FACULTAD CIENCIAS EXACTAS NATURALES Y AGRIMENSURA - UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDESTE

CARRERA BIOQUIMICA - AREA BIOQUMICA CLINICA - ASIGNATURA QUMICA CLINICA

JTP CEI
Versin en proceso

GUIA DE TRABAJO PRACTICO - LABORATORIO

PROTEINAS SERICAS
Objetivos
Determinacin de protenas totales por la reaccin del biuret.
Determinacin de albmina por unin al colorante Verde de Bromocresol.
Realizacin e interpretacin de una corrida electrofortica en acetato de celulosa y valoracin
cualitativa de las protenas sricas.
ETAPA PREANALITICA
1) Muestra
La muestra de eleccin para la determinacin de protenas totales y proteinograma electrofortico es
suero. Las protenas totales del plasma son 0.3 g/dl mas que en suero por la presencia del fibringeno.
Para la determinacin de albmina se puede utilizar indistintamente suero u plasma.
Los sueros con lipemia y/o hemlisis moderada o severa (Hb >0.2 g/dl) no deben procesarse. Los
sueros con bilirrubina total inferior a 10 mg/dl pueden procesarse.
Conservacin de la muestra
Las protenas totales del suero son estables durante 1 semana a temperatura ambiente y 1 mes cuando
se refrigeran. A 20 C las protenas duran 2 meses y la albmina 2 aos. Para realizar electroforesis
puede refrigerase el suero hasta 48 hs.
Hora de muestreo e ingesta reciente de alimentos
No se han observado variaciones diurnas en la concentracin de protenas sricas ni por ingesta
reciente de alimentos.
Estasis venoso
La elevacin de PT y albmina por estasis venoso dependen del grado y duracin del mismo, mientras
que los porcentajes de la electroforesis no se alteran. Debe minimizarse el estasis venoso durante la
venopuncin.
Cambios de postura
En los individuos normales la concentracin de protenas aumenta 8 a 10 % cuando pasan de la
posicin acostada a la de pie. Estos cambios de concentracin proteica debidos a cambios del agua
plasmtica se producen en 15 minutos.
Ejercicio
En las horas siguientes al ejercicio intenso puede haber moderada deshidratacin extracelular y con
ello, hemoconcentracin que eleva la proteinemia. El efecto aumenta a mayor temperatura ambiente y
nivel de ejercicio. El aumento que se registra es de magnitud semejante a los cambios causados por la
postura y requiere 30 minutos para volver a los valores basales.
Uso de anticonceptivos y embarazo
El uso de anticonceptivos orales y el embarazo disminuyen la concentracin srica de protenas totales,
principalmente debido a disminuciones de albmina. Las fracciones proteicas 1, 2 y aumentan
ligeramente con el uso de anticonceptivos orales y vuelven a ser normales a las 12 semanas de cesar
dicho uso.
Interferencias por medicamentos
Interferencias analticas:
En el dosaje de albmina con verde de bromocresol el cido acetilsalicilico, la carbenicilina y la
cefotaxima, as como la heparina usada in vitro, causan falsos descensos. La ampicilina a dosis
elevadas produce falsos aumentos. La penicilina produce un desdoblamiento de la albmina en la
electroforesis sobre celulosa o agarosa.
Se conoce una amplia gama de medicamentos que a dosis habituales no interfiere.
Interferencias farmacolgicas:
Las perfusiones intravenosas producen disminuciones de la albuminemia en especial si se utilizan
expansores como dextrano o manitol. Los diurticos, en especial la furosemida, producen elevaciones
por hemoconcentracin.

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Los estrgenos provocan descenso de la albuminemia por inhibicin de su sntesis heptica. Las dosis
habituales de 25 ug/da usadas en mujeres posmenopusicas causan solo leves descensos. Los
progestgenos no alteran la albuminemia.
La asparaginasa usada en hemopatas causa descensos de hasta 22% luego de 4 semanas.
La dapsona, un antileproso, tras tratamiento prolongado produce descensos de hasta 40% por aumento
del catabolismo de la albmina.
Medicamentos hepatotxicos en tratamientos prolongados causan descensos de albmina por
disminucin de su sntesis.
ETAPA ANALITICA
1) Metodologa: Cuantificacin de Protenas Totales "METODO DEL BIURET"
FUNDAMENTO
El mtodo se desarroll a partir de la observacin de que el biuret daba un complejo de color prpura al
reaccionar con una solucin alcalina regulada de sulfato de cobre. Las protenas y algunas aminas
reaccionan de forma semejante. Los iones cobre forman un complejo de coordinacin con cuatro grupos
-NH nucleoflicos, que en la reaccin con las protenas provienen de los enlaces peptdicos de los
aminocidos. El complejo muestra mximos de absorcin a 330 y 540 nm. La absorbancia
generalmente se mide a 540 nm, pues aunque es mayor la sensibilidad a 330 nm, es ms fcil que se
presenten interferencias. La absorbancia medida a 540 nm es directamente proporcional a la
concentracin de protenas totales en la muestra.
El reactivo de biuret est formado por una solucin alcalina de sulfato de cobre a la que se aade
tartrato sdico-potsico para evitar que precipiten los iones cpricos en forma de hidrxido. A veces se
aade ioduro potsico para evitar la reduccin espontnea de los iones cpricos, aunque no suele ser
necesario cuando el sulfato de cobre es puro y se utilizan concentraciones adecuadas de tartrato.
TECNICA OPERATORIA
Muestra:
Suero libre de hemlisis
Material requerido:
Espectrofotmetro o Fotocolormetro.
Micropipetas y pipetas capaces de medir los volmenes indicados.
Tubos de ensayo.
Tubos de fotocolorimetro o cubetas espectrofotomtricas.
Bao de agua a 37 C.
Reloj o Timer.
Reactivos: Tiene diferencias segn el fabricante
Reactivo Cuproalcalino:
GT Lab
Wiener
Biosystems
Sulfato de Cobre
12 mM
13 mM
6 mM
Tartrato sdico-potsico
32 mM
Ioduro potsico
6 mM
Hidrxido sdico
250 mM
875mM
1150mM
El Rvo Wiener tiene EDTA y alquilarilpolieter de concentracin no declarada.
El Rvo Biosystems tiene un detergente, sin especificar su composicin y concentracin.
El reactivo cuproalcalino debe conservarse a temperatura ambiente, en lugar fresco y al abrigo de la luz.
Es corrosivo.
Calibrador: Solucin de albmina y globulinas en estado nativo, de concentracin determinada frente al
estndar de referencia del National Institute of Standarts and Technologhy, SRM 927b. Conservar a 2-8
C hasta su fecha de vencimiento.
Puede utilizarse cualquier calibrador comercial de matriz proteica, siempre que tenga trazabilidad con
este estndar primario.
Suero control: Por ejemplo Precinorm (Lab. Roche, ex Boehringer)
Valor medio = 5.22 g/dl y rango aceptable (+/- 2DS) = 4.80 5.64 g/dl.
Valores obtenidos frente al mismo estndar primario (SRM 927b).
Puede utilizarse cualquier suero control comercial de matriz proteica siempre que tenga trazabilidad con
este estndar primario.

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PROCEDIMIENTO
En tubos rotulados colocar:
Blanco

Testigo
50 ul

Control

Muestra

Testigo de PT
Suero
50 ul
50 ul
Rvo. Cuproalcalino
2,5 ml 2,5 ml
2,5 ml
2,5 ml
Mezclar. Incubar en bao de agua a 37 C por 15 minutos. Leer en espectrofotmetro a 540 nm o
fotocolorimetro a 520-560 nm llevando a cero con reactivo de trabajo. Color estable 2 horas.
Clculos:
factor de clculo = g/dl de PT del Testigo
Absorbancia del Testigo
g/dl de PT en el suero = Absorbancia de la Muestra x factor de clculo
PERFORMANCE DEL METODO: (Automatizable)
LINEALIDAD: Cumple con la ley de Lambert-Beer hasta 15 g/dl (GT y Biosystems) y hasta 12 g/dl
(Wiener). Determinar el lmite con el instrumental de lectura a usar.
ESTABILIDAD: El color alcanza su intensidad mxima a los 15 minutos, estable 1-2 horas.
LMITE DE DETECCIN: Todas las protenas reaccionan de una forma similar, mostrando diferencias
muy pequeas entre cada una de ellas. Para un cambio de 0,001 unidades de absorbancia se requiere
un cambio mnimo de 0,02 g/dl.
REPRODUCIBILIDAD INTRALABORATORIO, INTERENSAYO: Al nivel de 7 g/dl se obtuvo un
coeficiente de variacin de 3 a 5 %.
Variaciones fisiolgicas: Aumentos por estados de deshidratacin. Disminuciones por estados de
sobrehidratacin, retencin de lquido, y embarazo en 3er trimestre.
Variaciones patolgicas: No tiene sentido considerarlas sin tener el proteinograma electrofortico, dado
que la correlacin clnica se realiza basndose en las variaciones observadas en las fracciones del
mismo.
2) Metodologa: Cuantificacin de Albmina Mtodo de Fijacin al Verde de Bromocresol
FUNDAMENTO
La albmina tiene una alta afinidad por aniones orgnicos colorantes, con la unin se eleva
marcadamente el pico de absorcin del colorante y dado que este incremento es proporcional a la
cantidad de albmina, puede cuantificarse la misma.
Con este principio se utilizan los colorantes prpura de bromocresol, verde de bromocresol y azul de
bromofenol. La albmina y el verde de bromocresol se unen instantneamente a pH entre 3,9 y 4,2 en
presencia de una adecuada fuerza inica, dando lugar a un gran aumento de la absorbancia a 625 nm
respecto de la solucin del colorante libre. Este incremento es proporcional a la concentracin de
albmina en la muestra. El colorante es de un color amarillo, mientras que el complejo protenacolorante tiene un intenso color azul verdoso. La alta afinidad albmina - colorante hace que toda la
albmina se una en menos de 30 segundos de ser mezclados. Se agrega un detergente no inico para
evitar enturbiamiento y bajar la absorbancia del reactivo y cloruro de sodio para disminuir la interferencia
por globulinas.
TECNICA OPERATORIA
Muestra:
Suero o plasma libre de hemlisis e ictericia.
Material requerido:
Espectrofotmetro o fotocolorimetro.
Micropipetas y pipetas capaces de medir los volmenes indicados.
Tubos de ensayo.
Reloj o timer
Reactivos:
Verde de Bromo Cresol (VBC) o bromocresolsulfonftaleina (BCF)

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La concentracin de VBC vara mucho segn el fabricante: Wiener (300 uM), GTLab (90 uM),
Biosystems (150 uM). La concentracin recomendada para mxima linealidad es de 60 uM (Kaplan Pesce). Buffer: Succinato 75mM, pH = 3,9. Tensioactivo no inico: polioxietilen lauril ter al 1 %. Cloruro
de sodio 0,8 M.
Este reactivo debe conservarse a temperatura ambiente, en lugar fresco y al abrigo de la luz.
Calibrador: Solucin de albmina y globulinas en estado nativo, de concentracin determinada frente al
estndar de referencia del National Institute of Standarts and Technologhy, SRM 927b. Conservar a 2-8
C hasta su fecha de vencimiento. Puede utilizarse cualquier calibrador comercial siempre que tenga
trazabilidad con este estndar primario.
Suero control: Por ejemplo Precinorm (Lab. Roche, ex Boehringer)
Valor medio = 3,49 g/dl y rango aceptable (+/-2DS): 3,07 3,91 g/dl.
Valores obtenidos frente al mismo estndar primario (SRM 927b).
Puede utilizarse cualquier calibrador comercial siempre que tenga trazabilidad con este estndar
primario.
PROCEDIMIENTO
Trabajar entre 15 y 28 C. Ajustar el espectrofotmetro a 625 nm o fotocolormetro a 620-650 nm
llevando a cero con reactivo de trabajo.
En tubos rotulados colocar:
Blanco Testigo Control Muestra
Testigo de Albmina
10 ul
Suero o plasma
10 ul
10 ul
Rvo. VBC
3,5 ml 3,5 ml
3,5 ml
3,5 ml
Mezclar por inversin suave. Leer dentro de los 15 a 30 segundos para evitar la interferencia positiva de
las dems protenas plasmticas. Por ejemplo la ceruloplasmina y el orosomucoide reaccionan con el
VBC a los 5 minutos.
Clculos:
factor de clculo = g/dl de Albmina del Testigo
Absorbancia del Testigo
g/dl de Albmina = Absorbancia de la Muestra x factor de clculo
PERFORMANCE DEL METODO
ESPECIFICIDAD: Elevada cuando se realiza la lectura a los 30 segundos de la mezcla. Es mayor frente
al prpura de bromocresol.
Interferencias endgenas: No pueden utilizarse sueros ictricos con bilirrubina > 20 mg/dl y/o con
hemlisis moderada o mayor y/o lipemia marcada. Los tres interfieren negativamente. La heparina
produce una turbidez que ocasiona falsos aumentos.
LINEALIDAD: Cumple con la ley de Lambert-Beer hasta 6 g/dl (GTLab, Biosystems y Wiener). Leves
variaciones segn el instrumental de lectura.
ESTABILIDAD: El color alcanza su intensidad mxima a los 20 a 30 segundos, luego va aumentando
lentamente hasta los 20 minutos, en que comienza a decrecer.
LIMITE DE DETECCION: Para un cambio de 0.001 unidades de absorbancia se requiere un cambio
mnimo de 0,01 g/dl de albmina.
REPRODUCIBILIDAD INTRALABORATORIO, INTERDAS: Al nivel de 3,7 g/dl se obtiene un CV de 2 a
3%.
Mtodo de referencia:
Ha sido propuesto el electroinmunoanlisis, el cual se basa en la migracin de las protenas del suero
por un campo elctrico en un medio con agarosa conteniendo antialbmina humana. La altura del pico
de precipitacin es proporcional a la concentracin de albmina en el suero. Presenta elevada
especificidad y recuperacin, y aceptable precisin. Otros mtodos inmunoqumicos de alta
performance son: Inmunodifusin radial, Inmunoturbidimetra, Inmunonefelometra, Radioinmunoanlisis

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y Enzimoinmunoanlisis. Todos ellos tienen la limitacin del costo y la exigencia de alta calidad del
anticuerpo utilizado.
El mtodo con prpura de bromocresol mostr mejor correlacin con el electroinmunoanlisis que el
mtodo con VBC.
Intervalo de referencia para Albmina en suero:
Se observan valores levemente superiores en varones respecto a mujeres.
Los valores en neonatos y lactantes son levemente inferiores respecto a los de adultos. Durante el
embarazo se presentan disminuciones en la albuminemia, que se acentan a medida que el mismo
avanza.
Cada laboratorio debe obtener sus propios intervalos de referencia para la poblacin que atiende. Como
orientacin podemos decir que para adultos de 17 a 41 aos aparentemente sanos, con dieta mixta, se
obtuvo un Intervalo de Referencia = 3,6 5,0 g/dl para la fraccin central del 95%.
Valores de Referencia, en pacientes del Hospital Peditrico "Dr. A. L. Casteln"
Resistencia, Chaco. (n = 1350). Enero - Setiembre de 1999.
Mtodo: Verde de bromocresol, lectura a 600 nm en BTS - 320
Edad
Albmina

0 - 6 meses 6 -12 meses 1 - 5 aos

2.90 - 4.56 3.02 - 4.78 3.10 - 5.16

5 - 15 aos > de 15 aos

3.16 - 5.32
3.56 - 5.12

Variaciones Patolgicas de la albuminemia

Descensos:
Por menor sntesis: Insuficiencia heptica subaguda o crnica, estados inflamatorios agudos y crnicos,
neoplasias y desnutricin proteica.
Por excesiva prdida: Quemadura y otras lesiones cutneas exudativas extensas o nefropatas con
proteinuria elevada, y enteropata perdedora de protenas.
Por deficiente absorcin: Enfermedades malabsortivas.
Por defecto gentico: Ausencia de sntesis heptica (analbuminemia).
Por hemodilucin: Sobrehidratacin o retencin de lquidos (embarazo en 3er. trimestre).
Los valores mas bajos de albuminemia (0,8 a 1,4 g/dl) se observaron en pacientes con sndrome
nefrtico no tratado y nios con desnutricin proteica severa.
Aumentos:
Diabetes inspida no tratada. Estados de deshidratacin.
Nota: En pacientes internados pueden observarse incrementos agudos de albmina, por ejemplo de 1,8
a 2,3 g/dl en 24 a 48 hs, debido a transfusiones de albmina o plasma fresco.
3) Metodologa: PROTEINOGRAMA ELECTROFORETICO Fraccionamiento Proteico por
Electroforesis en Acetato de Celulosa.
El suero humano contiene cerca de 125 protenas identificadas. Una mayor informacin sobre las
variaciones de las protenas plasmticas de un individuo, se obtiene al realizar la separacin en distintas
fracciones, lo cual puede realizarse con diferentes metodologas. Solo analizaremos la ms utilizada en
nuestro medio, con fines clnicos: electroforesis sobre acetato de celulosa.
FUNDAMENTO
La migracin de partculas cargadas sometidas a la influencia de una corriente elctrica se denomina
electroforesis. Es un sistema en una sola fase que depende de las movilidades relativas de las
diferentes partculas con carga elctrica neta, sometidas a un campo elctrico. Las protenas con carga
neta positiva migran hacia el ctodo y aqullas con carga neta negativa hacia el nodo. La velocidad de
migracin de la molcula proteica es determinada por la magnitud de dicha carga, su tamao, su forma
y la fuerza inica del medio.
Las protenas son polmeros de aminocidos, por lo cual su carga elctrica neta resulta del balance
entre los grupos amino (carga+) y carboxilo (carga -) de dichos aminocidos, y del pH de la solucin que
afecta estas cargas.
Dado que estas cargas dependen del pH de la solucin, cada protena tiene un pH en el cual su carga
elctrica neta resulta cero, denominado punto isoelctrico. A un pH superior a su punto isoelctrico la

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protena tendr carga neta negativa. Cuanto ms bajo el punto isoelctrico mayor magnitud de carga
negativa a un mismo pH superior al mismo.
En la electroforesis se mantiene un pH constante, habitualmente con un buffer de pH 8,6. A este pH la
mayora de las protenas estn cargadas negativamente en distinta magnitud segn su punto
isoelctrico y migran hacia el nodo con diferente movilidad.
La fraccin Albmina es la que posee mayor movilidad, le siguen las fracciones alfa1, alfa2, beta y en la
zona de siembra la fraccin gamma.
Efecto de la fuerza inica: A mayor fuerza inica, mayor competencia entre los iones y con ello
migracin ms lenta, dando bandas menos separadas pero ms ntidas.
Efectos del potencial, la temperatura y el tiempo: A mayor potencial, mayor carga elctrica y velocidad
de migracin pero tambin mayor generacin de calor. Si ste no se disipa adecuadamente, se puede
producir desnaturalizacin de las protenas de la muestra. El calor puede controlarse reduciendo la
fuerza inica del buffer o refrigerando la cmara de migracin. A mayor tiempo de migracin, mayor
separacin de las bandas pero tambin mayor difusin radial de las protenas y con ello, bandas menos
ntidas.
Efecto de los soportes: En la EF sobre papel, acetato de celulosa gelificado, o gel de agarosa la
separacin de las protenas sricas en 6 fracciones se realiza principalmente por las diferencias de
carga elctrica neta (soportes clase I). En la EF sobre almidn o sobre gel de poliacrilamida, la
separacin se realiza por las diferencias de carga, de tamao y de forma, por lo cual tienen mayor poder
de resolucin. Con almidn se obtienen 25 bandas y con poliacrilamida hasta 100 bandas (soportes
clase II).
A los fines de interpretar diferentes estados patolgicos, es suficiente la EF sobre soportes clase I en la
gran mayora de las veces.
TECNICA OPERATORIA
Es aplicable a suero, orina, y lquido cefalorraqudeo.
Muestra:
Suero libre de hemlisis. No utilizar plasma puesto que el Fibringeno presente en este ltimo
interfiere en la interpretacin del proteinograma electrofortico.
Soporte:
Acetato de Celulosa gelificado. Conservar las tiras en solucin de Metanol 40%. No dejar secar
al aire las tiras porque se pierden las dimensiones y las caractersticas del gel.
Material requerido:
Pinza (para cejas), tubos de ensayo y papel de filtro comn.
Cuba y Fuente de poder para electroforesis de 60 a 160 V
Micropipeta, capilar o aplicador especifico para realizar la siembra de la muestra.
Espectrofotmetro.
Reactivos:
Buffers:
Aconsejable: Veronal Sdico (Dietilbarbiturato de Sodio 0.04M) 8,24 g/l, pH= 8.6
Alternativa: Veronal Sdico 10,30 g/l + Veronal cido 1,34 g/l.
Soluciones Colorante y Decolorante:
Aconsejable: Colorante Amido Schwart 0,5 g en 45 ml de Metanol + 45 ml de Agua + 10 ml de cido
Actico.
Decolorante: 475 ml de Metanol + 475 ml de Agua + 50 ml de cido Actico.
Alternativa: Colorante Rojo Ponceau S 0,5 g en 100 ml de cido Tricloroactico 5%.
Decolorante: cido Actico 5%
Solucin Eluyente:
Aconseiable: cido Actico 80 %.
Alternativa: Trabajar al 60 % con calentamiento posterior.
Deshidratante: Metanol puro.
Transparentador: 8,5 ml de Metanol + 1,4 ml de cido Actico + 0,1 ml de Glicerol.
PROCEDIMIENTO

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Es esencial correr un suero normal junto con los desconocidos, para una adecuada interpretacin de los
electroforetogramas.
1) Tomar las tiras siempre con una pinza y eliminar el exceso de metanol colocando las tiras entre dos
hojas de papel de filtro. Sumergirlas en el buffer durante 15 minutos (mximo una noche).
2) Colocar el buffer en los compartimientos de la cuba.
3) Eliminar el exceso de buffer con papel absorbente, como se realiz en el paso 1. Extender las tiras
sobre el puente de la cuba con la superficie activa penetrable por las protenas hacia arriba (es la
superficie ms opaca, despus de secar la tira entre hojas de papel de filtro, aunque tambin puede
reconocerse poniendo la tira con el ngulo achaflanado abajo y a la derecha). La tira debe quedar bien
tiesa y plana. Cuidar que los extremos de la tira se compriman firmemente contra los puentes de papel
de filtro utilizados para conseguir una perfecta transmisin de la corriente elctrica. Conviene operar
rpidamente para evitar evaporaciones.
4) Utilizar Azul de Bromofenol como marcador de frente de corrida: Unos 5 ul de una solucin alcohlica
del mismo se dejan secar sobre placas de plstico, se coloca una gota de suero sobre el colorante y se
mezcla con la punta del tip de la micropipeta.
5) Efectuar la siembra del suero (aproximadamente 3 a 5 ul) con capilar, micropipeta o sembrador,
dibujando una lnea recta paralela al borde inferior (catdico) de la tira a 2 cm del mismo. Estos ltimos
permiten hacer una siembra mas precisa.
6) Tapar la cuba cuidadosamente, obteniendo un buen cierre.
7) Efectuar la migracin electrofortica a un potencial entre 150 - 200 V ajustado para tener 1 mA por
cm de tira. Controlar la migracin por el frente coloreado de albmina, que es la ms veloz.
8) Se deja el sistema en esas condiciones de 35 a 50 minutos.
9) Finalizar la corrida cuando el frente se acerque al borde andico de la tira, desconectar el aparato,
sacar las tiras y sumergirlas en solucin colorante 3 minutos.
10) Colocar luego las tiras en sucesivos baos de solucin decolorante, agitando durante 10 minutos en
cada bao, hasta obtener una clara visualizacin de las fracciones proteicas con un fondo
perfectamente claro.
Cuantificacin de las fracciones
Por Elucin (Tcnica econmica y por ello muy utilizada): Preparar series de 5 tubos con 2 ml de
solucin eluyente en cada uno. Cortar las fracciones coloreadas por sus valles, introducir en los
correspondientes tubos y agitar hasta que todo el colorante pase al lquido. Si se trabaja con
solucin eluyente al 60 % se calienta levemente el fondo de los tubos para facilitar la elucin.
Leer en espectrofotmetro a 620 nm para Amido Schwart o a 520 nm para Ponceau S. Se
calcula el porcentaje correspondiente a cada fraccin proteica relacionando la densidad ptica
de cada una de ellas a la suma total de densidades pticas. Para la cuantificacin en gr/dl es
necesario determinar el valor de protenas totales en suero (por el Mtodo de Biuret) para
relacionar luego este valor (correspondiente al 100 % de protenas sricas) con el porcentaje
correspondiente a cada fraccin.

Por Densitometra (Tcnica prctica para analizar muchas corridas por da, pero requiere un
densitmetro, aparato de elevado costo): Para realizar el registro densitomtrico se debe
transparentar previamente la tira. Para ello, acabada la decoloracin de la forma habitual, se
deben sumergir las tiras en metanol puro anhidro durante 5 minutos como mnimo en cubeta
seca, luego en solucin transparentadora durante 10 minutos como mnimo. A continuacin
colocar las tiras sobre una placa de vidrio cuidando que no queden burbujas de aire entre la tira
y el vidrio. Calentar la placa unos minutos colocndola bajo una lmpara de luz fuerte (100200V) a 5-10 cm de distancia, o en estufa a 60 - 70 C unos 10 minutos hasta transparencia
total. Conviene operar rpidamente con las tiras una vez que salen del bao transparentador
para evitar evaporaciones de la solucin transparentadora. Luego invertir la placa sobre papel de
filtro y dejar enfriar durante unos 20 minutos como mnimo. Se puede seguidamente separar la
tira de la placa de vidrio, conservndola en sobre de plstico o entre papeles. Efectuar la lectura
con el densitmetro. Las tiras se conservan indefinidamente y se las puede cortar, pegar y
archivar.

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Valores e Intervalos de Referencia en suero sanguneo:

En g/dl
En % dentro de las protenas
Fraccin
Proteica
Promedio
Lmites
Promedio
Lmites
normales
normales
Albmina
Globulinas alfa1
Globulinas alfa2
Globulinas beta
Globulinas gamma

4,5
0,31
0,48
0,81
0,90

4,0 - 5,2
0,2 - 0,4
0,4 - 0,7
0,7 - 0,9
0,7 - 1,4

64,3
4,3
6,9
11,5
13,0

57 - 74
3-5
5-9
9 - 14
12 - 20

Cada laboratorio debe obtener sus propios valores de referencia, o utilizar los obtenidos en otro
laboratorio de la misma cuidad, que atienda poblacin de similar nivel socioeconmico y con la misma
metodologa preanaltica y analtica.

BIBLIOGRAFIA
Gradwohl- Sonnerwirth- Jaret "Mtodos y Diagnsticos del Laboratorio Clnico" 8 Edicin 1983.
Captulos 9 y 12. Editorial Panamericana.
Pesce - Kaplan "Qumica Clnica. Mtodos". Edicin 1990. Captulos 12 y 17. Editorial Panamericana.
Todd - Sanford "Diagnstico clnico por el laboratorio I. Davidson y J. B. Henry. Editorial Salvat.
Enrique E. Heer, Ricardo A. Margni y colaboradores. "Electro e Inmunoelectroforesis". Manual de
Laboratorio e Interpretaciones fundamentales. 1 Edicin 1971. Capitulo 1. Gumersindo Fernndez
Editor Argentina.
Alfonso Balcells "La Clnica y el Laboratorio". 17 Edicin 1997. Parte 1. Capitulo 3. Editorial Masson S.
A. Barcelona (Espaa).
D. J. Holme, H Peck. "Bioqumica Analtica". Edicin 1983. Capitulo 3. Editorial ACRIBIA SA. Zaragoza
(Espaa).
Facultad de Ciencias Bioqumicas. Universidad Nacional de Rosario. "Gua de Trabajos Prcticos".
Bioqumica Clnica Cuantitativa. Edicin 1977. Servicio de Publicaciones de la Universidad Nacional de
Rosario. Argentina.