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MICROSCPIO TICO
1. Definio
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- tica
A parte tica composta por um conjunto de meios transparentes que conduzem o feixe
luminoso usado na microscopia. As lentes so reunidas em dois sistemas: oculares e objetivas.
a) Oculares: as oculares so formadas por sistemas de lentes cuja posio est sempre
prxima ao olho do observador. Sua finalidade recolher a imagem aumentada, vertical e direta.
Como a imagem que a objetiva fornece invertida, a imagem final do microscpio ser tambm
invertida. As oculares so formadas por duas lentes, a superior (lente ocular) e a inferior (lente do
campo ou coltica).
b) Objetivas: as objetivas, situadas sempre prximas do objeto que observado no
microscpio, constituem-se em sistemas centrados de lentes convergentes que formam uma
imagem real e invertida do objeto. Essa imagem acompanhada pela ocular e tornada definitiva.
Chamam-se objetivas a seco quando so empregadas, usando ar entre a objetiva e o objeto
examinado e chamam-se objetivas de imerso quando se coloca um leo transparente, de ndice
de refrao o mais prximo possvel da lente, entre esta e o objeto. O leo usado leo de cedro
ou sucedneo sinttico com a facilidade de tornar mais claro o campo do microscpio, o que
acontece quando o leo homogeneza o meio tico entre esses dois elementos.
A parte tica tambm compreende o sistema tico de iluminao que consiste de:
c) Fonte Luminosa: pode ser distante, como a luz solar ou prxima como a luz de uma
lmpada. Os microscpios modernos, mais aperfeioados, possuem uma lmpada embutida.
d) Diafragma-ris: quando for conveniente, pode-se limitar parte dos raios perifricos
que chegam ao objeto. Para tanto, o microscpio dispe de um diafragma-ris que permite
diminuir a abertura de entrada do feixe luminoso.
e) Condensador: conjunto de lentes situado entre a fonte de luz e o objeto, cuja
finalidade atuar no feixe de luz, produzindo um feixe com dimetro definido e uniforme e com
uma maior intensidade luminosa.
f) Filtros: os filtros so discos de vidro colorido ou recobertos com gelatina colorida que
absorvem uma parte das radiaes luminosas que atingem o objeto, permitindo utilizar faixas
estreitas de comprimento de onda proporcional, para uma dada objetiva, ao comprimento de onda
da luz empregada. O uso dos filtros pode favorecer grandemente a absoro aumentando o poder
de resoluo. Alm do mais, usando filtros de cores complementares possvel aumentar o
contraste entre estruturas de formas pouco diferenciveis.
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4. Limite de Resoluo refere-se menor distancia que deve existir entre os dois pontos
mencionados, de modo que ainda apaream individualizados na imagem formada pelo sistema
tico utilizado. O limite de resoluo (L.R.) depende do comprimento de onda de luz utilizada
() e da abertura numrica da objetiva (AN).
Portanto: L.R. =
K.
AN
onde, K e uma constante e vale 0,61 e igual a 0,55 para a luz branca. Portanto, o
limite de resoluo o inverso do poder resolutivo, de modo que, quanto maior for o poder de
resoluo menor ser o seu limite.
O poder de resoluo do aparelho depende essencialmente da objetiva, ou seja, de sua
abertura numrica (A.N.) e do comprimento de onda de luz utilizada. Quanto maior for a
abertura, maior o poder e, quanto menor for o comprimento de onda de luz utilizada, maior o
poder de resoluo da objetiva.
A abertura numrica depende do ndice de refrao do material colocado diante da
objetiva.
AN = n. sen
Sendo n = ndice de refrao do material intercalado entre a lmina e a objetiva (leo de
imerso, glicerina, gua, etc...); sen = abertura angular da lente objetiva (valor fornecido pelo
fabricante).
Logo, aumentando-se o valor de n, aumentamos tambm o valor de AN. Isso significa
que maior quantidade de luz penetrar na lente objetiva, perdendo-se menos luz por refrao e
reflexo.
As objetivas de imerso so tambm utilizadas menor distncia do objeto, o que
tambm contribui para captarem maior quantidade de luz dele proveniente.
Obs: leo: n = 1,52
ar: n = 1,00
5. O Aumento Final conferido pelo M.O. o produto do aumento conferido pela lente objetiva e
pela lente ocular (objetiva x ocular).
O olho humano desarmado tem um poder de resoluo de aproximadamente 0,2 mm e o
microscpio tico em torno de 0,2 m.
6. Iluminao de Khler
Esse mtodo de iluminao foi idealizado por A. Khler e proporciona um melhor
rendimento do sistema tico, sendo, portanto, imprescindvel para uma microscopia ou
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fotomicrografia de qualidade. Para a obteno da iluminao deste tipo devem-se realizar as
seguintes manobras:
1) Focalizar o preparo microscpico, com a objetiva 3,2X (ou 4X).
2) Fechar o diafragma ris do condensador, utilizando-se da alavanca. Excursionar o
parafuso do condensador para cima e para baixo at que se observem as bordas do diafragma em
foco (Figura 1)
3) Acionar os parafusos de centralizao do condensador at que a imagem do
diafragma fique bem no centro do campo (Figura 2)
4) Abrir o diafragma do condensador at que encha o campo (Figura 3)
5) Fechar gradualmente o diafragma do condensador, at que a intensidade luminosa
comece a diminuir.
OBS: Se o microscpio for dotado de diafragma de campo luminoso ou iluminador
(na base), nos itens 2 e 4 deve-se utilizar deste recurso no lugar do diafragma ris do
condensador.
7. Microscpio Estereoscpio
tambm um microscpio composto. Fornece imagens ampliadas de, no mximo,
algumas dezenas de vezes, permitindo assim a observao de objetos com dimenses maiores do
que os observados no microscpio composto propriamente dito.
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BIOLOGIA CELULAR
AULA PRTICA 1
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BIOLOGIA CELULAR
AULA PRTICA 2
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BIOLOGIA CELULAR
ANEXO DA AULA PRTICA 2
Assunto: Ciclose
1. Preparar uma lmina contendo dois ou trs pelos estaminais da flor da Tradescantia em gua e
cobrir com lamnula.
2. Observar que os pelos so filamentos formados por ns e interns, sendo que os interns so
constitudos por uma nica clula, em cujo interior pode-se observar o fluxo de organelas no
citoplasma perifrico e nas pontes citoplasmticas que cruzam o vacolo (ciclose).
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BIOLOGIA CELULAR
AULA PRTICA 3
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ANEXO DA AULA PRTICA 3
Assunto: Esfregao de sangue
1. separar duas lminas bem limpas, secas e desengorduradas
2. pingar uma gota de sangue na borda de uma lmina e, com a outra lmina posicionada num
ngulo de 45o, realizar o esfregao
3. deixar secar
4. cobrir a lmina com uma camada fina da soluo de Leishmann a 0,25% por 2 minutos
5. pingar 5 gotas de gua destilada
6. homogeneizar assoprando com uma pipeta e deixar repousando por 5 minutos
7. lavar em gua corrente e deixar secar
8. usar o procedimento acima para preparar esfregaos de sangue de um mamfero e de uma ave.
9. verificar que as hemcias de mamferos so anucleadas e a de aves (assim como as de anfbios
e rpteis) so nucleadas.
10.verificar a diversidade de formas do ncleo dos leuccitos.
ELEMENTOS FIGURADOS DO SANGUE (os nmeros referem-se espcie humana):
glbulos vermelhos = eritrcitos = hemcias
homens: 4,5 a 5,5 milhes/mm3
mulheres: 4 a 5 milhes/mm3
glbulos brancos = leuccitos (4.000 a 10.000/mm3):
granulcitos ou polimorfonucleados:
neutrfilos (50 a 70%)
eosinfilos (2 a 4%)
basfilos (0 a 1%)
agranulcitos:
linfcitos (20 a 30%)
moncitos (4 a 6%)
plaquetas
Estruturas a serem identificadas:
No esfregao de sangue de mamferos (humano, bovino ou ovino):
granulcito com ncleo lobulado (2 a 6 lbulos)
agranulcito com ncleo arredondado
hemcias anucleadas
No esfregao de sangue de aves (ou anfbios ou rpteis):
hemcias nucleadas
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BIOLOGIA CELULAR
AULA PRTICA 4
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ANEXO 1 DA AULA PRTICA 4
MITOSE - RAIZ DE CEBOLA:
Retirar os catfilos secos da cebola e com uma gilete cortar um pedao da
extremidade inferior (prato) retirando as possveis razes secas. Colocar a cebola sobre um borel
(copo, vidro de maionese, etc.) cheio de gua de maneira que apenas sua poro inferior fique
mergulhada. Depois de dois ou trs dias notar-se- o crescimento de diversas razes.
Procedimento:
1 - Com uma pina cortar da extremidade para cima cerca de 0,5 cm da raiz.
2 - Levar ao fixador Carnoy (3 partes de lcool : 1 parte de cido actico) por, no mnimo, 20
minutos.
3 - Hidrlise cida por 10 minutos.
soluo cida: 1 parte de HCl 1N (1 parte de HCl concentrado : 11 partes gua destilada) : 1
parte de lcool 95%
4 - Voltar ao fixador Carnoy por, no mnimo, mais 10 min.
5 - Sob lupa, separar o tecido epitelial (coifa) do meristema.
6 - Colocar uma gota do corante orcena lacto-actica na lmina e sobre ela depositar um pedao
de raiz (no mximo 3 pedaos).
Orcena lacto-actica: Orcena ---------------------- 1 g
cido actico glacial ---- 45 ml
cido ltico a 85% ------ 25 ml
gua destilada ----------- 30 ml
Dissolver a orcena na gua e juntar cido actico. Ferver. Juntar o cido ltico e deixar ferver
por alguns minutos. Esfriar. Filtrar. Conservar em geladeira.
7 - Quebrar (fragmentar) utilizando duas sondas exploradoras.
8- Colocar a lamnula e deixar de 5 a 10 min. para que ocorra a colorao.
9- Colocar a lmina com a lamnula entre papel higinico fino e proceder ao esmagamento,
pressionando os dedos sobre o papel.
10 Lutar (vedar) a lamnula com esmalte incolor.
11 Aps secar completamente, observar as diferentes fases da mitose (interfase, prfase,
metfase, anfase e telfase).
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ANEXO 2 DA AULA PRTICA 4
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BIOLOGIA CELULAR
AULA PRTICA 5
LISTA DE EXERCCIOS
CDIGO GENTICO. SNTESE PROTICA. REGULAO GNICA
0 1 - Q u a nt o s t ip o s d ife r e nt e s d e R N Am p o d e r ia m e s p e c ific a r a s e q nc ia
de a.a. MET-PHE-SER-PRO?
0 2 - C o ns id e r a nd o a s e q nc ia d e ba s e s nit r o g e na d a s d o D N A:
3 ' A C T T G C C C T A T A G T C 5 '*
5' T G A A C G G G A T A T C A G 3'
P e r g u nt a - s e :
a - Q u a l s e r ia a s e q nc ia d e ba s e s d o R N Am r e s u lt a nt e d a t r a ns c r i o
d a c a d e ia p o linu c le o t d ic a ma r c a d a c o m u m a s t e r is c o ? Q u a nt o s
c d o ns e s s e R N Am p o s s u ir ia ?
b - Q u a l s e r ia o a nt ic d o n d o R N A t r a ns p o r t a d o r p a r a o c d o n
5 'C U G 3 '?
03
- C o ns id e r a nd o a s e q nc ia d e ba s e s nit r o g e na d a s
c o r r e s p o nd e nt e a u m g e ne e s t r u t u r a l hip o t t ic o :
do
DNA
p o lip e p t d e o fo r ma d o a
c o ns e q nc ia s bio l g ic a s ?
p a r t ir
desse
D N A?
Q u a is
s e r ia m
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as
5 ' G G G AT G C C C T AC T C AAT G
T AT T T G AC AT T C AT T AAT C G 3 '
A
c - S e ho u ve s s e u ma mu t a o p o r s u bs t it u i o d e ba s e s ( A G ) no D N A
mo ld e na p o s i o a ba ixo ind ic a d a , q u a l s e r ia a s e q nc ia d e a . a . d o
p o lip e p t d e o fo r ma d o a p a r t ir d e s s e D N A? Q u a is s e r ia m a s
c o ns e q nc ia s bio l g ic a s ?
A
5 ' G G G AT G C C C T AC T C AAT G AT AT T T
AC AT T C AT T AAT C G 3 '
G
d - S e ho u ve s s e u ma mu t a o p o r d e fic i nc ia d e ba s e ( A) no D N A mo ld e na
p o s i o a ba ixo ind ic a d a , q u a l s e r ia a s e q nc ia d e a . a . d o p o lip e p t d e o
fo r ma d o a p a r t ir d e s s e D N A? Q u a is s e r ia m a s c o ns e q nc ia s bio l g ic a s ?
5 ' G G G AT G C C C T AC T C AAT G AT AT T T G AC AT T C AT T A T C G 3 '
A
e - S e o s e nt id o d a le it u r a d o R N Am d u r a nt e a t r a d u o fo s s e a o a c a s o ,
q u a nt o s p r o d u t o s d ife r e nt e s c a d a R N Am p o d e r ia s int e t iz a r ? P o r q u ?
f - Q u a l s e r ia a s e q nc ia d e a . a . d o p o lip e p t d e o s int e t iz a d o a p a r t ir d o
p o lip e p t d e o n o ma r c a d o d o D N A? E s t e p o lip e p t d e o d ife r e nt e
d a q u e le d o it e m a ? P o r q u ?
5 - Um dos tipos de sistemas regulatrios encontrados em organismos vivos o sistema indutivo e o
exemplo clssico o sistema da lactose em Escherichia coli, onde existe um gene regulador que
produz um repressor que, por sua vez, vai bloquear o operador, impedindo a sntese do RNA
mensageiro a partir dos genes estruturais que fazem parte do operon. Suponha uma clula com a
seguinte constituio:
i+
o+
y+
z+
---- -------- ---- ............ ----- -------- -------- -------- ----a - Na ausncia da lactose, vai haver produo de enzimas codificadas por y e z (genes estruturais)?
Por qu?
b - Se a lactose for adicionada ao meio, vai haver produo de enzimas a partir de y e z? Por qu?
c - Que vantagem voc acha que esse sistema oferece para a clula?
6 - Suponha agora que houve uma mutao no gene regulador (i+) de modo que ele se tornou i-, que
produz um repressor no ativo. Na ausncia de lactose vai haver produo de enzima por y e z?
Por qu?
7 - As seguintes mutaes podem ocorrer nos diversos genes que formam o operon da lactose em E.
coli?
+
i : fabrica substncia repressora que se torna inativa na presena de lactose
i- : no fabrica substncia repressora ativa
is : super-repressor insensvel presena de lactose
o+ : operador normal
oc : operador constitutivo, insensvel ao repressor, ativando permanentemente os genes estruturais
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o
Indutor ausente
Permease
-galactosidase
Indutor presente
Permease
-galactosidase
1) i+o+y+z+
2) i-o+y+z+
3) iso+y+z+
4) i+ocy+z+
5) i+ooy+z+
6) i-ocy+z+
7) i-ooy+z+
8) isocy+z+
9) isooy+z+
8 - Um outro sistema regulatrio aquele no qual o produto final de uma reao atua como o
repressor ligando-se a um apo-repressor inativo, ativando-o e tornando-o repressor completo.
o sistema repressivo. Suponha uma clula com a seguinte constituio:
R+
o+
G1+ G2+ G3+
---------------- ................ -------- ----------------- -------- -------- -------- ---
---------- apo-repressor
a - Explique como se d a produo de um produto final.
b - E se o produto final estiver em excesso na clula, haver produo de enzimas a partir de G1, G2 e
G3. Por qu?
9 - O lote haplide (n) de cromossomos de um cavalo (Equus caballus) contm 32 cromossomos. Em
relao a esse animal, pergunta-se:
a) Quantos cromossomos uma clula somtica possui?
b) Quantas clulas sero produzidas por mitose a partir de uma clula somtica aps um ciclo de
diviso e quantos cromossomos cada uma delas possuir?
c) Em que fase do ciclo celular o DNA (cido desoxirribonuclico) se duplica?
d) Que fase da mitose deve ser escolhida para a contagem e identificao dos cromossomos?
e) Quantos gametas sero produzidos por meiose a partir de uma clula germinativa e quantos
cromossomos tero cada um deles?
f) Quantas vezes e em quais momentos o DNA se duplica no processo de meiose?
g) O cruzamento de um asno (Equus asinus: 2n = 62) e uma gua levar a produo de hbridos
cujo nmero diplide de cromossomos ____.
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TABELA DO CDIGO GENTICO
1 posio
extremidade 5
U
U
U U U - P he
U U C - P he
U U A- L e u
UUG-Leu
UCU-Ser
UCC-Ser
UCA-Ser
UCG-Ser
U AU - T yr
U AC - T yr
U AA - *
U AG - *
U G U - C ys
U G C - C ys
U G A- *
UGG-Trp
3 posio
extremidade 3
U
C
A
G
CUU-Leu
CUC-Leu
CUA-Leu
CUG-Leu
CCU-Pro
CCC-Pro
C C A- P r o
CCG-Pro
C AU - H is
C AC - H is
C AA - G ln
C AG - G ln
C G U - Ar g
C G C - Ar g
C G A - Ar g
C G G - Ar g
U
C
A
G
AU U - I le
AU C - I le
AU A - I le
AUG-Met **
AC U - T r h
AC C - T r h
AC A - T r h
AC G - T r h
AAU - As n
AAC - As n
AAA- L ys
AAG - L ys
AG U - S e r
AG C - S e r
AG A - Ar g
AG G - Ar g
U
C
A
G
G C U - Ala
G C C - Ala
G C A - Ala
G C G - Ala
G AU - As p
G AC - As p
G AA - G lu
G AG - G lu
G G U - G ly
G G C - G ly
G G A- G ly
G G G - G ly
U
C
A
G
GUU-Val
G
GUC-Val
G U A- V a l
GUG-Val
* : c d o ns d e t e r mina o
* * : c d o n d e inic ia o
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BIOLOGIA CELULAR
AULA PRTICA 6
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BIOLOGIA CELULAR
AULA PRTICA 7
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BIOLOGIA CELULAR
AULA PRTICA 8
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BIOLOGIA CELULAR
AULA PRTICA 9