Universidad Nacional Autnoma de Mxico

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

LABORATORIO DE INMUNOLOGIA CLNICA

Tcnica de Jerne

Profesores: QFB Mara de las Mercedes Zamudio Duran

QFB Francisco Javier Parada Garca
Mtra. Yolanda Flores Cabrera
Dr. Osvaldo Daniel Casteln Martnez

Integrantes del equipo:

Grupo: 1802
Villa Reyes Odra Berenisse
Equipo: 3
Valle Medina Antonio
Herrera Lpez Ema Elvira

Introduccin
La tcnica de Jerne (mtodo de las placas hemolticas) se utiliza para visualizar las clulas productoras de anticuerpos
y para cuantificarlas. Actualmente hay una gran variedad de adaptaciones a esta tcnica pero el fundamento es
bsicamente el mismo, la formacin de placas lticas.
Tomando en cuenta el nmero de placas lticas, el nmero de clulas usadas en el ensayo y el nmero total de clulas
en el bazo, se puede tener una idea muy aproximada del nmero de clulas productoras de anticuerpo en el bazo
entero. Sin embargo como se ha descrito, la tcnica de Jerne detecta principalmente clulas productoras de anticuerpo
de la clase IgM (tcnica directa), y se requiere de una incubacin previa a la adicin de complemento, con un antisuero
contra inmunoglobulinas de ratn para detectar las clulas productoras de anticuerpo IgG (tcnica indirecta). En el
presente trabajo, se realiz la tcnica directa.
Aunque la tcnica est basada en una hemolisis localizada, actualmente con las modificaciones hechas a esta tcnica
se puede medir la respuesta antgeno solubles, repuesta bacteriana y deteccin de clulas productoras de anticuerpo
no fijador de complemento, solo por mencionar algunas.
Con los trabajos realizados por Jerne, se demostr en forma experimental la sensibilizacin precia de un animal frente
a un antgeno, estudiado de manera in-vivo la capacidad de los linfocitos B para producir anticuerpos y analizando el
fenmeno de la interaccin. Con esto ahora se puede saber que las clulas plasmticas, son las encargadas de formar
anticuerpos. Estas clulas se diferencian a partir de los linfocitos B gracias a la estimulacin de los linfocitos CD4+
Esta clula se origina en la medula sea, posteriormente se desplaza al bazo y a los ndulos linfticos para secretar
anticuerpos

Objetivo:
Cuantificar las clulas formadoras de anticuerpo en el bazo de ratn, mediante la tcnica de Jerne.

Diagrama:

5 das antes inocular

ratones va IP con 0.1
mL de una
suspensin de GR de
carnero al 10%

Sacrificar a los
ratones y extraer el
bazo, colocar en 4
mL de MEM

Separar las clulas

del estroma del bazo

Colectarlas clulas
con ayuda de una
pipeta Pasteur en un
tubo

Agregar esas
suspensiones a tubos
con agarosa a 37 C
45

Realizar las
diluciones 1:20 y
1:30 en MEM

Transferir el
sobrenadante a otro
tubo y realizar
diluciones

Dejar sedimentar 1
minuto

Colocar
complemento

Dejar 30 a 37 C

Observar y contar las

placas lticas, realizar
clculos.

Resultados:
Tabla 1. Resultados de la Practica de Jerne, grupal 1802, CFA.
Equipo

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
promedio

0
2
1

Clulas
formadoras
de placas
en el bazo a
esta
dilucin
0
1600
800

0
1
3
1
0
0
1

0
800
2400
800
0
0
711

Dilucin
1:20

1
0
0

Clulas
formadoras
de placas
en el bazo a
esta
dilucin
1200
0
0

0
0
1
0
0
0
0.22

0
0
1200
0
0
0
266.7

Dilucin
1:30

Clculos:
# CFP (10) = A (20 o 30) = B (4) = clulas formadoras de placa en el bazo

Donde:
CFP x 10 x Dilucin x 4 = Clulas por bazo
CPF: Placas lticas contadas
10: Se toma una dcima parte
Dilucin: Sea 20 o 30
4: Medio total, 4 mL de MEM

Anlisis de resultados
CFA vs un antgeno de eritrocito se suspenden en una capa de agar donde se contenan a los
antgenos de eritrocito, el anticuerpo secretado por una clula se difunde a travs del agar,
Cuando se aade complemento a la capa eritrocito-linfocito, solo aquellos eritrocitos que han
reaccionado con el anticuerpo fijaran el complemento y se consumar su lisis. Esto produce
zonas localizadas de hemlisis.
Se deba esperar una mejor observacin de esta lisis a mayor dilucin, pero no fue as, poda
deberse a que se llev a cabo una mala tcnica y esto conllevo a que no se observaran bien las
placas liticas.

Conclusin
3

La tcnica se llev a cabo, pero no de manera adecuada, el objetivo se cumpli el Cuantificar

las clulas formadoras de anticuerpo en el bazo de ratn, mediante la tcnica de Jerne. Aunque
no se hayan tenido resultados esperados con forme a las diluciones que se realizaron.

Referencias

Roitt I, et al. Inmunologa, 5 edicin. Harcourt,

Espaa 2000. pp 1- 26
Gualde
N, Bourinat-Lafon J. Inmunologa, Vol 20. Ed. Norma, Mxico 1994. pp 23-50
Hudson
L. C. Hay F. Inmunologa prctica. Ed. Jims. Espaa 1979. pp 27-51.
Weir M.D. Handbook of experimental inmunology. 3 edicin, Ed. Blacknell Scientificc
Publications.