Evaluacin de la actividad insecticida del extracto etanlico de Capsicum

chinense sobre Drosophila melanogaster.

Evaluation of the insecticidal activity for an ethanolic extract of Capsicum
chinense on Drosophila melanogaster
Domnguez G. M.; Fuentes Z. S. A; Prez. B. D; Rojas F. H; Rojas L. I. S.
Laboratorio De Metodologa Cientfica II, Carrera de Biologa, Facultad De
Estudios Superiores Iztacala, UNAM.
Resumen
En los ltimos 30 aos, los extractos de plantas se han utilizado contra diversas
especies de insectos fitfagos y han cobrado importancia como alternativas para
el control de insectos plaga porque no afectan el ambiente y son amigables con
enemigos naturales de insectos fitfagos, debido a esto en este estudio se evalu
el efecto insecticida del extracto etanolico de chile habanero (Capsicum chinense)
sobre adultos de Drosophila melanogaster, del cual se conoce la presencia de
alcaloides y fenoles. Se realizaron bioensayos de mortalidad en frascos de vidrio
con concentraciones de 15 mg/ ml, 20 mg/ml y 25 mg/ml de extractos de semilla y
pericarpio del chile habanero variedad Jacq. Ninguna concentracin tuvo
diferencia significativa alguna, el tiempo de exposicin no es factor para la
mortalidad de D. melanogaster por lo que se concluy una baja toxicidad del chile
sobre las moscas.
Palabras clave: Capsicum chinense, Drosophila melanogaster, Capsaicina,
Toxicidad
Abstract
In the past 30 years, plant extracts have been used against various species of
phytophagous insects and have become important alternatives for insect pest
control because they do not affect the environment and are do not harm to nonphytophagous insects. In this study, the insecticidal effect of an ethanol extract

(known for the presence of alkaloids and phenols) of chile habanero (Capsicum
chinense) on Drosophila melanogaster adults has been evaluated. Mortality
bioassays were performed in glass jars with seed and pericarp extracts pf
habanero Jacq variety in concentrations of 15 mg/ml , 20 mg/ml and 25 mg/ml and.
Since there was no significant difference in concentrations and time exposure is
not consider to be a factor for mortality of D. melanogaster, it was determined a low
toxicity of the extract on flies.
Index words: Capsicum chinense, Drosophila melanogaster, Capsaicin,
Toxicity
Introduccin
Las prdidas que ocasionan las plagas en los cultivos de los pases desarrollados
pueden cifrarse entre el 10 y 20% del total de la produccin, segn los cultivos.
(Organizacin de Agricultura y Alimentos FAO, 2014). En las ltimas tres
dcadas, los extractos de plantas han sido usados contra diversas especies de
insectos fitfagos (Clemente et al., 2003), porque no afectan el ambiente y son
menos dainos con los enemigos naturales de insectos plaga (Iannacone y
Lamas, 2003). Las plantas destinan una cantidad significativa del carbono
asimilado y de la energa a la sntesis de una amplia variedad de molculas
orgnicas que no parecen tener una funcin directa en procesos primarios, y que
se denominan metabolitos secundarios. Algunos productos del metabolismo
secundario tienen funciones ecolgicas especficas como atrayentes o repelentes
de animales como los flavonoides (Aggarwal y Brar, 2006). En general, los
metabolitos secundarios se pueden clasificar en insecticidas, aquellos que causan
la muerte de los insectos, y los insectistticos, que se refieren a la inhibicin del
desarrollo y comportamiento de los insectos. Por ejemplo, los repelentes, que
ahuyentan a los insectos de sus plantas hospederas (Celis et al., 2008)
El

C.

chinense

se

ha

utilizado

en

la

medicina

tradicional

como

hipercolesterolemiante, antioxidante y antiinflamatorio (Servicio de informacin

agroalimentaria y pesquera SIAP, 2010). Y se han reportado la presencia de

terpenoides, flavonoides y alcaloides (Valle, 2008). Las especies del gnero

Capsicum

sintetizan

capsaicinoides

de

los

cuales,

la

capsaicina

la

dihidrocapsaicina son responsables hasta del 90 % de la pungencia en los chiles

(Lpez, 2003; Czares et al., 2005) En los ltimos aos se ha demostrado que los
capsaicinoides presentan actividad biolgica contra insectos, como el efecto txico
sobre Myzus persicae (Sulzer) (Edelson et al., 2002). Actualmente, existen
patentes de insecticidas y agentes de control que contienen capsaicinoides (Eich,
2008).
Los reportes ms destacados acerca de los flavonoides han sido sobre los
beneficios que proporcionan (antioxidante y antibacteriana) sin embargo, debido a
su gran diversidad pueden tener otro tipo de actividad biolgica. En el 2000
Morimoto y colaboradores reportaron la actividad de cuatro flavonoides: tres
metoxiflavonas y una charcona, presentes en los extractos de Gnaphalium affine
D. Don, los cuales mostraron actividad anti-alimentaria contra Spodoptera litura F.
En el 2000 Howard y colaboradores, reportaron actividad antioxidante del C
chinense.

En

2014

Ceron-Cedillo

colaboradores

reportaron

actividad

antimicrobiana del chile sobre E. coli, L. Cassei y Penicillinum spp. En 2010

Borges-Gomez y colaboradores reportaron actividad de capsanoides en chile
habanero afectndose la produccin a diferentes condiciones de humedad y
nutricin.
Gracias a la informacin que se tiene acerca de los metabolitos secundarios que
C. chinense produce como compuestos fenlicos y alcaloides los cuales han
mostrado un efecto toxico, se cree que podra tener un efecto de mortalidad sobre
Drosophila melanogaster, por lo cual el objetivo de este estudio es evaluar la
mortalidad de los extractos etanolicos C. chinense sobre Drosophila melanogaster.

Materiales y mtodos.
Obtencin de materiales biolgicos.
Los frutos de C. chinense variedad Jacq. se obtuvieron de manera aleatoria en el
mercado ms cercano a la FES Iztacala. En cuanto a Drosophila melanogaster fue
donada por el laboratorio de Toxicologa Gentica de la FES Iztacala.
Se colocaron en frascos de vidrio conteniendo pur de papa.
Preparacin del extracto etanolico.
Los frutos de C. chinense se secaron y trituraron con etanol y se dejaron reposar
durante 48 horas, posteriormente se llevaron a liofilizar.
Caracterizacin fotoqumica preliminar
La presencia de alcaloides se determin por medio de la prueba de Meyer donde
se disolvieron 2 mg del extracto de etanol y se agregaron unas gotas del reactivo
de Meyer, as mismo se realiz la prueba de Dragendorff donde se disolvieron 2
mg del extracto y se aadieron unas gotas del reactivo de Dragendorff.
La determinacin de flavonoides se realiz por medio de la prueba de Salkowski
donde se colocaron 2 mg de muestra en 1 ml de cloroformo, se disolvi en un 1 ml
de cido sulfrico concentrado. As mismo se realiz la prueba de Shinoda que
consisti en agregar 1 ml de la muestra en un tubo Eppendorf, posteriormente
unas gotas de HCl concentrado y una tira de magnesio, se dej reposar y se
observ bajo luz UV
Y por ltimo se realiz la prueba de Hidrxido de sodio agregando en un tubo
Eppendorf 1 ml de muestra problema y unas gotas de NaOH.
Cuantificacin de fenoles totales.
Los fenoles totales se determinaron mediante el mtodo espectrofotomtrico de
Folin-Ciocalteu usando el cido glico como material de referencia. Se prepar
una disolucin patrn de cido glico de 600 mg/L de agua destilada, para lo cual
se pesaron400mg el cido glico, se colocaron en un tubo de ensaye y se llevaron
a volumen con 660 ml de agua destilada. De la misma manera se prepar una

disolucin de carbonato de sodio pesando 750mg de carbonato de sodio en un

tubo de ensaye, finalmente se lleva a su volumen de aforo con agua. Por otro lado
se prepara una disolucin del reactivo de Folin Ciocalteu con 80 l de reactivo en
720 l agua destilada; el reactivo se protegi de la luz y se coloc en refrigeracin
hasta su uso. A partir de la disolucin patrn de cido glico, en tubos de ensaye,
se hicieron las diluciones necesarias con agua destilada para obtener
concentraciones de 0.00625 mg en 0.0104 ml, 0.0125 mg en 0.0208 ml, 0.025 mg
en 0.0416 ml, 0.05 mg en 0.083 ml, 0.1 mg en 0.166 ml y 0.2 mg en 0.333 ml para
la preparacin de la curva de calibracin, posteriormente se agregaron 1250 l de
carbonato de sodio y 125 l del reactivo de Folin-Ciocalteau. Para las muestras
problema se sustituye el cido glico por el extracto en una concentracin de .2
mg/ml colocando 250 l en 750 l de agua destilada. Tambin se prepar un
blanco con agua destilada. Finalmente se ley la absorbancia a 760 nm en el
espectrmetro.
Bioensayos en D. melanogaster.
Los extractos del C. chinense se evaluarn mediante bioensayos de laboratorio en
adultos de Drosophila melanogaster, utilizando la tcnica CL50, con las distintas
concentraciones del extracto como variables que son 15 mg/ml, 20 mg/ml y 25
mg/ml y como control negativo etanol en una concentracin de 15 mg/ml, as
mismo el grupo testigo fue Tegosep, se introdujeron 10 moscas adultas en frascos
de vidrio, los cuales contenan pur de papa. Esto se realiz durante 3 das
contando la mortalidad de las moscas.

Resultados.
Rendimiento de los extractos etanlicos de C.chinense
Se obtuvieron 88. 37 g de pericarpio y 79.8 g de semilla lo que nos dio un
rendimiento del 98% y 97% respectivamente, esto se realiz con base al peso
seco. (Tabla 1)
Peso seco (Gramos)

% de rendimiento

Semilla

90.1

98%

Pericarpio

81.7

97%

Tabla 1. Porcentaje de rendimiento con base al peso seco.

Caracterizacin fitoquimica preliminar

C. chinense mostro presencia de fenoles tanto en pericarpio con 0.003405 mg/ml
como en semilla 0.044758 mg/ml, teniendo una mayor presencia en semilla como
era lo esperado (Tabla 2)
Concentracin

de

fenoles

totales

(mg/ml)
Semilla

0.044758

Pericarpio

0.003405

Tabla 2. Concentracin de fenoles totales encontrados en semilla y pericarpio.

En cuanto a las pruebas colorimtricas para la determinacin de flavonoides y

alcaloides (Tabla 3) dieron positivo en la prueba de Dragendorff para semilla y
pericarpio y en la prueba de Meyer solo pericarpio dio positivo mientras semilla
negativo. Para las pruebas de flavonoides en la prueba de Shinoda dio positivo
para semilla, no as para pericarpio coloreando la muestra de amarillo, para la
prueba de Salkowsy y de Hidroxido de sodio ambas resultaron positivas para
semilla y pericarpio de color rojo y amarillo respectivamente.

Alcaloides

Flavonoides

Reactivo

Semilla

Pericarpio

Dragendorff

++

Meyer

Shinoda

NaOH

++

Salkowski

++

Tabla 1. Se presentan los resultados de las pruebas colorimtricas donde ++ significa que la prueba fue totalmente
positiva, + levemente positiva y negativa .

Bioensayos en Drosophila melanogaster.

En los bioensayos de mortalidad de las moscas (Figura 1) se muestra que ninguna
de las concentraciones tuvo alguna diferencia significativa, el control negativo fue
el nico que tuvo diferencia significativa dando por hecho que este es ms efectivo
que el extracto de c. chnense. As mismo no hubo diferencia significativa en el
nmero de das que transcurrieron con el extracto, ni tampoco con pericarpio y
semilla

3.5
3
2.5
2
# de muertes
1.5
1
0.5
0
Concentracin
Figura 1. Mortalidad de Drosophila melanogaster a diferentes concentraciones de semilla y pericarpio de C.
chinense.

Discusin.
Rendimiento de extractos etanolicos de C. chinense.
El rendimiento de los extractos con 98% es pericarpio y 97% de semilla es alto, ya
que son valores cercanos al 100%, el mximo posible, estos rendimientos fueron
superiores a los presentados por Howard con un rendimiento del 22%.

Caracterizacion fitoquimica preliminar

La presencia de fenoles y alcaloides en semilla y pericarpio, ya se haba reportado
por Borges-Gomez y colaboradores en 2010 y Ceron-Cedillo y colaboradores en
2014. En la prueba de Meyer sali negativo para semilla, debido a que este es una
solucin neutra que no reacciono por el carcter bsico de los alcaloides, en
cuanto a la prueba Shinoda para flavonoides, en pericarpio resulto negativa,
debido a que al exponerla a la luz UV no se apreciaba la coloracin esperada.
Estos resultados tambin se le atribuyen a su baja polaridad como base, y alta
polaridad al convertirse a sales.
Bioensayos en D. melanogaster
El modelo de D. melanogster presenta una serie de caractersticas que la hacen
un material biolgico para ser utilizada como modelo experimental, ya que tiene un
ciclo de vida muy corto, distincin clara entre cada una de sus fases de desarrollo,
gran cantidad de descendientes, su mantenimiento requiere poco espacio y es de
costo reducido, adems causa prdidas en la industria agrcola debido a que es
una de las especies ms comunes del mundo y se alimenta de materia orgnica.
El mecanismo de accin de los alcaloides como toxicolgico es principalmente
presentndose como alimento afectando el sistema nervioso central

desde la

unin neuromuscular, logrando la inhibicin de enzimas llamadas colinesterasas

que a su vez provocan la prdida de movilidad de los insectos, este mecanismo de
accin es muy parecido al de los insecticidas organofosforados, diferencindolos
principalmente por el dao que se causa en el ambiente y los costos de
produccin, siendo una mejor opcin la produccin de sustancias toxicas para
plagas como son los alcaloides
Como ya se dijo, el extracto etanlico de C. chinense no tuvo efecto sobre
Drosophila melanogaster, posiblemente debido a que D. melanogaster presenta
resistencia a insecticidas, mediada por AchE est relacionada con cambios
cualitativos y cuantitativos en la enzima y con mutaciones puntuales generalmente

acompaadas por modificacion de los parametros cineticos de la hidrolisis de

acetilcolina. En general, los niveles de insensibilidad a insecticidas conferidos por
cada sustitucin individual son bajos pero en combinacin producen enzimas
altamente resistentes. El alto nmero de mutaciones puntuales en AchE contrasta
con las pocas mutaciones responsables para resistencia fuerte, encontradas en
otros sitios blancos alterados (GABA o kdr). Este nmero elevado de mutaciones
presentes en AchE se atribuye a la comunalidad sustrato-analogo insecticida y los
receptores de acetilcolina Se han registrado mutaciones especificas en AchE que
confieren resistencia en D. melanogaster Meigen (Mutero et al. 1994).
Estos resultados se pueden comparar con lo reportado con otras especies del
gnero Capsicum. Por ejemplo, C. frutescens (Gakuru y Foua, 1996), los cuales
poseen efecto insecticida mayor del 40 % sobre Callosobruchus maculatus
(Fabricius) y Culex quinquefasciatus (Say), respectivamente, aunque con
concentraciones del extracto menores al 2%. Lo anterior, tambin concuerda con
las investigaciones realizados por Bouchelta et al. (2005) quienes encontraron que
los alcaloides de C. frutescens afectan la supervivencia de los adultos de B.
tabaci. Por su parte, Choi et al. (2003) sealan que los adultos de Trialeurodes
vaporarorium (Westwood) son ms sensibles a los capsaicinoides que las ninfas.
La interaccin de los factores concentracin del extracto y tiempo sobre la variable
mortalidad no mostr diferencia significativa debida, muy probablemente, a que la
mortandad fue muy similar en los diferentes tiempos y entre las diferentes
concentraciones a las cuales fueron evaluados. En general, se observ que la
mortalidad fue baja para todos los tratamientos, lo cual explica este resultado.
Conclusiones.

C. chinense presenta fenoles totales y alcaloides tanto en pericarpio como

en semilla.

La toxicidad de C. chinense sobre Drosophila melanogaster fue baja en

todos los tratamientos.

Agradecimientos.

Al laboratorio de toxicologa gentica de la Facultad de Estudios Superiores Iztacala, por

la donacin de la cepa silvestre para la realizacin del trabajo.

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