Beruflich Dokumente
Kultur Dokumente
Mara Adelina Jimnez Arellanes, Nallely Rosalba Romn Corts, Ignacio Garca
Actividad antioxidante y antimicrobiana del extracto hexnico y compuestos puros del rizoma de Aristolochia
taliscana
Revista Mexicana de Ciencias Farmacuticas, vol. 42, nm. 3, julio-septiembre, 2011, pp. 35-41,
Asociacin Farmacutica Mexicana, A.C.
Mxico
Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=57924211005
Cmo citar?
Fascculo completo
Pgina de la revista
www.redalyc.org
Proyecto acadmico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto
DE: FARMACUTICAS
Trabajo Cientifico
Abstract
Aristo/ochia taliscana is a medicinal species known as guaco. By chemical fractionation from the hexanic extract, ()-licarin A and
B, and eupomatenoid 1 and 7 were isolated. These compounds were identified by comparing spectroscopic and spectrometric
data with those described in the literature. Antioxidant activity and polyphenols were determined by ABTS method and FolinCiocalteu reactive, respectively. Antibacterial activity was performed by broth dilution against Escherichia coli, Pseudomona
f1uorescens, and Lysteria monocytogenes. ()-Licarin A, eupomatenoid 7, and the hexanic extract exhibited significant antioxidant
activity; ()-Iicarin A and eupomatenoid 7 were positive in polyphenols test. The hexanic extract and eupomatenoid 7 inhibited
the growth of all bacteria strains, showing an MIC = 0.5 Land 0.7 mg/mL, respectively.
Correspondencia
Dra. Marfa Adelina Jimenez Arellanes
U.I.M. Farmacologia Productos Naturales, Hospital de
Pediatda, Ed. CORSE
2 piso, Centro Medico Nacional Siglo XXI, IMSS.
Av. Cuauhtc!moc 330 Col. Doctores 06720, Delg.
Cuauhtemoc, Mexico, D.E
e-mai1:adelinajim08@prodigynet mx
35
Introduccion
Aristolochia taliscana es conocida comUn.mente en Mexico como
guaco 0 raiz de guam, pertenece a la familia Aristolochiaceae y es
una hierba de naturaleza trepadora. 1 En la medicina tradicional, la infusi6n del rizoma es empleada para tratar mordeduras de serpiente, afecciones dermato16gicas, diarrea y t08. 2 Estudios quimicos previos describen que esta planta biosintetiza
neolignanos como ()-licarina A y By eupomatenoide 1 y 7,
austrobailignano 7, fragransina A, entre otros.2,3 Tres de estos
compuestos inhibieron el crecimiento de Mycobacterium tuberculosis H37Rv; la ()-licarina A y el eupomatenoide 7 presentaron
una Concentraci6n Minima Inhibitoria (CMI) =25 l'g/mL y la
()-licarina B mostr6 una CMI =50 l'g/mL. AdemOs, la ()-licarina A result6 muy activo contra 4 ccpas monoresistentes de
M. tuberculosis H37Rv, contra 12 aislados clinicos multifarmacoresistentes (MDR) de M. tuberculosis y 5 cepas de micobacterias no tuberculosas con un rango de CMI =3.12 -12.5 I'g/mL;
la ()-licarina B y eupomatenoide 7 resultaron menos activas
Material y metodo
taron que la dosis letal media (LD,,) del extracto y de la ()-licarina A es mayor a 1706 mglkg, efecto determinado en ratones
BalbIc clinicamente sanos, administrando el compuesto por via
intragastrica.5 Continuando con el estudio quimico-biol6gico
de la especie, en este trabajo se describe la actividad antibaeteriana y antioxidante del extracto hex:inico, asi como e1 aislamiento de un compuesto adicional y la actividad antibacteriana
y antioxidante de los compuestos puros y del extracto.
Debido al elevado costa de los farmacos aunado al poco acceso
a los sistemas de salud, al problema de la filrmaeoresistencia y
los severos efectos secundarios que ocasionan los medicamen-
miento prematuro, problemas cardiovasculares y el mal de Parkinson entre otros; van en aumento y su presencia esta asociada
interna en CDCI,. Los espectros de masas por impacto electr6nico se obtuvieron en un equipo Jeol AX-505 HA a 70 eV.
Los puntos de fusi6n (p.) fueron determinados en un aparato
Fisher-Johns y se reportan sin corregir. EI fraccionamiento
quimico se hizo por cromatografia en columna abierta de fase
normal (CC-FN) utilizando como fase estacionaria silica gel 60
(70-230 mesh, Merck) y la cromatografia en capa fina (ccf) se
realiz6 en placas de aluminio recubiertas con silica gel 60 UV25'
(0.2 mm, Merck). Los disolventes empleados [n-Hexano (nHex), cloroformo (CHCI,), y metanol (MeOH)] fueron grado
RA (Ma1linckrodt 0 J.T. Baker). Las plaeas de ceffueron reveladas con H 2 SO, al10% y calentamiento al1()(}<>C. La cromatografla liquida de alta resoluci6n (CLAR) se desarro1l6 en un
cromat6grafo Waters 600 conectado a un detector de arreglo
de diodos 996. EI control y manejo del equipo y la adqnisici6n
de datos se realiz6 mediante el programa Millennium 32 (Waters). Se emple6 una columna analitica fase reversa Spherisorb'"
10 I'm ODS2 RP (4.6 x 250 mm, Waters). Como fase m6vil se
emple6 un sisteroa isocnitico con MeOH (grado CLAR, ].T.
Baker) para el eupomatenoide 7, licarina A y B, y para el eupomatenoide 1 se utiliz6 aeetonitrilo::icido f6rmico 98:2. EI flujo
fue de 0.3 mUmin, el tiempo de cotrida fue de 26 min. Las
muestras fueron solubilizadas en MeOH (1 mg/mL) y el volumen de inyecci6n fue de 50 flL.
plean sustancias antioxidantes (AO) de origen natural 0 sintetico; sin embargo, el uso de estas Ultimas ha sido rcstringido por
su potencial carcinogenico.u Una gran variedad de sustancias
AO se encuentran en frutos, verduras comestibles y/o en plan-
36
DE: FARMACUTICAS
Preparacion del =acto y obtencion de compuestos: el extracto
se preparo via maceracion con n-Hexano RA a partir 2.068 kg
de rizoma seco y moUdo, a temperatura ambiente. Mediante
este proceso se obtuvieron 24.55 g de =acto crudo, el cual fue
sometido a fraccionamiento quimico por CC- FN siguiendo la
metodologfa descrita por Leon y Leon-Diaz.4,5
Determinacion de la Actividad Antioxidante (AAO): a) preparacion de muestras: 250 mg de muestra (extracto y/o compuesto puro) se disolvieron en 10 mL de acido acetico en acetonitrilo al 4%, se coloOO en Bano Marfa a 30"C con agitacion
durante 1 h.; al finalizar este periodo las muestras fueron aforadas a 25 mL con 1a misma soludon, esta mezcla se filtr6 con
un Acrodisc '" (0.2 flm). Cada muestra se preparo al momento
de emplearse.
b) Determinacion de polifenoles totales (PT): este ensayo se
llevo a cabo siguiendo la metodologfa descrita por Madhujitb
y Shahidi21 con algunas modificaciones. Se tomaron 500 flL
de muestra previamente preparadas (inciso a), se Ie adicionaron
500 flL del reactivo de Folin-Ciocalteau y 4 mL de carbonato
de sodio (Na,CO" 0.7 M), esta mezcla se agit6 vigorosamente
e incubo durante 2 h. a temperatura ambiente y en oscuridad.
Transcurrido el tiempo, las muestras fueron anallzadas en un espectrofot6metro (Varian Cary 50 Conc) a 765 nm. EI blanco fue
500 f1L de agua destilada, 500 flL de reactivo Folin-Ciocalteau
y 4 mL de Na,CO,. Como controles positivos se emple6 acido
ascorbico (Sigma), "cido gilico (Sigma) a la concentracion de
0-500 mgIL y catecol (0-100 mg/L, Sigma). Los resultados son
el promedio de tres determinaciones y se expresan como mg de
referencia/g de muestra (extracto 0 compuesto puro); calculados
mediante la siguiente formula:
(A-b)
_m
__ [_] mg de referencia
g de muestra
AAERef
A
(~).PM
mg de referencia
gdemuestra
Resultados y discusi6n
c) Determinacion de la actividad antioxidante (AAO) por el
mOtodo ABTS: en este casu se empleo la t&:nica descrita por
Re y col22, en la cual se genera el radical cation ABTS" que
se obtiene tras la reaccion de ABTS (7 mM) con persulfato de
potasio (2.45 mM, concentracion final), esta mezcla se incuba
a temperatura ambiente durante 16 h. antes de emplearse y es
estable por 48 h. aproximadamente. EI radical es dilnido con
etanol hasta obtener una absorbancia de 0.7 0.1 a 734 nm a
30"C. Posteriormente, se toma 1 mL del radical ABTS y se
Ie adiciona 10 flL de las muestras preparadas en el inciso a. La
mezcla se agito e incubO a 30"C, finalmente la absorbancia se
determino al minuto uno y al minuto 7 de reaccion. EI blanco
37
()-Iicarina A, B Ydel eupamatenoide 7; 1a ()-Iicarina A present6 un T ll. 10.09 min, e1 eupomatenoide 7 present6 un T R.
de 13.7 min y la ()-Iicarina B present6 un T R. 14.6 min. Las
condiciones analiti.cas empleadas para detectar estos compuestos
presentan buena reso1ud.6n, cabe seiiab.r que solo se ha descrito
'"0
14.59
licarina B
'.00
'"
'"
;/
'.80
'.60
'AO
"
'"
;/
'"
,.20
OR
eupomatenoide 7
'.00
{)
1.80
!;l
licarinaB
1.60
;/
'"
lAO
'"
1.20
cc~
1.00
0.80
OR
13.67
eupomaten .
lkarinaA
0.60
10.00
OAO
licarinaA
0.20
0.00
"""
...,
<00
'.00
".00
m.oo
""'" """
Figural
U.O
3.00
'00
Lq
0,
:1"&0
1.00
13.069
eapoma~l
000
:;1.00
4.00
6.00
8.00
minutos
Figura2
38
DE: FARMACUTICA
Tabla 1. Datos de RMN-'H y 13Cparael
eupomatenoide 1 y 7 aislados del rizoma deA. taJisclI1Ja
Proton
Eupomatenoide
7
151.48
110.19
133.05
1
151.14
110.3
133.0
109.16
109.2
7.1
133.61
133.6
7.25-7.32
104.42
104.4
7
7'
177.82
142.09
177.8
142.1
l'
123.67
2'
109.43
3'
146.58
4'
109.43
5'
114.44
6'
120.62
Co
131.46
C,
124.36
C,
18.41
CH.
9.57
OCH,O
OCH,
56.05
123.7
109.4
147.4
147.9
114.4
120.6
131.4
124.4
18.4
.69
101.2
56.2
7.03
n!03
.....,..1.5)
n.6.82
aH-l.5)
6.82
a~.1.5)
H=1.5)
7.01
a1'--5,=2.0)
7.25 7.32
a5"-4,=8.2)
6.98
a5'~'=0.6
"8:~) J
2'
5'
6'
02'-5'=2)
05'-4'=8.2)
6.98
05,-,,8.2,12'-
1"
a
P
CH,
OCH.
OCB.
OCRO
OH
Eupomatenoide
2
3
3.
2
3
4
Carbona
1
..
--
.=0.6)
6.49
6.15-6.27
1.90
2.40
3.97
4.03
6.5
6.15-6.27
191
2.4
4.03
3.89
6.0
5.62
5.75
-
Hz,J~ =15.87
Actividad antimicrobiana: el extraeto hex:inico fue el que result6 mas activo presentando una CMl=0.5 mg/mL contra
las tres cepas de baeterias y el eupomatenoide 1 present6 una
Tabla 2. Contenido de polifenoles totales (PT) y actividad antioxidante (AAO) del extracto y de los
compuestos pums aislados de A. talisCIl1Ja.
Muestra
PT
(mg de reflg de muestra)
Acido
galico
Acido
asc6rbico
0.0
334.4
24.1
1227.7
45.2
.00
0.0
509.4
36.1
1859.6
67.7
.00
Catecal
Acido
galico
1.63.0
33.9 1
140.3 4
0.0
0.0
155.3
7.4
0.0
634.8
30
411
14.4
.00
162.6 11.2
.00
109.2
4.5
0.0
589.9
33.4
348.8
16.1
.00
56.6 0.2
265 1
192.3 0.9
0.0
151.2
12.8
143.4
2.3
.00
0.0
706.6
58.6
670.1
10.4
.00
0.0
521.2
53.7
496.8 9.5
.0
*mg de referencialg de muestra. AAEAG: Actividad antioxidante equivalente a acido gaIico; AAEAA: Actividad antioxidante
equivalente a :icido asc6rbico, AAEC: Actividad antioxidante equival.ente a catcco~ AAEQ;, actividad antioxidante equival.ente a
quercetina. Los wlores son presentados como promedio D.E,0=3.
39
acido asc6rbico
de bacterias resis-
Conclusiones
La ()-licarina A y eupomatenoide 7 aislados del rizoma de A.
taliscana presenta efecto antiaxidante. Unicamente e1 extracto
hexanico y el eupomatenoide 1 inhibieron el crecimiento de
las tres cepas de bacterias. A. taliscana constituye una fuente de
compuestos AO y antibacterianos.
Referencias
1. Martinez M. Catalogo de nombres vulgares y cientificos de
plantas mexicanas. 1" Ed. Fondo de Cultura Econ6mico,
Mexico; 1979, p.167.
2. Abe F, Nagafuji S, Yamauchi T, Okade H, Maki], Higo H,
Akahane H, Aguilar A, ]imenez-Estrada M, Reyes-Chilpa
R. Trypanocidal constituents in plants 1. Evaluation ofsome
Mexican plants for their trypanocidal activity and active constituents in guaco roots ofAristolochia taliscana. Bioi Pharm
Bul. 2002; 25(9):1188-119l.
3. Enriquez RG, Chavez MA, Reyoolds WF. Phytochemical
investigation of plants of the genus Aristolochia. 1. Isola-
40
DE: FARMACUTICAS
17. Andrade JE, Burgess JR. Effect of the citrus f1avonone
naringenin on oxidative stress in rats. J Agric Food Chem.
2007; 55(6):2142-2148.
18. Duenas M, Gonz:ilez MS, Gonz:ilez PA, Santos BC. Antioxidant evaluation of O-methylated metabolities of chatechin, epicatechin and queroetin.J Pharm Biomed Anal. 2009;
51(2):443-449.
19. MunozJAM, Ramos EF. Componentes fenalicos de la dieta y sus propiedades biomedicina1es. Rev Horiz Med. 2007;
7:23-31.
20. Sellapan S, Akoh CC, Krewer G. Phenolic compounds
and antioxidant capacity of Georgia-grow blueberries and
b1ackberries.J Agric Food Chem. 2002; 50:2432-2438.
21. Madhujith T, Shahidi F. Antioxidant potential ofpea beans
(Phaseolus vulgaris L.).J Food Sci. 2005; 70(1):S85-S90.
22. Re R, Pellegrini N, Proteggente A, Pannala A, Yang M,
Rive-Evans C. Antioxidant activity an improved ABTS
radical cation decolorization assay. Free Radic Bioi Med.
1999; 26(9/10):1231-1237.
23. Mann CM, Markham JL. A new method for determining
the minimum inhibitory concentration of essential oils. J
Applied Microbiol.1998; 84:538-544.
24. Li F, Yang
Simultaneous determination ofdiasteromers
(+ )-licarin A and isolicarin from Myristica fragrans in rat
plasma by HPLC and its application to their pharmacokinetics. Planta Med. 2008; 74:880-884.
25. Luna MM. Estudio quirnico y biolagico deAristolochia ekgans.
26.
27.
28.
29.
30.
31.
xw.
32.
41