CONDICIONES Y CRITERIOS DE ESCALAMIENTO

Existen diversos criterios de escalamiento, que se encuentran directamente

vinculados con las variables que afectan de manera importante el sistema de
produccin. Entre estos se encuentran: nmero de Reynolds, tiempo de mezcla,
velocidad en la punta del impulsor, potencia por unidad de volumen (P/V),
coeficiente volumtrico de transferencia de masa (k La) y similitud geomtrica
del reactor, entre otros. Sin embargo, segn Quintero (1981), el nmero de
Reynolds y el tiempo de mezclado no son buenos criterios de escalamiento.
Escalar utilizando como criterio la velocidad de la punta del impulsor cuando
las clulas microbianas o agregados celulares pueden afectarse por grandes
esfuerzos constantes, disminuye la potencia por unidad de volumen en la
misma proporcin que aumenta la escala del fermentador, provocando que el
kLa disminuya (QUINTERO, 1981)
De acuerdo con lo anterior, al parecer los mejores criterios para pasar de una
escala a otra son la relacin P/V y el kLa (QUINTERO, 1981)
CRITERIO POTENCIA POR UNIDAD DE VOLUMEN CONSTANTE P/V.
El criterio de escalado P/V se basa en mantener constante el consumo de
potencia por unidad de volumen de un proceso lquido-gaseoso debido a la
agitacin. P/V requiere de un mayor grado de agitacin respecto de la
velocidad requerida para mantener el criterio Re constante. Es por tal motivo
que su desventaja radica en el alto consumo de potencia, ya que la velocidad
en la punta del agitador se incrementa con la escala y, por lo tanto, el diseo
de un motor de agitacin a gran escala resulta poco prctico en los
bioprocesos. Como consecuencia del incremento en la velocidad en la punta
del agitador, el esfuerzo cortante puede ocasionar daos en la morfologa de
clulas microbianas. Sin embargo, una agitacin y aireacin efectiva de los
fluidos presentes en un biorreactor promueven la dispersin de gases y tamao
de burbujas para la transferencia de masa. Lo anterior soporta las grandes
diferencias significativas en la hidrodinmica lquido-gaseosa que podran
presentarse utilizando los criterios P/V y Re.
Para el consumo de energa en un recipiente agitado, existe una relacin fija
entre velocidad del impulsor, N, y el dimetro del impulsor, Di. La potencia
constante por unidad de volumen, para un recipiente agitado mecnico est
dada por:
KLa
Bajas concentraciones celulares la OTR es baja, aun cuando las clulas pueden
estar respirando a su mxima velocidad de demanda especfica de oxgeno
(QO2 max); adicionalmente, la concentracin de oxgeno en el medio (C* O2) se
incrementa y se aproxima al valor de saturacin ( C* O2 ). As, el oxgeno se
presenta en una condicin no limitante para el crecimiento de los
microorganismos. A medida que la concentracin de biomasa se incrementa,
OUR se incrementa y como consecuencia la concentracin de oxgeno disuelto
disminuye. A unas concentraciones de operacin definidas, una alta
concentracin celular har que el valor de oxgeno disuelto alcance la
concentracin crtica de oxgeno (Ccrit) cuyo valor depende de las
caractersticas fisiolgicas de los microorganismos. A C crit el cultivo an cuenta
con la cantidad de oxgeno demandada por la concentracin celular presente. A

partir de este valor un incremento en la biomasa ya no dispone del oxgeno

que necesita para su desarrollo normal (JIMENES, 2003)
En fermentaciones aerbicas, la transferencia de masa est determinada por el
valor del coeficiente de transferencia de oxgeno o k La, como se mencion
anteriormente, generalmente se constituye en el criterio de escalamiento. Es
importante tener en cuenta que este factor es funcin de muchas variables
relacionadas en diferentes correlaciones.
El coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno o k La es considerado
como un parmetro crtico para el funcionamiento del biorreactor, cambia en el
transcurso de la fermentacin, se usa para medir la capacidad de aireacin de
un reactor, y depende tanto de variables de operacin como la agitacin y la
aireacin, as como del diseo y las condiciones de operacin del mismo, que
incluyen el dimetro, capacidad, potencia y densidad, viscosidad y composicin
del medio de cultivo, tasa de agitacin, diseo de eliminacin de gas,
estructura del microorganismo, agente antiespumante y temperatura
(SEPLVEDA, 2005), (SANCHEZ, 2003). Al emplear como criterio el k La deben
especificarse las condiciones ambientales y tiempo de fermentacin en el que
fue determinado, debido a que puede ocurrir que se elija un k La menor que el
necesario y al hacer el cambio de escala, descubriendo que no es suficiente
(QUINTERO, 1981).
La aireacin y agitacin son los parmetros ambientales que se encuentran
directamente relacionados con el coeficiente de transferencia de masa y por lo
tanto son los que pueden alterarlo, generando al mismo tiempo una variacin
en las condiciones de operacin como la disponibilidad de nutrientes, pH,
temperatura, concentracin de oxgeno disuelto, esfuerzos cortantes y
produccin de espuma (PARRA, 2004)
El propsito principal de la aireacin es poner en contacto el gas que
generalmente es oxgeno con el lquido o caldo fermentativo, mientras que la
agitacin pretende dispersar las burbujas del gas para disminuir su tamao (a
menor tamao de burbuja mayor rea de contacto y aumento de la
transferencia de masa), provocando turbulencia y homogenizacin del cultivo.
Por otra parte el burbujeo tambin sirve como medio de agitacin (JIMENES,
2003).

SIMILITUD GEOMTRICA
La similaridad geomtrica se define con mayor precisin en trminos de
correspondencia. Considerando dos cuerpos slidos. Cada uno provisto de tres
ejes imaginarios en el espacio que los intersectan a fin de ser descritos de igual
forma en todos sus puntos en un mismo cuerpo est dado por las coordenadas
x, y, z, mientras que en el segundo cuerpo un punto correspondiente est dado
por las coordenadas X, Y, Z. Ambos grupos de coordenadas estn relacionados
por la ecuacin:
X/x + Y/y + Z/z=L
Ecuacin 25.
Donde la relacin de escalamiento lineal L es constante. Estos dos puntos y
todos los dems pares de coordenadas espaciales que estn relacionados en
trminos de L son conocidos como puntos correspondientes. Con esto se define
que: dos cuerpos son geomtricamente similares cuando para todo punto en el

primer cuerpo existe un punto en el segundo. El concepto de similaridad

geomtrica se ilustra en la figura 5.
Esto es posible cuando cada punto en el primer cuerpo puede tener ms de un
punto correspondiente en el segundo. Esto ocurre cuando el segundo cuerpo
est compuesto por elementos idnticos mltiples geomtricamente similares
al primero. No es necesario que la relacin de escalamiento sea la misma en
cada uno de los ejes. Una definicin ms general acerca de los puntos
correspondientes est dada por
Dnde: X, Y y Z son relaciones de escalamiento constantes pero no
necesariamente iguales. La relacin entre dos cuerpos en los cuales las
razones de escalamiento son diferentes en diferentes direcciones se denomina
similaridad distorsionada.
Existe un factor de correccin no geomtrico y est dada por:

VARIABLES QUE INFLUYEN EN EL ESCALADO DE BIOREACTORES

(i) pH: El pH tiende a ser una variable de salida de fermentacin sensible y
potencialmente un controlador de parmetro, por lo tanto es valioso para
realizar un seguimiento del pH en todas las etapas de una operacin de
escalado como puede ser una ruta para la optimizacin.
Los tampones biolgicos, aunque costosos son una herramienta til para
hacernos entender si la variacin del pH est afectando el experimento sin
afectar intencionalmente las variables nutricionales en el experimento. El pH
de una fermentacin tiende a ser tanto una variable dependiente e
independiente, en que a valores de pH extremos, el crecimiento puede verse
afectado. Sin embargo los cambios de pH pueden ser el resultado de
degradacin o absorcin de los procesos, por ejemplo desglose proteoltica
puede resultar en la liberacin de amonaco. El nutriente disponible tiende a
cambiar con el cambio de escala, entonces los cambios de pH tambin pueden
alterar y pueden tener efectos positivos o negativos en el resultado requerido.
Es aconsejable para monitorear, rastrear y tratar de interpretar los cambios de
pH, y recomendar un curso de accin, que pueden requerir el uso de pH
acciones de control, basado en la observacin de la persona en sistema de
cultivo.
(ii) Cizalla: La cizalla tiende a ser baja en el matraz de sistemas de cultivo,
aumentando dramticamente cuando un proceso se escala en reactores de
tanque agitado, ya que estos estn diseados para ser mezcla de alta cizalla y
sistemas para la transferencia ptima de gas. La cizalla se puede aumentar
agitando los frascos con los deflectores y recipientes de vidrio, pero la inclusin
de estos elementos de cizallamiento creciente no se puede escalar en un
reactor de tanque agitado, el cizallamiento se incrementa por la geometra del
agitador cambiante, mediante el aumento de la velocidad de agitacin. Las
velocidades de cizallamiento tambin puede cambiar durante una
fermentacin, si el organismo produce un polimrico producto, tales son
ejemplo de ellos, Xanthamonas campestris, la produccin de la goma de
xantano, que muestra tendencias pseudoplsticos, o si se produce enzimas que
pueden degradar viscosos sustratos, por ejemplo, pectinasas de algunos
hongos filamentosos tales como Cochliobolus sativus, Para organismos
unicelulares tales como E. coli, los procesos de fermentacin tienden a ser
descrito como de cizallamiento insensible, mientras que la sensibilidad de
cizalla puede

ser experimentado en el cultivo de los eucariotas y filamentosos organismos.

En el peor de los casos, las clulas son friables y se lisan en un entorno de alto
cizallamiento.
(iii) Mantenimiento de temperatura:
La temperatura de las fermentaciones aerbicas afecta tanto a la solubilidad
de oxgeno y el coeficiente de transferencia
de masa kL.
El aumento de temperatura provoca baja, de modo que la fuerza para la
transferencia de masa se reduce. Al mismo tiempo, difusividad del oxgeno en
la pelcula de lquido que rodea la burbujas se incrementa, resultando en un
incremento en kL. El efecto neto de la temperatura sobre la transferencia de
oxgeno depende del rango de temperatura considerado. Para temperaturas
entre 10C y 40C aumento de la temperatura es ms probable que aumente la
tasa de transferencia de oxgeno. Por encima de 40C la solubilidad del oxgeno
se reduce significativamente, lo que afecta negativamente a la fuerza motriz y
la velocidad de transferencia de masa. (DORAN, 1995)
A pequea escala, las cantidades de biomasa son relativamente bajas y la
calefaccin se puede suministrar con relativa facilidad a una incubadora o un
reactor de tanque agitado. Sin embargo, como el volumen del reactor aumenta,
se genera calor y no se puede mantener de manera significativa durante la
aireacin y agitacin. La capacidad de enfriamiento puede ser entregado a un
gran fermentador mediante el uso de un recipiente con camisa suministrado
con refrigeracin o agua fra, o el recipiente puede tener serpentines de
refrigeracin internos o los vasos pueden estar situados al aire libre y ser
rociados con agua para provocar el enfriamiento por la prdida por
evaporacin.
Las Considerablemente diferentes en
los reactores donde la capacidad de
refrigeracin se suministra por el uso
de enfriamiento interno y se enfra,
esto puede interferir con
caractersticas de aireacin. Los
fenmenos reportados como ms
relevantes en el escalado de
bioprocesos,
Algunos parmetros de escalado no pueden ser mantenidos por economa o
por factores geomtricos. El nmero de Reynolds y los tiempos de mezclado
normalmente se incrementan (Nienow, 2001).
Las variaciones ms significativas en el escalado ascendente se refieren a
cambios bruscos en las condiciones ambientales que experimentan los
microorganismos, debido a largos tiempos de mezclado y a la formacin de
compartimentos. Las condiciones hidrodinmicas son otro cambio que
experimentaran las clulas.
Los microorganismos experimentan cambios en las condiciones
hidrodinmicas, dependiendo de su tamao. Sin embargo, las enzimas y las
bacterias pueden ser tan pequeas, que no se ven afectadas por estrs
dinmico del fluido. Adems, se ha mostrado experimentalmente, en el caso de

microorganismos filamentosos, que hay modificacin de la viscosidad de los

medios, razn por la cual se presentan problemas de transferencia de masa,
transferencia de energa y mezclado. Por tal motivo, se recomienda tener en
cuenta el anlisis de rgimen (el efecto de los gradientes de oxgeno y de
concentracin).
PROCESOS METABOLICOS AFECTADOS POR EL ESCALAMIENTO
Agitacin y estrs hidrodinmico
La agitacin es una operacin fsica que aumenta la homogeneidad del medio
de cultivo, disminuyendo los gradientes de concentracin y temperatura,
evitando la sedimentacin de las clulas (CHATTOPADHYAY S, 2002) (ZHONG JJ,
2002) y controlando el tamao de los agregados celulares. La agitacin, al
igual que la aireacin, genera fuerzas hidrodinmicas sobre las clulas en
suspensin, lo que se traduce en una respuesta metablica que depende del
tiempo, la intensidad de la exposicin y las caractersticas fisiolgicas de estas
clulas (KIERAN P, 1997)
En los procesos de agitacin es posible mantener constante la velocidad del
impulsor o el tiempo de mezcla. Se ha encontrado que tiempos de mezcla
elevados afectan el crecimiento debido a la formacin de zonas muertas dentro
del reactor que presentan una mayor limitacin a la transferencia de oxgeno,
mientras que tiempos de mezcla pequeos favorecen el incremento de la
densidad celular debido a una mayor homogenizacin del medio de cultivo.
(CHATTOPADHYAY S, 2002)
Una forma de entender los efectos de estrs hidrodinmico sobre los cultivos
es a travs de la teora de Kolmogorov, segn la cual durante la agitacin se
forman remolinos de diferentes tamaos; los mayores extraen energa del flujo
principal, mientras que los ms pequeos interactan directamente con las
clulas, hacindolas rotar y en ocasiones causando daos a la pared celular
cuando remolinos con rotaciones contrarias y tamaos menores al de la clula
entran en contacto con sta simultneamente.
Un hecho importante relacionado con la sensibilidad al estrs de corte en
cultivos celulares, es que el aumento de la viscosidad en el medio tiene un
efecto de proteccin contra las fuerzas de cizalla, pues un incremento en sta
disminuye las condiciones de turbulencia (JOSHI JB, 1996) (M & E., 1999). En
clulas vegetales se ha demostrado que en ciertas lneas celulares una
respuesta subletal al estrs de corte es la secrecin de glicoprotenas, las
cuales incrementan la viscosidad del medio de cultivo (JUREZ-SNCHEZ M,
2002).
Adicionalmente, se ha explorado el efecto de la adicin de suplementos
viscosos al medio de cultivo, encontrndose efectos favorables en la
produccin de antocianinas por Vitis vinfera
Aireacin y transferencia de oxgeno
Composicin y concentracin de ciertos compuestos gaseosos (oxgeno,
dixido de carbono y etileno, entre otros) en el medio de cultivo, es
determinante en el crecimiento celular y la sntesis de metabolitos secundarios
(LEE-PARSONS C,
2005) (TRUNG N, 2006), estas concentraciones dependen de varios factores,
como la temperatura, la presin, el flujo de aireacin y la composicin de los
gases de alimentacin.
El oxgeno favorece el crecimiento celular hasta cierto valor de Concentracin,
despus del cual tiene efectos inhibitorios debido al estrs oxidativo; sin

embargo, en algunos casos este efecto ha favorecido la acumulacin de

metabolitos secundarios (LEE-PARSONS C, 2005) (TRUNG N, 2006)