AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE Campylobacter jejuni DE LA

POBLACIN CANINA QUE HABITA EN LA UNIVERSIDAD POPULAR DEL

CESAR SEDE SABANA Y HURTADO

INTEGRANTES:
SHIRLEY MILENA HERRERA CARVAJAL
SAIRA SAIDETH PIMIENTA DURAN

ASESOR:
PATRICIA HERRERRA

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

FACULTAD DE SALUD
MICROBIOLOGA
2015

INTRODUCCION
El gnero Campylobacter se compone de bacilos Grampositivos, pleomorficos,
curvados en espiral. Son mviles gracias a un flagelo polar, son microaerofilos ya
que toleran pequeas cantidades de oxgeno, y otros son anaerobios, positivos a
oxidasa y no fermentan carbohidratos.
Campylobacter jejuni habita en vas intestinales de animales domsticos y
silvestres, los perros y gatos excretan con frecuencia el microorganismo y se
afirma que puede causar una enteritis febril en estos animales. Tambin produce
abortos en perras y es causa importante de enteritis en el hombre.
Provoca infecciones intestinales usualmente de origen zoontico. El cuadro clnico
se manifiesta por una diarrea aguda, que puede o no ir acompaada de vmitos,
dolor abdominal, dolor de cabeza y malestar general. El perodo de incubacin es
de 1 a 10 das, el cuadro clnico es muy autolimitado y dura entre 2 a 5 das.
Hay estudios que indicaran que Campylobcter es la primera causa de diarrea en
pases

desarrollados,

por

delante

de

otros

patgenos

como Salmonella, Shigella y Escherichia coli.

Desde los aos noventa y a pesar del aumento en las exigencias sanitarias a la
industria de alimentos de Europa Occidental,Estados Unidos, Australia y Nueva
Zelanda los casos de infecciones producidas por Campylobacter lejos de disminuir
han aumentado, sin existir una explicacin para esto. Se destaca el caso
de Dinamarca, en el que entre 1990 y 2000 los casos se triplicaron.

OBJETIVOS
Objetivo general
Aislar e identificar la especie Campylobacter jejuni de la poblacin canina
que habita en la Universidad Popular del Cesar en las sedes Sabanas y
Hurtado

Objetivos especficos
Identificacin de Campylobacter jejuni mediante aislamiento bacteriolgico y
pruebas serolgicas

JUSTIFICACION
La campilobacteriosis es una enfermedad causada por Campylobacter bacteria
que causa enfermedad en animales y humanos, la mayora de casos se relacionan
con manejo e ingesta de alimentos contaminados con dicha bacteria,
predominando aquellos alimentos proveniente de carne de corral cruda o sin
coccin adecuada, esta bacteria termotolerante, reconocen como reservorios
naturales una gran variedad de especies de animales domsticos y silvestres
(Blaser, 1983; Yogasundram y col., 1989; Giacoboni y col., 1993).
Los perros y gatos son portadores y, por su estrecha relacin con el ser humano al
ser utilizados como mascotas, se describen como una fuente probable de
infeccin, por contacto directo con mascotas infectadas, es importante resaltar que
las especies varan de acuerdo al hospedador susceptible a la enfermedad por lo
cual es indispensable el conocimiento de las especies prevalentes, as como la
individualizacin e identificacin de las cepas aisladas ya que estas proveen
informacin epidemiolgica y permite relacionar las fuentes de contagio y el modo
de transmisin. Los mtodos de tipificacin convencionales, basados en las
pruebas bioqumicas, resistencia a varios agentes y tolerancia a diferentes
temperaturas, son pruebas fenotpicas que se utilizan para caracterizar las cepas
aisladas.
En la Universidad Popular del Cesar, sedes Sabanas y Hurtado, existe una
poblacin canina bastante densa, de animales jvenes y adultos, que presentan
adems infecciones respiratorias, digestivas, etc y que podran ser importantes
focos de diseminacin para Campylobacter, ya que estos animales se encuentran
en contacto directo con otros animales susceptibles y con la poblacin estudiantil,
docentes y cuerpo administrativo del claustro acadmico

MATERIALES Y METODOS
DIAGNOSTICO DE LABORATORIO.
Puede realizarse el diagnstico por la demostracin del microorganismo en
examen directo o a travs del cultivo. El uso de los mtodos serolgicos para el

diagnstico tiene valor para la investigacin, ya que en pases en vas de

desarrollo los ttulos en la poblacin suelen ser altos. El examen de las muestras
fecales diarreicas utilizando microscopio de campo oscuro o contraste de fase,
dentro de las 2 horas de evacuacin, puede permitir un diagnstico presuntivo
rpido si se observa la rpida motilidad de las especies de Campylobacter en su
mayora acompaadas por eritrocitos y neutrfilos. Para cultivo y aislamiento a
partir de materia fecal se requiere de una atmsfera microaerfila, medios de
cultivo selectivos para inhibir la flora acompaante, temperatura ptima de
desarrollo (42-43C), aunque pueden desarrollar a 37C, pH ptimo de crecimiento
(6,5-6,9
MUESTRAS. Las muestras de deposiciones pueden ser tomadas con hisopo
rectal o bien por evacuacin espontnea, pudiendo mantenerse a temperatura
ambiente, por algunas horas, evitando su desecacin. La refrigeracin de las
muestras prolonga por varios das la sobrevida del microorganismo. Si es
necesario usar un medio de transporte, debe utilizarse el medio Cary Blair
modificado por la reduccin de la concentracin de agar en un 0,12% (ver
ANEXOS, Medios de Cultivo).
EXAMEN MICROSCOPICO DIRECTO Las muestras de materia fecal pueden ser
examinadas a travs de una tincin simple como Gram utilizando carbolfucsina
como colorante de contraste, o azul de metileno para idenficar leucocitos y formas
bacilares curvas. La observacin en microscopio ptico o de campo oscuro de
bacilos curvos y/o espirilados con gran motilidad en forma circular o de
sacacorchos nos permite un diagnstico presuntivo rpido.
CULTIVO EN MEDIOS SELECTIVOS Las placas se siembran en forma directa
con hisopo o con 2-3 gotas de deposiciones acuosas, se disemina por estra. Se
incuban con una atmsfera microaerfila que tenga 5- 10% de oxgeno y 3 a 10%
de dixido de carbono. Dado que en una diarrea el nmero de Campylobacter es
alto, no es necesario realizar enriquecimiento. Se recomienda solo en caso de
esperar un bajo nmero de microorganismos (manipuladores, convalecientes).
METODO DE FILTRACION PARA LA DETECCION DE CAMPYLOBACTER EN
HECES(*) El mtodo se basa en la separacin de Campylobacter del resto de la
flora microbiana presente en las heces, como por ejemplo los coliformes, que
quedan retenidos en la superficie de una membrana de celulosa de 0,45 o 0,66
m; los bacilos que logran penetrar o transponer la membrana van a depositarse

sobre un medio rico con sangre que actuar como sustrato para el crecimiento del
micoorganismo. De esta manera se obtiene un cultivo selectivo, situacin que
reemplaza a la adicin de antibiticos, para eliminar la flora acompaante.
TEMPERATURA DE INCUBACIN. Las especies termfilas de Campylobacter
crecen mejor a 42-43C que a 37C.
EXAMEN DE LAS PLACAS. El tiempo de incubacin ideal es de 48 horas,
aunque si el caso lo requiere, se pueden examinar a las 18-24 horas. Las colonias
sospechosas pueden observarse planas, no hemolticas de aspecto acuoso,
grisseas, con bordes irregulares y con tendencia a diseminarse. Muchas veces
se pueden ver incoloras. Se les debe realizar una identificacin presuntiva para su
posterior confirmacin y tipificacin.
IDENTIFICACION PRESUNTIVA Tincin de Gram: debido a que este
microorganismo no se tie bien con safranina, se recomienda el uso de
carbolfucsina al 0,8% como coloracin de contraste. Teniendo en cuenta la
morfologa caracterstica, es posible realizar solo la coloracin simple con este
colorante. Catalasa: se debe colocar sobre un portaobjetos limpio una colonia de
un cultivo fresco, agregar una gota de perxido de hidrgeno al 3 %. Una reaccin
positiva se evidencia por la 13 formacin de burbujas producto de la liberacin de
oxigeno a partir de la reduccin del perxido de hidrgeno. Oxidasa: se debe
utilizar un buen inculo que se coloca en un tubo de hemlisis conteniendo 0,2 ml
de agua destilada a la que se le introduce un disco impregnado en la solucin de
oxalato de p-aminodimetilamina. La enzima, citrocromo oxidasa es convertida a su
forma activa por la transferencia de electrones al oxigeno molecular. En presencia
de oxigeno molecular un gran nmero de electrones pueden ser transferidos por el
sistema citocromo oxidasa a una cantidad de compuestos orgnicos, entre ellos a
la paminodimetilamina.Una reaccin positiva se evidencia por el desarrollo de
color rojo. Motilidad: se realiza por microscopa ptica, de contraste de fase o
campo oscuro donde se observa microorganismos espiralados o con forma de S
http://www.cdc.gov/ncidod/dbmd/gss/publications/documents/ArgentinaLevelI/ManualProcedimientos_Campylobacter.pdf

Materiales y metodos