TRANSFERENCIA DE GENES

El concepto de redistribucin de las caractersticas a travs de la reproduccin

sexual en los animales y las plantas era familiar mucho antes de Mendel lo puso
sobre una base cientfica. No slo las caractersticas de los individuos representan
una combinacin de los de sus padres (o abuelos), pero el fenmeno se ha
utilizado durante siglos para establecer nuevas cepas de plantas y animales que
combinan las mejores caractersticas de las diferentes cepas. Cmo podemos
aplicar el mismo concepto a organismos como las bacterias que no presentan
reproduccin sexual?
Ahora sabemos que las bacterias intercambian informacin gentica, no slo en el
laboratorio sino tambin en la naturaleza. Hay tres mecanismos fundamentalmente
distintos de las que puede producirse dicha transferencia gentica:
1 de transformacin, en el que una clula ocupa molculas de ADN aisladas del
medio que lo rodea;
2 conjugacin, que implica la transferencia directa de ADN de una clula a otro;
3 transduccin, en el que la transferencia est mediada por virus bacterianos
(bacterifagos).
No todas las especies bacterianas presentan todos estos modos de transferencia
gentica. Conjugacin se demuestra ms fcilmente en bacterias Gram-negativas,
pero s ocurre en algunos gneros Gram-positivas tales como Streptomyces y
Streptococcus. Aunque algunas especies bacterianas importantes son
naturalmente transformable, en muchas transformacin otra especie slo se
demuestra fcilmente despus de alguna forma de pre-tratamiento artificial de las
clulas, y por lo tanto probablemente no ocurre naturalmente en esos organismos.
Estos mecanismos difieren de verdadera reproduccin sexual en dos aspectos
principales: no existe un vnculo con la reproduccin y la contribucin gentica de
los padres es desigual. Los padres estn por lo tanto conocen como clulas
donantes y receptores; la progenie recombinante se asemejan a la cepa original
destinatario en la mayora de las caractersticas. En este captulo la atencin se
centrar en la transferencia natural de genes entre bacterias (transferencia
horizontal de genes), y sobre la importancia que esto tiene para la evolucin de las
bacterias. Los mecanismos que se utilizan en el laboratorio, especialmente para la
modificacin gentica, y su aplicacin tanto para la manipulacin gentica y
anlisis gentico sern cubiertos en los captulos 8-10.
6.1 Transformacin
En cierto sentido, fue el descubrimiento de la transformacin, la captacin de ADN
por clula bacteriana, que inici el estudio de la gentica bacteriana y la biologa
molecular como la conocemos hoy en da. Fue en 1928 que Fred Griffith, en
colaboracin con el neumococo (Streptococcus pneumoniae), descubri que las

cepas no virulentas podan ser restaurados a la virulencia de incubacin con un

extracto de clulas virulentas muertas. Diecisis aos despus, Avery, MacLeod y
McCarty demostraron que el "principio de la transformacin 'era el ADN, que
estableci el papel del ADN como material hereditario de la clula bacteriana.
Transformacin ha sido importante en el anlisis gentico de algunas especies, y
ms recientemente (y en un grado mucho mayor) debido a su papel clave en la
clonacin de genes. Con el neumococo, clulas espontneamente vuelven
competentes para incorporar el ADN. Tal transformacin de origen natural ha sido
ms estudiado en Bacillus subtilis y Haemophilus influenzae (as como Str.
Pneumoniae), y fue pensado durante algn tiempo que limitarse a estas y otras
especies. Ahora se sabe que es mucho ms extendido. En particular, la
transformacin contribuye ampliamente a la variacin antignica observada en el
gonococo (Neisseria gonorrhoeae) a travs de la transferencia de genes que
codifican para pil la subunidad principal protena de los apndices superficiales
(pili) por el cual las bacterias se adhieren a las clulas epiteliales. Aunque el
nmero de especies en las que la transformacin natural se ha demostrado
todava es bastante limitada, es probable que se produzca, aunque a un nivel bajo,
en muchas otras bacterias. En este contexto, es importante recordar que con la
gran cantidad de bacterias en el medio ambiente, y la velocidad con la que se
reproducen, incluso eventos muy raros pueden ser muy significativo en una escala
de tiempo evolutivo. Transformacin por lo tanto probablemente ha jugado un
papel importante en la evolucin de muchas especies bacterianas.
Los detalles del proceso varan entre especies, pero algunas generalizaciones son
posibles. Competencia generalmente se produce en una etapa especfica de
crecimiento, ms comnmente en fase tarda logartmica, al igual que las clulas
estn entrando en fase estacionaria. Esto puede ser una respuesta a la densidad
de clulas en lugar de (o adems de) la fase de crecimiento. Por ejemplo, en
Bacillus subtilis, algunos de los genes implicados en el desarrollo de la
competencia son tambin involucrado en las etapas tempranas de la esporulacin.
El desarrollo de la competencia en esta etapa est asociada no slo con el
agotamiento de nutrientes, sino tambin con la acumulacin de productos
especficos secretadas (factores de competencia), que actan a travs de un
sistema regulador de dos componentes para estimular la expresin de otros genes
necesarios para la competencia. Dado que el nivel de estos factores de
competencia depende de la concentracin celular, competencia slo se
desarrollar a alta densidad celular. Esta es una forma de deteccin de qurum,
como se describe en el Captulo 3, en el que la respuesta de una clula individual
se rige por la concentracin de bacterias en el medio circundante. Siguiendo el
desarrollo de la competencia, los fragmentos de ADN bicatenario se unen a
receptores en la superficie celular, pero slo una de las hebras entra en la clula.
En algunas especies, el proceso es selectivo para el ADN de la misma especie, a
travs de un requisito para secuencias especficas de especie cortos. Por ejemplo,
la captacin de ADN por el meningococo (Neisseria meningitidis) es dependiente

de la presencia de una secuencia especfica la absorcin de 10 pb. El genoma de

N. meningitidis contiene cerca de 2.000 copias de esta secuencia, que slo
ocurrirn con poca frecuencia, por casualidad, en otros genomas. Del mismo
modo, la transformacin de Haemophilus influenzae se ve facilitada por la
presencia de una secuencia de captacin del 29 pb que se produce
aproximadamente 1500 veces en el genoma de H. influenzae. Estos organismos
sern, por tanto, slo se pueden transformar de manera eficiente con el ADN de la
misma especie.
Por otro lado, B. subtilis y Str. pneumoniae puede tomar hasta prcticamente
cualquier molcula de ADN lineal. Pero tomando el ADN es slo el comienzo. Si la
clula es llegar a ser transformada de manera estable, el nuevo ADN tiene que ser
replicado y heredada. Como estamos considerando aqu fragmentos de ADN
cromosmico (en lugar de plsmidos), la replicacin del ADN slo ocurrir si el
ADN entrante se recombina con el cromosoma del husped. Esto requiere
homologa entre el ADN transformante y el cromosoma receptor. Esto no
constituye una barrera absoluta a la transformacin con ADN para otras especies.
Siempre hay suficiente similitud en algunas regiones de los cromosomas, los
segmentos de ADN an pueden sufrir recombinacin con el cromosoma receptor.
Cuanto ms cerca la relacin taxonmica, lo ms probable es que va a ser lo
suficientemente similares. Un ejemplo de esto, con una considerable importancia
prctica, es el desarrollo de resistencia a la penicilina en Str. pneumoniae. Esto
parece haber ocurrido por la sustitucin de parte de los genes que codifican para
las enzimas diana penicilina con ADN correspondiente de estreptococos orales
naturalmente resistentes. Transformacin natural es de utilidad limitada para la
modificacin gentica artificial de bacterias, principalmente debido a que funciona
mejor con fragmentos de ADN lineales en lugar del plsmido circular DNA que se
utiliza en la modificacin gentica. Para la introduccin de genes forneos en un
husped bacteriano, diversas tcnicas se usan para inducir un estado artificial de
competencia. Alternativamente, es posible someter una mezcla de clulas y el
ADN brevemente a un alto voltaje que permite al ADN para entrar en la clula (un
proceso conocido como electroporacin). Aunque los mecanismos implicados son
muy diferentes, todos comparten el rasgo caracterstico de la toma de ADN
"desnudo" por las clulas, y por lo tanto se les conoce tambin como
transformacin. Estos mtodos se tratan en el Captulo 8.
6.2 Conjugacin
La conjugacin es la transmisin directa de ADN de una clula bacteriana a otra.
En la mayora de los casos esto implica la transferencia de ADN plsmido, aunque
con algunos organismos tambin puede ocurrir la transferencia cromosmica. Al
igual que con otros modos de transferencia de genes en bacterias, hay una
transferencia unidireccional de ADN de uno de los padres (donante) a la otra
(receptor).

En el ms simple de los casos, la conjugacin se consigue en el laboratorio

mediante la mezcla de las dos cepas juntos y, despus de un perodo de
incubacin para permitir la conjugacin a ocurrir, placas la mezcla en un medio
que no permite que cualquiera de los padres para crecer, pero en la que una
transconjugante que contiene genes de ambos padres crecern. Por ejemplo, en
el experimento ilustrado en la figura 6.1, una cepa (el donante) lleva un plsmido
que confiere resistencia a la ampicilina, mientras que la segunda cepa no tener un
plsmido, pero tiene una mutacin cromosmica que lo hace resistente a cido
nalidxico.
Despus de incubar el cultivo mixto, una muestra se coloc en placas sobre un
medio que contiene ambos antibiticos. Ninguno de los padres puede crecer en
este medio, por lo que las colonias que se observan se deben a la transferencia de
una copia del plsmido del donante a una clula receptora. Aunque este evento
puede ser muy poco frecuentes, la seleccin poderosa proporcionada por los dos
antibiticos significa que podemos detectar fcilmente la transferencia de plsmido
aunque slo sea, por ejemplo, 1 de cada 106 beneficiarios han recibido una copia
de la misma. Conjugacin se demuestra ms fcilmente entre los miembros de la
familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram-negativas (como vibriones y
pseudomonas).
Varios gneros de bacterias Gram-positivas poseen sistemas de conjugacin
razonablemente bien caracterizados: stos incluyen especies de Streptomyces
(que son comercialmente importantes como los principales productores de
antibiticos), los estreptococos lctico (que tambin son comercialmente
importantes debido a su aplicacin a diversos aspectos de la productos lcteos de
la industria) y bacterias de importancia mdica, tales como Enterococcus faecalis
(ver ms adelante en este captulo). El significado ms obvio de la conjugacin es
que en permite la transmisin de plsmidos de una cepa a otra. Puesto que la
conjugacin no se limita necesariamente a los miembros de la misma especie,
esto proporciona una ruta para la informacin gentica a fluir a travs de lmites
taxonmicos de ancho. Una consecuencia es que los plsmidos que estn
presentes en la flora intestinal normal se pueden transmitir a los patgenos que
infectan, que luego se vuelven resistentes a una amplia gama de diferentes
antibiticos.
6.2.1 Mecanismo de conjugacin
Formacin de acoplamiento de par
En la gran mayora de los casos, la aparicin de conjugacin es dependiente de la
presencia, en la cepa donante, de un plsmido que lleva los genes requeridos
para promover la transferencia de ADN. En Escherichia coli y otras bacterias
Gram-negativas, la clula donante lleva apndices en la superficie celular
conocido como pili.

Estos varan considerablemente en su estructura; Por ejemplo, el pilus

especificado por el plsmido F es largo, delgado y flexible, mientras que el pilus
RP4 es corto, grueso y rgido. El contacto de pili con los receptores en la superficie
de la clula receptora, formando as un par de acoplamiento (Figura 6.2). El pili
entonces contrato para traer las clulas en contacto ntimo, y un canal o poro a
travs del cual se hace el ADN pasa desde el donante al receptor. Curiosamente,
este mecanismo tiene mucho en comn con un sistema de secrecin de protenas
(secrecin de tipo IV; vase el captulo 1) utilizado por algunas bacterias para
entregar toxinas proteicas directamente en las clulas husped. Ms adelante en
este captulo vamos a ver otros mecanismos de conjugacin que son importantes
en bacterias Gram-positivas.
Transferencia de DNA
La transferencia de ADN plsmido del donante al receptor (Figura 6.3) se inicia por
una protena que hace un descanso de una sola hebra (nick) en un sitio especfico
en el ADN, conocido como el origen de la transferencia (ORIT). Una helicasa
codificada por plsmidos se desenrolla el ADN plsmido y la hebra mellada solo se
transfiere al destinatario a partir de la 5? FIN generada por el nick. Al mismo
tiempo, la libre 3? final de la hebra mellada se extiende a reemplazar el ADN
transferido, por un proceso conocido como replicacin de crculo rodante, que es
anlogo a la replicacin de los plsmidos y bacterifagos de cadena simple como
se describe en los captulos 4 y 5. La protena nicking permanece unida al extremo
5 del ADN transferido. La sntesis de ADN en el receptor convierte la hebra nica
transferida a una molcula de doble cadena. Tenga en cuenta que este es un
proceso replicativo. As que, aunque nos referimos a la transferencia del plsmido
de una clula a otra, lo que realmente quieren decir es la transferencia de una
copia del plsmido. La cepa donante todava tiene una copia del plsmido, y se
puede disfrutar de ms de apareamiento con otro destinatario. Tambin vale la
pena sealar que, puesto que, despus de la conjugacin, la clula receptora
tambin tiene una copia del plsmido, se puede transferir una copia del plsmido a
otra clula receptora. La consecuencia puede ser una epidemia se propag del
plsmido a travs de la poblacin mixta.
Movilizacin y transferencia cromosmica
No todos los plsmidos son capaces de lograr esta transferencia a otra celda sin
ayuda; aquellos que pueden que se conoce como plsmidos de conjugacin. En
algunos casos un plsmido conjugativo es capaz de promover la transferencia de
(mobilize) un segundo, de lo contrario nonconjugative, el plsmido de la misma
clula donante. Esto no sucede por casualidad; no se pueden movilizar todos los
plsmidos no conjugativos. Para entender la movilizacin podemos tomar el
plsmido ColEI como ejemplo. Este es un plsmido no conjugativo, pero tiene un
gen (MOB; vase la figura 5.3) que codifica la nucleasa especfica requerida para
mellar el ADN como en el modelo anterior, y un sitio oriT (tambin conocido como

bom) donde el nucleasa Mob hace un nick en el ADN. Es no conjugativa porque no

lleva los genes necesarios para la formacin de acoplamiento de par. La presencia
de otro (conjugacin) plsmido permite al donante para formar parejas de
apareamiento con la clula receptora, y luego ColE1 puede utilizar su propia
maquinaria para llevar a cabo la transferencia de ADN. Algunos plsmidos
movilizables no llevan un gen mafia. Movilizacin depende entonces de la
capacidad de la nucleasa Mob del plsmido conjugativo de reconocer el sitio bom
en el plsmido para ser movilizado. Esto slo funciona si los dos plsmidos estn
estrechamente relacionados. Por otra parte, el sitio bom es esencial para la
movilizacin. Este es un factor importante en la modificacin gentica como la
eliminacin del sitio bom partir de un vector plsmido se asegura de que los
plsmidos modificados no pueden transferirse a otras cepas bacterianas (vase el
captulo 8).
En la mayora de los casos, el ADN que se transfiere desde el donante al receptor
consiste simplemente en una copia del plsmido. Sin embargo, algunos tipos de
plsmidos tambin pueden promover la transferencia de ADN cromosmico. El
primero de ellos en ser descubierto, y el ms conocido, es el plsmido F (F para la
fertilidad) de E. coli, pero existen sistemas similares en otras especies,
especialmente Pseudomonas aeruginosa. En algunos casos, como se describe a
continuacin, esto implica la integracin del plsmido conjugativo en el
cromosoma donante (de modo que el cromosoma es en efecto transferidos como
parte del plsmido). Sin embargo, en muchos casos la transferencia cromosmica
se produce sin ningn tipo de asociacin estable con el plsmido, posiblemente
por un mecanismo anlogo a la movilizacin de un plsmido conjugativo no.
Cuando un plsmido se transfiere de una clula a otra por conjugacin, el
plsmido completo se transfiere. En contraste, la transferencia cromosmica no
implica una copia intacta completa del cromosoma. Una razn para esto es el
tiempo requerido para la transferencia. El proceso es menos eficiente que la
replicacin del ADN normal, y la transferencia de todo el cromosoma tomara unos
100 minutos (en E. coli). El par de acoplamiento muy raramente permanece juntos
tanto tiempo. En contraste, un plsmido de 40 kb decir es equivalente a 1% de la
longitud del cromosoma, por lo que uno esperara que la transferencia del
plsmido que se completar en 1 minuto. La transferencia incompleta de la ADN
cromosmico significa que no constituye un replicn intacto en la clula receptora.
Para este fragmento a ser replicado y hered debe recombinarse con el
cromosoma del husped, por lo general la sustitucin de los genes receptores
correspondientes en el proceso.
6.2.2 El plsmido F
El plsmido F fue descubierto originalmente durante los intentos para demostrar el
intercambio gentico en E. coli por cultivo mixto de dos cepas auxotrficas, de
manera que placas en medio mnimo solamente permitira recombinantes para
crecer. Se demostr muy pronto que los recombinantes se derivan de una de las

cepas parentales, y que una transferencia unidireccional de informacin fue, por

tanto, participa, desde el donante ('hombre') para el receptor ("femenino"). Las
cepas donantes llevan el plsmido F (F +), mientras que los destinatarios son F-.
Una caracterstica de este sistema que debe haber parecido curioso en el
momento es que cocultivo de un F + y F- una cepa resultaron en ser las 'mujeres'
convertida en 'machos', Esto es, por supuesto, debido a la transmisin del
plsmido F en s, que se produce a una alta frecuencia, en contraste con la
transferencia de marcadores cromosmicos que es muy ineficiente con un
donante F +.
Cepas Hfr
La utilidad de conjugacin para el anlisis gentico fue enormemente reforzada
por el descubrimiento de cepas donantes en el que la transferencia de ADN
cromosmico se produjo mucho ms comnmente. Estos Hfr (para alta frecuencia
de recombinacin) cepas surgen por la integracin del plsmido F en el
cromosoma bacteriano. Una caracterstica adicional de una cepa Hfr es que la
transferencia cromosmica se inicia desde un punto definido y procede en una
direccin especfica. El origen de la transferencia se determina por el sitio de
insercin del plsmido F y la direccin se rige por la orientacin del plsmido
insertado.
Esto puede dejarlo claro reetiquetado la molcula circular en la figura 6.3 como
ADN cromosmico que contiene un plsmido integrado F. La transferencia se
inicia por lo tanto desde el sitio oriT en el plsmido integrado pero ahora da como
resultado la transferencia de una copia del cromosoma bacteriano en lugar de slo
el plsmido. Un donante F +, en contraste, las transferencias genes de una
manera ms o menos aleatoria, ya que la transferencia no se inicia desde un
punto definido en el cromosoma. La combinacin de la transferencia parcial de
ADN cromosmico con la transferencia ordenada de genes hizo conjugacin una
herramienta importante en la cartografa de los cromosomas bacterianos (vase el
Captulo 10).
Integracin y escisin de F; formacin de F? plsmidos
Integracin del plsmido F se produce por recombinacin entre una secuencia en
el plsmido y un sitio cromosmico. Despus de la integracin, el plsmido F se
encuentra en una forma lineal en el sitio de integracin. La integracin es
reversible, ya que la recombinacin entre los sitios en los extremos de la plsmido
integrado conducir a su escisin a partir del cromosoma como una molcula
circular independiente. Sin embargo, es posible que esta escisin se produzca de
manera inexacta; es decir, la recombinacin se produce en un sitio diferente. Si
esto sucede, el plsmido resultante se habr incorporado una pequea cantidad
de ADN bacteriano. Esto forma lo que se conoce como un F? Plsmido (F-prime).
Si, por ejemplo, el plsmido se integra en un sitio adyacente al opern lac,
escisin imprecisa del plsmido puede dar lugar a la formacin de un F? Plsmido

lac, donde el opern lac se ha incorporado en el plsmido y ser transferido con la

plsmido a una cepa receptora, permitiendo as que para fermentar la lactosa.
Este es un mecanismo donde por un plsmido puede adquirir genes adicionales a
partir de un cromosoma bacteriano y transferirlos a otra cepa o especie. F?
plsmidos se pueden utilizar para crear diploides parciales; es decir, las cepas con
una copia de un gen especfico en el plsmido adems de la copia cromosmica.
El uso de diploides parciales para el estudio de la regulacin del opern lac se
describe en el Captulo 3, especialmente en la distincin de los genes reguladores
que actan en trans (es decir, que influyen en la expresin de un gen en una
molcula diferente) de las que slo afectan a la genes a los que estn unidos.
Tales experimentos siguen siendo pertinentes, sino que ahora utilizan plsmidos
recombinantes producidos in vitro.
6.2.3 Conjugacin en otras bacterias
La descripcin anterior de la conjugacin se aplica principalmente a bacterias
Gram-negativas tales como E. coli y Pseudomonas. Muchas especies Grampositivas, que van desde Streptomyces a Enterococcus, tambin poseen
plsmidos que son transmisibles por conjugacin, y en muchos casos el
mecanismo de la transferencia de ADN es bastante similar a la descrita
anteriormente. Sin embargo, hay diferencias sustanciales en los dems aspectos.
En general, el nmero de genes necesarios para la transferencia por conjugacin,
en algunos casos tan slo cinco genes, es mucho menor que en las bacterias
Gram-negativas, en donde se necesitan 20 o ms genes. Plsmidos conjugativos
en bacterias Gram-positivas, por tanto, pueden ser considerablemente ms
pequeo. Una de las razones para el menor nmero de genes necesarios es que
no parece haber ningn requisito para la produccin de un pilus. Esto es
probablemente, al menos en parte, un reflejo de la arquitectura diferente de la
pared celular en bacterias Gram-positivo, que carecen de la caracterstica de la
membrana externa de las Gram-negativos.
Un grupo de bacterias Gram-positivas donde los sistemas de conjugacin se han
estudiado en detalle los enterococos son, principalmente, E faecalis. Un modelo
simplificado se muestra en la Figura 6.4. Si la cepa donante, que lleva un plsmido
tal como pAD1, se cultiva por s mismo, los genes del plsmido necesarios para la
transferencia se desconectan por la accin de una protena represora, TraA. La
activacin de estos genes se produce en presencia de una clula receptora que
produce un pptido difusible (en este ejemplo se llama CAD1) que tiene una
accin de feromona similares. Este pptido se produce por escisin proteoltica de
un polipptido precursor. La clula donante contiene una protena de membrana
codificada por plsmidos, Trac. La unin de CAD1 a Trac es seguido por el
transporte de CAD1 travs de la pared celular. Una vez dentro de la clula
donante, CAD1 se unir al represor TraA e inactivar ella, permitiendo as la
expresin de los genes de transferencia. Una de las capas de productos,
sustancia agregacin (ASA) el exterior de la clula donante, dando como resultado

la formacin de un agregado de apareamiento con las clulas donantes y

receptores unidos. El plsmido de transferencia a continuacin, se produce, por un
mecanismo similar al descrito anteriormente. Despus de la transferencia, ms
eventos se producen en el transconjugante (la clula receptora que ha recibido el
plsmido) que inhiben la accin adicional de esta feromona, por lo que esta clula
ya no actuar como un destinatario para pAD1. Sin embargo, continuar para
producir otros feromonas que son especficos para diferentes plsmidos, que
codifican diferentes protenas receptoras.
Una ventaja de este sistema es que las clulas que contienen el plsmido no
expresan los genes necesarios para la transferencia de plsmido a menos que
exista un receptor adecuado en las proximidades. Esto no slo reducir la carga
metablica en la clula, pero tambin significa que no estn expresando antgenos
de superficie (tales como pili conjugativo) que podran ser reconocidos por el
sistema inmune del husped.
Transposones conjugativos
E. faecalis tambin proporciona un ejemplo de una excepcin a la regla general de
que la conjugacin es mediada por plsmidos. Algunas cepas de E. faecalis
contienen un transposn conocido como Tn916. Nosotros cubriremos
transposones de manera ms general en el captulo 7, pero por el momento todo
lo que necesitamos saber es que son elementos genticos mviles que son
capaces de moverse de un sitio a otro ADN. Lo que diferencia Tn916 aparte de
otros transposones es su capacidad para transferir de una clula a otra por
conjugacin. Transposones conjugativos tales como Tn916 difieren de plsmidos
en los que se replican y hereda como parte del cromosoma. No hay forma
independiente replicar estable, ya que es con un plsmido. Sin embargo, una
inspeccin ms detallada del mtodo de transferencia (Figura 6.5) muestra que
hay una gran cantidad de similitud con plsmido de transferencia. En particular,
Tn916 contiene un origen de transferencia (oriT) que es bastante similar a la
encontrada en muchos plsmidos. El primer paso en la transferencia es la escisin
del transposn del cromosoma, utilizando enzimas transposn codificada (Int y
Xis) que estn relacionados con los responsables de la integracin y la escisin de
bacterifago (vase el captulo 4). Esto produce una molcula circular que se
asemeja a un plsmido en todas menos una caracterstica vital: no tiene un origen
de replicacin por lo que es incapaz de ser copiados en la forma normal. Sin
embargo, ya que tiene un sitio de oriT, y lleva los genes tra necesarios para la
transferencia conyugal, que puede ser transferido a una clula receptora. Al igual
que con los sistemas de plsmido de transferencia descrito anteriormente, la
transferencia de Tn916 implica la sntesis de ADN de una sola hebra, iniciando en
oriT, y la transferencia de la cadena desplazada al destinatario. La hebra nica
entonces transferido se circulariz, y convertido a una forma circular de doble
cadena, que se inserta, al azar, en el cromosoma receptor por la accin de la
integrasa.

Una caracterstica adicional de Tn916 vale la pena considerar. Si la transferencia

se produjo sin la extirpacin del cromosoma, que se puede esperar para ver la
movilizacin de los cromosomas, con la transferencia incompleta del transposn.
Transferencia comenzara desde oriT y tendra que trabajar la vuelta al
cromosoma antes de llegar al resto del transposn. Esto no parece suceder. La
razn es que el promotor para la expresin de los genes tra se encuentra hacia el
extremo izquierdo del transposn (en la figura 6.5), y se enfrenta lejos de los
genes tra. En la forma lineal integrado, los genes tra no se expresar. Sin
embargo, cuando el transposn se escinde del cromosoma y circulariz, esto trae
el promotor en la posicin correcta y la orientacin para la transcripcin de los
genes tra. Por lo tanto, se expresarn a partir del intermedio circular, pero no de la
forma integrada. Esto asegura que el sistema de transferencia slo se activar
despus de haberse producido la escisin. Tn916 es el prototipo de una familia de
transposones conjugativos relacionados que son especialmente extendido en
cocos Gram-positivos, aunque los elementos relacionados tambin se producen
en bacterias Gram negativas (por ejemplo Bacteroides). Para muchos de estos
elementos, incluyendo Tn916, transmisin conjugativo es promiscuo en que
pueden transferir a otras especies o gneros. Podemos suponer, pues, que los
transposones conjugativos han jugado un papel importante en la difusin de
material gentico, incluidos los genes de resistencia a antibiticos, en todo el reino
bacteriano. En particular muchos de estos transposones, incluyendo Tn916, llevan
un gen de resistencia a tetraciclina (tetM) que se encuentran en una amplia gama
de especies de bacterias, lo que sugiere que han desempeado un papel en la
dispersin de este gen en particular.
6.3 Transduccin
Transduccin es la transferencia mediada por fago de material gentico. El paso
clave es el embalaje de ADN en las cabezas de fagos durante el crecimiento ltico
del fago (vase el captulo 4). Este proceso es normalmente altamente especfico
para ADN de fago. Sin embargo, con algunos fagos, los errores se pueden hacer y
fragmentos de ADN bacteriano (producido por la degradacin de fagos mediada
por el cromosoma del husped) en ocasiones se envasan por error, dando lugar a
partculas de fagos como que contienen un segmento de genoma bacteriano
(vase la figura 6.6). Estas partculas de transduccin son capaces de infectar una
clula receptora, ya que la informacin necesaria para la unin y la inyeccin de
ADN es llevado por las protenas de la partcula de fago, con independencia del
cido nucleico que contiene. Por tanto, el segmento de ADN transducido se
inyecta en la nueva clula husped. No todos los bacterifagos son capaces de
llevar a cabo la transduccin.
Los requisitos bsicos de un fago de transduccin eficaz son que la infeccin debe
dar lugar a un adecuado nivel de degradacin del ADN cromosmico para formar
fragmentos de tamao adecuado en el momento adecuado para el envasado, y
que la especificidad del proceso de envasado debe ser relativamente bajo. En

algunos casos, el ADN transducido es un plsmido bacteriano, en cuyo caso la

molcula de ADN inyectado es capaz de ser replicado y heredada. Ms
comnmente el ADN incorporado en la partcula de transduccin es un fragmento
de ADN cromosmico, que ser incapaz de replicarse en la clula receptora. Para
que sea replicado y hered debe ser incorporado en el cromosoma receptor (por
recombinacin homloga), como es el caso con otros mecanismos de
transferencia de genes.
Este proceso se conoce como la transduccin generalizada (en oposicin a la
transduccin especializada; vase ms adelante), ya que esencialmente cualquier
gen tiene la misma oportunidad de ser transducidas.
6.3.1 transduccin especializada
Como se describe en el captulo 4, algunos fagos (fagos templadas) son capaces
de establecer un estado conocido como lisogenia, en el que la expresin de los
genes de fagos, y la replicacin del fago, se reprime. En muchos casos el profago
se inserta en el ADN bacteriano y se replica como parte del cromosoma. Cuando
lisogenia se rompe y el fago entra en el ciclo ltico, se escindi del cromosoma por
recombinacin entre secuencias en cada extremo del profago integrado. Si este
evento de recombinacin ocurre en el lugar equivocado, una regin adyacente del
ADN bacteriano se incorpora en el ADN del fago. Toda la progenie de este fago
contendr entonces este gen bacteriano, por lo tanto, que se transduce a una
frecuencia muy alta (efectivamente 100% por partcula de fago) una vez que el
fago de transduccin ha sido aislado.
Dado que el ADN transferido se limita a una regin muy pequea del cromosoma,
el fenmeno se conoce como especializado (o restringida) transduccin. Esto es
muy similar a la formacin de F? plsmidos mencionados anteriormente. Al igual
que con la F? plsmidos, ahora es mucho ms fcil para agregar genes a lambda
ADN mediante la creacin de los recombinantes in vitro (captulo 8).
Otro fago que se ha empleado de forma similar es el fago Mu (vase el captulo 7)
que tiene la ventaja de insertar en mltiples sitios en el cromosoma por un
mecanismo de tipo transposn. Por tanto, es mucho ms fcil para crear una
amplia gama de fagos transductores especializados con Mu, que puede ser
utilizado tanto en la cartografa gentica y en la mutagnesis. En general, la
transduccin es un acontecimiento muy raro en el laboratorio sucede slo una vez
en 100 millones de infecciones de fagos. Es importante recordar, sin embargo, que
con el gran nmero de fagos presentes de forma natural (vase el Captulo 4) este
evento muy raro se vuelve altamente significativo en el medio ambiente, y por lo
tanto la transduccin juega un papel importante en la transferencia horizontal de
genes.
6.4 La recombinacin

Una caracterstica comn de la transferencia de genes entre las bacterias, a

excepcin de la transferencia de elementos que pueden replicarse de manera
independiente, es el requisito para la pieza transferido de ADN que se inserta en el
cromosoma receptor rompiendo ambas molculas de ADN, cruzando una y unirse
a ellos.
Este proceso, conocido como recombinacin, se describe en el Captulo 2. Hay
varias formas diferentes de la recombinacin, pero en este contexto que son
especficamente de los mecanismos que requieren la presencia de regiones
homlogas de ADN, que deben ser muy similares, pero no tienen que ser
idnticos. Por lo tanto, se conoce como recombinacin homloga.
6.4.1 Consecuencias de la recombinacin
Para la recombinacin entre un fragmento de ADN lineal (introducido por
transformacin, transduccin o conjugacin) y el cromosoma receptor, es
necesario para dos rotura y volver a unir los eventos que se produzca (vase la
Figura 6.7) de manera que una porcin del fragmento lineal se integrar en el
cromosoma circular, la sustitucin de la regin correspondiente del cromosoma.
Esto se conoce como un doble cruce. Por otro lado, si ambas molculas
participantes son circulares (por ejemplo, dos plsmidos, o un plsmido y el
cromosoma), a continuacin, un nico evento de recombinacin ser suficiente
(vase la Figura 6.8), produciendo una fusin de los dos crculos originales. Esto
puede ser un evento reversible. La recombinacin entre los dos extremos del
plsmido insertados dar lugar a la escisin del plsmido, como se discuti
anteriormente en relacin con la integracin del plsmido F, y tambin la
integracin y escisin de fago (Captulo 4).
En esta discusin se ha supuesto que dos molculas diferentes estaban
involucrados, es decir, estbamos considerando la recombinacin intermolecular.
Qu pasa si las dos regiones homlogas estn en la misma molcula, es decir, la
recombinacin es intramolecular Esto suceder si tenemos dos copias de un
elemento repetitivo, como una secuencia de insercin (IS; vase el captulo 7). Las
consecuencias dependern de la orientacin relativa de las dos secuencias
homlogas. Como podemos ver en la figura 6.9a, si las regiones homlogas estn
en la misma orientacin (repeticiones directas), la recombinacin entre ellos dar
lugar a la separacin en dos molculas circulares separados. (Para entender esto,
traza el curso del ADN en forma intermedia, donde se combinan las dos regiones,
a partir del punto A y el cambio hebras cuando se llega a la regin emparejado. A
continuacin se pierda B y C, y ir directamente a D y de nuevo a A.) En general,
una de estas molculas circulares no contendrn un origen de replicacin, y as se
perder. Por consiguiente, la consecuencia es una delecin de esa porcin del
ADN original.
Por otro lado, si las regiones homlogas estn en orientaciones opuestas
(repeticiones invertidas), como en la figura 6.9b, cables de recombinacin, no a la

separacin de dos molculas, pero para la inversin de la regin entre las

repeticiones invertidas. La molcula circular se mantiene intacta. La presencia de
elementos repetitivos puede causar deleciones o inversiones de regiones
cromosmicas de esta manera, adems de ser una causa de reordenamientos de
plsmidos como se describe en el captulo 5. Por ejemplo, si el cromosoma
contiene dos copias de una secuencia de insercin, en la misma orientacin y
bastante cerca juntos, entonces la recombinacin entre los dos es elementos dar
lugar a la supresin de la regin del cromosoma entre ellos. Esto puede ser una
causa significativa de la variacin entre las cepas bacterianas, como en
Mycobacterium tuberculosis, donde gran parte de la variacin de la cepa surge de
deleciones debido a la recombinacin entre secuencias de insercin.
6.4.2 sitio especfico y la recombinacin no homloga (ilegtima)
La recombinacin entre molculas de ADN puede ocurrir en otras formas, que no
son dependientes de la presencia de extensas regiones de homologa ni en la
accin de RECCA. Los ejemplos de stos, tratan en este libro otros lugares,
incluyen la integracin de ADN del bacterifago lamda, en el cromosoma, que
implica una recombinacin especfica de sitio entre una secuencia definida en el
ADN del fago y un sitio cromosmico especfico (Captulo 4), y el transposicin de
elementos mviles (secuencias de insercin y transposones) como se describe en
el captulo 7.
6.5 Genes mosaico y plasticidad cromosmica.
La transferencia de genes y la recombinacin no se limitan a genes enteros, pero
tambin pueden implicar partes de genes. Si el segmento de gen transferido
proviene de una especie diferente, esto se traducir en un gen mosaico en el que
un segmento es radicalmente diferente de la que normalmente se ve (ver Figura
6.10). Un ejemplo, encontrada anteriormente en este captulo, es el desarrollo de
la resistencia a la penicilina en Str. pneumoniae. El examen de los genes PBP
(que codifican las protenas penicillinbinding, que son el objetivo de la accin
penicilina) en cepas penicillinresistant muestra que algunas regiones son
sustancialmente diferentes de las secuencias correspondientes en las cepas
sensibles a la penicilina. Las diferencias son demasiado grandes para ser
explicada por la mutacin simple.
Sin embargo, estas regiones son muy similares a las secuencias correspondientes
en los estreptococos naturalmente resistentes que se encuentran en la boca, tales
como Streptococcus mitis. A partir de esto, se infiere que las partes de los genes
PBP han sido sustituidos por el ADN de estas otras especies. La facilidad con la
que una parte de un gen puede ser sustituida por otra pieza de ADN se refiere a la
estructura de la protena correspondiente. Muchas protenas se pliegan en varias
estructuras relativamente independientes conocidos como dominios, que estn
conectados por bucles flexibles (vase la figura 6.10, y el Captulo 1). Cada
dominio tiene su propia funcin en la actividad de la enzima. As, por ejemplo, una

enzima fosforilante (quinasa) puede tener un dominio que se une ATP y un

segundo dominio que se une al sustrato especfico. Por lo tanto, es posible
mezclar y combinar los genes en cuestin sin alterar la estructura global de la
enzima resultante. Esto se refiere a veces como dominio revolver. Ahora podemos
refinar nuestro concepto general de la variacin en las bacterias y la estructura del
genoma bacteriano.
La vista sencilla - que las bacterias (como los organismos que se reproducen
asexualmente) experimentan variacin meramente a travs de la adquisicin
gradual de mutaciones - es claramente insuficiente. Transferencia horizontal de
genes es moneda corriente (en la mayora de las especies), y no slo entre las
cepas de la misma especie, pero entre las especies y gneros; a veces a travs
de fronteras taxonmicas bastante ancho. Tcnicamente, nos referimos a una
especie que vara slo por mutacin, sin transferencia horizontal de genes, como
clonal. Todos los miembros de un clon descienden de un solo individuo, por lo que
aunque habr alguna variacin gradual, el examen de una sola caracterstica
(como el serotipo) dar una prediccin razonable de otras caractersticas de los
miembros de ese clon. Transferencia horizontal de genes se rompe esta relacin,
de modo que dos cepas pueden ser idnticos en muchos aspectos, pero
radicalmente diferente en otros. Volveremos a este concepto ms adelante,
cuando se considera el uso de tcnicas moleculares para la tipificacin de
bacterias (captulo 9).
Ms adelante en el libro (Captulo 10) tambin estaremos considerando el anlisis
de la estructura del genoma bacteriano. Genmica comparativo muestra que en
algunas especies, adems de la variacin a travs de la mutacin y mediante la
adquisicin de ADN de otras especies, ha habido un considerable reordenamiento
del genoma. Regiones de ADN, llevando un nmero de genes, se encuentran en
diferentes ubicaciones enteramente en diferentes cepas, o en especies
estrechamente relacionadas. Estos reordenamientos del genoma, a travs de la
recombinacin (posiblemente mediada por la accin de elementos de
transposicin, como veremos en el siguiente captulo), proporciona evidencia de la
plasticidad del genoma que contribuye en gran medida no slo a la variacin que
existe entre las bacterias, sino tambin a la emocin de investigarlo.