COLORAO DE GRAM

Introduo
A colorao de Gram um importante teste realizado nos laboratrios
de microbiologia, sendo um recurso importante no diagnstico de doenas
bacterianas. A partir de um certo perfil tintorial as bactrias coram-se de azulvioleta ou de rosa e consequentemente so classificadas como Gram-positivas
ou Gram-negativas, respectivamente. O mtodo da colorao de Gram
baseado na capacidade das paredes celulares de bactrias Gram-positivas de
reterem o corante cristal violeta no citoplasma durante um tratamento com
etanol-acetona enquanto que as paredes celulares de bactrias Gramnegativas no o fazem.
A tcnica de colorao de Gram envolve uma srie de procedimentos
antes de chegar etapa final de leitura da lmina preparada: envolve a
confeco do esfregao, sua fixao e passa pela colorao propriamente.
Nesta, o corante Cristal Violeta adsorve-se nas clulas, forma um complexo
com o iodo (Lugol) e aps a etapa diferencial, com lcool-acetona, as clulas
so contra-coradas com Fucsina de Gram. (FREITAS, Valdionir da Rosa e
PICOLI, Simone Ulrich. A Colorao de Gram e as variaes na sua execuo,
2007.)

Objetivos
O a prtica de Microbiologia ministrada pela Professora Viviane
Marcelino, foi Colorao de Gram. Essa aula tinha como objetivo compreender
os passos necessrios para realizar a colorao de Gram e diferenciar as
bactrias em Gram Negativas e Gram Positivas.

Procedimento de Colorao GRAM

Primeiramente colhemos o material a ser fixado e corado, de um dos
nossos colegas. A coleta feita com cuidado para que o swabe no toque a
lngua, por isso usa-se um abaixador para isola-la, e com um movimento
delicado passa-se o swabe em uma das tonsilas palatinas.

Aps isso, partimos para a confeco do esfregao. Lavamos a lmina

com gua destilada, secamos, e passamos o swabe, j com o material recm
coletado, sobre a mesma. Aps isso coramos com Cristal de Violeta por 60
segundos. Depois, lavamos com esguicho de gua destilada.
Logo aps, cobrimos com Lugol por mais 60 segundos; novamente
lavamos com gua destilada.
Fizemos ento a descolorao com Alcool 95%, por 10 ou 20
segundos; e novamente lavamos com gua destilada.
Logo aps isso, coramos com Fucsina por 60 segundos; depois,
lavamos com gua destilada, esperamos secar e fomos observar ao
microscpio.

Resultados
Foi observada ao microscpio apenas algumas bactrias Gram
positiva,

visivelmente

coradas

de

azul-violeta

possivelmente

no-

patognicas. As bactrias Gram-positivas retm o cristal-violeta e se

apresentam com colorao azul-violeta, enquanto as Gram-negativas ausentes
na amostra so descoradas pelo lcool-acetona, sendo, portanto, coradas pela
safranina e se apresentam rseas.