UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLE

SERVICIOS DE LABORATORIO: ANALISIS CLINICO II

ELABOPRADO POR: BIOQUIMICA MARLENE MEDRANO GUZMAN
GUIA PRCTICA MARZO /2016

HDL COLESTEROL
1. OBJETIVO: Determinar la concentracin de HDL Colesterol
en sangre
precipitando selectivamente las lipoprotenas de baja y muy baja densidad (LDL y
VLDL) determinando HDL colesterol en el sobrenadante con reaccin de punto
final.
2. DEFINICIONES:
HDL colesterol: Es una de las lipoprotenas ms ricas en colesterol que
contrarresta la accin nociva que pueda tener la LDL, sobre nuestro organismo
al evitar la arterioesclerosis excesiva.
3. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO:
3.1. Fundamento: El acido fosfotungstico y el cloruro de magnesio, que precipitando
selectiva y cuantitativamente las VLDL y LDL, permiten la obtencin de
resultados comparables al mtodo de referencia. Despus de la centrifugacin, el
colesterol HDL se determina en el sobrenadante utilizando el sistema enzimtico
colorimtrico colesterol medir la reaccin de punto a 505 nm.
3.2. Muestra: Suero
3.2.1. Cantidad: 250 ul.
3.2.2. Requisitos: No hemolizado, limpio y fresco
3.3. Equipos, materiales y reactivos:
3.3.1. Equipos:
Centrifuga
Espectrofotmetro (Stat Fax)
Bao mara a 37C
Vortex
3.3.2. Materiales:
Micropipetas :100 a 1000 ul
Tubos de hemolisis (tubos de Stat fax)
Reloj marcador
3.3.3. Reactivos:
Standard
Reactivo precipitante

Reactivo de Colesterol (reactivo de trabajo)

3.4. Procedimiento:
3.4.1. Precipitacin de las VLDL y LDL:
Enumerar los tubos,
Aadir 250 ul de suero + 250 ul de reactivo Precipitante.
Agitar vigorosamente por 30 segundos fundamental para la obtencin de
resultados consistentes.
Centrifugar a 3500 rpm por lo menos 15 min. para obtener un sobrenadante
lmpido
Pipetear el sobrenadante inmediatamente despus del centrifugacin teniendo
cuidado de no resuspender el precipitado para evitar resultados falsamente
elevados.
3.4.2. Reaccin Colorimtrica:
Enumerar los tubos de la siguiente forma:
REACTIVOS

BLANCO

STANDAR

DESCONOCIDO

Estndar
100 ul
Sobrenadante
100 ul
Reactivo de trabajo
1 ml
1 ml
1 ml
de colesterol
Mezclar en el Vortex e incubar 10 minutos a Bao mara a 37C
Realice la lectura comenzando por el blanco , estndar y muestra
Luego leer en el STAT FAX : N _____
Registrar los resultados e informar
5.4.3. Estabilidad de la mezcla de reaccin final:
El color de la reaccin final es estable 60 minutos por lo que la absorbancia
debe ser leda dentro de este lapso.
3.5. Valores de referencia:
HDL Colesterol:
Adultos
: mayor a 30 mg/dl
Nios y Adolescentes : mayor a 35 mg/dl
LDL Colesterol:
Adultos
: menor a 120 mg/dl
Nios y Adolescentes : menor a 110 mg/dl
VLDL Colesterol:
Adultos

: mayor a 30 mg/dl

Nios y Adolescentes : mayor a35 mg/dl

4. ANEXOS:
Anexo 1:
Sustancias interferentes conocidas:
Suero o plasma con hemlisis visible o intensa.
Valores por encima de bilirrubina de 5 mg/dl producen resultados falsamente
disminuidos y por encima de 750 mg/dl falsamente elevados.
Valores de bilirrubinas hasta 5 mg/dl, triglicridos hasta 750mg/dl,
hemoglobina hasta 180 mg/dl. No producen interferencias significativas.
Algunas muestras principalmente lipmicas pueden presentar el sobrenadante
limpio con una camada en su superficie que no debe ser pipeteado, para evitar
resultados falsamente elevados.
Anexo 2:
Linealidad:
La reaccin es lineal desde 5 hasta 200 mg/dl
Para valores superiores, diluir 1:2 la solucin coloreada final con el reactivo y
repetir la lectura multiplicando el resultado por 2.
Anexo 3:
Preparacin de reactivos de trabajo: Estndar y reactivo precipitante listo para usar
Estabilidad y condiciones de almacenamiento:
Conservar el estndar y Reactivo precipitante entre (2-8C) hasta la fecha de
vencimiento indicada en la caja.
Una vez abiertos no deben permanecer destapados y fuera del refrigerador
durante lapsos prolongados.
Evitar exposicin a la luz solar directa, durante el manipuleo los reactivos estn
sujetos a contaminaciones de naturaleza qumica y microbiana que puedan
provocar disminucin de la estabilidad.
Anexo 4:
Almacenamiento y estabilidad del suero:
HDL colesterol es estable 3 das entre (2-8C).
5. CALCULOS Y RESULTADOS:

HDL Colesterol mg/dl = D x F

Como calcular la concentracin del colesterol VLDL y LDL: Utilizando la

ecuacin de Friedewald que es exacta para muestras cuya concentracin de
triglicridos no ultrapasen 400 mg/dl y no pertenezcan a pacientes portadores de
lipoproteinemia de tipo III.
Ecuacin de Friedewald:
Colesterol VLDL= Triglicridos / 5
Colesterol LDL = Colesterol total (HDL + VLDL)