EXTRACCIN DE ANTOCIANINAS :

Las antocianinas se extraen de acuerdo con la metodologa de Lees y Francis (1972).

Disolventes tales como metanol y etanol (Nuclear) se usan a concentraciones de 60, 70 y 80%
en agua, se acidifica con 0,1% cido clorhdrico (HCl) (Synth 37%) para valores de pH de 2,0 y
4.0, y con 3% de cido ctrico (Synth) para valores de pH de 3.0 y 3.5.
Cien gramos (100 g) de arandanos se pesan y se homogenizan durante dos minutos en una
licuadora (Britnia, modelo L), con 100 ml de cada disolvente, por separado. Cada solucin se
transfiri a un vaso de precipitados de 400 ml, cubierto con parafilm y se almacen durante la
noche a 4 C. La mezcla despus se filtra al vaco usando n 1 papel Whatman y un embudo
de Buchner. A partir del filtrado solucin obtenida, 250 ml se toma y despus se aade 125
ml de disolvente para completarla mezcla .Esta mezcla se filtr despus y el residuo se lav
con disolvente hasta que obtuvo un total de 450 ml de solucin. Este extracto se transfiri a
un 500 ml matraz aforado y completado hasta el volumen con disolvente. 2 ml alcuota
esretiorado de este extracto, colocado en un matraz aforado de 100 ml, el volumen completa
con disolvente y la solucin se almacena en la oscuridad, durante dos horas a temperatura
ambiente. La absorbancia se ley a 535 nm en un espectrofotmetro (Uniscience, modelo
Genova).
DETERMINACIN CUANTITATIVA DE LAS ANTOCIANINAS:
Se determina la cantidad total de antocianinas segn el mtodo Lees y Francis (1972). Los
disolventes utilizados fueron metanol y etanol a 60, 70 y 80% en agua, se acidificacon cido
clorhdrico 0,1% a pH valores de 2.0 y 4.0, y con el 3% de cido ctrico a valores de pH de 3,0
y 3,5. El coeficiente de absorcin molar fue 98.2. La tcnica consista en la lectura de la
absorbancia
( = 535 nm) del extracto crudo diluido en el extractor disolvente en un espectrofotmetro
(Uniscience, modelo
Genova). Ecuacin 1 se presenta el clculo simplificado para la cuantificacin.

donde: FD = factor de dilucin; VEO = volumen de originales extracto crudo; VA = volumen de

la alcuota utilizada para la dilucin con el disolvente de extraccin; VS = volumen de
disolvente usado para dilucin; AT = antocianinas totales (mg.100 g-1 de la muestra); A =
absorbancia del extracto diluido a la longitud de onda de mxima absorcin; y E1%
1cm = 98,2; coeficiente de absorcin molar para una mezcla de antocianinas purificadasESTABILIDAD DE LAS ANTOCIANINAS
Se determina la estabilidad de las antocianinas de acuerdo con el mtodo descrito por Falco
et al. (2003).
Para determinar la concentracin de cido cafeico (Sigma - 99% estndar HPLC) que se
aaden a los anthocyaninins, el contenido total de slidos se calcul mediante el secado de 3
ml de extracto crudo en un horno (Biomatic) a 105 C a la constante peso (AOAC, 1998). El
resultado obtenido (mg.mL-1) se utiliz como el parmetro inicial para la adicin de la
co-pigmento en diferente peso / volumen (w / v) las proporciones. El extracto se diluy en HCl
- tampn de KCl (100 mM
cido clorhdrico - cloruro de potasio) a pH 3,0, con el objetivo de obtener valores de
absorbancia entre 1,0 y 1,5 en la longitud de onda de mxima absorcin. Las muestras de
control (extracto de antocianina sin cido cafeico) y pruebas de muestra (extracto de
antocianina con cido cafeico) se prepararon de acuerdo con la metodologa modificada por
Stringheta (1992), en la siguiente (cafeico cido: ratios de antocianina): 0,5: 1,0, 0,75: 1,0 y
1,0: 1,0. Estas soluciones se mantuvieron bajo agitacin / rotacin

durante 30 min (Fisaton, modelo 752) y luego transferido a con tapn de rosca tubos y dej en
reposo, al abrigo de la luz, por un perodo de dos horas para alcanzar el equilibrio. Los
experimento se llev a cabo por triplicado a temperatura ambiente
tanto en presencia como en ausencia de luz, y la valores de tiempo de vida media (t 1 / 2 - h)
calculado.
Despus de alcanzar el equilibrio en la oscuridad, la absorcin se ley en un
espectrofotmetro (Uniscience, modelo Genova) en la longitud de onda de absorcin mxima
de la antocianinas en la solucin tampn, con el objetivo de llegar a final de
valores de absorbancia entre 1 y 1,5 . Las longitudes de onda de absorcin mxima fueron
505 nm para el control, 510 nm
para la relacin de 0,5 : 1,0 ; 515 nm para 0,75 : 1,0 y 525 nm para 1,0 : 1,0 . Se calcularon
los valores de t 1/2 , utilizando el
los siguientes parmetros (ecuaciones 2 y 3 ) :

donde: Atx = Absorbancia en relacin con el tiempo ; AT0 = absorbancia en el momento

"cero" ; k = velocidad constante ; t = tiempo ( das , horas , minutos , segundos ) y t =
tiempo de vida media.