TINCIONES ESPECIALES EN HISTOQUMICAS

Grupo: N 10

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA DE LABORATORIO CLINICO E HISTOPATOLOGICO
CATEDRA DE:
TCNICAS HISTOLGICAS
DOCENTE:
LIC. IVN PEAFIEL
GRUPO: N 10
TEMA:
TINCIONES ESPECIALES EN HISTOQUMICAS
ELABORADO POR:
ALLAUCA VIVIANA
COLLAGUAZO GABRIELA
DE LA TORRE KATHERINE
MARTINEZ NATALY
TERCER SEMESTRE

PERIODO ACADMICO:
OCTUBRE 2015- FEBRERO 2016

Lab. Clnico e Histopatolgico

Tcnicas histolgicas

TINCIONES ESPECIALES EN HISTOQUMICAS

Grupo: N 10

INTEGRANTES:
N
1
2
3
4

N1

APELLIDOS Y NOMBRES
ALLAUCA CARRILLO CELIA VIVIANA
COLLAGUAZO ENRQUEZ ERIKA GABRIELA
DE LA TORRE ZABALA JESSICA KATHERINE
MARTINEZ INCA NATALY VIVIANA

25%

50%

75%

PARTICIPACIN
100%
Observacin
100%
Su colaboracin fue clave
para la correcta
elaboracin del presente
trabajo.
100%
Su colaboracin fue clave
para la correcta
elaboracin del presente
trabajo.
100%
Su colaboracin fue clave
para la correcta
elaboracin del presente
trabajo.
100%
Su colaboracin fue clave
para la correcta
elaboracin del presente
trabajo.

Cal. Docente

INTRODUCCIN

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Tcnicas histolgicas

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Grupo: N 10

Realizamos todo tipo de tcnicas de histoqumica para facilitar un diagnstico acurado

al patlogo. La histoqumica es la aplicacin de las reacciones qumicas y bioqumicas
en la tcnica histolgica, con el fin de localizar y determinar de manera cientfica ciertas
sustancias o su actividad.
En todas estas reacciones o bien se tie la sustancia que buscamos o los colorantes
reaccionan qumicamente con ella, como es el caso del PAS. Las tcnicas histoqumicas
comprenden el conjunto de mtodos empleados para la demostracin de la naturaleza
qumica de los componentes tisulares y celulares. Se recurre al empleo de estas
tinciones histoqumicas cuando la pretensin es visualizar (teir) especficamente una
sustancia determinada. Los mtodos histoqumicas se basan, pues, en hacer reaccionar
qumicamente (incubar) determinados reactivos con los componentes celulares o
tisulares que queremos demostrar para obtener un producto final que es coloreado y
puede verse con el microscopio.

TINCIONES ESPECIALES EN HISTOQUMICAS

Incluiremos dentro de las tcnicas histoqumicas a aquellas que supongan una reaccin
qumica en la que intervienen molculas pertenecientes al propio tejido (trataremos la
deteccin de glcidos mediante lectinas y la inmunohistoqumica en apartados
diferentes a ste, aunque algunos autores las incluyen como tcnicas histoqumicas).
El objetivo de la histoqumica es poner de manifiesto una molcula o familia de
molculas presentes en una seccin histolgica y estudiar su distribucin tisular "in
situ". Estas molculas son difcilmente discernibles con colorantes generales. Durante
el procesamiento del tejido previo a la reaccin histoqumica, como la fijacin o la
inclusin, hay que evitar daar a la molcula que queremos detectar porque de otra
manera resultara en falsos negativos, es decir, no tener tincin cuando en realidad la
molcula de inters s est presente en el tejido, aunque deteriorada. En algunas
ocasiones es necesario realizar pasos previos a la reaccin histoqumica para descubrir
la molcula que queremos detectar, por ejemplo usando un fijador adecuado, ya que de
otra manera no reaccionara con los reactivos qumicos. Vamos a dividir las tcnicas
histoqumicas en dos grupos: reacciones qumicas e histoqumica enzimtica.
Las reacciones qumicas consisten en la modificacin qumica de molculas del tejido
para posteriormente poder colorearlas. Existen tcnicas histoqumicas para detectar
glcidos, protenas y nucletidos. La tcnica histoqumica ms empleada es la
reaccin de PAS (Periodic Acid Schiff). Se utiliza para la deteccin de hidratos de
carbono, libres o conjugados, cuando estn en cantidades relativamente grandes en los
tejidos. La modificacin qumica del tejido consiste en la oxidacin mediante el cido
peridico de los enlaces entre los carbonos prximos que contienen grupos hidroxilos.
Esto provoca la formacin de grupos aldehdos que sern reconocidos por el reactivo
de Schiff, el cual se combinar con ellos para dar un color rojizo brillante. Entre los
componentes del reactivo de Schiff est la pararo sanilina (un componente de la

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fucsina bsica) tratada con cido sulfrico. Una gran ventaja de la tincin histoqumica
PAS es su capacidad de discriminacin de tipos de glcidos con pequeas
modificaciones de la tcnica.

Tincin con hematoxilina-eosina (imagen de la izquierda) y PAS-hematoxilina (imagen

de la derecha) de las vellosidades del intestino de humano cortadas transversalmente. Se
puede apreciar a las clulas caliciformes teidas de rosado con la tcnica de PAS por su
alto contenido en mucopolisacridos, mientras que en una tincin general aparecen
transparentes, sin teir.
La histoqumica enzimtica o histoenzimologa se basa en la capacidad que tienen
algunos enzimas del tejido de mantener funcional su centro activo tras el proceso de
fijacin. Estos enzimas y las clulas que los poseen se ponen de manifiesto mediante
una reaccin enzimtica que convierte a unos sustratos solubles e incoloros en
productos insolubles y coloreados. Los sustratos son especficos para el enzima y los
productos se depositan en el lugar preciso donde se produjo la reaccin, es decir,
donde se localiza el enzima. Las enzimas que se pueden detectar son variadas como
las peroxidasas, fosfatasas, deshidrogenasas, diaforasas, acetilcolinesterasa, etctera.
Hay que tener en cuenta que cuando queremos detectar una actividad enzimtica es
recomendable no incluir el material en medios como la parafina puesto que la
deshidratacin y la temperatura elevada pueden daar la conformacin de la enzima y
por tanto la actividad de su centro activo. Por ello estas tcnicas se realizan
normalmente en secciones obtenidas por congelacin o con el vibratomo.
La actividad NADPH diaforasa se asocia a las enzimas sintasas del xido ntrico en
sistema nervioso y vascular. A estos enzimas se les ha relacionado con el control del
flujo sanguneo y con ciertos aspectos de la fisiologa del sistema nervioso. Esta
tcnica permite detectar neuronas que expresan la enzima sintasa del xido ntrico de
una forma sencilla y rpida. La reaccin es NADPH + tetrazolio = NADP + +
formazn. Es el formazn el producto coloreado e insoluble que se puede observar con
el microscopio ptico, incluso con el electrnico.

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Imagen de un corte de 60 m de grosor de cerebro obtenida con un criostato y

procesada para histoqumica enzimtica que pone de manifiesto una actividad diaforasa
perteneciente a la enzima xido ntrico sintasa neuronal que aparece en algunas
neuronas (clulas con un color azul intenso).
TCNICA DEL PAS (cido Peridico Schiff)
Consiste en oxidar los tejidos mediante el cido peridico (HIO4) para incrementar el
nmero de grupos carbonilo (aldehdo o cetona) presentes en ellos, de forma que puedan
ser demostrados posteriormente mediante reactivo de Schiff.
Los hidratos de carbono contienen grupos carbonilos relativamente aislados, en una
proporcin aproximada de uno por molcula de monosacrido. Precisamente por ello es
necesario oxidarlos con el fin de incrementar dichos grupos, que solo pueden ser
detectados por el reactivo de Schiff si se encuentran situados en carbonos contiguos y
delimitados por grupos alcohlicos o amino.
Para los grupos aldehidos que aparecen en posicin 1,2 glicol estas condiciones se
cumplen exclusivamente tras la oxidacin de los correspondientes radicales hidroxilo.

Procedimiento Tcnico:
Fijacin:

Formol al 4 % o Lquido de Carnoy o Bouin.

cido Peridico0.5 % p/v.

Reactivo de Schiff:
1

Fucsina bsica (CI: 42510) 1g.

Agua destilada... 200 ml.

Disolver la fucsina en 200 ml de agua (d) hirviendo.

Dejar enfriar hasta aproximadamente 50 C. y filtrar

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Posteriormente agregar 20 ml de HCl 1N. Despus enfriar hasta 25 C y aadir 1g de

Bisulfito sdico o Metabisulfito potsico (sdico).
Mantener en la oscuridad. El lquido tarda unos 2 das o a veces 24h en tornarse de color
amarillo que indica que est listo para su uso.
Aadir 2g de carbn activado, mezclar y filtrar hasta que desaparezca el color.
La solucin debe conservarse en el refrigerado protegido de la luz.
o

Bao de cido Sulfuroso o Agua sulfurosa:

cido Clorhdrico (HCl) 1N 5 ml.

Metabisulfito sdico 10 %... 6 ml.

Agua (d)... 100 ml.

Colorante de contraste: Hematoxilina, Orange G o Van Gieson.

Tcnica de Tincin:

Desparafinar e hidratar (xilol y decrecientes alcoholes)

cido peridico 0.5 % 5 min.

Lavar en agua (d).

Reactivo de Schiff.. 15- 30 min.

Aclarar en 3 baos de agua sulfurosa 2 min. Cada uno.

Lavar en agua corriente

Colorante de contraste

Lavar con agua corriente.

Deshidratar, aclarar y montar.

Resultados:
Material PAS +: rojo oscuro a magenta.
B. Compuestos PAS +

polisacridos simples: como el glucgeno y la celulosa.

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Mucopolisacaridos neutros: se encuentran en el epitelio gstrico, en glndulas del

duodeno y en cpsulas bacterianas, tambin en intestino y estmago.

mucoprotenas como son algunas mucinas del tubo digestivo y del rbol respiratorio o
bronquial, tambin la tiroglobulina que est en el tiroides y la hormona estimulante.

Glucoprotenas del suero

Glucolpidos: como los ganglisidos y cerebros idos.

C. Compuestos PAS Los mucopolisacaridos cidos no pueden ser oxidados por el cido peridico y por eso
son PAS - (ya que no aparecen los grupos carbonilos)
D. Controles de la tcnica del PAS.
Es imprescindible realizar preparaciones testigo o de control que confirmen los
resultados obtenidos, para ello suelen ser muy tiles las tcnicas de bloqueo tales como
las de bloqueo de grupos aldehdos en general y las de acetilacin de grupos aldehdos
situados en posicin 1,2 glicol.
TINCIN DE GRAM
Incluyen tcnicas para las bacterias gram-positivas y gram-negativas, micobacterias
cido-resistentes, hongos y parsitos. La tincin de Gram, tambin conocida como
coloracin de Gram, es una tcnica de laboratorio que se utiliza rutinariamente en los
estudios microbiolgicos de las bacterias. Fue diseada por Christian Gram, un
cientfico dans, en el ao 1884. El objetivo de Gram era conseguir una prueba con la
que fuera posible diferenciar diferentes grupos de bacterias para as poder estudiarlas y
clasificarlas. La prueba result todo un xito y pronto se convirti en una tcnica muy
til no solo para el estudio de las bacterias, sino tambin para poder identificarlas
rpidamente en una infeccin y seleccionar el antibitico ms adecuado para tratarla.
La tcnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier origen
(esputo, orina, pus, etctera) que supuestamente contenga bacterias no identificadas. Los
colorantes tien la pared de las bacterias de color morado y, tras unos minutos, se
realiza un lavado del colorante. Despus de eso puede que el colorante permanezca en la
pared bacteriana o que se haya ido. En el primer caso permanecera el color morado, y
se tratara de bacterias Gram positivas y, en el segundo, la pared tendra un color rosado,
y seran Gram negativas.

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Estos dos
grupos
de
bacterias

son

los pilares en
los

que
basa

se
la

clasificacin de la ampla mayora de las bacterias. Cada uno de los grupos responde de
forma diferente a cada tipo de antibiticos, por eso es una tcnica til para seleccionar el
frmaco antimicrobiano inicial ante una infeccin. Hay que tener en cuenta que en
ciertas situaciones (como la sepsis) es muy importante iniciar un tratamiento antibitico
adecuado de forma precoz, por eso la tincin de Gram se pide de urgencia en muchas
ocasiones.
La tincin de Gram tambin tiene ciertas limitaciones. Algunas bacterias no tienen
pared, como por ejemplo las Chlamidias, y no se podrn identificar, al igual que los
virus. En esos casos la tincin no colorear ningn germen. Otro aspecto negativo de la
prueba es que no puede identificar el tipo exacto de bacteria responsable de la infeccin.
Para ello es necesario realizar un cultivo microbiolgico que se acompaa siempre de
un antibiograma para estudiar de forma exacta el antibitico ms efectivo.
Cristal Violeta 1%.
Cristales de Violeta1gr.
Agua100ml.
Fucsina Bsica al 0.25%.
Fucsina Bsica0.25gr.
Agua100ml.
Yodo de Gram.
Agua300ml.
Yoduro de Potasio2gr.

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Yodo1gr
Tcnica:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

Luego realizamos la tincin

Agregamos cristal de violeta durante un minuto.
Enjuagamos con un pequeo chorro de agua
Agregamos Lugol durante un minuto
Enjuagamos con un pequeo chorro de agua
Agregamos alcohol acetona colocndole en forma inclinada
Enjuagamos con un pequeo chorro de agua
Agregamos safranina durante un minuto

EXPLICACIN
El cristal violeta (colorante catinico) penetra en todas las clulas bacterianas (tanto
gram positivas como gram negativas) a travs de la pared bacteriana. El lugol es un
compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl
(Siulterio), los cuales estn presente para solubilizar el yodo, y actan de mordiente,
haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la clula
bacteriana. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en solucin acuosa
con el cristal violeta..
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloracin, ya que
en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos gram positivos no
se decoloran, mientras que los gram negativos s lo hacen.
Para poner de manifiesto las clulas gram negativas se utiliza una coloracin de
contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina.
Despus de la coloracin de contraste las clulas gram negativas son rojas, mientras que
las gram positivas permanecen violetas.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la tcnica. Sirve para hacer una
tincin de contraste que pone de manifiesto las bacterias gram negativas. Al trmino del
protocolo, las gram positivas se vern azul-violceas y las gram negativas, se vern
rosas (si no se hizo la tincin de contraste) o rojas (si se us, por ejemplo, safranina).

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TINCIN DE
GRAM MODIFICADA BROWN- BRENN
Puede ser ocupada tanto en tejidos frescos como en tejidos fijados con Formalina al
10%.
Propsito: Para demostrar gram-negativas y gram-positivos en el tejido
Reactivos:
Cristal Violeta al 1%
Lugol
Acetona
Fucsina bsica al 0,25
cido Pcrico Acetona
Tcnica:
Desparafinar e hidratar al agua destilada
Tincin de CristalVioleta por 1 minuto
Lavar en agua corriente
Aplicar lugol por 1 minuto
Lavar agua corriente
Decolorar con alcohol-Acetona (saca el exceso del colorante Cristal Violeta)
Lavar en agua corriente
Tincin con Fucsina bsica durante 3 minutos.
Lavar en agua corriente, y secar levemente la muestra.
Pasar rpidamente por 2 baos de acetona para iniciar la diferenciacin dela fucsina.
Pasar a la mezcla de cido Pcrico solucin acetona al 0,1% (tambin acta como
diferenciador) hasta que aparezca un color rosado-amarillo en la muestra.
Pasar por 2 cambios deacetona
Secar al aire, pasar al xilol y cubrir con enteyan.
RESULTADOS
Bacterias Gram positivas : azul
Bacterias Gram negativas: rojo
Ncleos: rojo
Fondo: Amarillo

TINCIN DE ZIEHL-NEELSEN

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La tincin de Ziehl-Neelsen es una tcnica de tincin diferencial rpida y econmica,

usada para la identificacin de bacterias cido-alcohol resistentes (BAAR) , como M.
tuberculosis.
Para demostrar la presencia de BAAR en cortes de tejido en parafina.
Los reactivos necesarios para su realizacin son los siguientes:
1. cido perydico 58%
2. carbol fucsina de Ziehl culina(fucsina fenicada). Preparar mezclando en el orden
dado:
1. 0,5 g fucsina bsica
2. 50 ml agua destilada
3. 5 ml etanol absoluto
4. 28,5 g cristales de fenol derretidos
3. hematoxilina
4. alcohol cido 1%:
1. Acido Clorhdrico1ml.
2. Alcohol ABS99ml.
Tcnica:
1. desparafinar e hidratar los cortes
2. cido peridico 5%, 10 min
3. lavar con agua destilada
4. fucsina fenicada, 15 min
5. decolorar en alcohol cido al 50%
6. lavar con agua destilada
7. hematoxilina, 10 min
8. carbonato de litio, azulamiento

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9. deshidratar, aclarar y montar preparaciones

Resultados
BAAR: rojo.
Ncleos: azul semiamarillo.
TCNICA DE GRIMELIUS
Tcnica de Grimelius no modificada se utilizan principalmente para la identificacin de
las clulas neuroendocrinas y sus tumores, tambin para la demostracin de fibras de
reticulina, melanina y calcio. Demostrar Grnulos Argirofilos.
Fijador: Bouin.
Corte: 4-6 micras.
Reactivos:
Impregnacin:
Solucin de Plata 1%.
Nitrato de Plata al 1%...4ml.
Buffer de Acetato (0.2mol)10ml.
Agua Bidestilada86ml.
Reduccin:
Solucin de Hidroquinona.
Hidroquinona1gr.
Sulfato de Sodio5gr.
Agua Bidestilada100ml.
Tcnica:
1.-Desparafinar hidratar.
2.-Solucin de Plata 58* a 60*C3Hrs.
3.-Lavar en Agua.
4.-Solucin de Hidroquinona 40* a 45*C1:30Hrs.
5.-Lavar en Agua.
6.-Deshidratar, Aclarar y Montar.
Resultados:

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Grnulos ArgirofilosPardo, Dorado o Negros.

TECNICA DEL ROJO CONGO
La tincin llamada rojo Congo es considerada como la tcnica ms fiable y prctica para
detectar amiloidey tambin se usa para teir preparaciones microscpicas,
especialmente en tinciones para el citoplasma y los eritrocitos.
Tcnica:
1.- Cortes por congelacin 10 micras.
2.- Colocarlos en solucin de Rojo congo al 1% en agua,- 30 min.
3.- Poner en carbonato de Litio (a saturacin en agua)---15 seg.
4.- Lavar en alcohol de 80, hasta que no arrastre mas colorante.
5.- Lavar en agua corriente 15 min.
6.- Teir con hematoxilina.
7.- Lavar en agua, deshidratar, aclarar y montar.
Resultados, el amiloide se tie en rojo claro, y brilla con luz polarizada.

TINCIONES PARA MUSINA:

La mucina es el trmino tradicional utilizado para un gran grupo de macromolculas
que contienen un grupo acido, que se divide en dos categoras principales:

Glicoprotenas: unido a la membrana o secretada compuestos por :

1. Un grupo de protenas
2. Un cido silico que contiene restos de carbohidratos
Glicosaminoglicanos del estroma que contienen: Acido hialurnico que puede
ser tambin sulfatado.

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Grupo: N 10

Las tinciones utilizadas para la demostracin especfica de mucinas altamente acidas

como: Azul de alciano
Se utilizan para clasificar a la metaplasia gstrica incompleta que tienen un potencial
maligno supuestamente diferente.
AZUL DE ALCIANO
El Alcian Blue es un colorante soluble en agua que deriva de su color azul del cobre en
las molculas.
Es un tinte bsico y por lo tanto tiene una afinidad por los tejidos que contienen grupos
aninicos tales como mucinas con cido y otros carbohidratos cidos.
Hay diferentes tipos de PH que colorean selectivamente diferentes tipos de mucinas
cidas. El Alcian Blue puede ser combinado con la tcnica de PAS para demostracin de
mucinas neutrales y cidas.
La tcnica de PAS se utiliza en los preparados para microscopa ptica, permitiendo la
tincin de componentes celulares que contienen hidratos de carbono, por ejemplo
algunas membranas celulares, clulas caliciformes en la mucosa del intestino, fibras
reticulares que estn rodeados por hidratos de carbono, etc.
Solucin de Alcian Blue:

Alcian Blue..1 GR.

cido Actico Glaciar.3 CC

Agua Destilada 97 CC

Procedimiento:
1.

Fijacin en alcohol 96

2.

lavado en agua corriente

3.

pasar por cido al 1% durante 5 Min

4.

Solucin de Alcian Blue (filtrado) durante 30 min

5.

lavado en agua corriente

6.

Teir con Hematoxilina durante 1 min

7.

Lavado en agua corriente durante 1 min

8.

Deshidratar (Alcohol 96 , 100 , 100/

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9.

Aclaramiento : Xilol1

10.

Aclaramiento : Xilol2

11.

Montar con blsamo.

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Observacin microscpica:

Mucinas cidas: Celeste

Ncleos: Azules

TINCIN DE GIEMSA
Tcnica muy til para la demostracin de varios elementos hematolinfoides (incluyendo
mastocitos) y microorganismos.
Los ncleos se tornan de color de violeta intenso, la granulacin eosinfila de un pardo
rojizo, el citoplasma de los linfocitos de azul definido y sus ncleos de violeta variable.
El colorante de Giemsa tambin da excelentes resultados para la tincin rutinaria de
frotes sanguneos.
Cuando se va a teir con este colorante, debe fijarse primero la muestra con metanol
absoluto por un tiempo mnimo de tres minutos (cuando la preparacin no incluye
metanol).
El colorante en solucin nunca se utiliza de manera directa, por lo que se debe diluir con
la solucin amortiguadora en una proporcin de 1:10 o 1:20 y el tiempo de coloracin
podr ser de 10 o 20 minutos, respectivamente.

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Solucin giemsa:
Polvo de Giemsa azur E.M.3.8 gr
Glicerina caliente ( +/- 60 grados centgrados).. 2.50 ml
Metanol250 ml
Procedimiento:
Para placas citolgicas:
1. placas bien secas, 1 minuto de reactivo MAY GRUMWALDS
2. enjaguar con agua corriente
3. colocar en el extendido el reactivo giemsa azur, por 5minutos, dependiendo de la
fecha de caducidad del reactivo con gotas de agua, para montar el brillo
metlico.
4. Secar al ambiente y montar.
Extendidos citolgicos:
1. Llevar al agua los cortes histolgicos
2. Coloca el reactivo de giemsa azur por 4-5 minutos dependiendo de la caducidad
3.
4.
5.
6.

del reactivo.
Lavar en agua corriente
Secar al ambiente
Colocar en xilol por unos segundos
Montar

Observacin microscpica:
Ncleos color violeta
Citoplasma color azul definido.

TINCIN PARA FIBRAS ELSTICAS

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Las tcnicas tipo Weiger son bastantes especficas para la elastina, y son consideradas
por muchos como el mtodo de eleccin para la demostracin de estas fibras
extracelulares.
Sim embargo la tincin de Gieson Verthoeff-van (VVG) es la ms popular porque es
rpida y se esbozan las fibras elsticas con un fuerte color negro.
Ambas tcnicas se suelen establecer en el contexto tricrmico proporcionando por la
tincin de Van Gienson.
Como resultado los ncleos celulares se tien de marrn a negro, el colgeno de rosa a
rojo y el musculo y el citoplasma de amarilla.

Solucin Hematoxilina de Verhoeff:

-Hematoxilina alcohlica:
Hematoxilina ------------------------------------10 gr.
Alcohol96 -------------------------------------100 ml
-Cloruro frrico al 10 %:
Cloruro frrico ----------------------------------10 gr.
Agua destilada ----------------------------------100 ml
-Yoduro potsico al 10 %:
Yoduro potsico --------------------------------10 gr.
Agua destilada ----------------------------------100 ml
-Solucin de Picrofucsina:
- Fucsina cida al 1 % ----------------------------1.3 ml
- cido pcrico a saturacin ---------------------- 9.7 ml

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Procedimiento:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

Hidratar
Hematoxilina de Verhieff por 30 minutos
Lavar
Cloruro frrico al 1% una pasada
Picrofucsina una pasada
Deshidratar con alcohol al 50%
Aclarar con xilol
montar

Observacin microscpica:
Ncleo: marrn o negro
Colgeno: rosa o rojo
Musculo y citoplasma: amarillo

SITIOS WEB:
http://www.buenastareas.com/ensayos/Tinci%C3%B3n-De-Gram-ModificadaBrown-Brenn/4905765.html
http://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-de-gram-13399
https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram
https://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/007621.htm
https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Ziehl-Neelsen
https://es.scribd.com/doc/40784447/Tecnicas-histoquimicas
https://es.wikipedia.org/wiki/Rojo_Congo

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https://campus.usal.es/~histologia/histotec/especial/espe10/espe10.htm
https://campus.usal.es/~histologia/histotec/especial/espe09/espe09.htm
https://citotecs.wordpress.com/2013/08/22/tecnica-de-alcian-blue/
https://es.wikipedia.org/wiki/T%C3%A9cnica_de_Schiff
https://qbhematologia.files.wordpress.com/2011/08/prc3a1ctica-3.pdf
https://www.uam.es/departamentos/medicina/patologia/Van%20gieson.htm
https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Verhoeff
http://es.slideshare.net/GiovArn/histoqumica
http://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/5-histoquimica.php

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