FACULTAD DE CIENCIAS NATURLAES EXACTAS Y DE LA

EDUCACION
PRACTICA LABORATORIO QUIMICA ANALITICA
Practica #12: Visita a la unidad de anlisis Industrial (Equipos:
CG/EM; HPLC, EAA, Polarografia, IR)
Diego Alejandro lvarez, Carlos Mario Suarez
1.

PREGUNTAS PRELIMINARES:

1.1. Consultar las Principales aplicaciones de las tcnicas de

CG, HPLC, IR, EAA, Polarografia.
Rta: Cromatografa de gases
Un equipo de cromatografa gaseosa.
La cromatografa de gases es una tcnica cromatogrfica en la que la
muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna
cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de una fase mvil de
gas inerte. A diferencia de los otros tipos de cromatografa, la fase mvil
no interacta con las molculas del analito; su nica funcin es la de
transportar el analito a travs de la columna.
Existen dos tipos de cromatografa de gases (GC): la cromatografa gasslido (GSC) y la cromatografa gas-lquido (GLC), siendo esta ltima la
que se utiliza ms ampliamente, y que se puede llamar simplemente
cromatografa de gases (GC). En la GSC la fase estacionaria es slida y
la retencin de los analitos en ella se produce mediante el proceso de
adsorcin. Precisamente este proceso de adsorcin, que no es lineal, es
el que ha provocado que este tipo de cromatografa tenga aplicacin
limitada, ya que la retencin del analito sobre la superficie es
semipermanente y se obtienen picos de elucin con colas. Su nica
aplicacin es la separacin de especies gaseosas de bajo peso
molecular. La GLC utiliza como fase estacionaria molculas de lquido
inmovilizadas sobre la superficie de un slido inerte.
La GC se lleva a cabo en un cromatgrafo de gases. ste consta de
diversos componentes como el gas portador, el sistema de inyeccin de
muestra, la columna (generalmente dentro de un horno), y el detector.
Tcnica de HPLC
La tcnica HPLC contiene cuatro componentes principales. En primer
lugar, es importante el sistema de entrega de disolvente (fase mvil)
que lleva las muestras a travs de la columna, ya que la polaridad afecta

la capacidad que tiene el sistema para separar las molculas. La

columna de cromatografa es generalmente una columna de vidrio
vertical que se llena con un adsorbente. En segundo lugar, el adsorbente
(tambin conocido como fase estacionaria, ya que no se mueve) es
comnmente un gel de slice o almina. En tercer lugar, el sistema de
introduccin de la muestra se compone de una especie de puerto de
inyeccin para introducir la muestra que se va analizar en el sistema de
entrega del disolvente. El cuarto componente es el detector.
El tipo de detector a utilizar depende del tipo de muestra que los
tcnicos estn analizando y lo que las molculas estn tratando de
aislar. Entre los criterios utilizados por el tcnico a la hora de elegir un
detector se encuentra la selectividad, la relacin seal-ruido, lmite de
deteccin, rango lineal, constante de tiempo, arrastre y volumen celular.
Entre los detectores ms utilizados se encuentran los detectores visibles
ultravioletas, espectrmetros de masas, ndices de refraccin,
detectores fluorescentes o dispositivos de dispersin de luz evaporada.
TECNICAS IR
En investigacin, la espectroscopa de infrarrojo puede brindar
informacin acerca de los grupos funcionales de molculas de estructura
desconocida. La espectroscopia infrarroja es ampliamente usada en
investigacin y en la industria como una simple y confiable prctica para
realizar mediciones, control de calidad y mediciones dinmicas. Los
instrumentos son en la actualidad pequeos y pueden transportarse
fcilmente, incluso en su uso para ensayos en terreno. Con una
tecnologa de filtracin y manipulacin de resultados en agua, las
muestras en solucin pueden ser medidas con precisin (el agua
produce una absorbancia amplia a lo largo del rango de inters,
volviendo al espectro ilegible sin este tratamiento computacional).
Algunas mquinas indican automticamente cul es la sustancia que
est siendo medida a partir de miles de espectros de referencia
almacenados.
Al medir a una frecuencia especfica a lo largo del tiempo, se pueden
medir cambios en el carcter o la cantidad de un enlace particular. Esto
es especialmente til para medir el grado de polimerizacin en la
manufactura de polmeros. Las mquinas modernas de investigacin
pueden tomar mediciones infrarrojas a lo largo de todo el rango de
inters con una frecuencia de hasta 32 veces por segundo. Esto puede
realizarse mientras se realizan mediciones simultneas usando otras
tcnicas. Esto hace que la observacin de reacciones qumicas y
procesos sea ms rpida y precisa.
TECNICAS EAA

La espectroscopia de absorcin atmica (EAA), tiene como fundamento

la absorcin de radiacin de una longitud de onda determinada. Esta
radiacin es absorbida selectivamente por tomos que tengan niveles
energticos cuya diferencia en energa corresponda en valor a la energa
de los fotones incidentes. La cantidad de fotones absorbidos, est
determinada por la ley de Beer, que relaciona sta prdida de poder
radiante, con la concentracin de la especie absorbente y con el espesor
de la celda o recipiente que contiene los tomos absorbedores.
Los componentes instrumentales de un equipo de espectrofotometra de
absorcin atmica son los similares a los de un fotmetro o
espectrofotmetro de flama, excepto
que en EAA se requiere de una fuente de radiacin necesaria para
excitar los tomos del
analito.
APLICACIN POLAROGRAFIA
La Polarografa es una tcnica de anlisis electroqumico que permite
estudiar fenmenos fsico-qumicos. Puede analizar trazas de elementos
metlicos en el orden de 1 a 0.1 ppm.
Los mtodos polarogrficos modificados brindan mayor sensibilidad, con
gran exactitud en mediciones de discriminacin de elementos qumicos,
como en especificacin de concentracin. Es una tcnica que en
complemento con otras tcnicas de anlisis es una herramienta valiosa.
Se emplea en problemas Fsico-Qumicos, como electrlisis, anlisis
qumico elemental, potenciales de ionizacin, cintica de reacciones
electrdicas, clculo del coeficiente de transferencia electrdica,
reversibilidad e irreversibilidad de procesos, cintica de las reacciones
qumicas, reconocimiento de componentes qumicos de sustancias
acuosas, naturaleza de iones complejos, fenmenos de adsorcin en el
electrodo, entre otros.
La Polarografa es una subclase de voltamperometra donde el electrodo
de trabajo es un electrodo de gota de mercurio (DME), til por su amplio
rango catdica y su superficie renovable. Fue inventado por Jaroslav
Heyrovsk . La polarografa es una medida voltamperomtrica cuya
respuesta est determinada por el transporte combinado de masa
difusin/conveccin. La polarografa es un tipo especfico de medida que
cae en la categora general de voltamperometra de barrido lineal,
donde el potencial de electrodo se encuentra alterado en forma lineal
desde el potencial inicial hasta el potencial final. Como mtodo de
barrido lineal controlado por el transporte de masa por
difusin/conveccin, la respuesta corriente vs. Potencial de un
experimento polarogrfico tiene la tpica forma sigmoidal. Lo que hace a
la polarografa diferente de otras medidas de voltamperometra lineal de
barrido es que polarografa hace uso del electrodo de gota de mercurio
(DME).

2.

DIAGRAMA DE FLUJO
UNIDAD DE ANALISIS INDUSTRIAL
(EQUIPOS CG/EM, HPLC, EAA, POLAROGRAFIA, IR)

Explicacin de los Equipos del departamento de Qumica por persona

encargada
Se realiza la introduccin de la sustancia Etanol al Equipo CG y se
observa el tipo de respuesta numrica digital y/o grafica que entrega el
software
Introduccin de a sustancia de Vitamina C al equipo HPLC y observar
respuesta numrica digital y grafica que el software entrega.
Introduccin de la sustancia patrn Acido Ascrbico tratada al equipo IR
Y se observa el respuesta numrica digital y grafica que entrega el
software
Introduccin de la sustancia patrn de Ion nitrato al equipo de
polarografia y se observa lo mismo anterior
Introduccin de la sustancia patrn de ion calcio al equipo EAA y se
observa lo que entrega el software.
3.

OBJETIVO

Conocer los equipos de anlisis instrumental y sus componentes bsicos

en la unidad de anlisis industrial.
4.

ANALISIS Y RESULTADOS

4.1. DIAGRAMA CADA UNO DE LOS EQUIPOS VISITADOS

4.1.1.

Equipo HPLC

4.1.2.

EQUIPO CG/EM

4.1.3.

Equipo IR

4.1.4.

Equipo EAA

4.1.5.
E
Q
U
I
P
O

POLAROGRAFIA

4.2. MENCIONAR TRES EJEMPLOS DE CUIDADO DE CADA UNO DE

LOS EQUIPOS DELA PRACTICA
4.2.1.

CG/EM

Inyectores Siempre es necesario proceder peridicamente a la

sustitucin de los diafragmas y a la limpieza de las superficies internas,
en particular los revestimientos de la inyeccin. Hay que comprobar
diariamente si los diafragmas tienen fugas utilizando un lquido
espumoso de tipo "Snoop". Los diafragmas slo suelen servir para 25-30
inyeccciones, siendo necesario sustituirlos despus. Los diafragmas que
presentan fugas han de sustituirse automticamente por otros nuevos
que hayan sido limpiados cuidadosamente con una extraccin de
disolvente o mediante tratamiento en una estufa al vaco antes del uso.
Si se emplea habitualmente un cromatgrafo de gases, hay que quitar el
revestimiento de la inyeccin de la abertura de sta (actualmente casi
todos los revestimientos de inyeccin son de vidrio) y sustituirlo por uno
nuevo o por el revestimiento original limpiado a fondo en una mezcla
con un 50 por ciento de cido ntrico que contenga un 7,5 por ciento de
cromato potsico. A continuacin, el revestimiento de la inyeccin se
lavar cuidadosamente con agua y etanol y se colocara de nuevo, una
vez seco, en la abertura de la inyeccin. Los diafrgmas se sustituirn
automticamente en esa fase.
Columnas Diariamente se comprobar si las conexiones de la columna
del cromatgrafo de gases tienen prdidas utilizando un detergente o
jabn lquido espumoso. Estas conexiones se apretarn en caso
necesario. La columna se inspeccionar visualmente a intervalos
peridicos para asegurarse de que no han aparecido resquicios en el
relleno de las columnas o, si se trata de una columna capilar, que no se
han producido roturas en la propia columna. Puede comprobarse si ha
habido una rotura en la columna midiendo el flujo en el detector final de
la misma. Las columnas rellenas tienen de ordinario un flujo de 10 a 25
mi aproximadamente por minuto, mientras que las columnas capilares
suelen tener un flujo que oscila entre 1,0 y 2,5 mi.
Tanto diaria como semanalmente se comprobar la resolucin de las
columnas utilizando un patrn de calibracin (vase la Seccin 2.2).
Cada semana se golpearn suavemente las columnas rellenas con un
lpiz o un trozo de madera para asegurarse de que el relleno de la
columna no ha sufrido alteraciones. Si se observa que la resolucin de
los picos se ha debilitado, se retirar la columna y se inspeccionar el
extremo de la inyeccin de la columna que pudiera haberse deteriorado
a causa de la contaminacin con extractos de muestras. Las soluciones
de patrones apropiados, que es necesario analizar para que sirvan de

base a la cuantificacin, pueden proporcionar una informacin

suplementaria de importancia crucial para el diagnstico. Se examinar
un cromatograma para determinar la constancia de los tiempos de
retencin, las alturas relativas de los picos y la simetra de las
configuraciones de stos, la ausencia de picos extraos, la regularidad
de la lnea de referencia y la proporcin entre seal y ruido. Los cambios
imprevistos suelen indicar problemas de degradacin o contaminacin,
ya sea en la propia columna, en el inyector o en el detector. Muchas
columnas rellenas y capilares se suministran con mezclas de
componentes de diversas polaridades, etc., y con el correspondiente
cromatograma de ensayo, que puede utilizarse tambin para comprobar
el rendimiento de la columna. Esta mezcla de ensayo permite confirmar
si la columna se ha deteriorado apreciablemente (vase la Seccin 2.2.1
del presente Apndice).
Estufas Adems de comprobar el correcto funcionamiento del sistema
de circulacin de aire y ventilacin a efectos de enfriamiento, el usuario
ha de recurrir a las indicaciones sobre la temperatura que facilita el
fabricante. Es posible insertar un termopar o un termmetro con
resistencia de platino para comprobar la temperatura de la estufa
isoterma. Si se utiliza este sistema para vigilar la programacin de la
temperatura, es posible descubrir variaciones sinusoidales inquietantes
en la rampa y fuertes subidas de temperatura cuando se llega a un
conjunto isotermo. Para trabajar con columnas capilares es
imprescindible que el control de la temperatura sea preciso y
reproducible. Sin embargo, algunos fabricantes son reacios a declarar
cules son exactamente las especificaciones y tolerancias para el control
programado. No obstante, lo que realmente importa es la precisin del
control de temperatura de la estufa. Siempre que la temperatura se
mantenga constante, da lo mismo que la estufa est 1 2 grados por
encima o por debajo de lo que indica la lectura.
4.2.2.

HPLC

Bomba La funcin principal de la bomba de HPLC es proporcionar un

flujo continuo de fase mvil a la columna de separacin a una presin
constante. Las piezas principales de la bomba aspirante e impelente son
los pistones, los cierres de los pistones y las vlvulas de retencin, el
motor y las levas de la barra impulsora.
Antes de su uso diario, hay que comprobar si el flujo de la bomba es
constante. Si se observa que el flujo es dbil o intermitente, hay que
introducir en el sistema disolvente des gasificado para eliminar el aire
atrapado, limpiar a fondo las vlvulas de retencin y, si est ajustado,
comprobar el correcto funcionamiento del regulador de impulsos.
Cuando se sustituyen los cierres y las vlvulas de retencin, hay que
actuar con cuidado para no daarlos apretando excesivamente las

piezas. El valor de la columna bombeada deber ser preciso. Sin

embargo, slo ha de ser exacto cuando el analista instala y valida un
sistema analtico. Una vez validado el sistema, lo nico que importa es la
precisin del flujo. Se comprobar la columna bombeada a intervalos
peridicos fijando la bomba en un volumen dado y pasando el disolvente
bombeado a un cilindro u otro aparato de medicin.
Columnas de HPLC Como cualquier medio de separacin
cromatogrfica, la columna de HPLC debe funcionar con la eficiencia
necesaria, como mnimo, para llevar a cabo la separacin de los
analitos. Por consiguiente, se calibrar peridicamente y se vigilar la
resolucin por medio de patrones (vase la Seccin 2.3).
Las columnas pueden deteriorarse por diversas razones, como la
contaminacin, el cambio de polaridad debido a la perdida de actividad
o una perturbacin en la geometra de la columna. La contaminacin
puede producirse en el cuerpo de la columna, a causa de la unin
irreversible de un componente a la fase estacionaria o, ms
frecuentemente, debido a la retencin de materia extraa en la parte
superior de la columna. Slo es necesario prestar atencin a las
columnas si el deterioro de la resolucin es analticamente significativo.
Si es necesario puede quitarse el extremo superior de la columna; a
continuacin se quita la "frita" de retencin y se inspecciona el relleno
de la columna. La supresin de unos pocos milmetros de relleno y su
sustitucin por nuevo relleno y una nueva "frita" resolver tal vez este
problema, pero podra causar otros con algunos rellenos de alta
resolucin.
Detectores de HPLC En el anlisis de alimentos se utilizan diversos
detectores, el ms frecuente de los cuales es el basado en UV visible,
fluorescencia, ndice de refraccin y propiedades electroqumicas de los
analitos. La respuesta de estos detectores se comprobar diariamente
utilizando el patrn que recomiende el fabricante para detectar
cualquier "desviacin" en el rendimiento, que suele ser una advertencia
oportuna de un fallo inminente en el detector.
Los detectores, especialmente los que se utilizan para medir
componentes derivados despus de la columna, deben enjuagarse a
fondo al final de cada jornada o al completar una serie de anlisis. Hay
que tener especial cuidado con los detectores cuando se utilizan junto
con bloques mviles modificados con aminas o sulfanatos amortiguados.
Despus del uso, el detector se desconectar y limpiar haciendo pasar
cido ntrico disuelto en agua (1:10) a travs de la unidad. Se dejar
reposar durante diez minutos y se aclarar a fondo con agua. Este
procedimiento garantiza la eliminacin de componentes que pueden
producir sedimentos insolubles y obstruir el instrumento.

4.3.

TECNICA ANALITICA INDUSTRIAL

TABLA 1
Tcnica
Analtica
Industrial
HPLC
CG/SM
IR
UV-VIS
Polarografi
a
EAA
5.

Cualitativa

Cuantitativ
a

Destructiva

No
Destructiva

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

5.1. Diferencias entre las tcnicas HPLC/CG-EM

RTA: En la cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a
travs de una columna que contiene a la fase fija. La separacin
cromatogrfica en HPLC es el resultado de las interacciones especficas
entre las molculas de la muestra en ambas fases, mvil y estacionaria.
A diferencia de la cromatografa de gases, la cromatografa de lquidos
de
alto
rendimiento
(HPLC,
de
high-performance
liquida
chromatography) no est limitada por la volatilidad o la estabilidad
trmica de la muestra.
La HPLC es capaz de separar macromolculas y especies inicas,
productos naturales lbiles, materiales polimricos y una gran variedad
de otros grupos polifuncionales de alto peso molecular. Con una fase
mvil lquida interactiva, otro parmetro se encuentra disponible para la
selectividad, en adicin a una fase estacionaria activa.
La HPLC ofrece una mayor variedad de fases estacionarias, lo que
permite una mayor gama de estas interacciones selectivas y ms
posibilidades para la separacin.
5.2. Diferencias entre las tcnicas IR/UV-VIS
RTA: En espectroscopa UV-Vis se irradia con luz de energa suficiente
como para provocar transiciones electrnicas, es decir promover un
electrn desde un orbital de baja energa a uno vacante de alta energa
Todos los tomos absorben en la regin ultravioleta (UV) ya que estos
fotones son bastante energticos para excitar a los electrones externos.

Si la frecuencia es lo bastante alta, se produce la fotoionizacin. La

espectrometra UV tambin se usa para la cuantificacin de protenas y
concentracin de ADN, as como para la proporcin de protenas y ADN
en una solucin. En las protenas se encuentran generalmente varios
aminocidos, como el triptfano, que absorben la luz en el rango de
280nm. El ADN absorbe la luz en el rango de 260nm. Por esta razn, la
proporcin de absorbancia 260/280nm es un buen indicador general de
la pureza relativa de una solucin en trminos de estas dos
macromolculas. Tambin pueden hacerse estimaciones razonables de
la concentracin de ADN o protenas aplicando la ley de Beer.
La espectrometra infrarroja ofrece la posibilidad de medir tipos
diferentes de vibraciones en los enlaces atmicos a frecuencias
diferentes. En qumica orgnica, el anlisis de los espectros de absorcin
infrarroja indica qu tipo de enlaces estn presentes en la muestra.

6.

CONCLUSIONES

.Las diferentes tcnicas instrumentales que existen en la actualidad,

permiten disponer de una gama amplia de opciones para afrontar de
manera integral un problema analtico en la agroindustria.
.Las tcnicas cromatogrficas individualmente, no son capaces de
suministrar una identificacin inequvoca de un compuesto particular y
la confirmacin por tcnicas especficas como la espectrometra de
masas es a menudo obligatoria.
. Las tcnicas cromatogrficas tanto en fase gaseosa como lquida,
solas, combinadas, o acopladas con otros equipos, son las ms utilizadas
para la identificacin y cuantificacin de compuestos aromticos de la
atmsfera.
.Las tcnicas espectromtricas tienen gran aplicabilidad en la
determinacin de compuestos orgnicos e inorgnicos, y son las ms
utilizadas entre todas las tcnicas de anlisis cuantitativo. Los mtodos
de anlisis instrumental, hacen parte fundamental de mltiples
operaciones unitarias en el campo agroindustrial
7.

BIBLIOGRAFIA

. SKOOG, HOLLER NIEMAN. Principios de Anlisis Instrumental, Quinta

edicin, Mc Graw Hill Interamericana, Madrid, 2001
. SKOOG, LEARY. Principios de Anlisis Instrumental, Cuarta Edicin, Mc
Graw Hill Interamericana, Madrid, 1994
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HARRIS, D.C. Anlisis
Iberoamrica, Mxico,2000

Qumico

Cuantitativo,

Grupo

editorial

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http://www.quiminet.com/ar5/ar_vcdarmadvcAAss-la-espectrometriade-absorcionatomica.htm
http://www.espectrometria.com/espectrometra_de_absorcin_atmica