

Figura 6: Aplicao da amostra na

cromatoplaca.

Figura 7: Cuba Cromatogrfica

Figura 8: aplicao da amostra e saturao na

cuba cromatogrfica.

Figura 9: evoluo da mistura atravs da migrao diferencial sobre uma camada

delgada de adsorvente.

Revelao dos cromatogramas:

Essa etapa consiste em tornar visveis as substncias incolores
presentes na amostra. A visualizao pode ser feita por meio de
mtodos fsicos ou qumicos, podendo tambm ser biolgicos, como
no caso da utilizao de reaes enzimticas ou bacterianas.
Reveladores fsicos e no-destrutivos: podem ser visualizados
atravs de luz ultravioleta, por se tornarem fluorescentes quando
excitados por essas radiaes. Quando as substncias no so
fluorescentes, podem-se utilizar adsorventes impregnados com
reagentes fluorescentes.
Reveladores qumicos: os mtodos qumicos de revelao so
destrutivos e aplicveis a separaes analticas. Utiliza-se agentes
cromognicos que, em contato com as substncias da amostra,
tornam-nas coloridas e, portanto, visveis. O mais utilizado o iodo,
que torna as manchas marrons.

Figura 10: revelador para Radiao ultravioleta para compostos fluorescentes.

Ex: clorofila.

Figura 11: Para a maior parte dos

compostos orgnicos muito utilizado a
exposio da cromatoplaca aos vapores
de iodo, em recipiente fechado

Figura 12: aplicadores de vidro

para reveladores qumicos.

Reveladores biolgicos:
Utiliza-se reaes enzimticas ou bacterianas para tornar a mancha
visvel.

Ex.: Para testar-se uma amostra que contm substncia antifngica

revela-se o cromatograma com esporos de fungos. Os fungos no
crescero onde houver essas substncias.

Figura 13: A placa foi borrifada com soluo de esporos de fungos.

Onde apareceram manchas brancas houve inibio dos fungos pelas
substncias contidas nos extratos de uma planta.

Aplicaes da CCD:
A CCD pode ser usada em Qumica Orgnica para:
- Estabelecer a identidade de dois compostos;
- Determinar o nmero de compostos de uma mistura;
- Determinar o solvente apropriado para uma separao por
cromatografia em coluna;
- Monitorar uma separao realizada por cromatografia em coluna;
- Checar a eficincia de uma separao.

Fator de Reteno (R.f.)

Sob condies bem estabelecidas, um dado composto
percorre sempre uma distncia fixa em relao distncia
percorrida pelo solvente. Esta relao chamada valor do
Rf.
Quando os parmetros experimentais so especificados, o
valor do Rf uma constante, para um dado composto. E ele
pode ser usado para auxiliar a identificao de uma
substncia.
Muitos compostos tm o mesmo Rf, assim como
diferentes compostos tem PF iguais.
Comparaes feitas do Rf obtido
com o Rf de padres considerado um mtodo qualitativo.

Rf

Distncia percorrida pela mancha desde a origem (x)

= ---------------------------------------------------Distncia percorrida pelo solvente desde a origem (y)

Figura 14: clculo do Rf para um componente de uma amostra

Anlise Quantitativa
A CCD pode ser utilizada para quantificao.
Retira-se da cromatoplaca a rea que contenha
a substncia desejada que extrada e
quantificada.
Freqentemente, utiliza-se a densitometria,
medidas de fluorescncia e radioatividade.

Vantagens da CCD

Fcil execuo;

Maior rapidez;

Menor trajeto da fase mvel ;

Boa resoluo;

Manchas em geral menos difusas;

Baixo custo;

Versatilidade.

Desvantagens da CCD
Difcil Reprodutibilidade: muito difcil a confeco de
duas placas idnticas, com a mesma quantidade de amostra,
etc;
Difcil determinao exata do Rf.

Tabela de constantes fsicas e Toxicidade

CUIDADO! A aspirao da slica causa silicose, um

tipo de inflamao pulmonar crnica!
A slica dever ser removida com esptula e colocada
em bquer e dever ser entregue ao tcnico.

Descartes
Alguns compostos que podem ser descartados diretamente na pia:

Orgnicos:

- lcoois com menos de 5 carbonos etanol;

- cidos carboxlicos com menos de 6 carbonos e seus sais de
NH4+, Na+ e K+;
- steres com menos de 5 carbonos.

Alguns compostos que podem ser descartados no lixo:

Para descarte (incinerao/co-processamento):
- solventes no halogenados, < 5% gua;
- solventes no halogenados, > 5% gua;
- solventes halogenados;
- perxidos orgnicos.

Fluxograma

Referncia Bibliogrfica
BRAGA, G.L. Introduo a Mtodos Cromatogrficos. 6

edio

COLLINS, C.H.; BRAGA,G.L.; BONATO,P.S. Fundamentos

de Cromatografia. So Paulo: da Unicamp, 2006. 456p.
http://www.slideshare.net/b.cortez/cromatografiaprincpios-cg