Biosntesis

del
peptidoglicano

Paredes bacterianas
Por que las estudiamos ?
Es una caracterstica definitoria de la clula bacteriana

Estn constitudas por componentes qumicos nicos.

Algunos de estos componentes pueden causar enfermedad.

La biosntesis es el sitio de accin de los antibiticos ms

importantes

Recordamos..

Peptidoglycan
cable

Wall-associated
protein

Teichoic acid

Cytoplasmic membrane

Peptidoglycan Lipoteichoic
acid

O-specific
polysaccharide

Core polysaccharide
Lipid A

Protein

Out

Lipopolysaccharide
(LPS)
Porin
Outer
membrane

8 nm

Cell
wall
Phospholipid
Periplasm

Peptidoglycan
Lipoprotein

Cytoplasmic
membrane

Outer membrane
Periplasm
Cytoplasmic
membrane

In

Etapas de la sntesis
Sntesis de precursores en el citoplasma
Ensamblaje parcial en la membrana
Modificaciones del precursor
Transporte a la cara externa de la membrana??
Ensamblaje final en el exterior??
Reciclado del undecaprenol fosfato

Reacciones citoplasmticas

11

Reacciones citoplasmticas
1-Biosntesis de UDP-N-acetilglucosamina
Requiere de cuatro enzimas
1. Glucosamina 6-P-sintasa (GlmS)
2. Fosfoglucosamina mutasa (GlmM)
3. Glucosamina-1-P-acetiltransferasa (GlmU)
4. N-acetilglucosamina 1-P-uridil transferasa
(GlmU)

+Pi

Reacciones citoplasmticas
2-Biosntesis del UDP-N-acetilmurmico
Intervienen dos enzimas
MurA: transfiere el grupo enol del PEP
al 3-OH del UDP-GlucNac liberando Pi
MurB: reduce el enol piruvatodel UDPGlcNAc-enol-piruvato utilizando un
equivalente de reduccin del NADPH
para dar el UDP-MurNAc

Reacciones citoplasmticas
3-Biosntesis del UDP-MurNAc-pptido
Intervienen cuatro enzimas llamadas Mur ligasas
MurC, D,E y F.
Catalizan la adicin de L-alanina, D-glutmico, un
diaminocido meso-DAP o L-lisina y el dipptido
D-Ala-D-Ala en el grupo lactilo del UDP-MurNAc

Mecanismo de reaccin de las ligasas Mur

Reacciones anexas

MurI: D-glutamato racemasa y Daminocido transferasa (D-AAT)

que cataliza ota reaccion
D-Ala +a-cetoglutarato ~ Dglutamanto + piruvato

La formacin del D-Ala es

producida por
la alanina racemasa( Air o DadX)
La condensacin de dos
moleculas de Ala es catalizada por
una D-Ala:D-Ala ligasa
dependiente de ATP (Ddl)

Sustratos de las vas metablicas: UTP, PEP,NADPH,ATP,AcCoA

UDP-

UDP-

Etapas de membrana

P
PPO4=
P

Metabolismo de undecaprenil fosfato en bacterias

Farnesil pirofosfato(C15)

8 isopentenil pirofosfatos (C5)

Undecaprenil pirofosfato
esencial

Undecaprenol

Undecaprenil -fosfato

Biosntesis de varios polmero de pared

(peptidoglicano, cidos teicoicos, LPS, cpsula
etc)

Biosntesis del Lpido I

Biosntesis del Lpido I

C55-P + UDP-MurNAc-pentapptido

UMP+ C55-PP-MurNAc-pentapptido (lipid I )

MraY

Mecanismo cataltico en dos pasos

Mecanismo cataltico en un solo paso

Fosfo-MurNAc -pentapptido traslocasa

Biosntesis del Lpido II

Membrana citoplasmtica

MurG

Lpido II

Lpido I

Modificacin enzimtica del Lpido II y flipasa

Puente de Gly

Peptidoglycan

Cytoplasmic
membrane

Transglycosylase
activity

Growing point
of cell wall

Autolysin
activity

Out

In
Pentapeptide

Bactoprenol

Etapas externas en la biosntesis del peptidoglicano

Bactoprenol con una cadena creciente de peptidoglicano

Reacciones del lado externo

Transpeptidasa

Transglicosilasa

Hltje J Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1998;62:181-203

Reaccin de transglicosilacin
Liberacin de ppB

Detalles de la reaccin de transglicosilacin:

El extremo reductor del MurNAc del pptido naciente es
transferido al 4-OH de la GlucNAc enlace b-1-4
y se libera C55-PP

Scheffers D , and Pinho M G Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2005;69:585-607

Reaccin de transpeptidacin

Reaccin de transpeptidacin

Reaccin de transpeptidacin
Dos
cadenas
de PG

Paso de activacin

Formacin del
intermediario
PG-EZ (acil-EZ)

Alanina desplazada

Reaccin de transpeptidacin

Ciclo del lpido transportador

Reciclado del bactoprenol

v

BacA

Hidrolasas del peptidoglicano

Tienen roles relevantes en el crecimiento del PG, divisin celular , espesor del
PG y forma de la bacteria.
Las enzimas encargadas son llamadas autolisinas: rompen enlaces glicosdicos
y amida.

En E. coli algunas son

D,D-Carboxipeptidasas (PBP 5, PBP4B, PBP6, PBP6B)
D,D-Endopeptidasas (PBP 4 y PBP 7)
Amidasas
LT Transglicosilasas lticas

Hidrolasas del peptidoglicano

en E.coli

Hidrolasas del peptidoglicano

Remodelado del peptidoglicano

Al comienzo el nuevo material incorporado tiene distinta composicin que el PG
preexistente. En fase estacionaria de crecimiento, el crecimiento del PG es mas lento y
remodela la estructura

Maduracin

1-aumento de los entrecruzamientos D,D

2-incremento en la proporcin de LppB unida a PG
3- perdida de la D-Ala terminal de los pentapptidos
no entrecruzados por accin de las carboxipeptidasas
4- entrecruzamientos L,D
5-cambios en la longitud de las cadenas de PG
6-Modificaciones secundarias, polmeros de
superficie acetilaciones y amidaciones que protegen
de la accin de la lizosima

PG nuevo adquiere una estructura indistinguible del PG de la clula

Estructuras en el PG maduro

Reciclado de murena

Peptidoglicano sintasas y protenas del ciclo celular

Las protenas del citoesqueleto controlan la posicin de las sintasas y las hidrolasas

Crecimiento de la pared de bacilos

Crecimiento en longitud (elongacin), mientras la
clula crece en tamao. PBP1 elongan las cadenas
de PG naciente
PBP4 y PBP5 cortan enlaces preexistentes
PBP2 Tpasa
Produccin del tabique transversal (septacin), que
conduce a la formacin de dos clulas hijas .FtsZ,
PBP3 o FtsI

Crecimiento de la pared de Cocos

Es zonal

Las formas L de B. subtilis sin pared no utilizan la maquinaria de divisin normal

Utilizan un sistema de tubulacion vesiculizacion y ampollas
independiente de MreB y FtsZ
Reminiscencia de reproduccin de las clulas primitivas

Pared de Gram negativas

LPS

El lipopolisacrido
A.G. saturados
(C-14): betahidroximirstico

Unidad repetitiva de
la cadena lateral

Ncleo externo

Los dominios Lpido A y Kdo son requeridos para el crecimiento

Los azcares del antgeno O no son necesarios para el crecimiento,
pero protegen de los antibiticos y la lisis mediada por el complemento
El ncleo y el antgeno O son requeridos para la virulencia

Ncleo interno

Glucosamina(16)glucosamina, con
OH en 1
sustituido con Petanolamina

Composicin del lipopolisacrido (LPS)

Lpido A: endotoxina, estructura conservada

Regin intermedia: ncleo del polisacrido,

estructura conservada, se divide en NI y NE

Regin distal o antgeno O: cadena lateral

especfica, polisacardica, son repeticiones de
pocos azcares, muy variable.

Biosntesis del LPS

La sntesis del LPS se divide en dos procesos
claramente diferenciados:
la formacin del lpido A y del ncleo del LPS, y

la sntesis del antgeno O.

Una vez sintetizados estos dos componentes tiene
lugar la unin de los mismos, su modificacin y
transporte hacia la membrana externa

Biosntesis del Lipido A-Va de Raetz

Enzimas constitutivas de la va del Lpido A

WaaA

Wickner W T et al. PNAS 2011;108:17255-17256

Ncleo del polisacrido

Ncleo interno : a-ceto deoxi octulnico (KDO )y D, D Heptosa o D,L heptosa
regin de las heptosas (pueden tener decoraciones)
Ncleo externo : glucosa, galactosa y N-acetilglucosamina ( regin de las hexosas)
pueden tener decoraciones

El KDO se agrega al lpido A por la Kdo sintasa (esencial para la viabilidad de las bacteria)
Luego se agregan las heptosas que son sintetizadas por una isomerasa que cataliza la
conversin de la sedoheptulosa 7-fosfato a D,D-heptosa-7-fosfato que por accin de otras
enzimas se llega a ADP-L,D Heptosa ( paso esencial para la integridad de la ME)

Variantes del ncleo interno de E .coli

Ncleo del polisacrido: se ensambla a partir

de precursores activados con nucletidos

Transferasas implicadas en la biosntesis del ncleo de E. coli R1. Las enzimas que forman el
ncleo interno estn marcadas en amarillo, mientras que las que modifican la estructura
estn en azul. Las verdes son las glicosiltransferasas del ncleo externo y la ligasa est
marcada en rosa. Raetz y Whitfield, 2002.

Biosntesis del antgeno O

El antgeno O es la parte ms externa del LPS y a su vez la ms inmunognica y
variable.
Algunos precursores se obtienen del metabolismo central de la bacteria.
UDP-glucosa, de la UDP-galactosa o de la UDP-N-acetilglucosamina, que se
incorporan directamente al polmero en formacin, o son intermediarios
De GDPmanosa, TDP-ramnosa y otros azcares presentes exclusivamente en los diversos
antgenos O.
Se forma sobre el undecaprenil-P
Intervienen glicosiltransferasas
Los oligosacridos se forman en la cara interna de la MI y luego son traslocados.
El antgeno O se ensambla separadamente sobre el undecaprenil-P y es traslocado por un
transportador putativo Wzx. Los oligosacridos son polimerizados en la cara periplsmica de
la membrana interna por Wzy y Wzz y luego trasferidos al lpido A por WaaL.
.

Transporte del LPS nuevo

Diferenciaciones en la clula procariota

1-Diversidad
2- Esporas bacterianas
Observacin
Composicin qumica y estructura
El proceso de eporulacin
Propiedades biolgicas de las esporas
Germinacin
3- Otras clulas diferenciadas
Quistes bacterianos
Mixosporas
Acinetos

Que son las esporas

Son estructuras de latencia o reposo
Con baja o nula actividad metablica
Muy resistentes
Son consecuencia de cambios morfolgicos y bioqumicos: de

Diferenciacin celular
Endosporas
Exosporas
Diferenciaciones de actinomicetos
Quistes bacterianos
Mixosporas
Diferenciaciones en cianobacterias
Acinetos o aquinetos

Bacilos
Bacillus
Clostridium
Cocos
Sporosarcina

Gnero Bacillus

Gnero Clostridium

Patgenas humanas y de animales.

Inters industrial por su capacidad de producir antibiticos (gnero
Bacillus).
Importancia agrcola al ser utilizadas como plaguicidas biolgicos.
Algunas alteran los alimentos.
Saprofitos del suelo.

Localizacin

Coloracin de Shaefer y Fulton

Localizacin: Es til como criterio

taxonmico,
pueden estar en el medio terminales,
deformantes

Observacin de las esporas

Microscopio ptico

Cunto puede vivir una espora?

Los datos publicados sobre la longevidad de
las endosporas indican que pueden
permanecer viables durante varias dcadas
y probablemente mucho tiempo ms
segn las condiciones a las que est
sometida.

Estructura fina de las esporas

Protoplasto o
ncleo ("core", en ingls), con
la MIC de la espora
(membrana esporal interna).
Pared de la espora
(= Germen de la pared de la
futura clula vegetativa).
Corteza o crtex, rodeado
externamente de la
membrana esporal externa.
Cubiertas.
Exosporio (no universal: las
esporas de algunas especies
carecen de l).

Esporas bacterianas

Protoplasto o Ncleo ( core)

Citoplasma muy deshidratado (10
-30%)
contiene dipicolinato de calcio
Contiene el cromosoma, pocos
ribosomas, ARNt, ARN polimerasa,
mono y di nucletidos pero no tri
nucletidos (no ATP).
Carece de componentes
inestables:
~No ARNm
~No enzimas biosintticas
~No aminocidos ni bases
nitrogenadas
~No cofactores reducidos (NADH,
Espora de Bacillus cereus http://www.shef.ac.uk/mbb/staff/moir-a
CoA, etc.)

Protoplasto o Ncleo ( core)

cido dipicolnico

El citoplasma est muy deshidratado con altas concentraciones de

ion Ca++ (1-3% del peso seco de la espora), y de cido dipicolnico
(DPA) (10% en peso); forman dipicolinato clcico (DPC), una
sustancia exclusiva de las esporas bacterianas. Reserva de Ca++

Protoplasto o Ncleo ( core)

-Gran cantidad de pequeas
protenas especiales, las pequeas,
cidas, solubles (SASP) que
mantienen le pH ms bajo que en la
clula vegetativa.
-Durante la germinacin se usarn
como fuente de C, E y AA.
-Acomplejan el ADN: protegen de
las radiaciones UV.
-Fuente de energa: 3fosfogliceratoPEP
pH es una unidad menor que el
citoplasma de la cel. vegetativa

Pared de la espora
Se encuentra inmediatamente por encima de la membrana interna
de la espora
Composicin: a base de un PG similar al de la clula vegetativa, con
sus caractersticos enlaces entre los tetraptidos
Funciones: al germinar la espora, dar lugar a la pared celular de la
nueva clula vegetativa, confirindole, mientras tanto, resistencia
osmtica
Origen: se sintetiza a partir de la prespora

Corteza o cortex

Cortex

Al microscopio electrnico:. Es gruesa, transparente a electrones, lminas concntricas

Formado de un PG especial
30% del NAM tiene tetrapptidos normales, pero el grado de entrecruzamiento es muy
bajo (6%).
15% del NAM tiene solo la L-ala inicial, en lugar de tetraptido.
55% de una modificacin del cido murmico (lactama del cido murmico), producida
por condensacin del -COOH lactilo con el -NH2, para formar la lactama
correspondiente).Gran resistencia a la lizosima.

Corteza o cortex
Origen: a partir de la clula madre.
Tiene un bajo grado de
entrecruzamiento:
-Estructura ms laxa, floja y flexible
que el PG normal es capaz de
expandirse o contraerse.
-Rpida autolsis durante la
germinacin.
La lactama del murmico
presenta gran resistencia a la
lisozima.

Cubiertas
Aspecto muy voluminoso,
distinto segn especies.
Partes densas a los
electrones.
Formada de una o ms
protenas de tipo queratina,
ricas en Cys y AA
hidrfobos.
Bacterial endospores. Panel A shows endospores from B. subtilis one of which is still retained within
the rod shaped 'mother cell'. In B. subtilis, spores are approximately 1.2 m in length and are
ellipsoidal. Released spores have a clear protective shell known as the spore coat and is comprised
of as many as 25 different protomeric components assembled into discrete layers. Panel B shows a
typical SDS-PAGE (12.5%) fractionation of solubilised spore coat proteins revealing predominant
species. Ricca and Cutting Journal of Nanobiotechnology2003

Estructura insoluble e
impermeable que impide la
entrada de numerosos
agentes qumicos agresivos,
incluyendo txicos

Exosporio
Estructura membranosa
transparente, a modo de
saco delgado y flojo a base
de protenas, polisacridos
complejos y lpidos
Muy resistente a enzimas
proteolticas

El proceso de esporulacin.. Cuando???

El proceso de esporulacin
Comienza cuando cesa el crecimiento
exponencial.( 5-8 hs para B. subtilis)
Se desencadena por una limitacin
nutricional, un estado de inanicin
El nutriente limitante que puede
desencadenar la esporulacin puede
ser:
La fuente de C, N o de P (GTP)
Las fases se nombran con un nmero
romano (I, II,....VII).
Se suele indicar los lmites de tiempo
en los que transcurre la fase (ej: t2-t3
significa que la fase transcurre entre la
2 y la 3 hora)

Fase 0

La clula se encuentra en la etapa final de

crecimiento exponencial y contiene dos
cromosomas.

Fase I (t0-t1)
Los dos cromosomas se condensan formando un filamento.
Se inician dos tabiques, cada uno cerca de un polo (espculas de PC hacia el
interior).
Se degradan protenas viejas y los aminocidos se emplean en fabricar
protenas especficas de la esporulacin.
se forma el septo con una capa muy delgada de PG

Fase II
Se termina el septo acntrico en uno
de los polos (el otro septo no se
completa, aborta).
Segregacin de cromosomas
Cada nucleoide queda en un:
-Compartimiento pequeo,
la prespora. 30%
-Compartimiento grande la clula
madre.
Sigue sntesis de antibiticos y
exoenzimas (proteasas, amilasas,
ribonucleasas, etc.).

SPOIIIE

Fase IV

Fase V
Deposicin de materiales de las cubiertas por fuera de
la membrana externa de la espora.
Contina la acumulacin de DPA, que secuestra iones
Ca2+para formar el DPC en el protoplasto.

Fase VI (t5.5-t7)
Maduracin de prespora a endospora.
Maduracin de la corteza (PG especial, ms laxo, con pocos
entrecruzamientos).

Maduracin de las cubiertas.

Citoplasma se hace ms
homogneo y denso a los
electrones.
Resistencia al calor y al
cloroformo.
Resistencia a las radiaciones
UV.
Resistencia a la lisozima.

Fase VII (t7-t8)

Autolisis de la clula madre y liberacin de la espora.

El exosporio pierde agua y se pega a las cubiertas.

Propiedades de las endosporas

Resistencia al calor. Es una consecuencia de los cambios que
llevan a la deshidratacin como medio de lograr la el estado de
dormancia y baja tasa metablica. Algunas resisten 120C
durante 15 minutos lo que condiciona los parmetros para
esterilizar
La tasa metablica ms baja
Permite la supervivencia en ambientes desfavorables
DNA protegido por cido dipicolnico y protenas SAPS
Luego de la activacin por stress, la disponibilidad de
nutrientes dispara la germinacin y el crecimiento
Dormancia. Gran inercia a los sustratos exgenos, la espora
slo perder la dormancia cuando se haya activado para la
germinacin.

Propiedades biolgicas de las endospora

Deshidratacin. Mecanismo:
~El DPA va entrando al protoplasto de la espora
~El Ca2+entra a la espora se forman quelatos de DPC.
~La corteza se queda sin cationes, las cargas negativas del PG
cortical se repelen, la corteza se expande, se topa con las
cubiertas y hay extraccin de agua del protoplasto.
~El protoplasto queda muy deshidratado, con componentes
inmovilizados.

Propiedades biolgicas de las endospora

Resistencia a los rayos UV:
~Absorcin de UV por cubiertas.
~Presencia del DPC.
~Las protenas SASPs forman complejos con el ADN.
~Por la deshidratacin del protoplasto no se generan dmeros
de pirimidina.
Resistencia a los agentes qumicos. Debida principalmente a
la gran impermeabilidad de las cubiertas(grosor, composicin
a base de protenas ricas en aminocidos hidrfobos y con
abundantes puentes disulfuro.

Germinacin de la endospora
Fases:
Preactivacin
Activacin
Germinacin
Terminacin

Crecimiento ulterior (entrada en

fase vegetativa)

Alternancia entre dos estados morfogenticos

Fenmenos bioqumicos asociados

a la esporulacin

Produccin de cuerpos o cristales paraesporales

Producidos en algunas especies: Bacillus
thuringiensis y B. popiliae.
Cristales proteicos octadricos (bipiramidales)
formados en el esporangio durante la
esporulacin.
Agregacin regular de subunidades de una
glucoprotena de 120 kD en fase IV de
esporulacin (protenas Cry), en la clula
madre
Son poderosos insecticidas ecolgicos,
especficos frente a larvas de: colepteros y
dpteros.
En agricultura plantas BT manipuladas
genticamente, que producen en sus tejidos
protenas Cry
Evita el uso de pesticidas qumicos

Toxinas Cry

Toxinas Cry

Acta como insecticida.

Oruga ingiere materia vegetal con bacterias esporuladas que
producen Cry.
La protena Cry se disuelve en el tracto digestivo. El pH alcalino
provoca la proteolsis que activa a la toxina.
La toxina altera la permeabilidad del epitelio intestinal, pasa a la
hemolinfa lo que provoca la parlisis y muerte de la larva.

Produccin de antibiticos
En la Fase II de la esporulacin se produce la sntesis de sustancias antimicrobianas
De naturaleza peptdica
Edenas Pptidos lineales bsicos que inhiben la sntesis de ADN
Bacitracina Pptidos cclicos que inhiben la sntesis del PG
Polimixinas Pptidos lineales que modifican la estructura y funcin de la Membrana

Polimixina

Exosporas
Son esporas externas, son resistentes slo a calor y desecacin y no
contienen DPA. Podemos encontrar exoesporas en el gnero
Methylosinum (bacterias que oxidan metano) y Rhodomicrobium.
Estas bacterias forman esporas reproductivas por gemaciones sucesivas
al final de sus prostecas. Estas exosporas poseen una envuelta a base de
pared rodeada de una cpsula o cubierta gruesa.

Actinomicetos-Streptomyces

Lim de nutrientes

1
2

Propiedades de las esporas de los estreptomicetos:

la pared celular de la espora es ms gruesa que la de la
clula vegetativa;
no hay cambio cualitativo en el peptidoglucano;
no hay crtex ni cubiertas;
son muy hidrofbicas

Quistes o Cistos bacterianos

Quistes o Cistos bacterianos

Mixosporas-Mixobacterias
Microquistes de Mixobacterias,
llamados mixosporas.
Sus envolturas constan de una
corteza, rodeada de cubiertas
(interna y externa).
Estas cubiertas se componen de
una glucoprotena muy rica en
polisacridos.
Son resistentes al
calor, desecacin,
A radiacin UV

Heteroquistes y Acinetos
Son diferenciaciones que aparecen en Cianobacterias
Los heteroquistes son clulas especializadas en la fijacin de N2
para proteger la nitrogenasa EVITAN difusin de O2
Engrosamiento de la pared celular, carencia de ficobilisomas y
realizan fotofosforilacin cclica

Acinetos

Acinetos