PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATLICA DE CHILE

FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE LABORATORIOS CLNICOS

MICROBIOLOGA
PARA ODONTOLOGA
MED 301 O

2016
ODONTOLOGA
TERCER AO

Nombre
Sigla
Crditos

:
:
:

Microbiologa para Odontologa

MED 301 O
7

Profesor Responsable
Dra. Lorena Isbej Espsito (lisbeje@uc.cl)
Coordinadora
Dra. Natacha Oyarzo P (noyarzo@uc.cl)
Docentes
Dra. Patricia Garca (pgarcia@med.puc.cl )
Dra. Marcela Ferrs (mferres@med.puc.cl )
Dra. Marisa Torres (marisa@med.puc.cl )
Dra. Katia Abarca (katia@med.puc.cl)
Dra. Ana Mara Guzmn (amguzman@med.puc.cl)
Encargado de Pasos Prcticos
TM Juan C. Romn (jroman@med.puc.cl)

I.

DESCRIPCIN GENERAL:

El curso de microbiologa clnica representa la primera instancia en que los

alumnos de Odontologa se enfrentan a conocer y explorar la relacin patgeno hospedero.
Desde el punto de vista de la formacin de los futuros Odontlogos la entrega de los
conocimientos iniciales de bacterias, parsitos, hongos y virus, sus mecanismos
patognicos, opciones de diagnstico y enfrentamiento teraputico se orientarn con el
objetivo de integrar en forma paulatina conocimientos clnicos bsicos que reforzarn y
profundizarn en aos posteriores.
Durante el curso se abordar el estudio de los agentes infecciosos responsables
de las principales causas de morbilidad y mortalidad en el hombre, poniendo especial
nfasis en los aspectos patognicos y la respuesta inmune, junto con el anlisis de los
fundamentos de las medidas de tratamiento, prevencin y control.
El eje central del curso es promover el aprendizaje de la microbiologa con un
sentido prctico y permanente para facilitar su uso en el enfrentamiento de pacientes en los
cursos clnicos de todas las especialidades. Para ello el grupo docente multidisciplinarios
interactuar con los alumnos en modalidad de conferencias, clases, seminarios y pasos
prcticos a lo largo del semestre.
II.

OBJETIVOS
Conocimientos:
Caracterizar a microorganismos
Reconocer e identificar sus estructuras microbianas y relacionarlas con su funcin
Discutir e interpretar el crecimiento de microorganismos
Reconocer los principales grupos de microorganismos patgenos de inters en la
patologa humana de nuestro medio y de la flora normal.
Describir los fundamentos e interpretacin del diagnstico microbiolgico de
bacterias y hongos.
Reconocer los factores de riesgos asociados al trabajo en el laboratorio y las
medidas destinadas a minimizarlos.
Actitudes:
Demostrar hbitos de estudio permanente con orden, eficacia, inters y creatividad
Ser capaz de buscar informacin adicional a los temas que se desarrollan
Participacin activa en los pasos prcticos.
Habilidades y destrezas:
Manipular material de laboratorio y agentes infecciosos, cumpliendo las normas de
bioseguridad establecidas.
Practicar tinciones microbiolgicas bsicas para reconocimiento microscpico de
bacterias y hongos.
Trabajar algoritmos diagnsticos de la identificacin de bacterias Gram positivas y
negativas.
Estudiar, analizar y exponer en forma crtica frente a sus compaeros resultados de
diagnstico microbiolgico y sus casos clnicos.

III.

PASOS PRCTICOS

Procedimientos Bsicos
Flora normal
Identificacin y susceptibilidad de bacterias (Gram +) y (Gram -)
Levaduras y Hongos filamentosos

IV.
EVALUACIONES DEL TRABAJO PRACTICO
En cada sesin de laboratorio se realizar un control.
La asistencia a stos ser obligatoria (100%).
En caso de enfermedad, se les exigir un certificado extendido por el Servicio Mdico de
los Alumnos de la P. Universidad Catlica.

V.

BIBLIOGRAFA MNIMA

1. Murray Patrick R., Rosenthal Ken S.,Pfaller Michael A. ,Medical Microbiology, 6 Ed.
2009. ISBN: 9780323054706
2. Marsh Philip D, Martin Michael V.Oral Microbiology, 5 Ed. 2009,Churchill
Livingstone Elsevier. ISBN 9780443101441
3. Abarca, Garca y Vial
Microbiologa Clnica
Ediciones Universidad Catlica de Chile, 2001

TRABAJO PRCTICO N1
PROCEDIMIENTOS BSICOS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
OBJETIVOS:
1. Reconocer y aplicar las medidas de bioseguridad en un laboratorio de microbiologa.
2. Identificar el material bsico usado en un laboratorio de microbiologa y reconocer los
medios de cultivo y sus utilidades.
3. Observar los mtodos de siembra ms utilizados en el laboratorio de Microbiologa
4. Observar y describir las caractersticas macroscpicas de las colonias desarrolladas en
los distintos medios de cultivo.
5. Observar y reconocer las distintas etapas y los fundamentos de la tincin de Gram
6. Realizar la observacin microscpica de frotis teidos:
Utilizacin correcta del microscopio de luz
Distinguir morfologa (cocceas y bacilos, Gram positivos y negativos) y
agrupacin (cadenas, racimos, diplococos).
MARCO TERICO
1. ROL DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
El rol del laboratorio de microbiologa es la identificacin del agente causal de la infeccin
a partir de una muestra clnica.
Para lograr este objetivo se debe realizar:
Etapa
1
2

3
4
5

Proceso
Examen microscpico de la muestra
(tincin de Gram)
Siembra de la muestra en medios de
cultivos, seleccionando los medios de
cultivo adecuados segn el microorganismo
que se sospeche y el origen de la muestra
Incubacin de los medios de cultivos
sembrados a 37C por 16 a 24 horas
Diagnstico microscpico de las colonias
con tinciones y diagnstico macroscpico
de las colonias
Pruebas bioqumicas y estudio de
sensibilidad (antibiograma) a partir de las
colonias desarrolladas en el cultivo.

Finalidad
Otorga una orientacin rpida
del microorganismo
Entrega de nutrientes para que
los microorganismos presentes
en la muestra puedan
desarrollarse
Obtener desarrollo de colonias
bacterianas
Permite una orientacin para
la identificacin bacteriana
En otras 16-24 horas se leen
los resultados de estas pruebas
llegndose a la identificacin
y susceptibilidad del
microorganismo

2. SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA

Para trabajar correctamente en el laboratorio de microbiologa es necesario conocer los
riesgos a los que se est expuesto. Para minimizar y controlar estos riesgos deben
observarse estrictas medidas de seguridad, tanto para proteger al operador como para
evitar la contaminacin de las muestras clnicas y cultivos.

BIOSEGURIDAD:
Se define bioseguridad como un conjunto de medidas preventivas destinadas a proteger la
salud de las personas que trabajan en el laboratorio frente a riesgos por agentes biolgicos,
fsicos o qumicos, as como tambin la proteccin indirecta del ambiente.
Situaciones de Riesgo
Riesgo por agentes biolgicos

Riesgo por agentes qumicos

Riesgo por agentes fsicos

Descripcin
El riesgo de infeccin por microorganismos se
produce por inhalacin, ingestin o contacto directo a
travs de la piel, mucosas erosionadas y/o sanas y a
travs de la conjuntiva
Se produce por ingestin, inhalacin y/o contacto con
la piel, tejidos, mucosas o conjuntiva, de sustancias
txicas, irritantes, corrosivas y/o nocivas.
Se est expuesto cuando se manipulan gases o
sustancias radioactivas, radiaciones ionizantes y no
ionizantes, exposicin a ruidos, vibraciones, fuego y
electricidad

El Riesgo por agentes biolgicos se clasifica segn el tipo de microorganismo o agente.

Clasificacin del Riesgo segn el agente infeccioso:
Nivel de Riesgo
Tipo de agente
I
Agentes de bajo riesgo para
individuo y para la comunidad.
II
Agentes de moderado riesgo para
individuo y bajo para la comunidad
III
Agentes de alto riesgo para
individuo y bajo para la comunidad
IV
Agentes de alto riesgo para
individuo y alto para la comunidad

Ejemplo
el Gnero
Corynebacterium
(excepto C.diphtheriae )
el Gnero Staphyloccocus
el Familia Mycobacteriaceae
el Virus bola

Del mismo modo, para protegerse existen niveles de Bioseguridad segn la Clasificacin
del Riesgo
Niveles de Bioseguridad segn clasificacin del riesgo:
Nivel
de Descripcin
Bioseguridad
Nivel 1
Nivel bsico de contencin basado en prcticas microbiolgicas
corrientes como Lavado de manos, uso de delantal, etc
Nivel 2
Acceso limitado, delantal, descontaminacin material, seales de riesgo,
gafas, delimitacin de reas, trabajo en gabinete slo si hay generacin
de aerosoles
Nivel 3
Todas las manipulaciones de laboratorio se llevan a cabo en un gabinete
de bioseguridad u otros equipos cerrados, presin negativa. Personal
altamente entrenado
Nivel 4
Son aplicables al trabajo con agentes peligrosos o txicos que representan
un alto riesgo individual y comunitario. Trajes especiales, edificio
aparte, ducha de salida, etc.
6

MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN UN LABORATORIO DOCENTE:

Medidas
Uso obligado de delantal
mnimas
Pelo largo tomado.
Delimitacin de reas: no colocar bolsos y ropa en los mesones.
No comer, fumar ni beber en el laboratorio.
No pipetear con la boca.
Uso cuidadoso de los mecheros.
Precauciones
estndar

Medidas destinadas a proteger al personal de salud en la prctica clnica y de

laboratorio, de la exposicin a productos biolgicos contaminados (sangre u
otros fluidos corporales como secrecin es o lquidos biolgicos, fisiolgicos o
patolgicos que se producen en el organismo)
Se aplican:
1. En la atencin directa de todos los pacientes (independiente del
diagnstico).
2. Cuando se manipule muestra biolgicas de pacientes
Las Precauciones estndar consisten en:
a) Higiene de manos (lavado de manos o uso de alcohol gel)
b) Equipo de proteccin personal
a)1. Lavado de manos
Las manos y otras superficies de la piel, se deben lavar lo ms pronto posible si
se contaminan con sangre y/o fluidos corporales.
El uso de guantes no excluye ni reemplaza el lavado de manos.
Las manos deben lavarse:
- Siempre que exista contaminacin visible con sangre o lquidos biolgicos.
- Despus de completar el trabajo y antes de abandonar el laboratorio.
- Despus de sacarse los guantes.
- Antes de cualquier otra actividad en la cual exista contacto con membranas
mucosas, ojos, piel con lesiones.
Tcnica de lavado de manos:
- Duracin mnima: 15-30 segundos para ser efectivo.
- Abra la llave del agua y mantenga el agua corriendo.
- Moje bien manos y muecas y aplique jabn o antisptico.
- Lave bien en espacios interdigitales, friccione dedos y uas.
- Frtese las muecas.
- Enjuague bajo el chorro desde la punta de los dedos.
- Squese con toalla de papel.
- Cierre llave con toalla de papel.
a) 2. Alcohol Gel:
Es un producto destinado a disminuir la carga bacteriana en las manos.
Se recomienda su uso cuando no hay disponibilidad de lavamanos, sin
embargo es efectivo slo si no hay suciedad visible o talco en las manos
b) Equipos de Proteccin personal
Delantal
Uso obligatorio del delantal abotonado.
No se puede ingresar al rea del laboratorio sin delantal
Pechera
7

Pechera plstica desechable que slo debe utilizarse en el rea de trabajo y

que deber eliminarse al final de la jornada.
Guantes:
Se deben utilizar guantes en la manipulacin de cualquier muestra clnica
o donde exista posibilidad de exposicin a sangre, suero o fluidos corporales.
No se puede contestar el telfono con los guantes puestos.
Forma correcta de ponerse los guantes:

Forma correcta de sacarse los guantes

Lentes de proteccin ocular:

Se deben utilizar, durante el manejo y procesamiento de cualquier muestra
clnica ya sea sangre u otro fluido corporal.
Eliminacin
de desechos

Existe 3 tipos de desechos que deben ser eliminados por separado

1.Desechos comunes: se eliminan en papeleros plsticos convencionales con
bolsas de basura negra
2.Desechos contaminados ( con muestras de pacientes o microorganismos) se
eliminan en la caja de cortopunzante-contaminado
3.Desechos cortopunzantes se eliminan en la caja de cortopunzante-contaminado
Conducta
Con sangre o material biolgico o con material contaminado con
frente
a microorganismos que se transmiten por contacto con piel no indemne.
derrames
Se debe proceder de la siguiente forma:
1. Avisar a su tutor o ayudante en forma inmediata
2. En caso que la piel o mucosas tomen contacto con material
contaminado, se debe lavar profusamente con agua y jabn en el caso de la
piel y slo con agua en el caso de mucosas.
3. En el caso de derrame es superficies:
Avisar a sus compaeros ms cercanos que se alejen del lugar.
Cubrir la superficie con toalla nova y agregar abundante hipoclorito de
sodio al 0.5%
Dejar reposar 10-15 minutos
Si hay vidrios, recoger el derrame con pala o cartn para evitar cortarse
Limpiar la superficie con hipoclorito de sodio al 0.5%
Eliminar en caja de cortopunzantes, si hay vidrios y si no en los desechos
contaminados
Quitarse los guantes y lavarse las manos

3. TECNICA ASEPTICA, CONTROL DE LA CONTAMINACIN Y SIEMBRA

MICROBIOLOGICA
Se debe evitar la contaminacin de las muestras, ya sea desde el operador como desde otras
muestras procesadas sucesivamente (contaminacin cruzada). Para ello, es necesario que el
operador trabaje con tcnica asptica y que el material utilizado sea estril.
Tcnica asptica:
Dado que los medios de cultivo estn diseados para favorecer el crecimiento microbiano,
las bacterias y los hongos del ambiente o provenientes de los materiales, manos y faringe
del operador, depositados sobre el medio crecern y contaminarn los cultivos.
Por lo tanto los medios de cultivo se esterilizan antes de su uso y se manipulan con tcnica
asptica, segn como se muestra en la figura siguiente.

Tcnicas de siembra microbiolgica:

El objetivo de la siembra microbiolgica es obtener desarrollo de colonias aisladas para
poder lograr la identificacin de las bacterias.
Existen distintos tipos de siembras, las ms usadas son la siembra en cuadrantes y la
siembra cuantitativa.
a) Siembra en cuadrantes:
Pretende obtener colonias aisladas, para lo cual en la primera parte del cuadrante (1), se
siembra la muestra directamente (trula con la que se obtiene la muestra). Para diseminar
en la segunda zona (2), se esteriliza por incineracin (mechero) una pipeta Pasteur, que se
enfra y se arrastra muestra desde la zona 1 a la 2. Se esteriliza nuevamente el asa, se enfra
y se disemina en la zona 3 de igual forma. Por ltimo en la zona 4 se realiza una
diseminacin en estra (ver siguiente figura).

Este mtodo permite obtener una estimacin semicuantitativa de la cantidad de bacterias

presentes en la muestra, segn la siguiente tabla:

Presencia de bacterias en el cuadrante

1
2
3
4

Estimacin semicuantitativa
Muy escaso
Escaso
Regular
Abundante

b) Siembra cuantitativa:
El objetivo de este tipo de siembra es cuantificar el nmero de bacterias presentes en la
muestra, para lo cual se debe sembrar una cantidad conocida y exacta de muestra. En el
caso de una muestra de orina, se siembra con un asa calibrada de 1 microlitro (0.001 ml) en
la zona 1 de inoculacin primaria. Posteriormente se disemina con estras perpendiculares a
la inoculacin primaria (2). Se incuba, se realiza el recuento de colonias, se multiplica por
1000 y se informa en Unidades Formadoras de Colonias (ufc) por ml. de muestra.

4. MEDIOS DE CULTIVO Y MATERIAL UTILIZADO EN EL LABORATORIO

DE MICROBIOLOGIA
Medios de cultivo
Consisten en mezclas heterogneas de elementos nutrientes de distinta naturaleza que
utilizan los microorganismos para su crecimiento.
Se utilizan en el laboratorio para aislar e identificar microorganismos y se clasifican segn
el estado fsico, su presentacin, el contenido de nutrientes y segn su utilidad.
Clasificacin de los Medios de Cultivo
Estado
Fsico

Slido
Lquido

Semislido
Presentacin En placa

permite visualizar las caractersticas macroscpicas de la(s)

colonia(s) y cuantificar su desarrollo
son de mayor sensibilidad en el desarrollo de los
microorganismos, sin embargo se contaminan con mayor
frecuencia.
permiten observar la movilidad de algunos microorganismos
Se usa slo para medios slidos. Su principal utilidad est en el
aislamiento primario, es decir, la siembra de la muestra con
obtencin de colonias separadas (aisladas) para su posterior
identificacin y sensibilidad.
10

Contenido
de
nutrientes

Utilidad

En tubo
Corrientes
Mejorados

Para
aislamiento
primario

Para
realizar
pruebas
bioquimicas

Puede contener medio lquido, slido o semi-slido

son los medios ms simples disponibles. Consisten en agar
corriente, gelatina o caldo corriente.
Consisten en un medio corriente al que se le adiciona algn
nutriente como sangre con o sin calentamiento (agar sangre,
agar chocolate), hidratos de carbono, con extracto de levadura
u otros factores de enriquecimiento especficos.
Se utilizan para la siembra directa de muestras clnicas. Entre
ellos tenemos: medios selectivos, diferenciales y
selectivos/diferenciales.
Medios selectivos: contienen agentes inhibidores (antibiticos,
colorantes, ciertos pH) y enriquecedores (nutrientes
especficos) que permiten seleccionar un microorganismo
particular.
Ejemplos: Agar Thayer Martin: favorece el desarrollo de
Neisseria e inhibe otras bacterias; agar Sabouraud: favorece el
desarrollo de hongos e inhibe bacterias.
Medios diferenciales: permiten la diferenciacin entre
bacterias porque revelan caractersticas metablicas especficas
de ellas.
Ejemplo: agar sangre de cordero al 5%, evidencia la presencia
de hemolisinas a travs de la observacin de la hemlisis (ver
tabla anexa).
Medios selectivos/diferenciales: consisten en una mezcla de
los dos medios anteriormente descritos. Ejemplos: agar Mac
Conkey: favorece el desarrollo de Gram negativos e inhibe a
los Gram positivos por sales biliares y cristal violeta, adems
diferencia a las bacterias que fermentan la lactosa mediante un
indicador de pH (rojo neutro).
Esto permite la identificacin de bacterias segn los diferentes
sustratos utilizados para su crecimiento y respiracin.

Medios deferenciales: Agar sangre

Tipo de hemolisis Aspecto
Significado
Ejemplo
Alfa hemolisis
Halo de color verde Hemlisis parcial Streptococcus
alrededor de la colonia de los glbulos pneumoniae
rojos
Beta hemolisis
Halo
de
color Hemlisis
Streptococcus
transparente alrededor completade
los pyogenes
de la colonia
glbulos rojos
Gama hemolisis
Sin halo
No hay hemlisis Entercoccus
de los glbulos
rojos

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Medio Selectivo Diferencial: Agar Mc Conkey

Medio de cultivo
Agar Mc Conkey
Agar Mc Conkey

5. MORFOLOGIA
macroscpico)

Color de la Interpretacin
colonia
Rojo/rosado
Colonia lactosa (+)
Fermenta lactosa
Transparente
Colonia lactosa (-)
(color
del No
fermenta
medio)
lactosa
MACROSCOPICA

DE

LAS

Ejemplo
Escherichia coli
Pseudomonas
aeruginosa

COLONIAS

(Diagnstico

Permite un acercamiento en la identificacin de los gneros bacterianos, que poseen

caractersticas propias de desarrollo de sus colonias, segn su forma, elevacin, margen y
color de la colonia.
La orientacin sobre las pruebas bioqumicas para la identificacin definitiva depende en
gran parte del aspecto macroscpico de las colonias.
6. TINCIONES:
La observacin microscpica de una bacteria sobre un portaobjetos requiere el uso de
tinciones que se basan en ciertas caractersticas estructurales de los agentes, de las cuales la
ms importante es la tincin de Gram..
Tinciones de uso en el diagnstico de agentes bacterianos:
TINCION

REACTIVOS

PRINCIPIO

UTILIDAD

Gram

Cristal violeta, lugol,

acetona, safranina

Gram positivos retienen cristal

violeta (azul), Gram negativos
se tien con contraste (rojo)
Unin cido-alcohol resistente
de fucsina a cidos miclicos de
pared (fucsia)

Clasificacin bacteriana
clsica: Gram (+) y (-)

Ziehl Neelsen Fucsina, alcoholcido, azul de

metileno

Micobacterias y bacilos
cido-alcohol resistentes
(BAAR)

12

1. Tincin de Gram:
Esta tincin es la ms importante en microbiologa pues permite diferenciar a las bacterias
en dos grandes grupos: Gram (+) y Gram (-).
Se cubre el frotis seco con cristal violeta y se
deja 1 minuto
Se tie todo prpura

Se lava el frotis con agua y se agrega solucin de

lugol. Se deja por minuto.

El cristal violeta es un colorante que

penetra la pared celular de bacterias Gram
(+) y (-).

El yodo es un mordiente que forma un

complejo con el cristal violeta.

Persiste todo prpura

Se decolora con alcohol-acetona. Se lava

con agua
Cocceas Gram (+) = violeta
Bacilos Gram (-) = decolorados

Se agrega safranina al 1% por 1 minuto. Se lava,

se deja secar y se observa al microscopio con
objetivo de inmersin.
Cocceas Gram (+) = violeta
Bacilos Gram (-)
= rojo

En la decoloracin con alcohol-acetona, la

gruesa pared de los Gram (+) impide la
salida del cristal violeta.
Por el alto contenido lipdico de la pared de
los Gram (-), el alcohol-acetona genera poros
por donde escapa el cristal violeta, la
bacteria se decolora y se tie de color rojo
con el colorante de contraste (safranina).

7. OBSERVACION MICROSCOPICA
Uso correcto del microscopio de luz (aceite de inmersin):
Para observar las bacterias con tincin de Gram y Tincin de Ziehl Neelsen, es necesario
utilizar el objetivo de inmersin (100x).
Para ello una vez realizado el extendido y la tincin se debe:
1. Colocar la preparacin sobre la platina del microscopio
2. Verificar que el condensador est arriba y el diafragma abierto, ya que el objetivo de
inmersin requiere mucha ms luz que los objetivos secos.
3. Enfocar primero con el objetivo 40x (seco), eligiendo la zona de inters.
4. Colocar el revlver a mitad de camino, entre el objetivo 40x y el de inmersin (100x,
lnea negra) (figura A) evitando cualquier contacto de los objetivos secos con el
aceite de inmersin.
5. Colocar una gota de aceite de inmersin sobre la preparacin
6. Cuidadosamente colocar el objetivo 100x en contacto con el aceite (figura B), el
objetivo deber estar prcticamente tocando el portaobjetos, y el aceite deber ocupar
este pequeo espacio (figura C)
7. Observe con los oculares, y ajuste el foco utilizando slo el micromtrico
8. Una vez terminada la observacin microscpica, limpiar cuidadosamente el objetivo,
retirando el aceite con un papel tissue.
13

Observacin microscpica
1. Tincin de Gram:
Revela la afinidad tintorial de las bacterias:
- Gram positivo
- Gram negativo
Permite conocer la forma bacteriana:
- Cocceas
- Bacilos
- Cocobacilos
- Vibrios
- Espirilos
- Espiroquetas
Permite conocer la disposicin bacteriana:Cocceas en diplo: diplococos
Cocceas en cadena: Streptococcus
Cocceas en ttrada: Micrococcus
Cocceas en octgena: Sarcina
Cocceas en racimo: Staphylococcus

Utilidad clnica de la tincin de Gram:

Este examen permite al clnico sospechar el agente causal de la infeccin, que muchas
veces sirve de base para el inicio de terapia antibitica.
La sensibilidad analtica (nmero mnimo de bacterias que la tcnica puede detectar) es de
100.000 bacterias /ml de muestra.
La sensibilidad clnica (probabilidad que un paciente que tenga una infeccin tenga un test
positivo) vara segn tipo de muestra
Se debe solicitar en toda muestra clnica
De gran importancia en infecciones mixtas por bacterias aerbicas y anaerbicas, pues si
bien los anaerobios no crecen en los medios habituales, s se observan en la tincin de
Gram.
14

2.Tincin de Ziehl Neelsen:

Es de gran importancia en microbiologa ya que permite evidenciar la presencia de bacilos
cido-alcohol resistente como el Mycobacterium tuberculosis, agente causal de la
tuberculosis, enfermedad infecciosa muy importante en nuestro pas
Tambin se utiliza para el estudio de Cryptosporidium en muestras de deposiciones.
Fundamento:
La fucsina que es un colorante bsico forma un complejo con los cidos miclicos de la
pared de las micobacterias. Este complejo es resistente a la decoloracin con alcohol-cido
(alcohol clorhdrico) permaneciendo de color fucsia a diferencia de las otras bacterias que
se decoloran. El azul de metileno se usa como tincin de contraste.
Tcnica:
1.- Se cubre el frotis con fucsina concentrada de Ziehl Neelsen.
2.- Se calienta el frotis hasta que emita vapores (2 a 3 minutos).
3.- Se decolora escurriendo alcohol-cido.
4.- Se tie de contraste con azul de metileno por 30 segundos.
5.- Dejar secar y leer con objetivo de inmersin (100x)
Utilidad clnica:
Permite identificar micobacterias presentes en una muestra.
En Chile, la presencia de bacilos cido-alcohol resistente en muestras diferentes de orina es
altamente sugerente de tuberculosis.
La cantidad mnima de bacilos que es capaz de detectar (sensibilidad analtica) vara entre
5.000 a 10.000 bacilos / ml de muestra.
Se debe solicitar en toda muestra clnica cuando se sospecha tuberculosis ya que es un
examen rpido, sencillo y de bajo costo que adems de confirmar un diagnstico permite
conocer los casos infecciosos.
ACTIVIDADES PRCTICAS DE LOS PROCEDIMIENTOS BSICOS
Este paso prctico se desarrollar con 6 estaciones que le permitirn:
1. Reconocer y aplicar las medidas de bioseguridad en un laboratorio de microbiologa.
2. Identificar el material bsico usado en un laboratorio de microbiologa y reconocer los
medios de cultivo y sus utilidades.
3. Observar los mtodos de siembra ms utilizados en el laboratorio de Microbiologa
4. Observar y describir las caractersticas macroscpicas de las colonias desarrolladas en
los distintos medios de cultivo.
5. Observar y reconocer las distintas etapas y los fundamentos de la tincin de Gram
6. Realizar la observacin microscpica de frotis teidos:
Utilizacin correcta del microscopio de luz
Distinguir morfologa (cocceas y bacilos, Gram positivos y negativos) y
agrupacin (cadenas, racimos, diplococos).
Aplique
en
todo
momento
las
mnimas
de
trabajo en el laboratorio, segn lo explicitado en este manual.

bioseguridad

para

el

15

ESTACIN 1: 10 minutos
MATERIAL DE LABORATORIO
Observe, identifique y registre el material usado en el laboratorio de microbiologa y su
utilidad.
Material
Observacin Utilidad
Torula con medio de trasporte
Frasco estril de boca ancha
Frascos de hemocultivos
Asa Calibradas
Pipetas pasteur
Portaobjetos, cubreobjetos
Batera para tincin de gran
Microscopio y aceite de inmersin
Tubo con medio de cultivo lquido
Placa con medio Agar sangre
Placa con medio Agar chocolate
Placa con medio Agar Mc Conkey
Placa con medio Agar Mueller Hinton
ESTACION 2: 20 minutos
SIEMBRA MICROBIOLOGICA DE MUESTRAS CLINICAS
1. Observe cmo el ayudante realiza los tipos de siembra ms frecuentemente usados:
a) Siembra en cuadrantes desde una muestra clnica de herida operatoria obtenida el
trula con medio de trasporte a los medios slidos ms frecuentemente utilizados.
b) Siembra cuantitativa desde una muestra de orina a los medios ms frecuentemente
utilizados
2. Siembra de sitios anatmicos con flora normal:
Tome una trula de algodn estril, humedzcala ligeramente en agua estril
(escurra exceso de lquido contra pared del tubo).
La eleccin del sitio anatmico depender del grupo en que se encuentre:

16

Grupo
Grupo 1
Grupo 2
Grupo 3
Grupo 4
Grupo 5
Grupo 6
Grupo 7
Grupo 8
Grupo 9
Grupo 10
Grupo 11
Grupo 12

Sitio anatmico de donde se obtiene la muestra

Tabique nasal,
Surco retroauricular,
Surco gingivodentario
Cuero cabelludo
Faringe
Manos.
Tabique nasal,
Surco retroauricular,
Surco gingivodentario
Cuero cabelludo
Faringe
Manos.

Siembre en placa de agar sangre con tcnica de aislamiento en cuadrante.

Rotule las placas con nombre, N de grupo y sitio anatmico.
Coloque su placa en la estufa en la caja rotulada con el sitio anatmico
Incubar a 37C x 24 hrs.
Recuerde que siempre se debe rotular adecuadamente placas y tubos. Las placas se
rotulan en la base donde est el medio de cultivo (nunca en la tapa) y se dejan con la
tapa hacia abajo y el agar hacia arriba.
ESTACION 3: 10 minutos
OBSERVACION MACROSCOPICA DE COLONIAS
Renase en grupos de a 2.
En el mesn encontrara un set de 5 placas en donde debe observar:
N
placa
1

Medio de cultivo

Observacin

Agar sangre

Alfa hemolisis

Agar sangre

Beta hemolisis

Agar sangre

Gamma hemolisis

Agar Mc Conkey

Colonia lactosa (+)

Agar Mc Conkey

Colonia lactosa (-)

Ejemplo de microorganismo

ESTACION 4: 10 minutos
TINCION DE GRAM
Observe cmo el ayudante realiza un extendido y cmo realiza la tincin de gran

17

ESTACIN 5: 10 minutos
OBSERVACION MICROSCPICA DE BACTERIAS GRAM (+) Y GRAM (-)
Esta estacin consta de 2 mesones, que requiere que el grupo se separe en 2 subgrupos de 5
alumnos.
Cada mesn dispondr de microscopios, c/u con una lminas ya enfocada, con el mismo
microorganismo (basta slo con observar un microscopio por mesn)
A los 5 minutos de observacin deber cambiar de meson.
Mesn Afinidad tintorial

Forma

Disposicin

Ejemplo de microorganismo

5
6

18

TRABAJO PRCTICO N2
FLORA NORMAL (MICROBIOTA)
OBJETIVOS:
1. Reconocer la importancia de la flora normal en salud y enfermedad
2. Reconocer la presencia de flora en los distintos sitios anatmicos
3. Relacionar cantidad y diversidad de la flora segn el sitio anatmico
MARCO TEORICO:
El cuerpo humano contiene normalmente miles de especies bacterianas y un nmero menor
de virus, hongos y protozoos.
La gran mayora son comensales, es decir conviven sin causarnos dao.
Se define flora normal a aquellos microorganismos que se hallan con frecuencia en el
cuerpo de las personas sanas sin provocarle enfermedad.
Las zonas del cuerpo colonizadas por flora normal son:
Piel: especialmente en reas hmedas (pliegues interdigitales, axila, ingle).
Vas areas: nariz y orofaringe.
Aparato digestivo: boca e intestino grueso.
Vas urinarias: uretra anterior.
Aparato genital: vagina.
Estas bacterias residen y proliferan en estos sitios siendo el nmero de microorganismos
ampliamente variable.
En los surcos gingivales de la boca y en la vagina existe una gran poblacin microbiana (1
a 10 millones de bacterias/ml de lquido o gramo de material raspado).
En las heces normales, 1/3 de su peso seco corresponde a bacterias (10:1 de
anaerobios:aerobios). Algunos ejemplos se observan en la siguiente tabla.
Zona
Piel
Faringe
Boca
Intestino
grueso

Gram positivos
Cocaceas
Bacilos
Staphylococcus Corynebacterium
Propionibacterium
acnes
Streptococcus
Corynebacterium,
alfa hemolitico
Staphylococcus
Streptococcus
alfa hemoliticos
Enterococcus

Corynebacterium,
Actinomyces
Clostridium

Gram negativos
Cocaceas
Bacilos

Neisseria

Haemophilus

Neisseria

Bacteroides
Eikenella,
kingella
Enterobacterias
Bacteroides
Pseudomonas

Tambin existen sitios anatmicos y rganos que son normalmente estriles en donde la
presencia de microorganismos se considera infeccin: sangre, lquido cefalorraqudeo
(LCR), lquidos de cavidades estriles (sinovial pleural, peritoneal, pericrdico) y los
tejidos profundos en general.

19

Normalmente existe un equilibrio entre los microorganismos de la flora y el hospedero; sin

embargo este equilibrio puede romperse por:
Aumento de la masa crtica bacteriana.
Traslado de bacterias desde el sitio original a zonas normalmente estriles.
Ruptura de barreras mecnicas por traumatismos.
Esto produce una proliferacin e invasin de los microorganismos dando origen a una
infeccin endgena.
Por lo general se requieren algunos determinantes para que se produzcan estas
enfermedades:
Disminucin del estado inmunitario del hospedero.
Tratamiento inmunosupresor o con corticoides.
Cirugas.
Uso de antibiticos.
Como ejemplos de infeccin endgena se pueden mencionar:
Infeccin urinaria por enterobacterias.
Endocarditis bacteriana por microorganismos de la boca (Streptococcus viridans).
Diarrea por antibiticos con sobreinfeccin por Clostridiun difficile.
Importancia de la flora normal:
La flora normal desempea un papel importante en la salud y en la enfermedad.
1. Estimulacin inmune: la presencia de microorganismos estimula la produccin de
anticuerpos (inmunoglobulinas). Estos anticuerpos, incluso a bajas concentraciones sirven
como un mecanismo de defensa. Entre los anticuerpos provocados por la estimulacin
bacteriana se encuentran los de clase Ig A, que son secretados a travs de las mucosas. Se
cree que ellos interfieren, posiblemente en forma diaria, en la colonizacin de los tejidos
profundos por los microorganismos comensales.
A veces, estos anticuerpos provocados por la estimulacin antignica de la flora presentan
reacciones cruzadas con los microorganismos patgenos.
Por ejemplo, anticuerpos elaborados contra bacterias de la flora intestinal presentan
reactividad cruzada con la cpsula de lipopolisacridos de las cepas de Neisseria
meningitidis productoras de meningitis.
2. Exclusin de invasores: las bacterias de la flora pueden evitar la colonizacin de
patgenos ya que ocupan receptores de las superficies epiteliales, producen sustancias
inhibitorias como antibiticos o protenas llamadas bacteriocinas.
Cuando la biota normal es eliminada con antibiticos, puede haber sobrecrecimiento de
microorganismos que causan enfermedades. Ejemplo: Diarrea asociada a antibiticos por
Clostridiun difficile. Este es capaz de producir toxinas que causan un cuadro diarreico grave
conocido como colitis pseudomembranosa.
3. Papel en la nutricin y metabolismo humano: algunas especies bacterianas como E.
coli y Bacteroides sintetizan vitamina K, constituyendo una fuente importante de esta
vitamina. Adems sintetizan enzimas capaces de desconjugar sales biliares y hormonas
sexuales, favoreciendo su reabsorcin en el circuito enteroheptico.

20

ACTIVIDADES PRCTICAS SOBRE FLORA NORMAL

ORGANIZACIN DEL TRABAJO PRACTICO
Esta actividad se desarrollara en 6 mesones, por lo que el curso debe dividirse en 10
alumnos por mesn.
Cada mesn corresponde a alumnos que hayan sembrado un mismo tipo de muestra.
En el mesn encontrar sus placas sembradas en el paso prctico anterior.
EJECUCIN DEL TRABAJO PRACTICO
1. Observe las distintas colonias presentes en la placa de agar sangre, escoja 1 de ellas,
descrbala macroscpicamente y realice tincin de gram.
2. Comente con sus compaeros del mesn si los hallazgo en cuanto a tincin de gran
y cantidad son similares, segn la siguiente tabla.
Sitio anatmico de
donde se obtuvo la
muestra

Cantidad relativa de
bacterias en la placa
de agar sangre *

Numero de tipos
distintos de colonias

Resultado de la
tincin de gram de
una de ellas**

*Ver Interpretacin de siembra en cuadrantes

** Recuerde describir afinidad tintorial, forma y disposicin
.
3. Resuma los hallazgos encontrados en su grupo y prepare una presentacin de 5
minutos al resto del laboratorio que debe ser realizada por un representante del
grupo.
4. Correlacione los hallazgos con el marco terico entregado en esta gua

21

TRABAJO PRCTICO N3
IDENTIFICACIN DE COCACEAS GRAM POSITIVAS Y BACILOS GRAM
NEGATIVOS Y ESTUDIOS DE SUSCEPTIBILIDAD
OBJETIVOS:
1. Conocer y practicar el procesamiento microbiolgico de las cocceas Gram
positivas y bacilos Gram negativos aislados a partir de muestras clnicas.
2. Reconocer algunas muestras clnicas que se reciben en el laboratorio para anlisis.
3. Reconocer la morfologa macroscpica de las colonias desarrolladas en los medios
de cultivos.
4. Interpretar la tincin de Gram y correlacionarla con la identificacin bacteriana.
5. Realizar la lectura e interpretacin del estudio de sensibilidad a los antimicrobianos
de bacterias Gram (+)
6. Conocer algunos cuadros clnicos relevantes causados por microorganismos Gram
(+) y Gram (-) y los resultados del laboratorio de microbiologa
MARCO TERICO
1.Pruebas bioqumicas para identificacin de cocceas gram (+)
Disposicin
de las
CG(+)
Cadena

Gnero
Streptococcus

Enteroccus
Racimo

Staphylococcus

Caracterstica
macroscpica

Prueba
bioqumica

Resultado
positivo

Alfa
hemoltico
Beta
hemoltico
Gama
hemoltico

Prueba de
optoqun
bacitracina

S pneumoniae

S viridans

S pyogenes

Agar Bilis
Esculina
NaCl 6,5%
Coagulasa

Enterococccus

Otros
Streptococcus
Otra

Colonia
blancoamarillenta

Staphylococus
aureus

Resultado
negativo

Staphylococcus
coagulasa
negativo

2. Pruebas bioqumicas para identificacin de bacilos gram (-)

Tincin de
Gram
Bacilos
Gram (-)

Familia o grupo
Enterobacteria

Caracterstica
macroscpica
Lactosa (+)

Prueba
bioqumica
Oxidasa (-)

No fermentadores

Lactosa (-)

Oxidasa (+)

Pruebas
adicionales
API
Vitek
Espectrometra
de masas
API
Vitek
Espectrometra
de masas

22

Coagulasa:
Busca la presencia de la enzima coagulasa producida por Staphylococcus aureus.
Diferencia Staphylococcus aureus de otros Staphylococcus coagulasa negativo.
Se realiza en tubo con plasma de conejo y se agrega la cepa en estudio. Se incuba por 16
horas.
Si hay coagulacin: Staphylococcus aureus
Bacitracina:
En una placa de agar sangre, se siembra en estudio en toda la placa. Luego se deposita un
disco de bacitracina y se incuba la placa a 35C por 16 horas.
Cualquier halo de inhibicin indica positividad y corresponde a Streptococcus pyogenes
Agar Bilis Esculina y Cloruro de sodio al 6,5%
En la superficie de un tubo semitendido con agar bilis y esculina se siembra una estra de
la cepa en estudio. Se incuba la placa a 35C por 16 horas y si hay desarrollo de
coloracin negra en el medio, indica positividad.
En un tubo con medio de cultivo liquido mas cloruro de sodio al 6,5% se inocula la colinia
en estudio. Se incuba a 35C por 16 horas y si hay desarrollo (turbidez) en el medio,
indica positividad.
Ambas pruebas positivas permiten identificar a la bacteria como perteneciente al gnero
Enterococcus
Oxidasa:
Busca la presencia de la enzima oxidasa, para los cual se pueden utilizar palitos o tiras en
donde se coloca la colonia sospechosa.
Si hay presencia de la enzima aparece un color morado. Es negativa para
Enterobacteriaceae y positiva para Neisseria.
Interpretacin Antibiograma:
Se utilizan para determinar la sensibilidad in vitro de las bacterias a los distintos
antimicrobianos.
Estn definidos para cada grupo de bacterias los halos de inhibicin que permitirn
clasificar a las bacterias en Sensibles, Intermedias o Resistentes.
a.- Interpretacin de los halos de Inhibicin para Staphylococcus spp
(en agar Mueller Hinton)
DROGA

CONTENIDO SENSIBLE INTERMEDIA RESISTENTE

DEL DISCO (Halo en mm) (Halo en mm) (Halo en mm)
Oxacilina
11-12
1 g
13
10
Eritromicina
14-22
15 g
23
13
Clindamicina
15-20
2 g
21
14
Vancomicina
30g
15

23

b.- Interpretacin de los halos de Inhibicin para Streptococcus pyogenes

(en agar Mueller-Hinton con sangre de cordero)
DROGA
Penicilina
Eritromicina
Clindamicina
Vancomicina

CONTENIDO
DEL DISCO
10 unidades
15 g
2g
30g

SENSIBLE
(Halo en mm)
28
21
19
17

INTERMEDIA
(Halo en mm)
20-27
16-20
16-18
-

RESISTENTE
(Halo en mm)
19
15
15
-

c.- Interpretacin de los halos de Inhibicin para Enterobacteriaceas

Mueller-Hinton)
DROGA

CONTENIDO
DEL DISCO
Ampicilina
10g
Cefazolina
30g
Gentamicina
10g
Ciprofloxacino 5g

SENSIBLE
(Halo en mm)
17
18
15
21

INTERMEDIA
(Halo en mm)
14-16
15-17
13-14
16-20

(en agar

RESISTENTE
(Halo en mm)
13
14
12
15

Interpretacin de los halos de Inhibicin para Pseudomonas aeruginosa (en agar

Mueller-Hinton)
DROGA

CONTENIDO SENSIBLE INTERMEDIA

DEL DISCO (Halo en mm) (Halo en mm)
Gentamicina
13-14
10g
15
Ciprofloxacino
16-20
5g
21
Imipenem
10ug
16-18
19

RESISTENTE
(Halo en mm)
12
15
15

ACTIVIDAES PRACTICAS SOBRE LA IDENTIFICACIN DE COCACEAS

GRAM POSITIVAS Y BACILOS GRAM NEGATIVOS Y ESTUDIOS DE
SUSCEPTIBILIDAD
ORGANIZACIN DEL TRABAJO PRCTICO
Se dispondr de 6 mesones con 6 muestras de pacientes diferentes.
Cada mesn estar compuesto por 10 alumnos.
En el mesn encontrar:
El caso clnico de un paciente con una enfermedad infecciosa
a) La muestra clnica correspondiente al paciente.
b) Los medios de cultivos ya sembrado y con el desarrollo bacteriano correspondiente
(previamente incubados por 16 horas).
c) La tincin de Gram de la colonia desarrollada, lista para ser observada al
microscopio.
d) Las pruebas bioqumicas que se realizaron para llegar a la identificacin bacteriana
(En caso que se requieran pruebas adicionales, Ud encontrar esta informacin
impresa en una hoja de resultados, tal como se obtiene4n en el laboratorio).
24

e) El estudio de susceptibilidad a los antibiticos por el mtodo de difusin en agar

(placa de agar Mueller Hinton con o sin sangre, con los sensidiscos, previamente
incubada 16 horas a 35C).
IMPORTANTE:
Recuerde que est trabajando con muestras biolgicas y microorganismos patgenos,
por lo que debe aplicar las medidas de bioseguridad aprendidas con anterioridad.
EJECUCIN DEL TRABAJO PRCTICO:
Observe cuidadosamente toda la secuencia previamente descrita y registre en la siguiente
planilla
1. Tipo de muestra:
Sangre
Secrecin
Tejido
Orina

Secrecin de herida quirrgica

La muestra vena en medio de transporte: Si

La muestra vena en medio de cultivo:
Si

No
No

2. Medios de cultivo en los que se desarroll la bacteria:

a. Agar sangre
b. Agar Mc Conkey
c. Agar chocolate
3. Describa la tincin de Gram :

Afinidad tintorial: ___________________

Forma: _________________________
Disposicin: ________________________

4. Resultado de la Identificacin bacteriana: ________________________________

5. Resultado de la Susceptibilidad:
DROGA

Dimetro del
(Halo de inhibicin en mm)

Interpretacin

6. Relacione todos los hallazgos con el caso clnico correspondiente

25

CASOS CLINICOS
Caso Clnico N 1 (Mesn 1):
Paciente de 26 aos, de sexo masculino, que en relacin a un traumatismo leve en el
antebrazo derecho, comienza con intenso dolor, aumento de volumen y enrojecimiento.
Por presentar fiebre de hasta 39C y calofros consulta en el Servicio de Urgencia, en
donde se constata un paciente febril, con dolor intenso y espontneo a la palpacin del
antebrazo derecho, que adems est aumentado de volumen, tenso y enrojecido.
Destaca la dificultad en la movilidad de la mano. Se toman 2 hemocultivos (de distintos
sitios de puncin) y se le realiza ecografa de la extremidad, que muestra importante
edema de los msculos del antebrazo. Se decide hacer una exploracin quirrgica, en
donde se observa salida de pus al abrir las fascias del antebrazo, e intenso edema y
enrojecimiento de los msculos del antebrazo. Se toman muestras de tejido para tincin
de Gram y cultivo.
Caso clnico N2 (Mesn 2):
Paciente de sexo femenino de 26 aos, cursando un embarazo de 30 semanas, refiere
que 24 horas antes de la consulta comienza con molestias urinarias (dolor al orinar,
aumento de la frecuencia miccional y nota que la orina est de mal olor). Decide hacer
reposo y tomar analgsicos pero comienza con calofros, fiebre alta y dolor lumbar
derecho, motivo por el cual consulta en el servicio de Urgencia. Al examen fsico
destaca una paciente plida, con aumento de la frecuencia cardiaca, febril y dolor a la
percusin lumbar derecha. El examen de Sedimento urinario mostraba una orina turbia
con abundantes leucocitos y polimorfonucleares con abundantes bacterias y eritrocitos.
Se realiza urocultivo que mostr ms de 100.000 UFC/ml y un hemocultivo positvo al
mismos microorganismo.
Caso Clnico N3 (Mesn 3):
Paciente de 56 aos, diabtico mal controlado, hipertenso, con antecedentes de
mltiples infecciones de una herida crnica en el metatarso derecho, que ha requerido
aseo quirrgicos y hospitalizaciones prolongadas. En el ltimo episodio la lesin se
observaba con mayor compromiso del celular subcutneo, por lo que debi
hospitalizarse nuevamente. Se toman muestras de tejido para cultivo y de la secrecin
purulenta dentro de pabelln.
Caso Clnico N4 (Mesn 4) :
Paciente de 16 aos, de sexo masculino, que en relacin a una espinilla traumatizada en
la zona cercana a la nariz, comienza con dolor, enrojecimiento y aumento de volumen
(2 cm de dimetro) en la zona. Consulta por persistencia del dolor (pulstil), rpido
aumento de tamao de la lesin (3cms) y salida espontnea de material purulento, desde
donde se obtiene una muestra para tincin de gram y cultivo.
Caso clnico N 5 (Mesn 5): Paciente de sexo femenino, de 85 aos, deteriorada por
una enfermedad de parkinson, que estando en un hogar de ancianos presenta una escara
sacra. A los das la escara se observa enrojecida con un rea de induracin y aparece
fiebre. Se decide enviar un trozo de tejido a cultivo realizando previamente un
exhaustivo aseo y eliminacin del tejido desvitalizado.

26

.
Caso clnico N 6 (Mesn 6):
Paciente lactante de 8 meses con antecedentes de infeccin urinaria (ITU) a repeticin, por
lo que su pediatra decide estudiar alguna causa anatmica condicionante de la ITU.
Dado que se decide realizar una ecografa renal y la uretrocistografa retrograda, el pediatra
solicita una sedimento de orina y un urocultivo.
El sedimento de orina muestra leucocitos y bacterias abundantes y el urocultivo muestra
80.000 UFC/ml del microorganismo en estudio

TRABAJO PRCTICO N4
UNIDAD DE MICOLOGA
LEVADURAS Y HONGOS FILAMENTOSOS DE INTERS MDICO
OBJETIVOS:
1. Conocer y caracterizar la morfologa macroscpica de las colonias de hongos
unicelulares o levaduras.
2. Conocer la morfologa microscpica de las levaduras.
3. Conocer y caracterizar la morfologa macroscpica de las colonias de hongos
pluricelulares: filamentosos y miceliales.
4. Reconocer la morfologa microscpica de hongos filamentosos, sifonados y septados:
hifas, conidias, macroconidias, microconidias, etc.
5. Discutir casos clnicos entregados en el paso prctico.
MARCO TERICO:
El campo de la micologa mdica ha tenido gran desarrollo en el ltimo tiempo debido al
aumento de individuos inmunosuprimidos por diversas causas, con lo cual el nmero de
especies potencialmente patgenas ha aumentado enormemente.
Desde el punto de vista clnico las micosis se clasifican como:
micosis superficiales: pitiriasis, piedras, tias, candidiasis superficial, etc.
micosis profundas: candidiasis sistmica, criptococosis, aspergilosis, mucormicosis, etc.
Desde el punto de vista del laboratorio los hongos se pueden dividir desde el punto de vista
morfolgico en:
unicelulares o levaduras
hongos filamentosos
La especie clsicamente implicada en infecciones en el humano es C. albicans. Sin
embargo existen otras especies asociadas a patologa humana como C. glabrata, C. krusei,
C. tropicalis, C. parapsilosis, etc. En este grupo se ha descrito resistencia a los
antifngicos, tanto intrnseca como adquirida, y es por ello que en el Laboratorio de
Micologa, la identificacin de las levaduras debe realizarse a nivel de especie. En algunos
casos tambin ser necesario el estudio de susceptibilidad a los antifngicos.

27

DIAGNSTICO DE LABORATORIO DE LAS LEVADURAS

1.- Microscopa directa de la muestra: es de utilidad la microscopa sin tincin (directo), el
gram y tambin algunas tinciones especficas como el blanco de calcoflor. La
presencia de yemaciones es clave para el diagnstico de levaduras
2.- Cultivo: en l se evala la apariencia y el color (existen levaduras pigmentadas, ej
Cryptococcus sp. o Rodotorula)
3.- Identificacin a nivel de especie: en general se utiliza el flujograma de la figura.
4.- Estudio de susceptibilidad: Existen mtodos de micro/macrodilucin en caldo y
tambin E- test.

CULTIVO (+)
LEVADURAS
TUBO
GERMINATIVO
(+)

Candida
Albicans

TUBO
GERMINATIVO
(-)
IDENTIFICACIN
TRADICIONAL

IDENTIFICACIN
ESPECTROMETRA DE
MASAS

CULTIVO PRIMARIO: ASPECTO Y

COLOR
PRESENCIA DE C PSULA
PRUEBAS BIOQUMICAS
(ASIMILACIN DE AZCARES)

TUBO GERMINATIVO: Candida albicans

Se realiza inoculando una colonia en un en un tubo con 1 ml de plasma humano y se
incuba a 37C por 2 a 4 horas.
Posteriormente se coloca una gota entre porta y cubre objetos y se observa al microscopio
con objetivo seco. No usar aceite de inmersin.

28

DIAGNSTICO DE LABORATORIO DE LOS HONGOS FILAMENTOSOS

Se realiza bsicamente a travs de:
1. Caractersticas macromorfolgicas de las colonias al cultivo
Velocidad de crecimiento, aspecto de la colonia, color del micelio areo y pigmentos
2. Caractersticas microscpicas
Hifas: es una estructura filamentosa de los hongos pluricelulares. Pueden ser septadas o
aceptadas
Formas de reproduccin caractersticas: macroconidias, microconidias, etc.

Hifa aseptada

Hifa septada

Formas reproductivas

Las caractersticas microscpicas se observan a partir de un microcultivo.

Consiste en colocar sobre un portaobjeto estril, un pequeo trozo de agar Sabouraud de
1-2 mm de espesor en el que se inocula un fragmento de la colonia fngica que se desea
estudiar. Luego se coloca un cubreobjetos estril y toda esta preparacin se incuba por
varios das a 30-37C en un ambiente hmedo. Finalmente, se retira el cubreobjetos el cual
se deposita sobre un portaobjeto que contiene gota de azul de lactofenol y se observa con
objetivo seco 25 o 40 X.

29

HONGOS FILAMENTOSOS
DERMATOFITOS
ESPECIE
Localizacin
Macroscopa

Microscopa

T. rubrum
piel
uas
pelo
colonia
blanca
algodonosa,
reverso
pigmento naranjo a rojo

M. canis
piel
pelo
uas (raro)
colonia blanquecina
lanosa, con pigmento
amarillo perifrico y
surcos
radiales.
Reverso
amarillo
anaranjado
macroconidias escasas, macroconidias
macroconidias
largas, angostas, como escasas, similares a T. abundantes piriformes
cigarro,
septadas, rubrum.
multiseptadas,
de
paredes finas
microconidias
paredes gruesas y
microconidias
abundantes redondas, rugosas
piriformes abundantes
en racimos
microconidias
piriformes escasas

M. canis

T. mentagrophytes
piel
pelo
uas
colonia polvorienta a
granular, blanca a caf
claro. Reverso caf

M. gypseum

T. rubrum

M. gypseum
piel
pelo
uas (raro)
colonia
polvorienta
a
granular,,
amarilla
caf.
Reverso
anaranjado a caf
macroconidias
abundantes
fusiformes,
de
extremos
redondeados,
paredes gruesas
microconidias
piriformes
escasas

E. floccosum
piel
uas
colonia
aterciopeladacafverdosa,
con
surcos
radiales.
Reverso naranjo a
caf
macroconidias
como mazo,a veces
en racimos
microconidias
ausentes

T. mentagrophytes

T. floccosum

30

MUCORALES

Especie

Rhizopus

Mucor

Absidia

Morfologa Macroscpica Morfologa Microscpica

Colonia vellosa o l anosa,
rpidamente l lena l a placa o
tubo. Blanca al principio y gris
caf cuando madura. Reverso
incoloro o crema.

Hifas anchas,irregulares
aseptadas (raramente se
observan septos). Rizoides bien
desarrollados.

Colonia l anosa y de
crecimeintorpido. Colonia
blanca l a principio y gris o
amarilla cuando madura.

Hifas anchas,irregulares
aseptada. Ausencia de rizoide.

Colonia algodonosa y densa,

crecimeinto rpido 2- 4 das.
Rpidamente l lena l a placa o
tubo. Blanca al principio y gris
oliva cuando madura. Reverso
incoloro o crema.

Esquema

Hifas anchas,irregulares
aseptada, (raramente se
observan septos). Rizoide
rudimentario.

31

ASPERGILLUS

Especie

Morfologa Macroscpica

Colonia

Morfologa Microscpica
Hifas septadas, paredes
paralelas y ramificacin
dicotmica e n anguklo de 45.
Vesculas e n forma de botella.

Colonias verde azuladas a grises.

Aspergillus fumigatus Superficie atercipopelada verde
musgo. Reverso blanco o marfl.

Aspergillus flavus

Colonia afelpada, topografa

plana o rugosa. Superficie
amarilla a amarilla verdosa.

Hifas septadas y relativamente

anchas. V esculas grandes y
globosas. Cabezas conidiales
radiadas.

Aspergillus terreus

Colonia algodonosa,
aterciopelada. Superficie de color
canela a caf claro. Reverso e s
blanco a caf.

Hifas septadas hialinas. Cabezas

conidiales l argas y compactas.
Vesculas e n forma de cpulas.

Colonia plana, blanca y con

superficie cubierta de conodios
negros, azabache, dando al
cultivo aspecto granular.

Hifas hialinas , septadas. Paredes

paralelas, l isas y ramificaciones
dicotmicas e n ngulo de 45.
Vesculas globosas, conidios
grandes, negros azabache e n
cadenas.

Aspergillus niger

A. fumigatus

A. niger

A. flavus

32

ACTIVIDADES PRCTICAS
ORGANIZACIN DEL TRABAJO PRCTICO
Se dispondr de 6 mesones, 3 de ellos con preparaciones de Hongos filamentosos y los
otros 3 con preparaciones de levaduras..
Cada mesn estar compuesto por 10-12 alumnos.
En los mesones 1, 2 y 3 encontrarn:
a) Un caso clnico de un paciente con una infeccin fngica
b) Los medios de cultivos ya sembrado y con el desarrollo de un tipo diferente
de hongo filamentoso (previamente incubados).
c) Una preparacin microscpica para observar elementos fngicos obtenidos
a partir de un microcultivo
En los mesones 4, 5 y 6 encontrarn:
a) Un caso clnico de un paciente con una infeccin fngica
b) Los medios de cultivos ya sembrado y con el desarrollo de un tipo diferente
de levadura (previamente incubados).
c) Una preparacin teida con Gram ya enfocada en el microscopio.
d) La preparacin con el tubo germinativo
Los alumnos tendrn 20 minutos para realizar el trabajo practico con hongos filamentosos,
al cabo de los cuales deben intercambiarse al mesn correspondiente con levaduras y
viceversa.
Al finalizar los 20 minutos, los alumnos permanecen en el mesn en que se encuentran,
dispondrn de 10 minutos para preparar la presentacin con el caso clnico y 5 minutos
para presentar el caso clnico a la seccin.
EJECUCIN DEL TRABAJO PRCTICO PARA HONGOS FILAMENTOSOS
1. Observe, describa y compare las caractersticas macroscpicas del cultivo de su
mesn, con lo descrito en el marco terico en cuanto a:
Caractersticas
Color
Aspecto de la superficie
Bordes
Pigmentos
2. Observe al microscopio la preparacin obtenida a partir microcultivo y compare lo
observado con lo descrito en el marco terico para ese hongo filamentoso en
cuanto a:
Tipo de hifa
Vescula
Cabeza
conidial
Presencia
de
conidia
Tipo de conidia

Septada/aseptada, ancha/fina

33

1. Comente el caso clnico con sus compaeros y cuando suene la seal cambie al
mesn del frente.
EJECUCIN DEL TRABAJO PRCTICO PARA LEVADURAS
1. Observe, describa y compare las caractersticas macroscpicas del cultivo de su
mesn, con lo descrito en el marco terico en cuanto a:
Caractersticas
Color
Aspecto de la superficie
Pigmentos
2. Observe las preparaciones microscpicas de su mesn y describa lo observado:
Caractersticas microscpicas
Observacin tincin de gram
Tubo germinativo
3.
4.
5.
6.

Comente el caso clnico correspondiente a su mesn.

Permanezca en el mesn donde se encuentra.
En los prximos 10 minutos prepare la presentacin del caso clnico.
En 5 minutos presente al anlisis del caso al resto de la seccin.
CASOS CLINICOS
LEVADURAS Y HONGOS FILAMENTOSOS DE INTERS MDICO

CASO CLNICO N 1 (mesn 1)

Paciente de 48 aos de edad, trasplantado renal en tratamiento con ciclosporina. Inicia
cuadro de dolor del rea maxilar y leve abombamiento. Consulta mdico quien por la
historia inicia tratamiento antibitico, a pesar de los cual en los da siguiente se agrega gran
compromiso del estado general y fiebre. Decide consultar nuevamente, tomndose una
radiografa de senos paranasales que muestra velamiento (ocupacin) de ambos senos
maxilares. Se realiza una puncin maxilar, derivando la muestra para estudio
microbiolgico. Comente segn los hallazgos de Laboratorio que otros exmenes habra
solicitado Ud.? Qu mostrara el examen directo de la muestra?
CASO CLNICO N 2 (Mesn 2)
Paciente de 7 aos de edad, cuya madre refiere la aparicin hace dos meses, de una
pequea lesin enrojecida y pruriginosa. La madre decide consultar, ya que a pesar de que
el nio se mantiene en buenas condiciones generales, la lesin ha aumentado
significativamente de tamao. Al examen fsico se observa una lesin redondeada algo
plida en su centro, de bordes eritematosos. Qu antecedentes epidemiolgicos debiera
investigar el mdico? De dnde obtendra una muestra para estudio? Qu
microorganismo esperara Ud. en el informe de Laboratorio?
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CASO CLNICO N 3 (Mesn 3)

Paciente de 55 aos de edad, con diagnstico de diabetes realizado 15 aos atrs, pero sin
control posterior. Un da previo al ingreso, presenta aumento de volumen del globo ocular
izquierdo y visin borrosa, con eritema leve de la zona. Al da siguiente, presenta
empeoramiento de los sntomas, con mayor eritema y exoftalmo (ojo protruido). Adems
presenta descarga nasal oscura. En el Servicio de Urgencia al cual consulta, se le toman de
inmediato exmenes generales, entre los cuales destaca una glucosa de 280 mg/dl y una
radiografa de senos paranasales que muestra velamiento (ocupacin) del seno maxilar
izquierdo. Comente segn los hallazgos de Laboratorio que otros exmenes habra
solicitado Ud.? Qu mostrara el examen directo de la muestra?
CASO CLNICO N 4 (mesn 4)
Lactante de 2 das de edad, con antecedentes de bajo peso al nacer. Estando en su casa, la
madre lo nota irritable y con dificultades para alimentarse por lo que consulta a su
pediatra. En el examen fsico se observa enrojecimiento de la mucosa de la cavidad oral y
en algunas reas con secrecin blanquecina adherida, que no se despega fcilmente. El
mdico solicita Gram. y cultivo. Comente segn los hallazgos de Laboratorio. qu otros
exmenes habra solicitado Ud.?
CASO CLNICO N 5 (Mesn 5)
Paciente sexo masculino, 38 aos de edad VIH (+) conocido desde hace 2 aos, sin terapia
antiretroviral. Desde hace una semana su familia lo nota con alteraciones de carcter a lo
cual se agrega confusin y vmitos, lo que motiva la consulta al Servicio de Urgencia. All
se realiza una puncin lumbar que da salida a LCR discretamente turbio. El citoqumico
mostr aumento de las protenas, glucosa baja. Se solicita gram y cultivo. Comente segn
los hallazgos de Laboratorio que otros exmenes habra solicitado Ud.?
CASO CLNICO N 6 (mesn 6)
Paciente sexo femenino, 32 aos con antecedentes de tratamiento antibitico (Septrin Forte)
por 7 das por infeccin del tracto urinario. A los 7 das de terminado el tratamiento, nota
secrecin vaginal blanquecina, agregndose 3 das despus intenso prurito (picazn) de la
zona vulvar y aumento del flujo. Por este motivo consulta al mdico, quien solicita gram y
cultivo de la secrecin vaginal. Comente segn los hallazgos de Laboratorio

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TRABAJO PRCTICO N5
UNIDAD DE MICROBIOLOGIA ORAL
.

1. OBJETIVOS:
1. Observar en el microscopio un frotis de placa bacteriana supra y sub gingival teida con
Gram y reconocer las diferencias entre ellas.
2. Observar y reconocer los elementos necesarios para realizar toma de muestra, cultivo e
identificacin de bacterias anaerobias y facultativas orales.
3. Reconocer de caractersticas macroscpicas de las colonias de Porphyromonas gingivalis
desarrolladas en un medio de cultivo.
4. Identificar los elementos necesarios para realizar un PCR y un cultivo de patgenos
periodontales anaerobios estrictos.
2. MARCO

TERICO:

INTRODUCCIN
La cavidad bucal refleja tanto el estado de salud oral como el general. Podemos observar
enfermedades de origen bucal, pero tambin nos muestra signos de otras patologas
facilitando el diagnstico de diversas enfermedades.
Dentro de las patologas bucales, la caries dental y la enfermedad periodontal se
consideran importantes problemas de salud pblica a nivel mundial, por su alta prevalencia
y por los costos que implica tratar a la poblacin afectada. Ellas generan una importante
alteracin de la calidad de salud oral, pero tambin pueden dar origen a otros problemas
de salud; asocindose a diabetes, obesidad y enfermedades cardacas.
El equipo de salud odontolgico y sus pacientes se ven expuestos a una gran cantidad de
microorganismos, los cuales viven en la cavidad bucal o transitan por ella. De ah la
importancia de conocer a qu microbiota nos estamos enfrentando, para tomar las medidas
de bioseguridad necesarias as como para implementar los mtodos de prevencin y
tratamiento de las enfermedades.

ECOSISTEMA BUCAL:
La cavidad bucal ofrece un hbitat muy heterogneo, con diferentes superficies que
entregan caractersticas biolgicas y fsico-qumicas especiales.
El nacimiento es el evento que pone fin a la vida intrauterina estril y expone al recin
nacido al contacto con otros individuos (principalmente la madre), animales y el medio
ambiente. Muchos de estos microorganismos, principalmente bacterias, sern transentes
mientras que otras logran adherirse, crecer y colonizar.
Los que logran mantenerse en piel y mucosas comienzan el proceso de colonizacin,
transformndose en microflora residente organizada en un biofilm bucal
La flora bucal es muy diversa, la mayor cantidad de los microrganismos bucales son
bacterias, se conocen ms de 700 especies, pero se cree que alrededor del 40% de ellas an
36

no son identificadas. (Paster et al, 2001). Tambin encontramos cerca de 30 especies de

hongos, algunos virus y protozoos.
Normalmente la flora bucal se relaciona en equilibrio (homeostasis), el cual es muy lbil y
puede verse afectado por una serie de factores; dependientes de las caractersticas propias
del husped, del medio ambiente o de las relaciones ente los propios microrganismos.
NO existe una especie encontrada exclusivamente en sitios sanos o en sitios enfermos.
Podemos decir que cuando existe un estado de homeostasis predomina cierta flora sobre
otra. Lo mismo ocurre durante el desarrollo de alguna patologa.
Las infecciones orales son polimicrobianas, lo que es importante considerar para el
diagnstico y tratamiento de ellas.
BIOFILM BUCAL
Se denomina bifilm a una comunidad de microorganismos adheridos a una superficie,
rodeados de una matriz denominada glicocalix (polmeros), organizados estructural y
funcionalmente.
sta organizacin les permite adquirir ciertas ventajas: como ser ms tolerantes a agentes
antimicrobianos. La estructura del biofilm puede impedir el ingreso de antibiticos o
permitir su paso solo a algunas capas, dejando otras sin afectar.
Se pueden encontrar biofilm en superficies dentarias, lengua, prtesis dentales y
restauraciones.
MTODOS DE IDENTIFICACIN MICROBIOLGICA EN ODONTOLOGA
Dentro de los mtodos de identificacin microbiolgica ms utilizados en Odontologa
tenemos los cultivos y el PCR. Si bien estos mtodos no son una prctica rutinaria en
nuestra profesin, se hace necesario conocerlos por su utilizacin en el diagnstico y
tratamiento de casos complejos e interdisciplinarios.
Cultivos en medios selectivos
El cultivo permite realizar identificacin microbiana, recuento de colonias y pruebas de
sensibilidad a antimicrobianos.
La toma de muestra y transporte deben ser cuidadosas porque se necesita la presencia de
un nmero elevado de bacterias viables para dar un resultado positivo.
La obtencin de resultados requiere cierta cantidad de tiempo a la espera del crecimiento
bacteriano.
Tambin existe la desventaja de un costo mayor a otros mtodos y la imposibilidad de
detectar aquellos microrganismos incultivables

37

PCR
La reaccin en cadena de la polimerasa, cuyas iniciales en ingls son PCR ("polymerase
chain reaction"), es un mtodo de identificacin molecular que puede reproducir en el
laboratorio mltiples copias de un fragmento de ADN especfico.
De sta manera, cuando se quiere investigar la presencia o ausencia de un microorganismo
en una muestra, con la tcnica de PCR se busca en forma especfica replicando su
secuencia de ADN, previamente conocida. Si el microorganismo no est en la muestra, el
PCR ser negativo.
Se basa en la actividad de la enzima ADN polimerasa que es capaz de fabricar una cadena
de ADN complementaria a otra ya existente. Se requiere que el medio contenga
nucletidos, que son la materia base para fabricar el ADN (adenina, tiamina, citosina y
guanina), y una pequea cadena de ADN que pueda unirse a la molcula que queremos
copiar para que sirva como "primer".
Luego el resultado es colocado en un gel de agarosa, donde por el peso molecular
especfico de cada bacteria y por la presencia de cargas elctricas, se produce una
migracin dentro del gel ubicndose en un sector especfico, el cual est determinado para
cada bacteria o virus. As podemos establecer si el microorganismo est presente o no.
La sensibilidad de la tcnica de PCR es muy alta incluso cuando el nmero de
microorganismos es muy pequeo o no son viables, pero presenta algunos inconvenientes,
como por ejemplo que no es una tcnica cuantitativa y existe una alta probabilidad de
obtener falsos positivos por contaminacin.
Para resolver el problema de la cuantificacin se han realizado variaciones al esquema
inicial del PCR, dando lugar a lo que se conoce como PCR cuantitativo o PCR en tiempo
real.
La clave en el PCR cuantitativo es la posibilidad de detectar en tiempo real la amplificacin
del genoma estudiado. Para llevar a cabo esta deteccin existen varios mtodos pero casi
todos basados en la utilizacin de otro fragmento de ADN (sonda) complementario a una
parte del ADN que queremos amplificar. Esta sonda lleva adherida una molcula
fluorescente que se libera cuando es desplazada de su sitio por la ADN polimerasa y emite
fluorescencia al ser iluminada con un lser. La cuantificacin de la fluorescencia emitida
durante cada ciclo de la PCR ser proporcional a la cantidad de ADN que se est
amplificando.
La toma de muestra en el paciente y el transporte al laboratorio es ms fcil que en el
cultivo, ya que no requiere la presencia de microrganismos vivos. Pero, el PCR no permite
realizar pruebas de susceptibilidad antimicrobiana ni recuento de colonias.
Adems el PCR solo entrega informacin de los microorganismos que estamos solicitando
al laboratorio sean identificados y no de todos los presentes en el sitio afectado.

38

3. ACTIVIDADES

PRCTICAS:
El curso se dividir en 4 grupos, para ser distribuidos en 4 estaciones de trabajo.

Estacin de trabajo N-1: Tincin de placa bacteriana supragingival

Revelado de placa bacteriana

En el microscopio podrn observar frotis de placa bacteriana supra gingival de un

paciente sano y subgingival de un paciente con periodontitis, ambas teidas con Gram.
De lo observado, identifique las formas bacterianas presentes y la clasificacin de
Gram a que corresponden.
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
Explique brevemente las diferencias entre la composicin del biofilm de placa
bacteria supra y subgingival observados
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
Estacin de trabajo N-2: Mtodos de cultivo de patgenos periodontales subgingivales
Encontrarn los elementos necesarios para el cultivo de patgenos periodontales anaerobios
estrictos.
Observaremos en forma especfica placas de cultivo de agar sangre donde se desarrollaron
colonias de Porphyromonas gingivalis.

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Porphyromonas gingivalis.

Esta bacteria est fuertemente asociada a enfermedad periodontal (lo que significa que hay
una fuerte asociacin entre su presencia y el inicio y progresin de la enfermedad)
Corresponde a un bacilo Gram (-) anaerobio estricto que necesita hemina y vitamina K para
su desarrollo. En las placas de agar sangre se aprecian como colonias pigmentadas de
negro.
Entre sus factores de virulencia estn:
Produccin de enzimas (gingipains)
Protenas de pared celular con alta capacidad antignica y de adhesin a la pared de
otras bacterias que colonizan las superficies orales.

Cultivo de patgenos periodontales.

Una vez seleccionados los dientes donde se tomarn las muestras, se elimina
cuidadosamente la placa supragingival de la zona con una cureta estril. Luego se procede a
tomar la muestra con conos de papel de endodoncia estriles, nmero 30, colocndolos
cuidadosamente dentro del saco periodontal durante 10 a 30 segundos. Los conos se
retiran y se introducen en tubos plsticos que contienen 1 ml de medio de transporte RTF
estril a una temperatura de 4C.
Las muestras deben ser procesadas en el laboratorio de microbiologa dentro de un
plazo mximo de 2- 3 hrs posteriores a la toma.
En el laboratorio las muestras son tratadas en cmaras de anaerobiosis. Se comienza con un
Vortex (mezclado) por 45 segundos y luego se procede a una dilucin seriada.
Posteriormente comienza el cultivo en un medio no selectivo de agar sangre Columbia
(sangre desfibrinilada, 1mg/ml Hemina y 0.5 mg Menadiona) y se incuba en una jarra
hermtica que posee un generador de anaerobiosis, por 5 das a 36C.
La identificacin de colonias de P.gingivalis u otra bacteria se realizan mediante anlisis de
la morfologa colonial (macroscpico) y/o de la morfologa celular (microscpico).
Tambin se pueden utilizar pruebas bioqumicas o de fluorescencia para confirmar la
identificacin.
En la superficie agar sangre, las colonias de P.gingivalis son inicialmente blanquecinas para
luego adquirir un color crema. A los 4 a 8 das, las colonias se oscurecen a un color rojo
profundo, verdoso o negro, desde el borde hacia el centro, por la concentracin de hemina
en la pared celular. Las colonias son de forma redonda, convexas, brillantes y lisas.
Las colonias ya identificadas pueden ser aisladas y resembradas en medios selectivos si
se requerirse otro procedimiento adems de la identificacin, como por ejemplo un
antibiograma.
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El protocolo de laboratorio tiene algunas variaciones en caso de cultivar bacterias con otros
requerimientos nutricionales o de oxgeno.

Colonias pigmentadas de negro

Cultivo con antibiograma
Aplicando a la prctica clnica los conocimientos entregados, seale una ventaja y una
desventaja del cultivo de periodontopatgenos como mtodo de identificacin bacteriana.
Cultivo:
A)Ventaja:________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
B) Desventaja:
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________

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Estacin de trabajo N-3 Mtodos de identificacin de patgenos periodontales por

tcnicas de biologa molecular
PCR
La toma de muestra en el paciente es similar que para un cultivo, solo que los conos de
papel se llevan al laboratorio en un tubo plstico sin medio de transporte ni refrigeracin.
El mtodo amplifica el ADN de microorganismos vivos, muertos o en replicacin. Esto
puede ser una ventaja cuando la viabilidad del microorganismo se pierde rpidamente
durante la toma o el transporte de la muestra o cuando el microorganismo no se puede
cultivar.

PCR: gel de agarosa.

Aplicando a la prctica clnica los conocimientos entregados, seale una ventaja y una
desventaja del PCR
A)Ventaja:________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
B) Desventaja:
_________________________________________________________________ ________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________

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