VI.

ANEXOS
ANEXO N 1
TEMA:
DETERMINACIN DE LA ACIDEZ DEL VINAGRE
FUNDAMENTO: El vinagre o vinagre de vino es un producto
obtenido de compuestos amilceos mediante una fermentacin
durante la cual, por la influencia de agentes microscpicos:
Mycoderma aceti, Bacteriun oxidan, el alcohol etlico a cido actico.
Presenta una acidez total expresada como cido actico, (CH3COOH).
La determinacin se fundamenta en la neutralizacin del cido
actico mediante la adicin de una base fuerte. La localizacin del
punto final con un indicador cido-base. El mtodo permite que el
hidrxido de sodio reaccione con el cido actico del vinagre segn la
siguiente reaccin cido-base:
CH3-COOH + NaOH CH3COONa +
H2O
OBJETIVO: Determinar la concentracin de cido actico en una
muestra de vinagre a travs de una titulacin volumtrica cido-base
para conocer su grado de acidez.
MATERIALES Y REACTIVOS

Bureta de 25 ml
Pipeta Graduada de 10 ml
Pipeta Volumtrica de 10 ml
Erlenmeyer de 250 ml
Probeta de 50 ml
Agitador de Vidrio
Vinagre Comercial o Vino Blanco
Solucin de Hidrxido De Sodio (NaOH) 01 N
PROCEDIMIENTO
1. Tomamos una pipeta volumtrica de 10 ml de muestra y
transferimos a un erlenmeyer
2. Adicionamos 90 ml de agua destilada, 5 gotas de naranja o rojo de
metilo y agitamos hasta homogenizacin total.

3. Calibramos una bureta con NaOH 0.1n y luego adicionamos gota a

gota en la solucin cida hasta que cambie de color
1. Registramos el volumen de lcalis consumido y calculamos la acidez
expresada en como cido actico (CH3 - COOH), usando la ecuacin
de la acidez.
Clculos:
ACIDEZ

= ml de NaOH X N X K X 100 / volumen de muestra

1000 ML

40g NAOH
1N

250 ML

X
0.1 N

X = 250 ML x 40g NAOH x 0.1 N / 1000 x 1 N

X= 1 g NAOH
ANEXOS

ANEXO 1

ANEXO 3

ANEXO 2

ANEXO 4

CONCLUSION
Concluida la prctica se determin la concentracin de cido actico
en una muestra de vinagre, y a travs de una titulacin volumtrica
tiene un grado acidez de 4.8 (un grado de acidez moderadamente
bajo).

FIRMA

ANEXO N 2
TEMA:
EFECTOS DE LA CONCENTRACIN DEL SUSTRATO EN LA
CINTICA ENZIMTICA
FUNDAMENTO
Se fundamenta la prctica en la capacidad que posee el sustrato en
diferentes concentraciones para formar un complejo sustrato-enzima,
si aumenta la concentracin tambin lo hace la velocidad hasta su
decrecimiento por la limitante que tiene la enzima.
OBJETIVO
Interpretar como afecta a la formacin del complejo sustrato enzima y
la velocidad de la cintica enzimtica.
MATERIALES Y REACTIVOS

5 Tubos de ensayo de 15 ml
Pipetas graduadas
Vasos de precipitacin
Buretas
Bao de Mara
Urea 0.25 M
Ureasa
Solucin buffer pH 6.2; 7.2; 8.2; 9.2
Cl2Hg 1%
ClH 01 N
Indicador rojo de metilo 0.05 %
PROCEDIMIENTO
1. Disponemos y rotulamos 5 tubos numerados del 1 al 5 y el ltimo
como testigo.

2. Adicionamos en cada tubo urea 0.25 M, de acuerdo a lo siguiente:

T
T
T
T
T

1:
2:
3:
4:
5:

2.5 ml
5.0 ml
7.5 ml
10 ml
5.0 ml

3. Adicionamos la solucin buffer pH 7.2, de acuerdo a lo siguiente:

T
T
T
T
T

1:
2:
3:
4:
5:

9.5.ml
7.0 ml
4.5.ml
2.0 ml
7.0 ml

4. En el tubo testigo adicionamos 5 gotas de Hg Cl 2.

5. Sometemos al bao Mara a 50C por 15 minutos.
6. Adicionamos en cada uno de los tubos 0.5 ml de ureasa.
7. Colocamos
temperatura.

a bao Mara durante 30 minutos a

la misma

8. Adicionamos en cada tubo 5 gotas de Hg Cl 2 a excepcin del

testigo.
SOLUCIN

T1

T2

T3

T4

Urea 0.25
M

2.5 ml

5.0 ml

7.5 ml

10 ml

5.0 ml

Buffer 7.2
pH

9.5 ml

7.0 ml

4.5 ml

2.0 ml

7.0 ml

Cl 2Hg

5 gotas

5 gotas

5 gotas

5 gotas

5 gotas

B. Mara
15

50 C

50 C

50 C

50 C

50 C

ureasa

0.5 ml

0.5 ml

0.5 ml

0.5 ml

0.5 ml

B. Mara
30

50 C

50 C

50 C

50 C

50 C

Cl 2Hg

5 gotas

5 gotas

5 gotas

5 gotas

5 gotas

VALORACIN DE LA CINTICA

Procedemos a valorar los micromoles de urea hidrolizados para lo cual

se sigue el siguiente ordenamiento:
1. Con una pipeta volumtrica transferimos del tubo testigo 5 ml a un
erlenmeyer, adicionamos, 10 ml agua destilada y 3 gotas del
indicador rojo de metilo.
2. Desde una bureta adicionamos gota a gota ClH 0.1N, hasta el
cambio de coloracin de la solucin.
3. Registramos el volumen del ClH consumido.
4. Realizamos el mismo proceso con cada uno de los tubos restantes y
se obtiene el titulo corregido de cada tubo restando el valor del
volumen consumido en el tubo testigo.
TUBOS

TTUL
O

T
(TESTIGO)

T.
CORREGID
O

T1

3.2 ml

1.7 ml

1.5

T2

5.3 ml

1.7 ml

3.6

T3

5.0 ml

1.7 ml

4.3

T4

3.7 ml

1.7 ml

2.0

CLCULO DE LA UREA HIDROLIZADA

1. El titulo corregido de cada tubo se multiplica por 50 que
corresponde al equivalente de micromoles de urea hidrolizados.
MUESTR
AS

VOLUMEN
DE HCL

F. DE
CONVER.

M DE UREA
HIDROL.

T1

1.5 ml

50

75

T2

3.6 ml

50

180

T3

4.3 ml

50

215

T4

2.0 ml

50

100

2. Calculamos los micromoles de urea contenido en cada tubo, para lo

cual se multiplica el volumen adicionado del sustrato por 250, que
corresponde al equivalente de la urea 0.25 M, y se divide para
12.5, que es el volumen total de sustrato, buffer y enzima.

TUB

T.CORRE

UREA

UREA

OS

TITU
LO

GIOO

ADICD.

HIDROL.

T1

2.5
ml

1.5

75

12

T2

5.0

3.6

180

14.4

T3

7.5
ml

4.3

215

11.46

T4

10
ml

2.0

100

CALCULO DEL PORCENTAJE:

Tubo 1:
Sustrato: 2.5ml Urea

2.5ml Urea *250= 625 Urea hidrolizada

625 Urea Hidrolizada
75
U hidrolizada
=

100%
x

100 75 ml
=12
625 ml

Tubo 2:
Sustrato:5.0 ml Urea

5.0 ml Urea *250= 1250 Urea hidrolizada

1250 Urea Hidrolizada
180 U hidrolizada
=

100 180 ml
=14.4
1250 ml

Tubo3
Sustrato: 5.0 ml Urea

7.5 ml Urea *250= 1875 Urea hidrolizada

100%
x

1875 Urea Hidrolizada

215 U hidrolizada
=

100%
x

100 215 ml
=11.46
1875 ml

Tubo4:
Sustrato: 10 ml Urea

10 ml Urea *250= 2500 Urea hidrolizada

2500 Urea Hidrolizada
100 U hidrolizada
=

100%
x

100 100 ml
=4
2500 ml

CALCULOS DE MICRO-MOLES DE UREA

Tubo 1:
Sustrato: 2.5ml Urea

2.5ml Urea *250= 625 Urea hidrolizada/ 12.5= 50 micromoles de

urea

Tubo 2:
Sustrato: 5.0 ml Urea

5.0 ml Urea *250= 1250 Urea hidrolizada/ 12.5= 100 micromoles

de urea

Tubo3
Sustrato: 7.5 ml Urea

7.5 ml Urea *250= 1875 Urea hidrolizada/12.5= 150 micromoles de

urea

Tubo 4:
Sustrato: 10 ml Urea

10 ml Urea *250= 2500 Urea hidrolizada/ 12.5= 200 micromoles

de urea
3. Representa en el eje de coordenadas los valores obtenidos de urea
hidrolizada en cada tubo en el eje de las Y; mientras que la variable
correspondiente en el eje de las X.

MICRO
Efectos de la concentracin del sustrato
de la cinetica enzimatica
MOLES
DE

UREA
MICROMOLES
DE UREA HIDROLIZADAS
HIDRO
LIZ AD
SUSTRATO A

INTERPRETACIN
Se interpreta la cintica desarrollada en cada tubo estableciendo lo
siguiente:
a. Valor ptimo en que se desarrolla la cintica enzimtica para cada
uno de los factores.
Tubo testigo: 1.7 ml ClH consumido.
T1:
T2:
T3:
T4:

3.2
5.3
5.0
3.7

ml
ml
ml
ml

1.7
1.7
1.7
1.7

ml
ml
ml
ml

=
=
=
=

1.5
3.6
4.3
2.0

ml
ml
ml
ml

5.7 valor optimo

Es los 4 tubos los valores de ml corregidos son menores que el valor

optimo lo que significa que el sustrato es menor que el normal por lo
tanto son des acelerados.
ANEXO

Anexo
Anexo 3

Anexo 2

CONCLUSIN
Concluida la prctica determinamos como afecta a la formacin del
complejo sustrato enzima y la velocidad de la cintica enzimtica,
observamos la reaccin obteniendo como resultados que las
concentraciones utilizadas que dieron una desaceleracin de la
velocidad de reaccin y el sustrato enzima pudo desarrollarse en
todas las muestras.
FIRMA

PRACTICA N 3
TEMA:
DETERMINACIN DE ALMIDN EN HARINA
MTODO: (HIDRLISIS ACIDA Y VOLUMETRA)
FUNDAMENTO
Aplicando calentamiento a ebullicin y destilacin con refrigerante
de reflujo, con CIH concentrado, se produce la hidrlisis acida del
almidn y su inversin completa en glucosa dextrosa), que ejerce
una accin reductora en caliente sobre las sales alcalinas de cobre
(reactivo de fellings, solucin a y b).

OBJETIVO
Determinar el peso de la muestra, con sus valores propios, los
resultados finales y determinar el porcentaje del almidn en la
muestra de harina.
MATERIALES Y REACTIVOS

Matraz Erlenmeyer
Algodn
Vaso De Precipitacin
Pipeta Volumtrica
Baln Aforado
Bureta
HCL Concentrado
Fenolftalena
KOH Al 25%
Tiosulfato De Sodio (Na2S2O3)
Agua Destilada
Harina
PROCEDIMIENTO

1. Pesamos dos gramos de muestra (harina) en un erlenmeyer,

adicionamos 100 ml de agua destilada y 50 ml de HCL concentrado y
seguidamente ponemos a hervor por 1 hora.
2. Dejamos enfriar y adicionamos 7 gotas de fenolftalena.
3. Desde una bureta adicionamos KOH al 25 %, hasta neutralidad
fenolftalena y se neutraliza KOH al 25%, es decir hasta tener una
coloracin rosa.
4. Seguidamente de esto filtramos en un vaso de precipitado.
5. Tomamos 50 ml del filtrado con una pipeta volumtrica y transferimos
a un baln aforado de 250 ml de capacidad, enrasamos con agua
destilada; obtenindose
esta manera la solucin lista para la
titulacin.
6. Finalmente titulamos con Tiosulfato de sodio hasta su decoloracin, en
el cual se utilizaron 22 ml.
CALCULOS:

% DE ALMIDN = g. de Dextrosa 250x100 x 0,9 / 100 x 2g x

50
%DE ALMIDN= 2.25
ANEXO

ANEXO 1
ANEXO 2

ANEXO 3
ANEXO 4

CONCLUSIN
Concluida la prtica determinamos el peso de la muestra y con sus
valores propios, y por ultimo determinamos que el porcentaje del
almidn en la muestra de harina (2.25%) en 2gr, y la neutralizacin
de la fenolftalena que tuvo una coloracin rosa.

ANEXO N 4
TEMA:
MATERIA INSAPONIFICABLE
FUDAMENTO

El porcentaje de materia insaponificable se determina por

halogenacin de la grasa en medio alcohlico valorando el contenido
de materia Insaponificable con NaOH, en presencia de un indicador
como la fenolftalena.
OBJETIVO
Determinar el contenido de materia insaponificable en una muestra
de manteca de chancho a travs de la titulacin con NaOH en
presencia del indicador fenolftalena.
MATERIALES Y REACTIVOS

Vaso de precipitacin de 250 ml

Erlenmeyer 250 ml
Bureta de 25 ml
Probeta
Agita de vidrio
Hidrxido de sodio
Bao Mara
Solucin (NaOH)
Fenolftalena
Agua destilada
Etanol
Manteca de chancho
ter di etlico
PROCEDIMIENTO
1. Pesamos alrededor de 5 g. de muestra bien homogenizada en un
Erlenmeyer de 250 ml y adicionar 30 ml. de alcohol y 5 ml de
solucin de hidrxido potsico acuoso (50%).
2. Calentamos a 75C por una hora hasta saponificacin completa.

2. Adicionamos en frio 50 ml de etanol y 50 ml de ter dietilico, agitar

vigorosamente y dejar en reposo hasta la clarificacin de dos capas
lipdicas.
4. Extraemos con una pipeta la capa superior de la solucin lipdica
sin que se absorba el residuo de la capa inferior.
1.Evaporamos el alcohol-ter en bao de Mara a 75C, hasta que no
haya la emanacin de vapores.

6. El residuo lipdico extrado se lleva a neutralizacin, para lo cual se

adiciona 50 ml de etanol, 1 ml de fenolftalena, y se titula con NaOH
0.1 N, hasta el cambio de color dbilmente.
CLCULOS:
M.I. = 1 ml de NaOH 0,1N x 0,0056 / Peso de la muestra
M.I.

= 1 ml de NaOH 0,1N x 0,0056 / 5g

M.I.

0.0012 ml

ANEXO

ANEXO

ANEXO 2

CONCLUSION
Concluida la prctica determinamos el contenido de materia
insaponificable en una muestra de manteca de chancho que tiene una
cantidad 0.0012 ml a travs de la titulacin (NaOH) en presencia de la
fenolftalena que tiene un indicador de disoluciones bsicas que vara
desde un pH 8 a 10, transformando disoluciones incoloras en
disoluciones con rosados.