Trabajo Prctico N

1 y 2

Jacqueline Chanaday, Yanina Mazzocco, Marianela Rodriguez

Trabajo Prctico de Laboratorio N 1 y 2

TOMA Y TRATAMIENTO DE MUESTRAS RESONANCIA

MAGNTICA NUCLEAR CUANTITATIVA (qRMN)
En el siguiente informe de laboratorio se utiliz la resonancia magntica nuclear
(RMN) para determinar la presencia de flurbiprofeno en un extracto procedente de un
comprimido comercial, Clinadol Forte, cuyo procedimiento de extraccin se diagram
por los alumnos. Por otro lado, se emple la tcnica de resonancia magntica nuclear
cuantitativa (qRMN) para cuantificar glifosato presente en tres diferentes muestras
(suelo contaminado, herbicida comercial

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Parte I: EXTRACCIN DE FLURBIPROFENO DESDE UNA

FORMULACIN COMERCIAL
1) Objetivos

Diagramar un procedimiento experimental para la extraccin de fluribuprofeno en

un comprimido comercial.
Analizar el espectro RMN del producto final de extraccin.
Comparar resultados con otros procedimientos experimentales.

2) Procedimiento Experimental
El Procedimiento Experimental se diagram por los alumnos que presentan el siguiente
informe, el cual se muestra en el siguiente diagrama de flujo:

Disolucin de un comprimido en acetato de etilo

Sonicado

Extraccin

Secado

Filtrado

Evaporacin del solvente

Figura 1: Diagrama de flujo del procedimiento experimental implicado en la extraccin

de flurbiprofeno a partir de un comprimido comercial.

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Inicialmente se tom un comprimido comercial del medicamento Clinadol Forte de
(0,40190,0002) g de masa y se lo sumergi, aproximadamente, en 100 mL de acetato
de etilo. Luego, se realizo una sonicacin por 15 minutos para facilitar la disolucin del
comprimido en el solvente. A continuacin, con el objetivo de eliminar todos los
excipientes como talco, almidn o dems, se hicieron 3 extracciones en donde para la
primera se utiliz aproximadamente 100 mL de agua (a los cuales se le agrego NaCl
para evitar la formacin de emulsiones, y de esta forma facilitar la extraccin) y en las
dos finales HCl (preparado a partir de HCl 37%, haciendo una solucin 1/10 -6mL de
HCl en 54 mL de H2O-). Al producto de las extracciones se lo seco con sulfato de sodio
anhidro, despus, se lo filtro por gravedad. Para eliminar por completo el solvente
remanente en la solucin, se emple un rotavapor (lo cual es una extraccin del
solvente con vaco).
Finalmente, el extracto se analizo por la tcnica de resonancia magntica nuclear
(RMN).

3) Resultados
Tanto los espectros, como sus correspondientes anlisis se encuentran en el ANEXO.
En la figura tres se observa el espectro que se obtuvo por la tcnica 1H RMN para el
extracto que obtuvieron los estudiantes que presentan el siguiente informe de
laboratorio. En un primera instancia, se observa la presencia del compuesto de inters,
el flurbiprofeno, si se lo compara con un espectro de flurbiprofeno de referencia
(informacin que fue otorgada por los profesores del trabajo prctico, en una
explicacin, en el presente informe de laboratorio no se presenta un espectro tal, ya
que no se lo pudo encontrar).
A su vez, en dicho espectro, se observan un gran nmero de seales, es decir, no solo
se encuentran aquellas correspondientes al compuesto de inters; entonces esto
evidencia la presencia de alguna impureza. Esta impureza puede deberse a la
presencia de ftalato cido de potasio (este problema fue informado por uno de los
profesores al observar los espectros en la misma explicacin, pero dicho dato no se
pudo corroborar en el presente informe, ya que tampoco se pudo hallar el espectro
correspondiente para realizar la comparacin correspondiente), el cual se encuentra en
los bidones en los cuales se almacena el acetato de etilo, que se emple para disolver
el comprimido.
Por otro lado, si se lo compara con el espectro de la figura 5, correspondiente al
extracto del mismo compuesto que obtuvo otro grupo de estudiantes, se determina
que la cantidad de flubirprofeno extrado es mayor para este ltimo caso. Este hecho
puede deberse a que dicho grupo de estudiantes aplico un procedimiento experimental
diferente, o a que, simplemente, debido a un error de los operadores se perdi
compuesto entre punto del procedimiento experimental. Por lo cual, se realizaron los
espectros de RMN 2D solamente para esta ltima muestra.
Se determinaron para dicha muestra los siguientes espectros de RMN en 2D,
experimentos de correlacin,:

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En la figura 6 se encuentra el espectro de correlacin homonulear (H,H, COSY).

En donde se comprob que existe correlacin entre los protones metlicos y los
metnicos. Pero, dado que los protones aromticos pertenecen a otro sistema de
espn, los mismos, no se correlacionan con ningn otro.

En la figura 7 se observa el espectro HMBC, el cual es un espectro de

correlacin heteronuclear a larga distancia entre protones y carbonos de la
molcula. Dicha correlacin a largo alcance puede llegar hasta dos o tres
enlaces, saltea heteroatomos, y presenta dificultades en su anlisis ya que
posee restricciones geomtricas, que pueden permitir o no que la correlacin
ocurra. Se evidencian las mismas correlaciones que para el caso anterior.

En la figura 8, se presenta el espectro HSQC (Espectroscopa de Correlacin

Heteronuclear de un nico Cuanto), el cual muestra los carbonos directamente
conectados.

En la figura 9 se presenta el espectro 19F RMN del extracto de flurbiprofeno que

obtuvo otro grupo de estudiantes que ya se estaba analizando en los anteriores
espectros. El cual es muy limpio, entonces esto indica que las impurezas que
presenta la muestra no contienen flor. Por lo cual, si se le hubiera agregado un
estndar a la muestra, se hubiera podido medir la cantidad de flurbiprofeno que
se extrajo.

Tras estos anlisis, recin se puede asegurar que en el extracto se evidenci la

presencia del compuesto de inters, el flurbiprofeno.

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Parte II: CUANTIFICACIN POR qRMN

A). EXTRACCION DE GLIFOSATO DEL SUELO

1) Objetivos

Determinar la concentracin de glifosato de una muestra de suelo real,

aplicando un procedimiento utilizado en laboratorios analticos certificados.
Trabajar la muestra de la misma manera que un laboratorio analtico de calidad.
Analizar el espectro qRMN de cada muestra, y cuantificar el glifosato presente
en cada una.

2) Cadena de custodia
En la siguiente imagen se muestra la cadena de custodia elaborada para el
anlisis de la muestra de tierra:

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3) Resultados
Debido a un error experimental de los operadores, se realizo solamente el
procedimiento experimental planteado en la gua de Trabajos Prcticos N1 para la
muestra de tierra control, la cual no estaba contaminada con el pesticida de inters, el
glifosato.
Como se observa en la Figura 10 del Anexo, solo esta presente en el espectro de
(zgpg:30) 31P RMN la seal correspondiente al estndar que se emple (Na3PO4.12H2O).
Por lo cual, segn el resultado hallado, la matrz (el suelo) no estara aportando
fosfatos, o no al menos una cantidad lo suficientemente significativa como para que
sea detectada por dicha tcnica empleada.

B).MUESTRA DE HERBICIDA COMERCIAL, y

C).DE GLIFOSATO DE GRADO TCNICO

1) Objetivos

Analizar el espectro qRMN de cada muestra, y cuantificar el glifosato presente

en cada una.

2) Procedimiento experimental
El procedimiento experimental no se detalla, ya que este se encuentra explicado en la
hoja de trabajos prcticos de la materia.

3) Resultados
Al igual que en el caso anterior, correspondiente a la Extraccin de glifosato del
suelo , solo se analizaron los espectros desacoplados en fsforo, la aclaracin
correspondiente se encuenta en el ANEXO.

Muestra de herbicida comercial:

Tras el anlisis de los datos experimentales, para lo cual se aplico un programa de
computadora llamado MestRe, se obtuvo el siguiente resultado:

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Glifosato de grado tcnico:

Tras el anlisis de los datos experimentales, para lo cual se aplico un programa de
computadora llamado Manova, se obtuvo el siguiente resultado:

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CONCLUSIONES

En el presente informe de laboratorio se mostraron los resultados obtenidos al aplicar

la tcnica de resonancia magntica nuclear para la identificacin de compuestos, como
as tambin para la cuantificacin.
En una primera parte, se lo aplica para determinar la presencia de flurbiprofeno,
compuesto de inters, en un extracto que se obtuvo de un un comprimido comercial
del medicamento Clinadol Forte. El procedimiento experimental aplicado fue
diagramado por los alumnos. Tras el anlisis de los resultados se concluye, respecto a
esta primera etapa experimental, lo siguiente:

El extracto presenta impurezas, ya que en el espectro de la figura 5 (Espectro

zg30: 1H RMN) se observan ms seales que las esperadas para el flurbiprofeno.
Entonces, para realizar una identificacin certera de la identidad de la o las

impurezas presentes, se debera de contar con mas informacin, como por

ejemplo de todos los compuestos presentes en el comprimido, si puede existir la
posibilidad de que ocurra una contaminacin de la muestra debido al recipiente
en el que se almaceno uno de los solventes empleados, etc.

Si bien, tras la discusin de los resultados durante la clase de laboratorio con los
profesores, en el extracto que obtuvieron los alumnos que presentan este
informe se identific el flurbiprofeno (espectro tambin necesario para su
correcta identificacin, el cual no se muestra) a partir de los espectros de la
figura 5, se emple otro extracto para la aplicacin de RMN en 2D, ya que en
este se observ una mayor cantidad del compuesto de inters.

Tras el anlisis de los espectros RMN 2D, se puede afirmar la presencia de

flurbiprofeno en el extracto obtenido por el otro grupo de estudiantes. Por lo
cual, esta tcnica result ser una buena tcnica para la identificacin del
compuesto de inters. Cabe aclarar que su anlisis fue dificultoso, debido a la
gran complejidad que presentan los mismos.

La diferencia en los espectros de 1H RMN entre ambos grupos de estudiantes,

puede deberse a que aplicaron diferentes procedimientos experimentales, o a
problemas del operador (que se haya perdido mucha muestra en algn paso,
como por ejemplo en la filtracin por gravedad, ya que se emple, en vez de un
papel de filtro, un trozo de algodn, tambin pudo ocurrir que las extracciones
no hayan sido eficientes, etc).

En una segunda etapa, se cuantifico e identifico glifosato en tres distintas muestras.

En la primera, extracto de suelo, debido a un error de los operadores, solo se

trat una muestra de suelo control, la cual no estaba contaminada con el
compuesto de inters. En esta se determin que el suelo (matrz) no aporta
fosfatos, o al menos no de una manera significativa tal que sea detectable por
qRMN.

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En la segunda, se determino la cantidad de glifosato presenta en un herbicida

comercial, Glacoxan. El valor hallado fue de 13,0 g/100mL, mientras que el
valor que se informa en el producto es de 43,8 g/100mL.Esta diferencia de
valores puede deberse a un error experimental, (que el operador haya cometido
algn error experimental como por ejemplo colocar menos cantidad del
herbicida que la requerida segn el procedimiento experimental, mal pipeteo,
etc) o puede deberse a un error en el anlisis de los datos al aplicar el programa
computacional MestRe.

Por ltimo, se identific y cuantific glifosato de grado tcnico. En donde el

valor hallado fue del 4,689%.

Esta ltima etapa no presenta grandes dificultades en cuanto a las tcnica empleadas
en el laboratorio, ya que por un lado los procedimientos experimentales ya estaban
establecidos, y adems estos eran de fcil aplicacin.

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ANEXO

Aclaraciones preliminares:

En aquellas partes experimentales en las cuales se haya procedido a la

cuantificacin, se analizaron dos espectros uno de 1H RMN, y otro de fsforo 31P
RMN. Esto se debe que en el espectro de 1H RMN analizado, el pico
correspondiente al agua es mucho mayor que el del glifosato (el cual se
confunde con el ruido del espectro). Entonces, debera emplearse agua
deuterada, lo cual implica un gasto mucho mayor. Una alternativa a este
problema es analizar el espectro para el fsforo 31P RMN, y no para protones. El
estndar que se emplea es el Na3PO4.12H2O.

zgpg30: Esta notacin que se observa en los espectros de qRMN nos indica el
ngulo de fase con la que se midi, dado que esto genera que se pierda
sensibilidad en la medicin, se adquiri una mayor cantidad de veces (para
tener una buena relacin seal/ruido). Dado que el anlisis es cuantitativo.

Parte I: EXTRACCIN DE FLURBIPROFENO DESDE UNA FORMULACIN

COMERCIAL

Figura 3: Espectro zg30: 1H RMN del extracto de flurbiprofeno, que se obtuvo a partir del
procedimiento experimental que aplicaron los alumnos que presentan este informe de
laboratorio.

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Figura 4: Estructura del flurbiprofeno.

Figura 5: Estructura del ftalato cido de potasio.

Para el flurbiprofeno, compuesto cuya estructura se observa en la figura 4, se observan

tres tipos de seales a grandes rasgos:
1. Correspondiente a los protones aromticos. Hay cuatro tipo de protones
aromticos, los cuales se marcaron en la figura 4, esto se debe a que para
algunos grupos de protones sus entornos qumicos resultan similares, entonces
originaran corrimientos qumicos similares. Dada su naturaleza de ser
aromticos, es de esperar que sus corrimientos qumicos sean altos, entre 7-8
ppm.
2. Correspondiente a los protones metnicos. Integra para un solo protn, y dado
que posee tres 1H vecinos, se observa como un cuatriplete (lo cual indica el
desdoblamiento de la seal). El corrimiento qumico caracterstico de este tipo
de protones es entre 1,5-2 ppm, pero dado que esta unido a un grupo -COOH y
a un anillo aromtico, (grupos son tomadores de densidad electrnica, lo
desprotegen ms), ocasionando que el corrimiento qumico sea mayor al rango
esperado.
3. Correspondiente a los protones metlicos: integra para tres protones, y dado que
solo posee un 1H vecino, se observa como un doblete. Su corrimiento qumico
caracterstico es bajo, al rededor de 1ppm, pero dado que posee el mismo
entorno qumico que el grupo anterior, esta seal se observa a mayo res ppm.
Los cuales se observan en la figura tres.
En cuanto al ftalato cido de potasio, compuesto cuya estructura se observa en la
figura 5, presenta cinto tipos diferentes de seales. En donde, cuatro de los protones

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(que originan cuatro seales distintas ya que sus entornos qumicos no son
equivalentes) son aromticos (dos de ellos integran para un solo protn y se observan
como un doblete; y los otros dos integran para un solo protn pero se observan como
tripletes ya que tienen dos protones vecinos) y el otro protn al ser cido, dependiendo
de las condiciones experimentales es si puede llegar a observarse o no.
Pero dado que se observan un gran nmero de seales en el espectro presentado en la
figura tres, no se les asigno un grupo de picos especfico a cada seal que se nombro
anteriormente para ambos compuestos, ya que para hacer esto con certeza debera
contarse con un espectro de ambos compuestos puros, analizados bajo las mismas
condiciones experimentales.
A continuacin se presenta el espectro z1H RMN del extracto de flurbiprofeno, que se
obtuvo a partir del procedimiento experimental que aplicaron otros alumnos.

Figura 5: Espectro zg30: 1H RMN del extracto de flurbiprofeno, que obtuvo otro grupo de
estudiantes, los cuales aplicaron un procedimiento experimental diferente.

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Figura 6: Espectro COSY del extracto de flurbiprofeno, que obtuvo otro grupo de estudiantes,
los cuales aplicaron un procedimiento experimental diferente.

Figura 7: Espectro HMBC del extracto de flurbiprofeno, que obtuvo otro grupo de estudiantes,
los cuales aplicaron un procedimiento experimental diferente.

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Figura8: Espectro HSQC del extracto de flurbiprofeno, que obtuvo otro grupo de estudiantes,
los cuales aplicaron un procedimiento experimental diferente.

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Figura 9: Espectro 19F RMN del extracto de flurbiprofeno, que obtuvo otro grupo de estudiantes,
los cuales aplicaron un procedimiento experimental diferente.

Parte II: CUANTIFICACIN POR qRMN

CUANTIFICACIN POR qRMN DE UNA MUESTRA DE SUELO CONTAMINADO CON
GLIFOSATO, HERBICIDA COMERCIAL, Y DE GLIFOSATO DE GRADO TCNICO

Para la cuantificacin se emple la siguiente relacin matemtica en ambos casos:

Entonces, dado que tras el anlisis de los espectros, se toma el rea del estndar igual
a uno, y ya que la cantidad de fsforos presentes en ambas molculas es igual a uno,
se llega a la siguiente expresin final:

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Muestra de suelo control:

Figura 10: Espectro zgpg30:

P RMN de la muestra de suelo control de glifosato .

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Anlisis de los valores hallados:

Muestra de herbicida comercial:

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Figura
11: Espectro fosfro desacoplado para la muestra de herbicida comercial, tras el procesado de
los datos. Se muestra el pico correspondiente al glifosato.

Anlisis de los valores hallados:

Glifosato de grado tcnico:

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Figura
12:
Espectro fosfro desacoplado para la muestra de glifosato de grado tcnico, tras el procesado de
los datos. Se muestra el pico correspondiente al glifosato.

Anlisis de los valores hallados:

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