Identificacin de un paso del complejo Mycobacterium tuberculosis por una prueba RPIDA.

que la prueba esta funcionando adecuadamente. Esta banda es la banda de Control

La seccin derecha de la ventana de resultados indica los resultados de la prueba. Si aparece otra
banda de color en la seccin derecha de la ventana de resultados, esta banda es la banda de Prueba.
Resultado Negativo : La presencia de solamente la banda control (lnea C) dentro de la
ventana de resultados indica un resultado negativo.
2.

Resultado Positivo : La presencia de dos bandas de color (banda T y banda C) dentro de la

ventana de resultados, sin importar cual banda aparece primero, indica un resultado positivo
Nota :
1.
Dependiendo de la concentracin de antigeno MPT64, puede variar la intensidad de la lnea de prueba.
2.
Un resultado positivo no cambiar una vez este se establezca a los 15 minutos

La Tuberculosis es una enfermedad altamente infecciosa causada por el Mycobacterium tuberculosis

y es una enfermedad potencialmente fatal en humanos. La caracterizacin biolgica molecular
bioqumica e inmunolgica del Mycobacterium tuberculosis ha llevado a la identificacin de varios
antigenos los cuales pueden ser tiles en el desarrollo de mtodos diagnsticos mejorados con el fin
de discriminar entre el complejo M. tuberculosis y otra mycobacteria diferente a Mycobacterium
tuberculosis (MOTT bacilli). Mycobacterium tuberculosis ha sido conocida por secretar mas de 33
diferentes protenas. Una de las protenas predominantes MPT64 fue encontrada solamente en el
fluido de cultivo de cepas del complejo M. tuberculosis. Recientemente SD ha desarrollado un
ensayo rpido, simple usando anti-MPT64 monoclonal de ratn para una discriminacin rpida
entre el complejo Mycobacterium tuberculosis y el MOTT bacilli.
[Uso programado] La prueba rpida SD BIOLINE TB Ag MPT64, es una prueba de identificacin
inmunocromatogrfica para el complejo M. tuberculosis, que usa anti-MPT64 monoclonal de
ratn. Esta prueba puede ser usada fcilmente para la identificacin rpida del complejo M.
tuberculosis, en combinacin con sistemas de cultivo basados en medios lquidos sin ninguna
complejidad tcnica en laboratorios clnicos.
[Principio] Esta prueba de casete consta de una almohadilla para la muestra, una almohadilla de
conjugado dorado, una membrana de nitrocelulosa y una almohadilla absorbente. Los anti-MPT64
monoclonal de ratn fueron inmovilizados sobre la membrana de nitrocelulosa como material de
captura (lnea de prueba). Otros anticuerpos los cuales reconocen otros eptopes del MPT64,
conjugados con las partculas del coloide dorado, fueron usados para la captura del antigeno y la
deteccin en un ensayo tipo sndwich. El dispositivo de la prueba rpida SD BIOLINE Ag MPT64 tiene
una letra C de (Lnea control) y la letra T (Lnea de prueba) sobre la superficie del casete. Ambas la
lnea de control y la lnea de prueba no son visibles en la ventana de resultado antes de la aplicacin
de cualquier muestra. La Lnea Control es usada como control del procedimiento. La lnea control
debe siempre aparecer si el procedimiento de prueba es realizada adecuadamente y los reactivos de
prueba de la lnea control estn funcionando. Cuando la muestra es aplicada en el pozo de muestras,
esta fluye lateralmente a travs de la membrana, el anticuerpo-conjugado coloide dorado, se une al
antigeno MPT64 en la muestra, en medio lquido. El complejo entonces continua fluyendo y se une al
anti- MPT64 monoclonal de ratn sobre la fase slida en la lnea de prueba, produciendo una banda
de color de rojo a prpura. En ausencia del MPT64 no hay lnea en la regin de banda de prueba.

Materiales Suministrados/ ingredientes activos de los principales componentes

Precauciones / estabilidad y almacenamiento del Kit

1.
2.
3.
4.
5.

La prueba rpida SD BIOLINE TB Ag MPT64 debe estar almacenada a temperatura ambiente (1~30C).
El dispositivo de prueba es sensible a la humedad as como al calor.
Realice la prueba inmediatamente despus de remover el dispositivo de prueba de su bolsa de aluminio.
No usar la prueba despus de la fecha de vencimiento.
No congelar. No almacene el kit de prueba bajo la luz directa del sol.

Advertencias
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Para uso diagnstico in Vitro nicamente.

para una prueba de identificacin rpida del complejo M. tuberculosis a partir de cultivos
lquidos y slidos.
No comer o fumar mientras manipula las muestras.
Use guantes de proteccin y mascara mientras manipula muestras. Lave las manos
completamente despus de esto.
Limpie completamente los derrames usando un desinfectante apropiado.
Decontamine y elimine todas las muestras, kits de reaccin y materiales potencialmente
contaminado, como si estos fueran desechos infecciosos, en un recipiente biopeligroso.
No use el kit de prueba si la bolsa est daada o el sello est roto.

Preparacin de muestras
Cultivos lquidos
100l de muestra tomada de un cultivo lquido procesado de muestra de esputo pueden ser aplicados
directamente al pozo de muestra (S) sin el uso del procedimiento de preparacin de muestra.
Cultivos solidos
[colonia] Para preparacin de muestras a partir de cultivos solidos, se deben suspender
3-4 colonias en 200l de bfer de extraccin antes de la prueba
[fluido de condensacin] si hay fluido de condensacin de los tubos de agar
inclinado, se puede aplicar 100l de muestra tomados del fluido de condensacin
directamente al pozo de muestra (S), o las colonias pueden ser suspendidas en este
fluido de condensacin en cambio del bfer de extraccin.

Procedimiento de la prueba
1.
2.
3.
4.

Retirar el dispositivo de prueba de su bolsa de aluminio y ubquelo sobre una superficie plana y seca.
Adicionar 100l del cultivo liquido (o 100l del cultivo solido suspendido en bfer) dentro
del pozo de muestra.
Cuando la prueba comience a funcionar, se ver el color prpura desplazndose a travs de
la ventana de resultados en el centro del dispositivo de prueba.
Interprete los resultados de prueba 15 minutos despus de la aplicacin de la muestra.

Interpretacin de la prueba
1.

Limitaciones de la prueba
Si bien La prueba rpida SD BIOLINE TB Ag MPT64 es muy exacta en la deteccin de
antigenos MPT64 , puede ocurrir una baja incidencia de resultados falsos.
Si se obtienen resultados cuestionables es necesario emplear otras pruebas clnicas disponibles.
Como con todas las pruebas diagnsticas, un diagnstico clnico definitivo no debe estar
basado en los resultados de una sola prueba, este debe solamente ser realizado por el
mdico despus de que todos los hallazgos clnicos y de laboratorio hayan sido evaluados.

1.
2.
3.

Caractersticas de Desempeo
Sensibilidad

1.

Mtodo de prueba

Una banda de color aparecer en la seccin izquierda de la ventana de resultados, mostrando

Mtodo de cultivo aislado

M. tuberculosis
M. tuberculosis aislado de
aislado de muestras Total
muestras clnicas
clnicas (MGIT)
(3% medio Ogawa)

Prueba rpida Positivo

SD BIOLINE TB Negativo
Ag MPT64
Total
(%) Sensibilidad
2.

158
1
159

58
2
60

216
3
219

98.6% (216/219)

Specificity

Mtodo de prueba

Prueba rpida Positivo

SD BIOLINE Negativo
TB Ag MPT64 Total
(%) Especificidad

El kit de prueba rpida SD BIOLINE TB Ag MPT64 contiene los siguientes elementos para
realizar el ensayo.
Dispositivo de prueba individualmente empacado en una bolsa de aluminio con un desecante
Bfer de extraccin (para preparacin de muestras a partir de cultivos slidos)
Instrucciones de uso
Ingredientes activos de los principales componentes
Una tira de prueba incluye: coloide dorado anti-MPT64 monoclonal de ratn conjugado
dorado (0.240.048g), lnea de prueba: anti-MPT64 monoclonal de ratn
(0.320.064g), lnea control: inmunoglobulina anti-ratn de cabra (0.640.128g).
Diluyente del ensayo: Bfer fosfato 100mM (q.s.), azida de sodio(q.s.)

G
AA

1.

Resultado Invalido : Si la banda control no es visible dentro de la ventana de resultado despus de

realizar la prueba, el resultado es considerado invlido. Puede ser que las instrucciones no se siguieron
correctamente o que la prueba esta deteriorada. Se recomienda analizar nuevamente la muestra.

Mtodo de cultivo aislado

Mycobacterium
Cepas de
Cepa
Cepa
Mycobacterium No-tuberculoso
aislado de
bacteriana fngica
No-tuberculoso
muestras

SA

Explicacin de la prueba

0
137
137

0
15
15

0
57
57
100% (260/260)

0
51
51

Total
0
260
260

Precisin
A. La precisin dentro del ensayo fue determinada usando 3 replicas de ocho muestras
diferentes que contienen diferentes concentraciones de anticuerpos. Los valores
negativos y positivos fueron identificados correctamente el 100% de las veces
B. La precisin entre ensayos fue determinada usando las ocho muestras diferentes que
contienen diferentes concentraciones de anticuerpos en tres diferentes replicas con tres
lotes diferentes de dispositivos de prueba. Nuevamente se observaron resultados
positivos y negativos el 100% de las veces.

Valores Esperados
En el reciente estudio de evaluacin del kit de prueba rpida SD BIOLINE TB Ag MPT64 en
combinacin con sistemas de cultivo basados en medios lquidos, se demostraron bandas fuertemente
positivos contra la bacteria pertenecientes al complejo Mycobacterium tuberculosis, M. tuberculosis,
M. africanum y M. Boris, mientras no se observo seal positiva para los MOTT bacilli analizados.

Bibliography of suggested reading

1.
2.
3.

4.
5.
6.

Cloning and B-cell-epitope mapping of MPT64 from Mycobacterium tuberculosis H37Rv.

Infect Immun. 1994 May;62(5):2058-64
Delayed-type hypersensitivity responses to ESAT-6 and MPT64 from Mycobacterium
tuberculosis in the guinea pig. Infect Immun. 1998 Jul;66(7):3454-6.
Expression of Mycobacterium tuberculosis MPT64 in recombinant Myco. smegmatis:
purification, immunogenicity and application to skin tests for tuberculosis. Clin Exp
Immunol. 1996 Feb;103(2):226-32.
Mapping of the delayed-type hypersensitivity-inducing epitope of secreted protein MPT64
from Mycobacterium tuberculosis. Infect Immun. 1995 Dec;63(12):4613-8.
Mutations including IS6110 insertion in the gene encoding the MPB64 protein of Capilia
TB-negative Mycobacterium tuberculosis isolates. J Clin Microbiol. 2004 Jan;42(1):390-2.
Simple and rapid identification of the Mycobacterium tuberculosis complex by immunochromatographic
assay using anti-MPB64 monoclonal antibodies. J Clin Microbiol. 1999 Nov;37(11):3693-7.

Desaprobacin:
Habindose tomado todas las precauciones necesarias para asegurar la capacidad de diagnstico y
precisin de este producto, si ste es usado fuera del control del fabricante y/o distribuidor, (o el resultado
depende del medio ambiente y/o de un error del usario), el resultado mismo puede verse afectado. Una
persona sujeta a diagnstico debe consultar al mdico para confirmar posteriormente los resultados.
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reclamo, costo o dao ya sea originado directa o indirectamente o consecuencialmente o
relacionado con un diagnstico incorrecto (sea positivo o negativo), durante el uso de este. producto.
Fecha de elaboracin : 2010. 06
08FK50-Sp-0

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