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PREPARACIONES HISTOLGICAS DEL

SISTEMA NERVIOSO.
TCNICAS DE TINCIN

Aragons, Fernndez Vicente


1 Psicologa
Grupo C

NDICE
1. Tincin de Nissl.
2. Tincin de Cajal con nitrato de plata (AgNo3).
3. Tincin con hematoxilina y eosina.
4. Tincin de Golgi.
5. Tinciones par mielina (mtodos Weigert)
a. Tincin con tetrxido de osmio.
b. Tincin Klver-barrera.
6. Tinciones para la gla
a. Tincin de Cajal con oro sublimado.
7. Tinciones para revelar neurotransmisores.
a. Tincin por fluorescencia inducida por
formaldehdo y cido glioxlico.
b. Tincin mediante inmunocitoqumica.

1. TINCIN DE NISSL

Permite teir el pericarion (soma), pues contiene protenas que se tien


bien con colorantes.
Usa colorantes como: Violeta de cresilo, tionina y azul de toluidina.
Proporciona una panormica general y exhaustiva de la distribucin,
tamao y morfologa de las neuronas, pero no ofrece informacin alguna
sobre sus ramificaciones.

En la figura de
la izquierda, se
muestra una
seccin
histolgica con
tincin de Nissl
del hipocampo
de un roedor
mostrando
varios tipos de
neuronas.

Detalle de una
neurona, que en este
corte muestra tres
terminaciones. Se
puede distinguir
claramente el ncleo
celular y los ncleos
gliales (puntos
pequeos).

2. TINCN DE CAJAL CON NITRATO DE PLATA

Se basa en la adicin de nitrato de plata y dicromato potsico en un


tejido. Formando un precipitado oscuro que impregna completamente
las clulas del SN.
Obtiene acceso a la morfologa completa de neuronas y clulas
gliales. El marcaje de los axones permite obtener informacin acerca
de la conectividad neuronal
Tie selectivamente a un grupo muy bajo de clulas.

Tincin de Cajal. En la
imagen de la izquierda
se muestran una serie
de fibras y axones
colaterales a las clulas
de Purkinje.

En la imagen de la derecha, se muestra una


neurona con el ncleo y el nuclolo bien
diferenciados. Esta clula pertenece a un bulbo
raqudeo humano

3. TINCIN CON HEMATOXILINA Y EOSINA

La hematoxilina se fija a estructuras cidas como la cromatina


del ncleo y los grandes acmulos ribosomales del citoplasma
como el retculo endoplasmtico rugoso.
La hematoxilina no es un colorante en sentido estricto si no que
lo es la hematina (compuesto oxidado)
La eosina se une a elementos del citoplasma y la matriz
extracelular.
El tiempo de diferenciacin depende de la intensidad de tincin
de la eosina que se desea en la muestra.

En la imagen de la
izquierda, se muestra
el primer plano de un
ganglio espinal
teido con
hematoxilina-eosina
donde se pueden ver
las clulas que lo
componen.
En la figura, se
observan neuronas
pseudounipolares
(ms grandes), vasos
sanguneos, axones y clulas de Schwann que forman las vainas de mielina que
recubren estos axones.

En la imagen siguiente se
muestran tanto clulas
satlites (pequeas), como
neuronas (grandes) y
vasos sanguneos
(capilares). La imagen
corresponde a un ganglio
con el objetivo 40x.

4. TINCIN DE GOLGI

Permite diferenciar morfolgicamente cada una de las clulas del SN,


por lo que es posible agruparlas segn sus caractersticas externas.
Tien un porcentaje muy bajo de clulas.
La tincin se localiza en toda la extensin de la clula, no en una
determinada zona.
Los resultados se obtienen en un periodo breve de tiempo.
Excelente impregnacin de axones, aunque no se tien completamente
las arborizaciones terminales por lo que aparecen con un aspecto ms
claro y despejado.

En la figura, se observan
clulas de Purkinje
correspondientes al cerebelo,
mediante la tcnica de tincin
de Golgi.

Gracias a la tincin de Golgi puede


distinguirse una nica clula en todo su
esplendor: El soma triangular que
constituye el citoplasma y del cual
parte el largo axn y las dendritas. En
imgenes como esta Cajal lleg a
distinguir incluso las espinas
dendrticas que recubren las
ramificaciones y el cono axonal.

5. TINCIONES PARA MIELINA (MTODOS DE WEIGERT)

5.1.

Usan colorantes afines a protenas unidas a fosfolpidos.


Sirven para identificar tractos de fibras.
Se puede combinar con la tincin de Nissl.

Tincin con tetrxido de osmio.

La imagen de la
izquierda muestra
una fibra
mielinizada
preparada con
tetrxido de osmio.
Se observa un
ndulo de Ranvier
hacia a mitad de la
fibra. La tincin
ms oscura de la
mielina se
interrumpe en el nodo, donde la fibra est cubierta slo por el
citoplasma de la clula de Schwann.

Preparacin de fibras
separadas teidas con
tetrxido de osmio,
mostrando una clara
degeneracin axonal.

En la imagen se muestra un corte


transversal de un nervio
perifrico. Se observan
claramente los axones neuronales.

5.2.

Tincin de Klver-Barrera

Marca de un color los somas neuronales y de otro distinto los axones.


Permite detectar las principales rutas por las que las neuronas se
proyectan a otras reas.
El colorante rojo neutro tie cuerpos en la sustancia gris y el azul de
luxol pone de manifiesto las vas de la sustancia blanca.
Reactivos: Luxol rpido, cido periydico de Schiff y hematoxilina (rojo
neutro).

Esta
preparacin
digital
muestra una
parte de la
corteza del
cerebelo del
mono. Se
pueden
distinguir
distintas capas de l corteza cerebelosa. El tipo de clula ms
representativo son las clulas de Purkinje, que se encuentran de
forma dispersa en la capa ganglionar y pueden ser claramente
reconocidas por su soma de gran tamao.
Otra capa significativa de la corteza es la capa granular, compuesta
por una gran cantidad de clulas pequeas, ncleo redondeado,
localizada entre la capa ganglionar (clulas de Purkinje) y la materia
blanca.

Imagen de una corteza cerebelosa


de un mono con pocos aumentos
teida con la tcnica de Klverbarrera. Se puede distinguir
fcilmente la sustancia blanca y la
sustancia gris.

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6. TINCIONES PARA LA GLA


6.1 Tincin de Cajal con oro sublimado.

Permite identificar los dos tipos de clulas gliales, especialmente los


astrocitos, rebeldes a la tincin con otros mtodos.

La imagen muestra una seccin del cerebro de un paciente con Enfermedad de

Alzheimer, teido con el mtodo de Cajal con oro sublimado. Se observa una baja
densidad en la poblacin neuronal.

Clulas neuroglicas de la sustancia blanca del cerebro


humano (astrocitos). En la imagen inferior tambin se
observan varias neuronas de tamao considerable.

7. TINCIONES PARA REVELAR NEUROTRANSMISORES


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Pueden usarse para medir la actividad cerebral mediante la deteccin de protenas que
se sintetizan cuando las neuronas se activan.
7.1.

7.2.

Fluorescencia inducida por formaldehdo y cido glioxlico.


Permite la visualizacin de monoaminas debido a la unin con el
formaldehdo.
Estimacin semicuantitativa de los terminales y la distribucin de la
densidad de los somas neuronales en los tejidos del SNC.

Inmunocitoqumica
Permite identificar elementos como orgnulos celulares,
neurotransmisores, enzimas, receptores de NT...
La tcnica consiste en crear de forma artificial sustancias qumicas que
reconozcan especficamente al elemento a estudiar (Anticuerpos).

Neurona de rata marcada con fluorescencia. Fotografa


tomada con microscopa lser. Tincin con anticuerpos
contra tubulina en neuronas cultivadas in vitro.

A la derecha, secciones del cerebro del ratn


inmunoteidas con anticuerpo
antineuroglobulina.
A-Corteza. B- Hipocampo y surco dentado.
C- Tallo cerebral D-Cerebelo y clulas de
Purkinje.

A la izquierda, deteccin de tiroxina


hidroxilasa mediante
inmunocitoqumica usando un
anticuerpo primario sin marcar, un
anticuerpo secundario conjugado con
biotina y el complejo avidina-

biotina.peroxidasa.

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REFERENCIAS

Fundamentos de Psicobiologa. Libro de prcticas. Vinader Caerols


C.
Fundamentos de Psicobiologa. Libro de Prcticas 1. Escarbajal
Urrieta. M.D.
Histologa y biologa molecular: introduccin a la anatoma
patolgica. Kierszenbaum.A.
Neuroimagen. Tcnicas y procesos cognitivos. Ros M.
The histological slides and drawings of cajal. Garca Lpez P.,
Garca Marn V. y Freire M. (2010).

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