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MEMBRANA CITOPLSMICA | a Contenidos

1.1 COMPOSICIN QUMICA


La membrana citoplsmica bacteriana es la estructura de tipo bicapa proteolipdica que delimita al protoplasto. Su proporcin protenas: lpidos es superior a
la de las membranas celulares eucariticas, llegando a alcanzar valores
relativos de 80:20.
Lasmembranasprocariticas,porlogeneralcarecendeesteroles
Las membranas procariticas, a diferencia de las de eucariotas, carecen de
esteroles (con las salvedades de Oxyphotobacteria, ciertas bacterias
metilotrofas, y de los Mollicutes). Pero en cambio, en muchas bacterias existe
una peculiar clase de compuestos policclicos, denominados hopanoides
(triterpenoides pentacclico) que parecen condicionar parte de la rigidez de las
membranas citoplsmicas.
Lpidos.Abundan sobre todo los fosfolpidos derivados del cido fosfatdico:
fosfatidiletanolamina
fosfatidilglicerol
cardiolipina
En bacterias Gram-positivas, adems se encuentran glucolpidos y
glucofosfolpidos.
La composicin y proporcin concretas de los distintos tipos de lpidos son
variables entre distintas cepas bacterianas, y dentro de cada cepa, en funcin
de las condiciones de cultivo (temperatura, pH, etc.).
Los cidos grasos esterificados con el glicerol en los fosfolpidos son
principalmente:
1. saturados, como p. ej.:
a. palmtico
b. mirstico
c. de cadena ramificada (muy frecuentes en muchas bacterias Grampositivas)
2. monoinsaturados (sobre todo en Gram-negativas), como p. ej.:
a. palmitoleico

b. cis-vaccnico
A diferencia de eucariotas, no existen cidos grasos poliinsaturados, con la
excepcin de las Oxifotobacterias. Este grupo de bacterias fotosintticas tiene,
adems, la capacidad de modificar mediante desaturasas el grado de saturacin
de sus cidos grasos, lo que representa un mecanismo adaptativo frente a
cambios de temperatura.
Las bacterias pueden modificar la proporcin entre cidos grasos
insaturados y saturados, con objeto de mantener un estado de fluidez
adecuado en la membrana, como adaptacin a cambios de temperatura: a altas
temperaturas, aumenta la proporcin de cidos grasos saturados, mientras que
a bajas, aumenta la de los insaturados. Las bacterias psicrfilas (amantes del
fro) presentan casi todos sus cidos grasos de tipo insaturado.
En Arqueas, en lugar de los habituales lpidos a base de steres de cidos
grasos con glicerol, existen lpidos a base de teres de alcoholes de
cadena larga con glicerol (p. ej., difitanil-glicerol-diteres).Los alcoholes
suelen ser derivados poliisoprenoides. Este tipo de membranas son ms rgidas
que las de eubacterias. Incluso existen arqueobacterias con membranas a partir
de tetrafitanil-diglicerol-tetratereres, que consituyen bicapas
monomoleculares.
Como ya vimos en el tema anterior, la membrana citoplsmica alberga un
transportador lipdico de tipo politerpenoide, llamado undecaprenil-fosfato
presente en pequea cantidad (<1%). Igualmente se dan quinonas
isoprenoides (como la menaquinona o la ubiquinona) que, como veremos en
otro captulo, participan en cadenas de transporte de electrones. En algunas
bacterias existen igualmente variedades de pigmentos carotenoides.
Protenas:Constituyen la mayor parte de la membrana bacteriana (hasta el 80%
en peso seco). Existe una gran variedad de tipos de protenas en una misma
bacteria (hasta 200), pero la composicin y proporcin concreta vara segn las
condiciones de cultivo. Segn su localizacin en la membrana, y su grado de
unin con la porcin lipdica, se distingue entre:
protenas integrales de membrana (= endoprotenas): son protenas
estrechamente unidas a la membrana, por lo general atravesadas en plena
bicapa lipdica. Son difciles de extraer, tenindose que recurrir a detergentes
y/o disolventes orgnicos para separarlas respecto de los lpidos.
Protenas perifricas (= epiprotenas): unidas a la superficie de la
membrana, de forma ms dbil, por lo que son ms fciles de extraer y
purificar. Incluso algunas establecen contactos slo transitorios con la
membrana.

1.2 ESTRUCTURA
Mtodos de observacin y estudio
A microscopio ptico, se recurre a la tincin con Azul Victoria. A microscopio
electrnico, en cortes ultrafinos, se observan una estructura de unos 7 nm de
grosor, con dos capas externas densas a los electrones limitando una capa
central transparente.
Los estudios mediante difraccin de rayos X y de resonancia magntica nuclear
(RMN) demuestran una estructuracin bsica a base de cadenas de fosfolpidos
en una bicapa, segn se describe a continuacin.
Estructura
Consiste en una bicapa lipdica, con los grupos polares (hidrfilos) hacia afuera,
y las cadenas hidrofbicas de cidos grasos (o, en el caso de Arqueobacterias,
de alcoholes) hacia adentro, ajustndose al modelo de mosaico fluido de Singer
y Nicholson. Inmersas en esta bicapa se encuentran las abundantes protenas,
que pueden moverse lateralmente en el mosaico de molculas de lpidos,
igualmente dotados de una rpida movilidad. Parece ser que no existe movilidad
de lpidos entre las dos capas.
La membrana citoplsmica es asimtrica (aunque no tanto como la membrana
externa de Gram-negativas). Esto se traduce en el hecho de que muchos de los
procesos que tienen lugar en la membrana sean vectoriales (tengan una
direccin determinada).

1.3 FUNCIONES DE LA MEMBRANA CITOPLASMICA


La membrana citoplsmica de los procariotas es una notable estructura
multifuncional (como uno podra esperar de la constatacin del gran nmero de
tipos de protenas), siendo el sitio donde se producen muchos procesos
metablicos complejos, en un grado desconocido en el resto del mundo vivo.
De manera telegrfica, se puede decir que bsicamente, la membrana
citoplsmica bacteriana es una barrera osmtica (que mantiene constante el
medio interno), pero que merced a sistemas de transporte, permite
selectivamente el paso de sustancias entre el exterior y el interior, y que
interviene, adems, en procesos bioenergticos, en la biosntesis de
componentes de membrana, de pared y de cpsulas, y en la secrecin
de protenas. Desglosaremos brevemente estos diversos tipos de papeles de
la membrana.

Participacinenprocesosbioenergticos(obtencindeenerga)
Contiene todos los componentes requeridos para la transduccin de energa y la
produccin de ATP, por procesos respiratorios. En el caso de una bacteria
quimiotrofa, esto incluye:
deshidrogenasas
cadenas de transporte de electrones (con quinonas, citocromos, etc.)
ATP-asas (ATP sintasas/hidrolasas)
Algunas bacterias fotosintticas (de las Anoxifotobacterias) tambin incluyen
este tipo de componentes en la membrana citoplsmica.
En el tema 15 veremos en ms detalle cmo explica la teora quimiosmtica de
Mitchell el acoplamiento entre el funcionamiento de las cadenas de transporte
electrnico (o de la ATP-hidrolasa) y la generacin de un gradiente de protones a
travs de la membrana (potencial electroqumico o fuerza protn-motriz), el cual
a su vez puede:
generar ATP (desarrollo de un trabajo qumico)
promover transporte de ciertos nutrientes (trabajo osmtico)
promover movimiento flagelar (trabajo mecnico).
Participacinenbiosntesisdepolmerosdelasenvueltas.Como ya hemos visto en temas
anteriores (captulo 6), la membrana alberga transportadores (como el
undecaprenil-P) y enzimas relacionados con fases de la biosntesis de
polisacridos de la cpsula, peptidoglucano, cidos teicoicos y teicurnicos y
lipopolisacrido. Igualmente en ella se localizan los enzimas implicados en la
sntesis de los lpidos de la propia membrana.
Participacinenlasecrecin y modificacin postraduccional de las
protenascuyalocalizacinfinalesextraprotoplstica.Esto ya lo vimos en referencia a
las protenas de la pared, y lo mismo es aplicable a protenas secretadas al
medio (recurdese lo dicho sobre los polisomas asociados a la cara interna de la
membrana, y cmo el complejo de reconocimiento de seal colaboraba en el
paso de la protena a travs de la membrana).
Puntodeanclajedelcromosomaydealgunosplsmidos.Como veremos, sigue estando
debatido si un tipo de invaginacin de la membrana, llamado mesosoma (ver
ms adelante, en este captulo, apartado 3.1) es o no un artefacto, pero parece
fuera de duda que el cromosoma se ancla de alguna manera a la cara interna
de la membrana (sea a los mesosomas, o como proponen otros, a la cara
interna de los anillos perispticos). En la zona de anclaje parecen residir algunos
de los enzimas encargado de la replicacin. La membrana tiene igualmente un

papel en la separacin (segregacin) de las dos copias del cromosoma replicado


a las clulas hijas.
Barreraselectiva:Mantiene la constancia del medio interno (impidiendo la salida
de iones, metabolitos y macromolculas), pero simultneamente permite o
promueve activamente la entrada de nutrientes y la salida de los
productos de desecho. Esta funcin de transporte es la que ocupar la
siguiente seccin.

2. TRANSPORTE DE NUTRIENTES | a Contenidos


Tradicionalmente se viene considerando tres mtodos principales de transporte
de sustancias a travs de la membrana:
transporte pasivo inespecfico (= difusin simple);
transporte pasivo especfico (= difusin facilitada);
transporte activo.

2.1.TRANSPORTEPASIVOINESPECFICOODIFUSINSIMPLE
Este transporte consiste en la difusin pasiva de ciertas sustancias para las que
la membrana es impermeable, debido a la diferencia de concentracin (C) a
ambos lados de dicha membrana. Aparte de esta diferencia de concentracin,
en la difusin pasiva influyen:
la constante de permeabilidad (P), es decir, el grado de permeabilidad de la
membrana a la sustancia en cuestin;
el rea o superficie total (A) a travs de la que se produce el transporte.
Las membranas citoplsmicas son impermeables en s mismas a la mayor parte
de las molculas. Slo se da en el caso de O2, CO2, NH3, agua y otras pequeas
sustancias polares no ionizadas.
La difusin simple se produce por el paso de estas sustancias a travs de poros
inespecficos de la membrana citoplsmica.

2.2TRANSPORTEPASIVOESPECFICOODIFUSINFACILITADA
Es un proceso que permite el paso de compuestos por difusin a travs de
transportadores estereoespecficos y (al igual que en el caso anterior) sobre la

base de un gradiente de concentracin (en la direccin termodinmicamente


favorable).
El transportador suele ser una protena integral de membrana (permeasa),
cuya conformacin determina un canal interior, y por el cual un determinado
sustrato puede alcanzar el interior, sin gasto de energa. Se piensa que cuando
el soluto se une a la parte de la permeasa que da al exterior, esta protena sufre
un cambio conformacional que libera la molcula en el interior. La difusin
facilitada exhibe propiedades similares a las de las reacciones enzimticas:
Especificidad de sustrato: cada permeasa transporte un solo tipo de sustratos
qumicamente parecidos.
Cintica de saturacin de tipo Michaelis-Menten, es decir, la velocidad de
transporte aumenta con la concentracin de sustrato, hasta un valor lmite
(Vmax) por encima del cual ulteriores aumentos del soluto no aumentan dicha
velocidad (debido a que todas las porinas disponibles estn ya totalmente
ocupadas):
Velocidad de entrada: Vent = Vmx [Sext] /(Km + [Sext])
Velocidad de salida: Vsal = Vmx [Sint] /(Km + [Sint])
Aunque este sistema de transporte es muy comn en eucariotas, es muy
raro encontrarlo en bacterias. La explicacin evolutiva es que los
procariotas suelen vivir en ambientes con pocas concentraciones de
nutrientes, y por lo tanto no es frecuente que se den gradientes
adecuados. Una de las pocas excepciones la constituye el glicerol, que
es transportado por difusin facilitada en una amplia gama de bacterias,
tanto Gram-positivas como Gram-negativas. Conforme el glicerol entra,
es rpidamente convertido a glicerol-fosfato; por lo tanto, la
concentracin interna de glicerol como tal es prcticamente nula, lo que
facilita esta difusin incluso a bajas concentraciones exteriores de esta
sustancia.

2.3TRANSPORTEACTIVO
Consiste en el transporte de sustancias en contra de un gradiente de
concentracin, lo que requiere un gasto energtico. En la mayor
parte de los casos este transporte activo (que supone un trabajo
osmtico) se realiza
a expensas de un gradiente de H+ (potencial electroqumico de
protones) previamente creado a ambos lados de la membrana, por

procesos de respiracin y fotosntesis;


por hidrlisis de ATP mediante ATP hidrolasas de membrana (F1F0)
Los sistemas de transporte activo son los ms abundantes entre las
bacterias, y se han seleccionado evolutivamente debido a que en sus
medios naturales la mayora de los procariotas se encuentran de forma
permanente o transitoria con una baja concentracin de nutrientes.
Los sistemas de transporte activo estn basados en permeasas
especficas e inducibles. El modo en que se acopla la energa
metablica con el transporte del soluto an no est dilucidado, pero en
general se maneja la hiptesis de que las permeasas, una vez captado el
sustrato con gran afinidad, experimentan un cambio conformacional
dependiente de energa que les hace perder dicha afinidad, lo que
supone la liberacin de la sustancia al interior celular.
Estudiaremos los siguientes tipos de transporte activo:
transporte
transporte
transporte
transporte

activo ligado a simporte de protones;


activo ligado a simporte de iones Na+;
activo sensible a choque osmtico;
acoplado a translocacin de grupos.

2.3.1.TRANSPORTEACTIVOLIGADOASIMPORTEDEPROTONES
Como se recordar, el simporte se puede definir como el transporte
simultneo de dos sustratos en la misma direccin, por un mismo
transportador sencillo. En el caso del transporte activo ligado a simporte
de protones, lo que ocurre es que uno de los sustratos (H+) ha creado
previamente un gradiente de concentracin, cuya disipacin es
aprovechada por el otro sustrato para entrar con l. Este otro sustrato
puede ser:
una molcula de carga negativa: en este caso, su simporte ligado a
protones tiende a disipar slo el gradiente de concentracin. Ejemplos:
transporte de iones fosfato, de glutamato, etc.
una molcula neutra: en este caso, su simporte tiende a disipar no slo
el gradiente de concentracin, sino tambin el gradiente elctrico.
Ejemplo: en Escherichia coli, la lactosa usa una -galactsidopermeasa, que es una de las permeasas bacterianas ms
intensamente estudiadas.
Por otro lado, ciertas molculas catinicas (iones K+, lisina), son
transportadas directamente a travs de permeasas, en ausencia de

simporte de protones.
2.3.2.TRANSPORTEACTIVOLIGADOASIMPORTEDEIONESSODIO
Se puede considerar una versin modificada del anterior: algunas
sustancias no son transportadas activamente de forma directa por el
potencial electroqumico de protones, sino indirectamente, a travs de
un gradiente de Na+ que a su vez se origina a expensas de dicha fuerza
protn-motriz.
El sustrato entra por una permeasa, junto con iones Na+, pero a su vez
este sodio se recicla por un sistema de antiporte, a expensas de la
disipacin del potencial de protones.
Ejemplo: el azcar melibiosa, en el caso de la enterobacteria E. coli.
Estos dos tipos de transporte activo ligados a simporte quedan inhibidos
si tratamos las clulas con algn agente ionforo (p. ej., el antibitico
valinomicina), que destruye el potencial electroqumico de protones.

2.3.3.TRANSPORTEACTIVOSENSIBLEACHOQUEOSMTICO
Este transporte, propio de bacterias Gram-negativas, queda puesto de
manifiesto cuando lo impedimos por algn procedimiento que altere o
elimine la membrana externa (conversin a esferoplastos):
Por ejemplo: tratemos E. coli con el quelante EDTA en una solucin
tamponada isotnica (con un 20% de sacarosa). Centrifugamos y el
sedimento de clulas lo resuspendemos en una solucin de MgCl2 en fro
(0C). El resultado es que las protenas del periplasma escapan al medio
externo. Esto es un caso de tratamiento por choque osmtico que
origina prdida de contenidos del periplasma. Se comprueba que ciertos
sistemas de transporte quedan inutilizados, debido a que requieren para
su funcionamiento, amn de protenas de membrana citoplsmica,
otras especficas del espacio periplsmico. Por contra, este sistema
no se ve afectado por los agentes ionforos. La energa requerida la
suministra el ATP.
El tipo paradigmtico de este tipo de transporte se denomina de
transportadores ABC dependientes de protenas de unin
periplsmicas o ATPasas de trfico. Se trata de sistemas de varios
componentes, en los que existen protenas periplsmicas que captan el
sustrato con gran afinidad, y lo llevan hasta unass protenas de

membrana, las cuales acoplan el paso de dicho sustrato hasta el


citoplasma (sin alteralo qumicamente) con la hidrlisis de ATP. Este tipo
de sistemas est muy extendido, dentro de las Gram-negativas, entre
las Enterobacterias.
La denominacin de "transportadores ABC" se debe a que en todos ellos existe una o dos
protenas perifricas de membrana citoplsmica que posee un dominio (de unos 200
aminocidos) conservado evolutivamente, denominado "cassette de unin a ATP" (las
iniciales de ATP-binding cassette generan la sigla "ABC"). Existen muchos ejemplos de
protenas ABC, tanto en procariotas como eucariotas (incluido humanos), y todos ellos
estn implicados en transportar sustancias a uno u otro lado de la membrana. En el tema 10
veremos ejemplos de transportadores ABC que funcionan "al revs" de los de este tema:
son "exportadores" de protenas recin sintetizadas que deben insertarse en las envueltas
bacterianas o ser excretadas al medio.
Elementos de este tipo de sistema:
Porinas o protenas de membrana externa para lograr la difusin del
sustrato desde el medio hasta el espacio periplsmico.
Protena(s) solubles de espacio periplsmico que se unen al sustrato
con gran afinidad.
Un heterodmero formado por dos protenas integrales de membrana
(cada una de ellas posee 5 o 6 trechos en -hlice que atraviesan la
membrana citoplsmica), que son la permeasa propiamente dicha del
sistema (el canal por donde pasa el sustrato).
Dos protenas perifricas de membrana citoplsmica, adosadas al lado
citoplsmico, que incluyen el mdulo ABC que acopla la hidrlisis de
ATP con el transporte unidireccional del sustrato a travs de la
membrana.
Modelo del mecanismo de este sistema:
1. El sustrato exgeno normalmente entra al periplasma a travs de
algn canal inespecfico o porina de membrana externa.
2. La protena periplsmica especfica, antes de su unin al sustrato
tiene una determinada configuracin (denominada "abierta").
Cuando el sustrato pasa al periplasma, la correspondiente protena
de unin periplsmica se une a l con gran afinidad, y al unirse
cambia de conformacin. En esta configuracin, llamada
"cerrada", el sustrato se encuentra "enterrado" entre dos lbulos
de la protena.
3. Mientras tanto, el dmero de protenas integrales de membrana
(antes de la unin con la protena periplsmica) se encuentra en

un estado energizado pero incapaz de transportar sustrato. En


esta situacin, puede unirse (por la parte que da al periplasma) al
complejo formado por la protena periplsmica (en configuracin
"cerrada") ligada al sustrato. Al hacer esto, el heterodmero de
membrana cambia de conformacin, de modo que ahora muestra
mayor afinidad hacia la protena periplsmica y se abre su canal
para el sustrato.
4. Entonces, el complejo de membrana alcanza su estado de mnima
energa, y con ello descarga el sustrato en el citoplasma y se logra
la separacin de la protena periplsmica (que vuelve a su
configuracin "abierta").
5. Finalmente, la hidrlisis de ATP catalizada por las protenas
perifricas ABC (adosadas a la membrana y asociadas a las
protenas integrales) suministra la energa para que el
heterodmero de membrana vuelva a su estado energizado inicial,
preparado as para otro ciclo de transporte.
Mediante este tipo de sistema de transporte muchas bacterias Gramnegativas, y especialmente las Enterobacterias (como Escherichia coli o
Salmonella typhimurium) logran introducir numeros tipos de sustancias:
Azcares como arabinosa, galactosa, maltosa, ribosa, xilosa, etc.
Aminocidos como histidina, glicina, leucina, etc.
Oligopptidos
Algunas vitaminas y metales.

2.3.4.TRANSPORTEACOPLADOATRANSLOCACIONDEGRUPOS
Es un sistema de transporte que acopla la entrada del sustrato con su
modificacin qumica por unin covalente con un grupo qumico.
Estrictamente hablando, no es un transporte activo, porque no funciona
en contra de un gradiente de concentracin, pero se considera de hecho
como activo, ya que la concentracin del sustrato modificado dentro de
la clula supera con creces a la del sustrato sin modificar en el exterior.
Este sistema supone un ahorro de energa metablica: aunque en el
transporte se gasta un enlace rico en energa, el sustrato queda
modificado en su paso a travs de la membrana en la forma que la
bacteria emplea como primer intermediario de su ruta metablica. Es
decir, con un solo proceso se cumplen dos funciones distintas:
transporte y preparacin qumica para la ruta, que de todas formas
habra que realizar. No es de extraar que este tipo de transporte haya

sido seleccionado frecuentemente en la evolucin bacteriana, y que hoy


lo encontremos en muchos procariotas, especialmente en bacterias
anaerobias o aerobias facultativas que recurren a fermentaciones
(recordar que las fermentaciones tienen un rendimiento energtico
menor que los procesos respiratorios; por lo tanto, es "lgico" que se
seleccionen mecanismos ahorradores como el descrito).
El caso mejor estudiado de esta clase de transporte lo constituye el
llamado sistema de fosfotransferasa de azcares (segn las casi
inevitables iniciales inglesas: PTS). En E. coli el sistema PTS permite el
transporte de glucosa, manosa, fructosa y los polioles sorbitol y manitol.
Consta de varios componentes que funcionan como una cadena de
transportadores del grupo fosfato de alta energa del fosfoenolpirvico
(PEP) hasta el azcar a transportar en cuestin.
Las dos primeras protenas son inespecficas respecto del azcar (son
comunes a los diversos sustratos a transportar), tienen localizacin
citoplsmica y su sntesis es constitutiva. Se conocen como
Enzima-I (EI)
HPr (esta ltima es una pequea protena termoestable, rica en
histidina).
El otro componente, llamado Enzima II (EII) es especfico de cada
azcar, y su sntesis es inducible por el correspondiente sustrato:
Suele estar compuesto por tres subunidades o dominios:
EIIA (hasta hace poco llamado EIII) es citoplsmico y soluble;
EIIB es un dominio perifrico de membrana: aunque es hidrfilo, se liga
al lado citoplsmico de la membrana a travs de EIIC.
EIIC es una protena integral de membrana
Veamos cmo funciona el sistema:
1. Por un lado, el azcar se une al enzima EIIC especfico, pero ste
por s mismo no puede liberar al azcar sin modificar en el interior
celular.
2. Mientras tanto, la EI cataliza (en presencia de Mg++) la
transferencia del fosfato de alta energa del PEP a la HPr.
3. La HPr fosforilada (HPr-P) transfiere el fosfato al enzima IIA
especfico del azcar [p. ej., la glucosa (EIIAGlc ) o el manitol
(EIIAMtl)].
4. La EIIA-P rpidamente, y en presencia de Mg++, transfiere el fosfato
a la enzima-IIB especfica con la que se asocia (p. ej., EIIBGlc), que a
su vez fosforila el azcar (en el caso de la glucosa convirtindola

en glucosa-6-P): en este momento la EIIC pierde su afinidad por el


azcar modificado, que de esta forma entra en el citoplasma,
preparado ya para actuar como sustrato de la primera reaccin del
catabolismo de este azcar.
Otros ejemplos de transporte acoplado a translocacin de grupos:
Entrada de cidos grasos mediante un sistema de transferencia de
Coenzima A, que los transforma en acil-CoA.
Entrada de purinas y pirimidinas, mediante un sistema de fosforribosiltransferasas:
purina o pirimidina (exterior) + PRPP ---------> NMP (interior) + P
(PRPP = fosforribosil-pirofosfato)
(NMP = nuclesido monofosfato)
En bacterias es frecuente encontrar varios sistemas de transporte para
un mismo nutriente (p. ej., Escherichia coli posee cinco sistemas para
transportar la galactosa y tres sistemas para algunos de los
aminocidos. Los diversos sistemas se diferencian en cuanto a su
requerimiento energtico, su afinidad, su regulacin, etc. Lgicamente,
la evolucin ha debido seleccionar esta redundancia de sistemas de
transporte con objeto de permitir que el microorganismo sobreviva bajo
diversas circunstancias ambientales.

2.4TRANSPORTEDEHIERRO
El hierro es un cofactor de muchas enzimas y citocromos, por lo que las
bacterias necesitan captarlo. Las bacterias que viven dentro de animales
superiores tienen un problema: en los fluidos y tejidos de sus patrones el
hierro libre es muy poco abundante, por lo que se vuelve vital
aprovisionarse con este elemento de alguna manera. Muchas bacterias
secretan unas molculas llamadas en general siderforos, que son
capaces de formar quelatos (complejos) con el hierro frrico. Por
ejemplo, Escherichia coli secreta el siderforo enterobactina. Cuando la
enterobactina se une al hierro, forma un complejo octadrico, que luego
se engarza con un receptor especfico de la membrana externa, tras lo
que el hierro se libera al espacio periplsmico, desde donde entra al
citoplasma por medio de un sistema sensible a choque osmtico similar
al ya estudiado ms arriba.

3. ESTRUCTURAS MEMBRANOSAS INTRACITOPLSMICAS | a Contenidos

3.1MESOSOMAS
Son estructuras membranosas intracitoplsmicas que se observan en la
mayor parte de las bacterias, constituidas por invaginaciones de la
membrana citoplsmica.
Observacin: A microscopio ptico se pueden detectar con tincin
negativa con cido fosfotngstico. A microscopio electrnico se observa
que, por lo general, el mesosoma se ubica en determinadas
localizaciones: sitios donde se inicia la divisin celular; tabiques
transversales en crecimiento (incluyendo los que delimitan el
compartimento de la endospora); zonas cercanas a los nucleoides
(cuerpos nucleares). Desde hace mucho tiempo se viene discutiendo si
los mesosomas son en realidad estructuras autnticas de la bacteria, o
como dicen otros, meros artefactos de las tcnicas microscpicas
empleadas. El debate an no est apagado, segn algunos destacados
microbilogos.
Estructura y composicin: Los mesosomas ms caractersticos y
patentes son los de bacterias Gram-positivas. Su aspecto al microscopio
electrnico es el de repetidas invaginaciones de la membrana: una
invaginacin primaria en forma de sculo irregular, de la que surge una
invaginacin secundaria, llamada tbulo mesosmico, que rellena el
hueco de la invaginacin primaria. El tbulo mesosmico suele consistir
en un conjunto de pequeas vesculas arrosariadas, o tbulos,
conectados entre s, a veces con aspecto de cebolla.
Cuando se obtienen protoplastos en Gram-positivas, la invaginacin
primaria desaparece, y el tbulo mesosmico se evagina y se fractura,
liberndose una serie de vesculas membranosas huecas (no rellenas de
citoplasma).
Los mesosomas de Gram-negativas son menos conspicuos y menos
complejos: se manifiestan como pequeas invaginaciones de la
membrana, con forma laminar o a base de tubos dispuestos de forma
verticilada.
Funciones:
La porcin de membrana del mesosoma correspondiente a la
invaginacin primaria (pero no as a la secundaria) posee una
composicin semejante a la de la membrana citoplsmica, por lo que se
le pueden aplicar los papeles que ya hemos estudiado (transporte de
electrones, sntesis de componentes de las envueltas...).

Probable papel en la sntesis del septo transversal, quiz regulando las


autolisinas implicadas en la divisin celular (ver apartado 5 del captulo
6).
Puntos de anclaje del cromosoma bacteriano (y quiz de algunos
plsmidos), actuando en la segregacin de los cromosomas hijos a las
clulas hermanas (y en el caso de las bacterias esporuladas, en la
segregacin de los cromosomas a los compartimentos de la clula
madre (esporangio) y de la preespora.
Zonas de secrecin de ciertas exoenzimas (p. ej., penicilinasa en
Bacillus).

3.2CROMATFOROS
Son invaginaciones de la membrana citoplsmica de las bacterias
purpreas (dentro de las Anoxifotobacterias) que albergan su aparato
fotosinttico. Dependiendo de las especies, pueden adoptar formas
variadas:
A modo de vesculas huecas;
capas de repliegues concntricos, a modo de lminas paralelas,
cercanas a la membrana citoplsmica;
formando tbulos, aislados o en haces.
Los cromatforos suponen obviamente una adaptacin para aumentar la
superficie de membrana til capaz de realizar las funciones propias de la
fotosntesis.

3.3OTRASINVAGINACIONES
En muchas bacterias quimioautrofas (especialmente las nitrificantes)
existen invaginaciones de la membrana (a menudo denominadas
citomembranas) que permiten una mayor superficie para la realizacin
de sus actividades respiratorias. Sus formas y disposiciones son
igualmente muy variadas.
En Azotobacter, una bacteria aerobia fijadora de nitrgeno atmosfrico,
y que presenta una altsima tasa respiratoria, se pueden detectar
tambin invaginaciones de membrana que aumentan la superficie
disponible para sus intensos procesos de oxidacin.

4. TILACOIDES | a Contenidos
Son sacos membranosos aplastados presentes en las Oxifotobacterias,
que no estn en continuidad con la membrana citoplsmica; en su
cara externa se disponen filas de ficobilisomas (vase captulo 8). El
conjunto de membrana tilacoidal + ficobilisomas es el responsable de la
fotosntesis oxignica en este grupo de procariotas.

. CITOPLASMA BACTERIANO: VISIN DE CONJUNTO | a Contenidos


El citoplasma bacteriano es la masa de materia viva delimitada por la
membrana citoplsmica. En su interior se albergan:
cuerpos nucleares (nucleoide);
plsmidos (no en todas las cepas bacterianas);
ribosomas;
inclusiones (no en todas);
orgnulos (no en todas).
Al igual que en los dems seres vivos, el citoplasma es un sistema coloidal cuya
fase dispersante es agua junto con diversas sustancias en solucin (citosol), y
cuya fase dispersa est constituida por macromolculas y conjuntos
supramoleculares (partculas submicroscpicas). La viscosidad es mayor que la
del citoplasma eucaritico, estando desprovisto de corrientes citoplsmicas.
Observacin:
A microscopa ptica, obviamente es poco lo que se puede distinguir en l. En
las clulas jvenes se suele teir de modo uniforme, teniendo un carcter
basfilo (debido a la abundancia de ARN). En las clulas viejas se tie
irregularmente, debido a la aparicin de inclusiones y a la acumulacin de
sustancias de desecho.
A microscopa electrnica destaca el carcter granulado, producido por los
numerosos ribosomas (que a los aumentos habituales aparecen como partculas
esfricas), aunque se observa una zona irregular hacia el centro, ms
transparente a los electrones, que se debe a los cuerpos nucleares (nucleoide).
En los intersticios entre las partculas granuladas existe una sustancia amorfa
en la que no se pueden distinguir ms detalles, y que corresponde a la fase
dispersante acuosa de la que hablbamos ms arriba.
En este captulo y en los prximos nos dedicaremos al estudio de las principales
estructuras y macromolculas que alberga el citoplasma. Comenzaremos con
las inclusiones y orgnulos especiales que presentan algunas bacterias (este

cap. 8), para abordar despus la organizacin a gran escala del material
gentico bacteriano (cap. 9), y un rpido repaso al proceso de expresin de la
informacin gentica contenida en ste (cap. 10, con estudio de los ribosomas
bacterianos).

2. INCLUSIONES DE RESERVA | a Contenidos


Son acmulos de sustancias orgnicas o inorgnicas, rodeadas o no de una
envuelta limitante de naturaleza protenica, que se originan dentro del
citoplasma bajo determinadas condiciones de crecimiento. Constituyen reservas
de fuentes de C o N (inclusiones orgnicas) y de P o S (inclusiones inorgnicas).
Estudiaremos:
1. Inclusiones orgnicas:
a. inclusiones polisacardicas
b. grnulos de poli--hidroxibutrico (o, en general de poli-hidroxialcanoatos)
c. inclusiones de hidrocarburos
d. grnulos de cianoficina
2. Inclusiones inorgnicas:
grnulos de polifosfato
a. glbulos de azufre

2.1 INCLUSIONES POLISACARDICAS


Son acumulaciones de (1-->4) glucanos, con ramificaciones en (1--> 6),
principalmente almidn o glucgeno (segn especies), que se depositan de
modo ms o menos uniforme por todo el citoplasma cuando determinadas
bacterias crecen en medios con limitacin de fuente de N, pero donde an
sean abundantes las fuentes de C y energa. En esta situacin, se detiene
prcticamente la sntesis de protenas y de cidos nucleicos, y la mayor parte
del C asimilado se convierte rpidamente en estos materiales de reserva.
Cuando a estas clulas las pasamos a un medio rico en N, pero carente de
fuente de C, estas inclusiones se usan como fuente interna de C para la sntesis

de cidos nucleicos y protenas.


Estas inclusiones actan, pues, como sistemas de almacenamiento de carbono
osmticamente inertes (la clula puede albergar grandes cantidades de
glucosa que, si estuvieran como molculas libres dentro del citoplasma, podran
tener efectos osmticos muy negativos).
Sntesis (veamos el ejemplo del glucgeno):
fosfoglucomutasa

Glucosa-6-P --------------------------------> Glucosa-1-P

ADP-glucosa-pirofosforilasa

Glucosa-1-P + ATP ---------------------------------------> ADP-glucosa + PP

glucgeno sintetasa

ADP-glucosa + { ,1-->4 glucano aceptor}n -----------------------------------------> {


1-->4 glucano}n+1

Sobre este polmero lineal acta la enzima ramificadora (que introduce enlaces
(1-->6) con glucosa), de modo que se forma el glucgeno maduro.
Degradacin:
glucgeno fosforilasa

Glucgeno --------------------------------> n {glucosa-1-P}

Para la total degradacin del glucgeno se requieren tambin enzimas


desramificadoras, capaces de romper los enlaces (1-->6).
Observacin:
Para observarlas se recurre a la tincin con una solucin de I2 + IK:

glucgeno: aparece de color pardo-rojizo;


almidn (amilopectina): color azul.

2.2 GRNULOS DE POLI--HIDROXIBUTRICO (PHB) Y DE POLIHIDROXIALCANOATOS (PHA)


Los grnulos de poli--hidroxibutrico son acmulos del polister del cido hidroxibutrico (= 3-hidroxibutrico), rodeados de una envuelta protenica, y que
al igual que en el caso anterior, se producen en ciertas bacterias como reserva
osmticamente inerte de C en condiciones de hambre de N. Adems de la
proteccin osmtica, estos grnulos suponen la ventaja de neutralizar un
metabolito cido (el grupo carboxilo de cada unidad de -hidroxibutrico
desaparece como tal, al intervenir en el enlace ster con la siguiente unidad).
En las especies de Bacillus constituye la fuente de carbono y energa al inicio de
la esporulacin. Una funcin semejante parece implicada a la hora del
enquistamiento de Azotobacter.
Una clula puede contener de 8 a 12 de estos grnulos, que miden unos 0.2-0.7
m de dimetro, y que van provistos de una envuelta proteica de unos 3-4 nm
de grosor. Pueden llegar a representar el 80% en peso de la clula.
Sntesis:
Se produce por una rama lateral de la ruta de sntesis de los cidos grasos, a
travs de -hidroxibutiril-CoA. En los grnulos, el polmero queda asociado a un
sistema complejo que ser utilizado en la degradacin, pero este sistema habr
de activarse antes.
Degradacin:
1. La degradacin comienza con la actuacin de un enzima proteoltico que
desorganiza la envuelta proteica de los grnulos;
2. Los grnulos as "activados" sufren ahora la accin de una despolimerasa,
que va generando dmeros de hidroxibutrico.
3. Actuacin de una dimerasa especfica, que genera -hidroxibutrico a
partir de los steres dimricos.
Observacin:
A diferencia de los acmulos de polisacridos, los grnulos de PHB son visibles a
microscopio ptico en fresco, debido a su elevado ndice de refringencia. Se
tien bien mediante Negro-Sudn.
Grnulos de poli--hidroxialcanoatos (PHA):

En los ltimos aos est quedando patente que los grnulos descritos de PHB
son un ejemplo de una clase ms amplia de grnulos de poli--hidroxialcanoatos.
Por ejemplo: cuando determinadas especies de Pseudomonas crecen en n-octano como fuente de carbono,
se acumula un polmero de steres del cido -hidroxi-octanoico, con una funcin metablica semejante a la
del PHB.
Ciertas cepas de Alcaligenes eutrophus, cuando crecen en glucosa y propinico producen copolmeros
aleatorios de unidades de -hidroxibutrico y -hidroxivalrico (=3-hidroxipentanoico).
Existen interesantes perspectivas de aprovechamiento econmico de estos polmeros, ya que los PHA se
comportan como excelentes termoplsticos biodegradables. Por ejemplo, la empresa britnica ICI tiene
patentados procesos industriales para fabricar PHA donde casi el 90% de las unidades son de hidroxivalrico,
que da un polmero flexible comercializado con el nombre de Biopol . Los polmeros a base de 4- o 5hidroxibutrico y 3-hidroxibutrico son ms largos, ms elsticos y ms biodegradables (se han empleado en
la fabricacin de envases)

2.3 INCLUSIONES DE HIDROCARBUROS


Son acmulos de reserva (con envuelta proteinica) de los hidrocarburos que determinadas
bacterias (especialmente Actinomicetos y relacionados) usan como fuente de C.

2.4 GRNULOS DE CIANOFICINA


Muchas cianobacterias (Oxifotobacterias) acumulan grandes grnulos
refringentes de reservas nitrogenadas cuando se acercan a la fase
estacionaria de crecimiento. Estos grnulos de cianoficina son acmulos
de un copolmero de arginina y asprtico: consta de un ncleo de
poliasprtico, en el que todos los carboxilos de las cadenas laterales
estn unidos con L-arginina. Su sntesis no est basada en el mecanismo
habitual en ribosomas, ya que no se ve inhibida por el cloramfenicol.

2.5 GRNULOS DE POLIFOSFATOS (= GRNULOS DE VOLUTINA, O


GRNULOS METACROMTICOS
El nombre de "metacromticos" alude al efecto metacromtico (cambio
de color): cuando se tien con los colorantes bsicos azul de toluidina o
azul de metileno envejecido, se colorean de rojo. A microscopio
electrnico aparecen muy densos a los electrones.

Son acmulos de polifosfato, polmeros lineales del ortofosfato, de


longitud variable (por trmino medio, unas 500 unidades), que
representan un modo osmticamente inerte de almacenar fosfato.
Parece ser que la parte central de estos grnulos constituye un ncleo
formado por lpidos y protenas. En algunos casos pueden constituir una
fuente de energa, en sustitucin del ATP (se trata en este caso de una
especie de "fsil bioqumico?").
Se acumulan cuando algn otro nutriente distinto del fosfato se hace
escaso (sobre todo cuando va desapareciendo el sulfato). En estas
condiciones se detiene la sntesis de los cidos nucleicos, y la volutina se
acumula a la espera de su utilizacin para esta sntesis de nucleicos,
cuando aparezca el nutriente originalmente limitante.
Su sntesis se produce por adicin secuencial de restos de P a PP,
actuando el ATP como donador:

P-P + ATP ------> P-P-P + ADP;


(-P-)n + ATP -----> (-P-)n+1 + ADP.
Los grnulos de polifosfatos tienen un interesante aspecto aplicado, en la eliminacin de
fosfatos en las aguas residuales. En los lodos activados de las plantas de procesamiento de
aguas y residuos es muy abundante la bacteria Acinetobacter, que puede llegar a acumular
el 24% de su biomasa bajo la forma de polifosfatos. Durante los periodos de aerobiosis,
esta bacteria se asegura la energa a partir de sustratros extracelulares, y mientras tanto
acumula grnulos de polifosfatos; en anaerobiosis, los niveles de ATP los mantienen a
expensas de usar esos grnulos de polifosfato, por lo que el lodo libera fosfatos. Esto se
aprovecha para eliminar concentraciones problemticas de fosfatos en aguas residuales,
derivadas del uso de fertilizantes y detergentes (proceso "Renpho").

2.6 GLBULOS DE AZUFRE


Las inclusiones de S aparecen en dos grupos de bacterias que usan
sulfuro de hidrgeno (SH2):
las bacterias purpreas del azufre (que usan el SH2 como donador de
electrones para la fotosntesis);
bacterias filamentosas no fotosintticas como Beggiatoa o Thiothrix,
que lo usan como donador de electrones para sus oxidaciones.

En ambos casos, el sulfuro de hidrgeno es oxidado a azufre elemental


(S0), que en el citoplasma se acumula como glbulos muy refringentes y
rodeados de envuelta protenica. Estos glbulos son transitorios, ya que
el S0 se reutiliza por oxidacin hasta sulfato, cuando en el medio se
agota el sulfuro.

3. OTRAS INCLUSIONES | a Contenidos


3.1 INCLUSIONES DE SALES MINERALES
Acmulos grandes, densos y refringentes de sales insolubles de calcio
(sobre todo carbonatos) que aparecen en algunas bacterias (como
Achromatium), cuyo papel parece consistir en mantenerlas en el fondo
de los lagos y ros.

3.2 FICOBILISOMAS
Son estructuras supramacromoleculares, en forma de cilindros o
bastones, adosadas a la superficie de la membrana tilacoidal de las
Oxifotobacterias, confiriendo a sta un tpico aspecto "granuloso" en las
micrografas electrnicas.
Como se puede ver en el esquema, estn constituidas por pilas de
discos a partir de ficobiliprotenas, cromoprotenas que sirven como
"antenas" para la captacin de luz en la fotosntesis de estos
procariotas. Los grupos cromforos son: ficocianinas, aloficocianinas y
ficoeritrina. Como veremos oportunamente, la disposicin ordenada de
los distintos pigmentos tiene un papel central en la "canalizacin" de la
energa de la luz hacia los centros de reaccin (ubicados ya en plena
membrana tilacoidal) donde se localizan los complejos fotosintticos
protenas-clorofilas.

4. ORGNULOS PROCARITICOS CITOPLSMICOS | a Contenidos


Como ya dijimos, en procariotas no existen por regla general orgnulos
citoplsmicos rodeados por unidad de membrana. Las nicas
excepciones estn constituidas por los tilacoides de las Oxifotobacterias,
ya estudiados en el captulo anterior. En algunos grupos bacterianos se
pueden encontrar orgnulos citoplsmicos no rodeados por unidad
de membrana (o sea, sin bicapa lipdica). Muchos de ellos presentan
envueltas basadas en subunidades de protenas:

carboxisomas
vacuolas de gas
clorosomas
magnetosomas.

4.1 CARBOXISOMAS (= CUERPOS POLIDRICOS)


Estructuras presentes en bacterias fotoautotrofas (Oxifotobacterias y
ciertas bacterias purpreas) y quimioautotrofas (nitrificantes,
Thiobacillus), de apariencia polidrica con tendencia a esfrica. Su
dimetro oscila entre 50 y 500 nm, y estn rodeadas de envuelta
monocapa proteinica de unos 3,5 nm. El interior tiene aspecto granular,
debido a la acumulacin de la enzima ribulosa-bifosfato-carboxilasa
(RuBisCo, la carboxidismutasa, el enzima clave en el ciclo de Calvin de
asimilacin de CO2). Aunque se pens que eran los sitos de fijacin del
CO2, parece ms bien que se trata de reservas de dicha enzima.

4.2 VACUOLAS DE GAS

Son orgnulos muy refringentes al microscopio ptico, que al electrnico


muestran una estructura a base de agrupaciones regulares de
vesculas de gas. Cada vescula tiene una forma de cilindro bicnico
(200-1000 nm de longitud y unos 70 nm de dimetro), rodeado de una
monocapa de unidades globulares de protena ensambladas
helicoidalmente que dan un aspecto a bandas ("costillas"). Esta envuelta
es impermeable al agua, pero permeable a los gases, por lo que la
composicin y concentracin del gas dentro de la vescula depende de
las que existan en el medio. Conforme se sintetizan y ensamblan las
vesculas, el agua va siendo eliminada del interior (vase esquema).
La funcin de estas vacuolas es mantener un grado de flotabilidad
ptimo en los hbitats acuticos a las bacterias que las poseen,
permitindoles alcanzar la profundidad adecuada para su modo de vida
(segn los casos, para obtener una intensidad adecuada de luz,
concentracin ptima de oxgeno o de otros nutrientes).
Las vacuolas de gas son muy frecuentes en Oxifotobacterias y
Anoxifotobacterias; tambin se dan en algunas arqueobacterias
(Halobacterium, algunas metangenas) y en bacterias prostecadas
(Ancalomicrobium, Prosthecomicrobium).

4.3 CLOROSOMAS

Son vesculas oblongas situadas por debajo de la membrana


citoplsmica, que contienen los pigmentos antena de las bacterias
fotosintticas verdes (antigua familia Chlorobiaceae, dentro de la clase
Anoxyphotobacteria). Son invisibles a microscopa ptica; miden 100150 nm de longitud y unos 50 nm de anchura, estando rodeadas de una
monocapa de protenas. Se disponen por debajo de la membrana
citoplsmica, sin estar en continuidad con ella, aunque en muchos casos
aparecen conectadas a travs de un pednculo de naturaleza no lipdica.

4.4 MAGNETOSOMAS

Son orgnulos sensores del campo magntico terrestre, que aparecen en


ciertas bacterias acuticas flageladas microaerfilas o anaerobias (p. ej.,
en Aquaspirillum magnetotacticum). Consisten en cristales homogneos
de magnetita (Fe3O4), de formas cubo-octadricas o de prisma
hexagonal, delimitados por una envuelta protenica. Los diversos
cristales suelen disponerse en filas paralelas al eje longitudinal de la
bacteria, o en otras agrupaciones regulares de varios unidades, hasta
varias decenas.
Fueron descubiertas en 1975, y se sabe que permiten la orientacin
magntica a las bacterias que las poseen (bacterias magnetotcticas),
determinando la orientacin de su natacin. En el hemisferio Norte, el
campo magntico est orientado hacia abajo, y en el sur hacia arriba.
Las bacterias magnetotcticas del hemisferio septentrional se orientan
al N, y las del meridional, al S. Por consiguiente, cuando las bacterias
son removidas de los fondos donde viven, por magnetotaxia pueden
volver al fondo, que es donde encuentran las concentraciones de
oxgeno adecuadas para su modo de vida