VIABILIDADE DO CULTIVO DA FOLHA DESTACADA PARA DETERMINAO DA

RESISTNCIA DE SOJA AO CANCRO DA HASTE

Ivana Marino Brbaro

Eng. Agr., Dr., PqC do Polo Regional Alta Mogiana/APTA
imarino@apta.sp.gov.br
Laerte Souza Brbaro Jnior
Doutorando, Departamento Produo Vegetal FCAV/UNESP, Jaboticabal
barbaro2303@hotmail.com
Marcelo Ticelli
Eng. Agr., Ms., PqC do Polo Regional Alta Mogiana/APTA
mticelli@apta.sp.gov.br

Fernando Bergantini Miguel

Adm., Ms., PqC do Polo Regional Alta Mogiana/APTA
fbmiguel@apta.sp.gov.br
Jos Antonio Alberto da Silva
Eng. Agr., Dr., PqC do Polo Regional Alta Mogiana/APTA
jaas@apta.sp.gov.br

Dentre as principais doenas da soja, est o cancro da haste causado por Diaporthe
phaseolorum var. meridionalis. Devido existncia de um dinmico programa de
melhoramento gentico e de testes de linhagens, a disperso da doena encontra-se sob
controle, atravs da utilizao de cultivares resistentes. Contudo, testes de avaliao da
reao da referida doena so rotineiramente realizados pelos programas de melhoramento,
visto que, para liberao de uma nova cultivar, deve-se obrigatoriamente constar na
descrio do VCU (Valor de Cultivo e Uso), a resistncia a essa doena (Yorinori, 2000).

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Por outro lado, a utilizao da tcnica de cultivo de folhas destacadas em estudos com
agentes de doenas em plantas descrita em trabalhos realizados h mais de meio sculo.
Este mtodo apresenta a possibilidade de infectar folhas destacadas e manter estas folhas e
parasitas inoculados sobre as mesmas, em condies vigorosas por um determinado
perodo de tempo (Clinton & McCormick 1924).
Diante da importncia da cultura e da doena, objetivou-se estudar a viabilidade da tcnica
alternativa de cultivo da folha destacada em caracterizar reaes de resistncia e
suscetibilidade em cultivares D. phaseolorum var. meridionalis, agente causal do cancro
da haste da soja para posterior utilizao em programas de melhoramento visando a
obteno de cultivares comerciais de soja resistentes.
Neste ensaio, testou-se 6 linhagens avanadas de soja, pertencentes ao programa de
melhoramento da FCAV/UNESP e disponibilizados a APTA- Alta Mogiana. Tais linhagens
so resultantes de cruzamentos biparentais realizados entre cultivares resistentes e
suscetveis ao patgeno. A reao de resistncia dessas linhagens na gerao F2 foi
avaliada atravs do mtodo do palito de dente em casa de vegetao, sendo que somente
as sementes F3 colhidas das plantas F2 resistentes foram semeadas no campo. Como
testemunhas, utilizou-se as cultivares MG/BR 46 (Conquista) classificada como resistente ao
cancro da haste, e FT-Cristalina como altamente suscetvel doena (Embrapa, 2005).
Desta forma, as linhagens e cultivares foram semeadas em vasos e cultivadas em casa de
vegetao. Parte das plntulas foram utilizadas para cultivo da folha destacada. As folhas
em V1 foram destacadas da planta cortando-se o pecolo imerso em gua destilada. Em
seguida, o pecolo foi envolvido em algodo embebido com gua destilada. Folhas assim
preparadas foram colocadas em placas de Petri, contendo uma camada de algodo
recoberta com papel de filtro umedecido com gua destilada e incubadas a 28C e
fotoperodo de 12 horas em cmara de germinao (BOD) at o enraizamento. As
extremidades dos palitos foram lavadas em gua destilada, e autoclavadas, e aps,
dispostas em placas de Petri contendo o meio de cultura BDA (batata+dextrose+agar),
simultaneamente repicagem do fungo, para que o miclio se desenvolvesse, envolvendo
os palitos. Aps 15 dias, procedeu-se a inoculao introduzindo-se um palito colonizado
pelo patgeno no pecolo da folha enraizada (Franco et al., 2001, Franco et al., 2009). As
placas foram posteriormente incubadas em cmara tipo BOD a 28C e fotoperodo de 12
horas (Figura 1).

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Figura 1. Folha destacada da cultivar de soja FT- Cristalina

inoculada com Diaporthe phaseolorum var. meridionalis atravs
do mtodo do palito-de-dente

O delineamento experimental para o ensaio das folhas destacadas foi o inteiramente

casualizado com dez tratamentos (6 linhagens e FT-Cristalina e MG BR 46 (Conquista)
inoculadas com o isolado CH-8 de D. phaseolorum var. meridionalis e testemunhas das
duas cultivares inoculadas sem o isolado de D. phaseolorum var. meridionalis), com 10
repeties. Cada parcela foi constituda por uma placa de Petri contendo duas folhas
primrias destacadas de soja.
Realizou-se seis avaliaes semanalmente atravs da escala de notas variando de 0 a 5,
em que 0 = sem sintomas; 1 = traos a 10 % de rea foliar infectada (AFI); 2 = 11 a 25 % de
AFI; 3 = 26 a 50 % de AFI; 4 = 51 a 75 % de AFI e 5 = 76 a 100 % de AFI (Yorinori, 1997).
A outra parte das plntulas foi utilizada para avaliao da reao de plntulas em casa de
vegetao. A inoculao em V1 foi feita introduzindo-se o palito colonizado no hipoctilo, a
1,5 cm abaixo do n cotiledonar. Ressalta-se que as plntulas, aps inoculao foram
mantidas por nebulizao por 72 horas e aps mediante regas dirias.
A avaliao dos sintomas foi efetuada semanalmente, 15 dias aps a inoculao, totalizando
6 semanas, atravs de escala de notas de 0 a 5, que se baseia no nvel de infeco (NI),
onde 0 = planta sem sintomas; 1 = traos a 10% da planta infectada (PI); 2 = 11 a 25% da
PI; 3 = 26 a 50% da PI; 4 = 51 a 75% da PI e; 5 = 76 a 100% da PI. Tambm realizou-se na
sexta avaliao, a contagem de plntulas sadias - PS, plntulas infectadas - PI (plntula

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com necrose, acompanhada de clorose, murcha ou necrose de uma ou mais folhas e com
leve reduo do desenvolvimento da parte area) e plntulas mortas - PM. O critrio de
separao das reaes das cultivares foi baseada na porcentagem de plntulas mortas (%
PM). Sendo que o clculo da % PM utiliza a seguinte frmula: % PM = (PM+PI/2).100/TP,
onde PM = nmero de plntulas mortas; PI = nmero de plntulas infectadas; TP = total de
plntulas inoculadas. A reao das cultivares foi discriminada de acordo com o seguinte
critrio: R = resistente: 0 a 25 % PM; MR= moderadamente resistente: 26 a 50 % PM; MS =
moderadamente suscetvel: 51 a 75 % PM; S = suscetvel: 76 a 90 % PM e AS= altamente
suscetvel: acima de 90 % PM (Figura 2) (Yorinori, 1996).

Figura 2. Sintomas observados na cultivar FT-Cristalina inoculada com

Diaporthe phaseolorum var. meridionalis pelo mtodo do palito de dente,
e testemunha em condio de casa de vegetao.

O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado com 5 repeties para as

linhagens e cultivares inoculadas com o patgeno e cinco repeties para as testemunhas,
sendo cada parcela constituda por um vaso com 5 plntulas.
Em relao tcnica da folha destacada, constatou-se que as linhagens no apresentaram
diferenas significativas no nvel de infeco a D. phaseolorum var. meridionalis desde 14
at 49 dias aps a inoculao, sendo portanto, resistentes ao fungo. Resultados
semelhantes foram notados nas testemunhas: Conquista inoculada ou no com o patgeno
e FT-Cristalina no inoculada com o patgeno, o que confirma a resistncia da cultivar

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Conquista e que, as cultivares sem serem inoculadas com D. phaseolorum var. meridionalis
no apresentaram sintomas ocasionados pela contaminao com outros patgenos. Por
outro lado, elevados nveis de infeco obtidos nas folhas destacadas da cultivar FTCristalina inoculada com o fungo, denota alta suscetibilidade da mesma, alm de, uma boa
preciso experimental.
Na Figura 3 esto apresentados os resultados das avaliaes do nvel de infeco em casa
de vegetao.

Palito-de-dente
5,00

Nveis de infeco

4,50

FT-Cristalina com Dpm

4,00

Conquista com Dpm

3,50

FT-Cristalina sem Dpm

3,00

Conquista sem Dpm

2,50

JAB 00-01-21/2C2D

2,00

JAB 00-02-3/6A4D

1,50
1,00

JAB 00-03-11/9K3D

0,50

JAB 00-04-1/5A4D
JAB 00-05-8/2D3C

0,00
1

JAB 00-06-2/2C1D

Avaliaes

Figura 3. Nveis de infeco obtidos em seis avaliaes de

linhagens de soja cultivadas, em condies de casa de vegetao,
inoculadas com D. phaseolorum var. meridionalis (Dpm) pelo
mtodo do palito-de-dente colonizado.

Nota-se que na 1a avaliao, exceto para a FT-Cristalina inoculada com o patgeno, no

foram observados sintomas da doena. As linhagens comportaram-se como resistentes ao
patgeno, uma vez que, mostraram baixos nveis de infeco at a sexta avaliao
realizada. J, a cultivar FT-Cristalina inoculada com Dpm, foi classificada como altamente
suscetvel ao patgeno, sendo que, na ltima avaliao foi atribuda a nota mdia de 4,80.
A anlise da correlao das notas atribudas para o nvel de infeco em folha destacada e
planta intacta cultivada em casa de vegetao na sexta avaliao revelou a existncia de
correlao positiva e significativa (r = 0,988**), comprovando a importncia da tcnica da
folha destacada em estudos envolvendo fungos fitopatognicos.

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Referncias
Clinton GP and McCormick FA (1924) Rust infection of leaves in Petri dishes. Connecticut
Agricultural Experiment Station 260:475 - 501.
Embrapa (2005) Tecnologia de produo de soja regio central do Brasil- 2005.
Editora Embrapa Soja: Embrapa Cerrados: Embrapa Agropecuria Oeste: Fundao
Meridional, Londrina, 239p.
Franco HBJ, Nepomuceno M, , Trabuco MAPC, Centurion CFL and Di Mauro AO (2001)
Reao de gentipos de soja ao cancro da haste (Diaporthe phaseolorum f.sp. meridionalis).
Fitopatologia Brasileira 26: 395-395.
Franco HBJ, Centurion MAPC and Barbosa JC (2009) Estudo de mtodos de inoculao
para a avaliao de cultivares de soja a Fusarium tucumaniae. Summa Phytopathologica,
35:32-38.
Yorinori JT (1996) Cancro da haste da Soja: epidemiologia e controle. Editora
EMBRAPA/CNPSo, Londrina, 75p. (Circular Tcnica, 14).
Yorinori JT (1997) Odio da Soja. Editora EMBRAPA-SOJA, Londrina, 13p.
Yorinori (2000) JT Riscos de surgimento de novas doenas na cultura da soja. In:
Congresso de tecnologia e competitividade da soja no mercado global. Cuiab, p. 165169.

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