MANUAL DE PRCTICAS LABORATORIO DE

QUMICA DE PRODUCTOS NATURALES

DIRECTORIO

MTRO. EMILIO JOS BAOS ARDAVN

RECTOR

MTRO. FRANCISCO FERNANDO EUGENIO URRUTIA ALBISUA

VICE-RECTOR ACADMICO

M. enCs. MARIANO SNCHEZ CUEVAS

DIRECTOR DEL DEPARTAMENTO DE
CIENCIAS BIOLGICAS

M.C. MARIA CRISTINA MIRANDA VERGARA

COORDINADORA DEL REA O FACULTAD

M.C. ZAIDA NELLY JUREZ

AUTOR

EXPRESIN REFLEXIVA
La Qumica de Productos Naturales de origen vegetal animal es de
gran utilidad al hombre en la bsqueda de nuevos frmacos y en el
aprovechamiento integral de los metabolitos secundarios que tienen
aplicacin en reas como la de alimentos, control de plagas,
toxicologa, etc. En este curso, se obtendrn habilidades en el uso de
tcnicas de extraccin, separacin e identificacin de los principios
activos, necesarias para la realizacin de los ensayos biolgicos que
demuestren su actividad.

ndice
EXPRESIN REFLEXIVA.......................................................................................................... 3
INTRODUCCIN ........................................................................................................................ 5
NORMAS DE SEGURIDAD DE LOS LABORATORIOS ......................................................... 6
REGLAS DE LABORATORIO PARA ALUMNOS DE QUMICA DE PRODUCTOS
NATURALES ............................................................................................................................... 8
CRITERIOS DE EVALUACIN ............................................................................................... 10

Cdigo de conducta .......................................................................................................... 10

Requisitos para hacer el reporte........................................................................................ 10
Procedimientos de evaluacin .......................................................................................... 10
PROPSITO DEL LABORATORIO ........................................................................................ 11

ANLISIS FITOQUMICO PRELIMINAR ................................................................... 12

FLAVONOIDES .............................................................................................................. 16
FLAVONOIDES .............................................................................................................. 21
PRCTICA 3 ............................................................................................................................. 23

SAPONSIDOS............................................................................................................... 23
PRCTICA 4 ............................................................................................................................. 26

ESENCIAS ....................................................................................................................... 26
PRCTICA 5 ............................................................................................................................. 29

HETERSIDOS ANTRAQUINNICOS ....................................................................... 29

PRCTICA 6 ............................................................................................................................. 33

ALCALOIDES ................................................................................................................. 33
PRCTICA 7 ............................................................................................................................. 39

RECONOCIMIENTO DE TANINOS ............................................................................. 39

PRCTICA 8 ............................................................................................................................. 41

OBTENCIN DE UN EXTRACTO VEGETAL ............................................................ 41

PRCTICA 9 ............................................................................................................................. 43

CROMATOGRAFA DE COLUMNA Y PLACA FINA ............................................... 43

BIBLIOGRAFA ......................................................................................................................... 46

INTRODUCCIN
La Qumica de los Productos Naturales se refiere a la investigacin
de los metabolitos secundarios o "metabolitos especiales" de fuentes
naturales de origen vegetal, animal, marino, fngico y bacteriano.
Se consideran Productos Naturales a todos los compuestos orgnicos
provenientes del metabolismo secundario o tambin llamado
metabolismo especial que, independientemente del peso molecular
(PM), se producen en ese organismo vivo como respuesta ante las
condiciones externas, ya sea: estrs hdrico, trmico, de superpoblacin y radiante, siendo en general seales qumicas frente a
herbivora, plagas, patgenos y simbiosis con otros organismos. Estos
son justamente compuestos de inters porque son activos en
organismos animales, incluido el hombre.

NORMAS DE SEGURIDAD DE LOS LABORATORIOS

Localiza los dispositivos de seguridad ms prximos.

Estos dispositivos son elementos tales como extintores, lavaojos, ducha de
seguridad, mantas anti-fuego, salida de emergencia. etc. Infrmate sobre su
funcionamiento.
En caso de accidente.
Considera la seguridad de sus compaeros, por ello el laboratorio es un lugar
para trabajar con seriedad. En caso de cualquier accidente personal o del material
de trabajo, notifquese inmediatamente al maestro.
Infrmate sobre las medidas bsicas de seguridad.
El trabajo en el laboratorio exige conocer una serie de medidas bsicas de
seguridad que son las que intenta recoger esta gua.
Presta atencin a las medidas especficas de seguridad.
Las operaciones que se realizan en algunas prcticas requieren informacin
especfica de seguridad. Estas instrucciones son dadas por el profesor y/o
recogidas en el guin de laboratorio y debes de prestarles una especial atencin.
En caso de duda, consulta al profesor.
Cualquier duda que tengas, consltala con tu profesor. Recuerda que no est
permitido realizar ninguna experiencia no autorizada por tu profesor.
Cuida tus ojos.
Los ojos son particularmente susceptibles de dao permanente por productos
corrosivos, as como por salpicaduras de partculas.
Es obligatorio usar gafas de seguridad siempre que se est en un laboratorio
donde los ojos puedan resultar daados. No lleves lentes de contacto en el
laboratorio, ya que en caso de accidente, las salpicaduras de productos qumicos
o sus vapores pueden pasar detrs de las lentes y provocar lesiones en los ojos.
Vestuario de laboratorio.
El uso de bata es obligatorio en el laboratorio, ya que por mucho cuidado que se
tenga al trabajar, las salpicaduras de productos qumicos son inevitables. La bata
ser preferentemente de algodn, porque en caso de accidente, otros tejidos
pueden adherirse a la piel, aumentando el dao.
Usa guantes.
6

Es recomendable usar guantes, sobre todo cuando se utilizan sustancias

corrosivas o txicas. En ocasiones, pueden ser recomendables los guantes de un
slo uso.

REGLAS DE LABORATORIO PARA ALUMNOS DE

QUMICA DE PRODUCTOS NATURALES
1. Todos los estudiantes debern usar bata blanca del
correctamente abotonada.

laboratorio y

2. Est prohibido fumar, comer, beber o introducir alimentos al laboratorio an

fuera de la hora de prctica.
3. La hora de entrada tiene 5 minutos de tolerancia, despus no se permitir el
acceso al laboratorio.
4. Coloca tus objetos personales en el lugar que te indique tu profesor, esto es
para evitar la acumulacin de cosas en el rea de trabajo
5. Mantener el orden durante el transcurso de la prctica y respeto a la clase y a
los compaeros.
6. Se formarn equipos permanentes de trabajo y las faltas de asistencia a
alguna prctica no podrn ser repuestas con otro grupo.
7. Por cada prctica que se realice los alumnos tendrn que entregar un reporte
por equipo de la misma, que entregarn cada 8 das.
8. Cada material que se rompa o extrave, deber ser repuesto con material
nuevo (amparado con la nota de compra).
9. Antes de iniciar la prctica lea cuidadosamente las instrucciones, si no
entiende, pregunte al maestro.
10. Cada equipo deber responsabilizarse por la limpieza inmediata del material y
rea de trabajo.
11. Al destapar cualquier frasco de sustancias, tpese de inmediato despus de
utilizarlo y evite cambiar los tapones.
12. No arrojar slidos al lavadero o canales de desage.
13. Queda estrictamente prohibido sacar cualquier instrumento o equipo del
laboratorio.
14. Al final de la prctica entregar todo el material o equipo al maestro.
15. Al final de cada prctica colocar los bancos en su lugar y lavarse las manos
8

con agua y jabn.

CRITERIOS DE EVALUACIN

Cdigo de conducta
Tolerancia de 5 minutos para entrar al laboratorio. Despus de este tiempo
no se permitir el acceso de los alumnos.
No se permite el uso de celulares durante las sesiones de laboratorio.
Asistencia a todas las prcticas con bata blanca, zapatos cerrados con
suela antiderrapante y lentes de seguridad.
El equipo llevar el manual engargolado a las prcticas del laboratorio.
El alumno se compromete a leer previamente las prcticas del laboratorio.
Las inasistencias se justifican solamente con la carta expedida por los Directivos
de la Coordinacin
El alumno que falte a la prctica de laboratorio pierde derecho a su evaluacin.
Requisitos para hacer el reporte
PORTADA
Nombre de la universidad, nombre de la prctica y nmero, nombre
completo de los integrantes del equipo
REPORTE
OBJETIVO: Conoce los objetivos (propios del equipo) de la prctica).
PROCEDIMIENTO: Obtiene el procedimiento del manual de cada prctica
RESULTADOS: Obtiene los resultados esperados (dibujos o valores).
DISCUSIN FUNDAMENTADA: Discute los resultados y/o cambios que se
obtuvieron
en la prctica y fundamenta con los conocimientos tericos,
bibliogrficos y de artculos correspondientes al tema de la prctica.
CUESTIONARIO: Contesta correctamente las preguntas.
CONCLUSIN: Concluye con un comentario o idea final que resuma los aspectos
ms importantes tanto del tema que se trabaj como de los resultados de la
actividad que se realiz en la prctica
BIBLIOGRAFA
El reporte se entrega impreso a la semana de realizada.
Si hay clonacin de prctica se les anular la calificacin del reporte a los dos
equipos
Procedimientos de evaluacin
Reporte de laboratorio

55%
10

Diagramas
Seguridad
Trabajo final

15%
20%
10%

Total

100%

Esto equivale al 20% de la calificacin final de la materia.

La calificacin mnima PARA APROBAR EL LABORATORIO es de 7.0. Para
aprobar la materia es indispensable tener aprobada la teora y el laboratorio.

PROPSITO DEL LABORATORIO

Familiarizar al estudiante con las operaciones y reacciones ms usuales de la

qumica de productos naturales, as como sus limitaciones y riesgos.
Ensearles los principios cientficos sobre los que se basa la qumica de
productos naturales.
El verdadero xito se caracteriza por la realizacin eficaz de cada experiencia.
Incrementar su habilidad manual, criterio y confianza para efectuar reacciones.

11

PRCTICA 1
ANLISIS FITOQUMICO PRELIMINAR
OBJETIVO
Efectuar un anlisis preliminar al material vegetal, para detectar la presencia
de compuestos activos de inters, para su posterior extraccin.
INTRODUCCIN
El trabajo de investigacin bibliogrfica constituye el fundamento de cualquier
proyecto y determina la diferencia entre un buen proyecto y otro que no lo es.
Una revisin bibliogrfica consta de dos partes:
- Bsqueda de bibliografa: buscar, ordenar, gestionar y asimilar la informacin
disponible.
- Revisin de la bibliografa: comprender lo ledo y extraer las ideas principales
para nuestro propsito.
La investigacin bibliogrfica forma parte importante de la introduccin al proyecto
informtico y tiene diversas finalidades:
- Justifica el proyecto, esto es. Demuestra que el proyecto vale la pena y que
hemos elegido un tema relevante. Adems, demuestra que el proyecto es original
y no repite el trabajo de otros.
- Sita el proyecto dentro de un contexto, evaluando la investigacin anterior y
actual en dicho campo. Tambin muestra cmo se engloba el proyecto en este
contexto y en qu forma hace alguna contribucin nueva.
- Permite que otros investigadores consulten las fuentes bibliogrficas que hemos
citado y puedan entender y, en su caso, continuar nuestro trabajo.
Si imaginamos que un proyecto es como un edificio en construccin, los cimientos
debern ser siempre la investigacin bibliogrfica. A menudo los estudiantes
comienzan sus proyectos en la planta baja, no por los cimientos, ya que tienden
a exponer sus ideas sin justificarlas y fundamentarlas debidamente, sin ubicarlas
en el contexto adecuado. El resultado es un proyecto que no est correctamente
construido, hay fallos en la publicacin, en la perspectiva de la investigacin, en la
debilidad de las conclusiones y en la ignorancia de otros impactos e influencias
que pudiera haber tenido el esfuerzo hecho.
Una revisin bibliogrfica no debera realizarse de una forma irresponsable, sino
que debe hacerse desde una perspectiva estructurada y profesional. Leer
cualquier cosa que caiga en nuestras manos es aburrido y, desde luego, es una
prdida de tiempo. Por ello, es importante dirigir la bsqueda bibliogrfica hacia
los artculos o libros relevantes. Por supuesto, cuando se inicia un proceso de
12

bsqueda bibliogrfica no se sabe que material es el ms relevante; sin embargo,

a medida que se avanza en la investigacin, debemos delimitar la bsqueda todo
lo que sea posible.
Hay dos reglas de oro a recordar, cuando se realice una bsqueda
bibliogrfica:
- El proceso de bsqueda de informacin puede durar mucho tiempo. Por tanto,
hay que empezar lo antes posible y no recopilar material que no est relacionado
con el tema elegido.
- Debe anotar las referencias completas de cualquier tipo de material que se
obtenga. Esto ahorrar tiempo al final del proyecto, pues no habr que
malgastarlo en volver a la biblioteca a buscar los detalles concretos de los
artculos que deseemos citas.
Formatos de la Informacin.
La informacin se presenta en multitud de formatos diferentes, unos ms
accesibles ms reconocidos y mejor valorados acadmicamente que otros. Los
siguientes apartados resumen las distintas formas en las que aparece el material
bibliogrfico.
Libros.
Los libros son el punto de partida de cualquier investigacin bibliogrfica, pues
proporcionan una buena base y una visin global adecuada del tema elegido. Sin
embargo, hay que tener en cuenta que habitualmente, los libros representan
conocimiento consolidado
y por ello las ideas que presentan, estando
habitualmente consolidadas, no son de ltima actualidad.
Hay que conseguir cuanto antes el software necesario para el trabajo
(herramientas, libreras, componentes), pues no es deseable estar a la mitad
del proyecto y darse cuenta que el software que necesitamos ya no est
disponible o es muy caro.
Internet.
Internet aparece como una valiosa fuente de informacin, pero se debe tratar
con extrema cautela. Afortunadamente, cada vez existen una mayor cantidad de
pginas de informacin de gran valor; stas aparecen junto a otras menos fiables
y por ello hay que saber seleccionar. Internet puede ser una herramienta til de
bsqueda para material acadmico, informacin de empresas, software, y a
menudo podemos encontrar tambin trabajos publicados (artculos de revistas,
por ejemplo) que son difciles de obtener mediante procedimientos normales.

Evaluacin crtica.
Normalmente cuando se tiene que hacer una evaluacin y la gente escucha o
13

lee la palabra criticar cree que se emplea en un sentido negativo, sin embargo
evaluar crticamente es algo ms que entender el tema que se estudia y aprender
de memoria alguna de sus partes. Leer y entender lo que se ha ledo es
solamente la primera parte del proceso. Adems de conocer sus limitaciones, sus
contradicciones, sus reas de desarrollo y los callejones sin salida que pueda
tener. El punto crucial de la evaluacin crtica es pensar sobre lo que se est
leyendo.
No hay reglas especficas e infalibles que puedan aplicar para escribir una
perfecta revisin bibliogrfica, ya que es algo que se mejora con la prctica.
Sin embargo hay que recordar que una revisin bibliogrfica no es un informe
que enumera los artculos y libros que hemos ledo, sean relevantes o no. Hay
que ser selectivo en lo que se cita.
MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS
-

Visita a la Biblioteca
METODOLOGA
La informacin sobre estudios qumicos de plantas que les sern asignadas y
sustancias aisladas de ellas, se publica en revistas de diversas reas, como
Farmacia, Agricultura, Medicina, Botnica y otras. Por lo que la localizacin de los
datos sobre un vegetal especfico puede ser difcil.
Para hacer el trabajo de investigacin ms fcil se cuenta con el Chemical
Abstracts que condensa resmenes respecto a cualquier aspecto qumico
investigado en una especie vegetal. La informacin se busca en sus ndices de la
siguiente manera.
Busque en diccionarios de qumica, libros de texto, monografas y revistas de
repaso. Se debe empezar por las publicaciones ms recientes que abarcan
mayor cantidad de referencias.
Se deben anotar el nombre del autor, el ttulo del artculo y la revista donde
apareci, la informacin de importancia, as como el volumen, la pgina, el ao.
Anote tambin los volmenes, pginas o columnas y posicin del artculo y se
procede a revisarlos seleccionando el de importancia.
RESULTADOS Y OBSERVACIONES
1. Con ayuda de lo antes explicado cada equipo deber hacer una investigacin
bibliogrfica de la especie asignada por el Profesor del Laboratorio, sobre algunos
de los siguientes tpicos:
a) Botnica. Especifica la funcin de los componentes en la planta.
b) Bioqumica. Especifica las reacciones qumicas enzimticas, en las que el
compuesto participa en la planta.
c) Qumica. Especfica las propiedades qumicas y reacciones no enzimticas
del compuesto.
14

d) Farmacutica. Especifica los constituyentes de la planta, tiles en medicina.

Cada equipo entregar fotocopias del material recopilado, as como un resumen
sobre lo ms sobresaliente de su investigacin.

DISCUSIN DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFIA

15

PRCTICA 2 (PRIMERA PARTE)

FLAVONOIDES

OBJETIVO
Efectuar en el laboratorio una Extraccin de Hesperidina, uno de los Flavonoides
de la naranja.
INTRODUCCIN
Con este nombre se designa de manera general a una serie de compuestos,
ampliamente distribuidos en el reino vegetal, responsables, en muchas ocasiones,
de la coloracin de las flores, frutos e incluso de determinadas coloraciones de las
hojas.
Qumicamente poseen estructuras muy semejantes, ya que todos ellos tienen un
origen biosinttico, comn, con un esqueleto del tipo C6-C3-C6 y la gran mayora
derivan de la fenil-2-cromona, diferencindose unos de los otros por el grado de
oxidacin de su molcula. En la naturaleza pueden encontrarse en forma libre o
en forma de hetersidos, por unin a la estructura de la fenil-2-cromona de una o
varias osas (bien a travs de un puente oxdico o en uniones carbono-carbono,
formando C-hetersidos).
Atendiendo a su naturaleza qumica, pueden establecerse los siguientes grupos:
Flavonas y Flavonoles:
Se diferencian entre s en que todos los favonoles llevan un grupo hidroxilo en
C3, mientras que las flavonas carecen de l. A ambos grupos pertenecen la
mayora de los flavonoides conocidos. Tambin, y de una manera general, portan
dos hidroxilos en C6 y C7 que pueden estar libres, eterificados, esterificados o
unidos a molculas de osas, formando los correspondientes hetersidos. En el
caso de los C-hetersidos, la unin se realiza en el carbono anomrico de la osa
y el C6 o C8. El fenilo (anillo B) lleva generalmente un grupo hidroxilo en C4y es
frecuente la presencia de otro grupo hidroxilo en C3, ambos, libres, eterificados o
esterificados.
H
O

H
O
H
O

H
O

O
H

O
H

S
A
N
O
V
A
L
F

H
O
S
E
L
O
O N
O
V
H A
L
O F

H
O

16

Las flavanonas y flavanoles se pueden considerar derivados de las estructuras

de flavonas y flavonoles, respectivamente, por la hidrogenacin del doble enlace
en C2-C3.
H
O

H
O

H
O

H
O

O
H

O
H

S
E
L
O
N
H
O
O
V
A
L
F
O O
R
D
I
H I
H
O D

S
A
N
O
O N
A
V
H A
L
O F

Chalconas.

H
O

La apertura del heterociclo da lugar a este tipo de molculas, mantenindose

casi constante los sustituyentes en el resto de la estructura.
H
O

O
H
O
S
A
N
O
C
L
A
H
C

Auronas.

H
O

Se caracterizan por la sustitucin en la molcula del anillo pirnico por un anillo

furnico.

O
H

S
A
O N
O
R
U
A

Propiedades fsico-qumicas
Los hetersidos son generalmente solubles en agua, metanol, etanol, mezclas
hirdroalcohlicas e insolubles en disolventes apolares (cloroformo, benceno, etc.),
al contrario de las agliconas que son solubles en estos ltimos disolventes, e
insolubles en agua, aunque, si disponen de grupos fenlicos libres, se disuelven
en soluciones acuosas alcalinas.
17

La extraccin a partir del vegetal vendr condicionada por la solubilidad

particular del hetersido. De manera general, se pueden extraer con mezclas
hidroalcohlicas en caliente. La solucin obtenida es destilada al vaco para la
completa eliminacin del alcohol y, posteriormente es tratada con ter de petrleo,
cloroformo, al objeto de eliminar lpidos, clorofilas, agliconas, etc. A continuacin,
los hetersidos pueden ser extrados con acetato de etilo y proceder entonces a
su purificacin, generalmente mediante tcnicas cromatogrficas.
Reacciones de identificacin
De forma general, dan reacciones positivas con reactivos generales de fenoles:
Cloruro frrico y cido sulfanlicodiazotado, por citar los ms usuales.
Dentro de las reacciones ms especficas, se puede sealar aquella coloracin
que se origina cuando se trata una solucin hidroalcohlica de flavonoides con
magnesio metlico y HCl (reaccin de Shibata) o la aparicin de coloracin rojo
cereza si existen flavonas y dihidroflavanoles, con Zinc y HCl.
Las agliconas poseen espectros de absorcin en la regin ultravioleta
caractersticos, que sufren alteraciones en presencia de determinados reactivos
(cloruro de aluminio, acetato de sodio, etc.) y que ofrecen valiosos datos para la
caracterizacin de los mismos.
La cromatografa en capa fina es una tcnica muy utilizada para poner de
manifiesto la presencia de agliconas y hetersidos a partir de extractos vegetales.
Algunos flavonoides son coloreados (chalconas y auronas, por ejemplo), lo que
permite visualizacin directamente en el cromatograma: La utilizacin de diversos
reactivos (vapores de amoniaco, tricloruro de aluminio, etc.) y la observacin de
las placas antes y despus del revelado, a la luz visible y ultravioleta, permite, en
muchas ocasiones, no slo detectar la presencia de estos compuestos, sino
obtener informacin acerca del tipo de flavonoide presente.
La hesperidina es un hetersido aislado en 1828 por Leberton a partir del tejido
esponjoso interno de la piel de las naranjas (Citrus sinensis). No es un compuesto
amargo, al contrario que su ismero, la neohesperidina (presente en la naranja
amarga, Citrus aurantium, posee la propiedad de reducir la fragilidad de los
capilares sanguneos.
La hesperidina puede aislarse con gran facilidad, y el principio de la prctica
consiste en extraer dicho compuesto con metanol, previa eliminacin de las
esencias con ter de petrleo, hexano o cloroformo, concluyendo con la
hirdrlisis cida para la separacin del aglicn (hesperitina) y la porcin
glicosdica de la molcula (rutinosa: ramnosa ms glucosa).

18

Hesperidina
MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS (para las prcticas 1 y 2)
Reactivos
Agua destilada
Muestra. Cscara de naranja seca.
0.5ml de cido clorhdrico
Gotas de cloruro Frrico 1%(p/v)
Formamida
Magnesio en cinta
Etanol
100ml de metanol
0.8mL de cido Sulfhdrico
80 mL de cloroformo
20mL de formamida
20mL de etilen Glicol
0.1g de sulfato de sodio anhidro
1mL de fenol
10 ml de cloroformo: Acetato de Etilo
(60:40) (v/v)

1 Conexin en Y (inversa) 24/0 para

destilacin
1 Conexin porta termmetro 14/24, 24/40
1 Termmetro esmerilado 14/23
3 Pinzas de 3 dedos con nuez.
Portaobjetos
Embudo Bchner de plstico
Mortero de porcelana con pistilo
Embudo de separacin
Embudo estriado
Papel filtro Whatman
Bao Mara
Vasos de 10 mL
Bao de arena.
2 tubos de ensayo
Probeta de 25 y 50 mL
1 soporte universal
Equipos

Materiales
Cmara de Cromatografa (vaso + caja
Petri)
Capilares

1 parrilla de calentamiento
Rotavapor y bomba de vaco
Microscopio

Nota: TODO EL MATERIAL, AS COMO LAS CANTIDADES DE REACTIVOS

SE AJUSTARN A LA CANTIDAD DE MUESTRA DE LA CUAL SE DISPONE.
EN TODAS LAS PRCTICAS!

19

MTODOLOGA
Mtodo A. Extraccin hesperidina y hesperitina del pericarpio de la
naranja.

Pese10 g de polvo de pericarpio de naranja en un vaso de precipitados con

30 mL de cloroformo y agite unos 10 minutos, El cloroformo eliminar grasas y
otras sustancias no glucosdicas. Decante el cloroformo y ubquelo en el garrafn
de desechos correspondiente.
Pase el pericarpio de la naranja a un matraz redondo de 250 mL y aada
100 mL de metanol, refluje durante 20 minutos.
Apague el calentamiento, espere a que se enfre el sistema. (No retire el
agua al refrigerante hasta que finalice la ebullicin dentro del matraz).
A continuacin, con mucho cuidado decante el matraz a un vaso de 100
mL.
La solucin filtrada, que contiene entre otros compuestos la hesperidina, se
concentra a vaco en un rotavapor hasta consistencia semilquida (consistencia
como la miel).
Al extracto obtenido dentro del matraz, se le aaden 20 mL de formamida,
calentando en un bao Mara de 60-70 oC durante 3 minutos.
Filtre al vaco la solucin y al filtrado colquelo en un vaso de 250 mL y
adale 100 mL de agua destilada, dejando la solucin en reposo hasta el da
siguiente, para permitir la cristalizacin de la hesperidina.

20

PRCTICA 2 (SEGUNDA PARTE)

FLAVONOIDES
Segundo da.
El precipitado de hesperidina se recupera por filtracin al vaco.
Una pequea cantidad del precipitado se observa al microscopio, comprobando
la existencia de cristales de hesperidina, en forma de finas agujas.
Con una esptula se traslada todo el precipitado, a un erlenmeyer (o vaso de
precipitados de 100 mL) y se aaden 20 mL de etilenglicol, calentando
ligeramente en bao de agua.
Filtre si es preciso y el lquido filtrado constituye lo que de ahora en adelante
denominaremos solucin de hesperidina.
Hidrlisis de la Hesperidina
En un tubo de ensaye se colocan 2 mL de solucin de hesperidina y se
adicionan 0.5 mL de cido sulfrico concentrado, se mezcla y se calienta durante
30 minutos en un bao de agua a ebullicin.
Finalizando este tiempo, se vierten en un embudo de separacin y se aaden
50 mL de agua destilada. Se extrae dos veces con dos porciones de 25 mL de
cloroformo.
Se recuperan las fracciones de cloroformo y se colocan en un vaso limpio y
seco. En otro recipiente recupere la fase acuosa y gurdela para trabajar
posteriormente con ella.
A la fase clorofrmica (orgnica) se le aade 0.1 g de sulfato de sodio anhidro
para deshidratar.
Despus de unos minutos se decanta a un vaso limpio y seco y se concentra,
evaporndose en un bao de arena. Concentrar hasta que quede una cuarta
parte del volumen original (no debe llegar a sequedad).
Con este volumen realizar una cromatografa en capa fina, donde se detectar
la presencia de hesperitina, aglicona de la hesperidina.
Caracterizacin de azcares
En la fase acuosa que guard, se pondr de manifiesto la presencia de los
azcares liberados recurriendo a una reaccin colorimtrica.
Coloque 0.5 mL de la solucin acuosa en un tubo de ensayo, y adale 1 mL de
una solucin de fenol. Agite la mezcla y deje caer por la boca del tubo de ensaye
2.5 mL de H2SO4 concentrado gota a gota con una pipeta. El calor generado es
suficiente para la formacin de color cuando en la solucin existen azcares.
Hesperidina: Reacciones de Identificacin
1. Coloque en un tubo de ensaye 2 mL de la solucin de hesperidina, y
se le adiciona 1 mL de metanol. A continuacin se le aaden unas gotas de
21

solucin de cloruro frrico, si la prueba es positiva se deber formar un color

rojo vino.
2. En un tubo de ensaye se colocan 2 mL de la solucin de hesperidina,
se adicionan 0.5 mL de HCl concentrado y un trozo de cinta de magnesio. Agite
el tubo cuidadosamente. La presencia de hesperidina quedar puesta de
manifiesto por la aparicin de un color violeta.
Hesperitina: Cromatografa.
Cromatografa en capa fina
Preparar una placa cromatogrfica.
Aplicar dos muestras en cada placa, con la ayuda de un capilar (estirado). Las
muestras son de la solucin clorofrmica concentrada.
Eluente: Cloroformo/Acetato de Etilo (60:40) (v/v)
Revelador: FeCl3 1% (p/v) en etanol.
Patrn: Hesperitina.
Nota. La hesperitina se localizar como una mancha de color marrn rojizo.
RESULTADOS Y OBSERVACIONES
Caractersticas y usos de la planta que utiliz.
Especifique la cantidad de muestra que pes.
Determine la cantidad de producto recuperado en g y %.
Reporte el resultado de sus pruebas de identificacin.
Reporte las observaciones de su prctica.
DISCUSION DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS
CONCLUSIONES
BIIBLIOGRAFA CONSULTADA

22

PRCTICA 3
SAPONSIDOS
OBJETIVO
Aplicar una de las tcnicas mejor probadas para el aislamiento de Saponinas.
INTRODUCCIN
Los saponsidos constituyen un grupo particular dentro de los hetersidos.
Poseen dos propiedades caractersticas: ser tensoactivos y hemolticos. As, en
solucin acuosa son capaces de originar abundante espuma y por su poder
hemoltico, provocan la lisis de los eritrocitos, propiedad que los hace
especialmente txicos para animales de sangre fra.
Se clasifican en dos grandes grupos, segn la naturaleza de la genina:
esteroideos y triterpnicos.
En ambos tipos de saponsidos la posicin del hidroxilo en C3 es constante y
suele portar uno o dos oligsidos, ya sean lineales o ramificados, ligados por un
puente ter o ster.
La extraccin de estos compuestos, a partir de una droga, puede realizarse con
agua, mezclas hidroalcohlicas o metanol, despus de eliminar sustancias
lipdicas con otros disolventes.

H
O
O
C

O
O
H
O

O
H

S
o
Oc
i
Ct
I

Nr
r
i
c
Pi
l
RG
E.
Tc
I
RA
T

S
O
Ca
I
n
i
Dn

Oe
g
Rs
Eo
Ti
SD
E

ESTEROIDEOS

23

MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPO

Reactivos
28mL de alcohol Butlico normal
60mL de alcohol Etlico al 80%
Cloruro de Potasio
1.2mL de cloruro de Sodio
20mL de ter etlico
20mL de metanol
Hojas de la planta asignada molida
Tiras de pH
Materiales
2 Anillos metlicos.
Embudo Bchner

Embudo de separacin de 500 mL

Embudo de separacin de 250 mL
1 Matraz Kitazato de 500 mL
1 Matraz baln de 250 mL, 24/40
4 Soportes universales
Refrigerante de bolas.
2 Tubos de ensayo de 10 mL
2 Vasos de precipitados de 250 mL
Equipos
Parrilla de calentamiento
1 Balanza granataria
Bomba de vaco.

METODOLOGA
Extraccin de saponina de una planta
En un matraz de baln de 250 mL, coloque 20 g de hojas molidas o trituradas de
su planta y se agregue 60 mL de alcohol etlico al 80%. La mezcla se lleva a
reflujo 1 h.
Se decanta el metanol y se evapora a bao Mara (o con ayuda de vaco) hasta
un volumen de 12 mL. En seguida se agregan 1.2 g de Cloruro de sodio y la
mezcla se lleva a un pH de 4.5 con HCl al 10%(v/v). La solucin anterior se coloca
en un embudo de separacin y se extrae dos veces con porciones de 10 mL de
ter etlico, a fin de eliminar grasas y otras sustancias no glucosdicas.
Las capas acuosas se extraen nuevamente, 2 veces, con porciones de 14 mL
de alcohol butlico normal. Los extractos se renen y se concentran casi a
sequedad por destilacin directa en bao Mara. Se obtiene de esta forma una
saponina cruda. (Con un poco realice la prueba de identificacin).
La saponina que se obtuvo, puede purificarse con el siguiente mtodo:
Prueba de Identificacin
Para comprobar la presencia de saponinas, colocar en un tubo de ensayo una
pequea porcin de saponina cruda o purificada, agregar agua y agitar
enrgicamente. La formacin de espuma que permanezca por lo menos dos
minutos, indicara la presencia de saponinas.
RESULTADOS Y OBSERVACIONES
1. Caractersticas y usos de la planta que utiliz.
2. Rendimiento del producto obtenido.
3. Prueba de identificacin
24

4. Observaciones de la prctica.
CUESTIONARIO
1.
2.
3.

Investigar la frmula estructural de una saponina y su uso.

De ejemplos de otras plantas de donde se extraen saponinas
De otra forma de identificar una saponina.
DISCUSION DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS
CONCLUSIONES
BIIBLIOGRAFA CONSULTADA

25

PRCTICA 4
ESENCIAS
OBJETIVO
Efectuar en el laboratorio una
Esenciales.

tcnica para extraer e identificar Aceites

INTRODUCCIN
Las esencias, o aceites esenciales, son lquidos voltiles y olorosos que estn
contenidos en los rganos secretores de los vegetales.
Estn constituidas por mezclas complejas de sustancias: hidrocarburos
terpnicos y sus productos de oxidacin (alcoholes, aldehdos y cetonas);
compuestos aromticos (fenoles, aldehdos, cetonas), etc. En general, cada
esencia tiene un componente mayoritario que es el responsable de las
propiedades y caractersticas de esa esencia en particular, aunque el resto de
compuestos minoritarios aportan, en algunos casos calidad y fineza a la misma.
Extraccin
Para la extraccin de esencias se utilizan principalmente dos mtodos generales:
Extraccin con solventes. Las esencias son solubles en disolventes
lipdicos (ter de Petrleo, Cloroformo, Dicloroetano, etc.), lpidos
(manteca de vaca, aceite de oliva, etc.) y alcohol.
Destilacin en corriente de vapor de agua.
Ensayos a realizar en una esencia
Fsicos
Rotacin ptica, Densidad, ndice de Refraccin, Solubilidad en etanol y Punto de
Congelacin son los ms frecuentes.
Qumicos
ndice de acidez, etc.
H
O

H
O

H
O
L
O
L
A
N
I
L

O
N
E
M
I
C
p

L
O
C
A
V
R
A
C

L
O
M
I
T

26

MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPO

Reactivos
100 gr Planta seca asignada
Agua destilada
20 mL de cloruro de metileno
1 gr de sulfato de sodio anhidro
Materiales
1 Matraz redondo 24/40 de 500 mL
1 Matraz redondo 24/40 de 1000 mL
1 Refrigerante 24/40
1 Embudo 24/40
1 Conexin en U 24/40
1 Conexin porta termmetro 14/24, 24/40

1 Termmetro esmerilado 14/23

3 Pinzas de 3 dedos con nuez
3 soporte universal
1 Mechero Fisher
1 tela de asbesto
1 Pipeta
1 Bureta
Mangueras
Equipos
1 bomba de recirculacin de agua con su
charola y hielo
Balanza granataria

METODOLOGA
Arrastre con vapor
Antes de iniciar monte el equipo que le indique su Profesor de laboratorio.
Coloque en el matraz redondo 100 g de su planta molida y 50 mL de agua
destilada. Inicie el calentamiento cuidadoso de su muestra y utilice el agua del
embudo de separacin para reponer la que se va perdiendo durante la destilacin.
De este proceso, recupere aproximadamente 300 mL de destilado,
recuerde que para obtener una recuperacin completa del aceite debera
prolongar la destilacin hasta que ya no salieran gotas oleosas mezcladas con el
agua.
Si es posible la mayor parte del aceite que se recuper, se puede reunir en
la base del matraz donde se recibe el destilado, esto facilita su separacin por
decantacin. En ocasiones quedan algunas gotas en la superficie del agua, que
ni por agitacin se logra que caigan al fondo. En tal caso se separa la parte
principal mencionada y la solucin acuosa se somete a dos extracciones suaves,
con 10 mL de cloruro de metileno para cada extraccin.
Las fracciones de cloruro de metileno se juntan, se les agrega una pequea
cantidad de sulfato de sodio anhidro, para eliminar el exceso de agua presente, se
decanta (a un vaso limpio y seco), el cloruro de metileno, se evapora en campana
y se obtiene el producto deseado. Una las fracciones de aceite esencial
recuperado. Pese su producto.

27

RESULTADOS Y OBSERVACIONES
1. Caractersticas y usos de la planta que utiliz.
2. Especifique la cantidad de muestra que pes.
3. Determine la cantidad de aceite recuperado en g y %.
4. Reporte las observaciones de su prctica.

CUESTIONARIO
1. Qu aplicaciones tienen los aceites esenciales
2. De ejemplos de las plantas ricas en aceites esenciales pertenecientes a
las familias antes mencionadas, por ejemplo: labiceas, pinceas, etc.
3. Por qu se recomienda utilizar planta fresca y seca?

DISCUSION DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

CONCLUSIONES
BIIBLIOGRAFA CONSULTADA

28

PRCTICA 5
HETERSIDOS ANTRAQUINNICOS
OBJETIVO
Extraer y caracterizar qumicamente antraquinonas que se encuentran en
numerosas drogas.
INTRODUCCIN
Hetersidos.
Con este nombre se designa a una serie de productos naturales cuyo elemento
comn es estar constituidos por un resto glicosdico (una, dos o ms osas o
derivados de osas) unido a una parte no glicosdica denominada aglicona o
aglicn o genina.
La unin entre estas dos partes de la molcula se realiza a travs de un tomo
puente. En la gran mayora es un tomo de Oxgeno, dando lugar a los llamados
O-hetersidos, aunque tambin puede ser Nitrgeno (N-hetersidos) o Azufre (Shetersidos). En algunas ocasiones no existe ese tomo puente originndose la
unin entre dos tomos de carbono (C-hetersidos).
En el establecimiento de dicha unin, siempre participa el hidroxilo del Carbono
1 de la osa y un grupo hidroxilo, amino o sulfhidrilo del aglicn. Al estar bloqueado
el hidroxilo del Carbono 1 de la osa, sta pierde su carcter reductor.
Propiedades Generales
Los hetersidos, a diferencia de otros grupos fitoqumicos no ofrecen un
conjunto de propiedades comunes, fundamentalmente por la gran diversidad
estructural que puede presentar el aglucn y que va a condicionar las
caractersticas del mismo.
En general, los hetersidos son compuestos slidos, cristalinos (los hay
amorfos), de punto de fusin definido, generalmente incoloros (los hay
coloreados) no reductores; solubles en agua, metanol, etanol, acetato de etilo y
mezclas hidroalcohlicas e insolubles en disolventes poco polares (cloroformo,
benceno, etc.). Por el contario, las agliconas suelen ser solubles en los
disolventes lipdicos e insolubles o muy poco solubles en agua.
La nica propiedad comn a todos ellos es la de ser hidrolizables: Por
tratamiento con cidos, se rompe el puente de unin separndose el aglucn de
la osa, con lo que sta recupera sus propiedades reductoras. Esta hidrlisis
puede conseguirse en condiciones muy suaves o exigir situaciones ms
enrgicas, caso de los C-hetersidos, que por ser una unin carbono-carbono,
precisa de una hidrlisis oxidativa (HCl/FeCl3 y calor).
29

Hetersidos Antraquinnicos
Las antraquinonas son derivados hidroxilados de la dicetona del antraceno con
propiedades laxantes o purgantes. Se encuentran en numerosas drogas (hojas de
Sen, rizoma de Ruibarbo, corteza de Cscara Sagrada, corteza de Frngula,
Aloes), al estado libre o combinadas con azcares, formando hetersidos. Los
hetersidos son solubles en agua mientras que las aglicoas se disuelven en
disolventes lipdicos y soluciones alcalinas acuosas.

Qumicamente se pueden poner de manifiesto, cuando se encuentran en estado

libre y no en forma de hetersido, por la reaccin de Borntrager, que se basa en el
color rojo-cereza que dan estos compuesto con lo lcalis (hidrxido de sodio,
hidrxido de amonio). Otra reaccin coloreada de las 1, 8-dihidroxi antraquinonas
es con acetato de mangnesio en solucin metanlica. Con este reactivo se
desarrolla un color rojo, ms intenso y estable que con los lcalis.
Las antronas reaccionan con la p-nitrosodimetilanilina, formando un azoderivado.
Se investigarn en este apartado las antraquinonas libres y aqullas
procedentes de las combinadas.
MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPO
Reactivos

Materiales

Hojas de planta
Muestra
20ml de Cloroformo
4ml de NH4OH al 10% (v/v)
5ml de H2SO4 10% (v/v)
Papel filtro # 2

1 Matraz Erlenmeyer de 50 ml
2 Tubos de ensayo
Embudo de separacin de 100 mL
Equipos
Parrilla

30

METODOLOGA
Antraquinonas Libres
Se pesa 1 g de polvo de hoja de planta y se coloca en un matraz Erlenmeyer de
50 mL (deben estar encendidos los extractores del laboratorio), se le aaden 10
mL de cloroformo agite la mezcla durante 5 minutos.
Decante el contenido del matraz a un tubo de ensaye, evite que el slido se pase
al tubo.
Al lquido filtrado del tubo se le aaden 2 mL de hidrxido de amonio al 10%. Se
agita y se deja reposar hasta la separacin de las dos capas. Si en el polvo de la
droga existen antraquinonas libres, la capa amoniacal aparecer de color rojocereza.
Antraquinonas combinadas
Se pesa 1 g de polvo de droga (medicina que se sepa contiene la planta), se
coloca en un vaso de 100 mL y se pone a hervir sobre una parrilla con 50 mL de
agua, durante 2 minutos.
Al cabo del tiempo deber enfriar y decantar la solucin a otro vaso de 100 mL.
A la solucin filtrada se le aaden 5 mL de H2SO4 al 10% y se calienta ebullicin
durante 5 minutos (sobre parrilla), con el fin de hidrolizar los hetersidos
antraquinnicos.
Se deja enfriar la solucin (a temperatura ambiente) y se trasvasa a un embudo
de separacin donde se aaden 10 mL de cloroformo. Se agita para que las
antraquinonas libres se disuelvan
en el cloroformo y se deja reposar,
recuperndose la fase orgnica (clorofrmica) en un tubo de ensayo.
Se aaden a este tubo 2mL de hidrxido de amonio al 10% se agita y se deja
reposar.
La presencia de antraquinonas libres se pondr de manifiesto por la aparicin de
color rojo cereza en la capa acuosa amoniacal.
RESULTADOS Y OBSERVACIONES
Caractersticas y usos de la planta(s) que utiliz.
Observaciones y resultados de las reacciones que llev a cabo.
CUESTIONARIO
1. De acuerdo a los ejemplos de su prctica, sugiera los equipos que podra
utilizar para identificar estos compuestos? Explique su respuesta.
En dnde se pueden encontrar estos hetersidos?
Nombre 5 hetersidos antraquinnicos obtenidos de las plantas. Escriba su
frmula.
Por qu son importantes las antraquinonas?
De qu otra forma podra identificar esto hetersidos antraquinnicos?
31

DISCUSIN DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA CONSULTADA

32

PRCTICA 6
ALCALOIDES
OBJETIVO
Extraer y caracterizar qumicamente un Alcaloide a partir de una planta.
INTRODUCCIN
Alcaloides.
La palabra alcaloide significa semejante a la sosa y hace alusin a una de sus
propiedades ms comunes: su carcter bsico.
Aunque no existe una definicin completa, y a la misma se han incorporado
diferentes matices, los alcaloides pueden considerarse como sustancias de origen
natural, nitrogenadas, con carcter bsico y dotado de propiedades
farmacolgicas notables.
Como rasgos caractersticos se sealarn, la presencia de Nitrgeno en su
molcula, su actividad farmacolgica y el carcter ms o menos bsico de la
misma. La basicidad depender de la posicin de nitrgeno, pudiendo oscilar de
compuestos dbilmente bsicos (Aconitina) a bases fuertes (derivados de amonio
cuaternario como la Tubocurarina).
Las tendencias actuales llevan a restringir la presencia de los alcaloides al Reino
Vegetal, a delimitar su estructura a aquellas molculas cuyo tomo de nitrgeno
est incluido en un heterociclo y, biosintticamente, slo a aquellas sustancias
originadas a partir de aminocidos.
Propiedades generales
Al ser compuestos bsicos, los alcaloides son susceptibles de reaccionar con los
cidos para formar las correspondientes sales. Por lo tanto, un alcaloide puede
encontrarse en forma de sal o en forma de base. Los alcaloides en el vegetal se
encuentran generalmente en forma de sales (oxalatos, tartratos, malatos,) o
unidos a taninos.
Los alcaloides en estado de base son generalmente slidos cristalizables, de
punto de fusin definido (los que no portan oxgeno en su molcula son lquidos
voltiles, arrastrables en corriente de vapor de agua). Son solubles en la mayora
de los disolventes lipdicos (ter etlico, cloroformo, benceno, etc.), etanol e
insolubles en agua.
No son solubles en disolventes tales como el ter de
petrleo ni hexano.
En el estado de sal son slidos, de puntos de fusin definidos, solubles en etanol
y agua e insolubles en los disolventes lipdicos. Las diferentes propiedades de
solubilidad, van a permitir su extraccin de las drogas.

Reacciones de Precipitacin
33

Los alcaloides, en forma de sal y en solucin acuosa precipitan con una serie de
reactivos. Las principales reacciones que se realizan son:
Taninos, originando taninos de alcaloide
Sales Complejas
Reactivo Mayer (Iodomercuriato de Potasio/HCl): Pecipitado amarillo.
Reactivo Dragendorff (Iodobismutato de Potasio/HNO3): Precipitado rojo teja.
Reactivo Bouchardat (Iodo/Ioduro de Potasio/HCl). Precipitado rojo.
Acidos Complejos
AcidoFosfomolbdico: Fosfomolibdato de alcaloide.
AcidoFosfotngstico: Fosfotungstato de alcaloide.
AcidoSilicotngstico: Silicotungstato de alcaloide.
Acido Pcrico:
Picrato de alcaloide (cristalino)
Sales.
Cloruro arico:
Cloroaurato de alcaloide.
Cloruro platnico:
Cloroplatinato de alcaloide (cristalino)
Cloruro mercrico:
Cloromercurato del alcaloide.
Todos estos precipitados se pueden romper por tratamiento con una base fuerte,
liberando al alcaloide en forma de base.
Extraccin
Los procedimientos de extraccin son bastante comunes para la gran mayora de
los alcaloides, ya que salvo los que presentan en su estructura qumica
determinadas particularidades (grupos fenlicos, uniones ster, etc.), las
diferencias que se establecen radican en el procedimiento inicial de extraccin,
segn sea el agente alcalinizante y el disolvente elegido para la misma. En todo
caso, el fundamento siempre es el mismo: aprovechar la diferente solubilidad de
los alcaloides segn se encuentren en forma de base o en forma de sal.
Extraccin en estado de base
En un matraz se humedece el polvo de droga con una pequea cantidad de lcali
(generalmente hidrxido de amonio) con el objeto de desplazar los alcaloides de
su estado salino y, a continuacin, se aade un disolvente lipdico (ter etlico,
cloroformo, diclorometano, etc.), agitando. Se filtra, y el polvo se vuelve a extraer
de nuevo con el disolvente, con objeto de asegurar la extraccin completa.
Se renen las soluciones extractivas que contienen disueltos los alcaloides en
34

forma de base y se agita en un embudo de separacin con cido diluido (HCl o

H2SO4). Los alcaloides forman las sales correspondientes, solubilizndose en la
capa acuosa.
Se separa la capa acuosa, se lleva a otro embudo de decantacin y se trata con
una base (NaOH, KOH, etc.) hasta pH bsico. Los alcaloides precipitan. Al mismo
embudo de separacin se le adiciona el solvente lipdico, agitando. Los alcaloides
en forma de base se disuelven en dicho disolvente, con lo que una vez
separadas las dos fases, se recoge la fase lipdica, se deshidrata (generalmente
con sulfato de sodio anhidro) y se destila el disolvente.
En el matraz quedar un residuo constituido mayoritariamente por los alcaloides
totales procedentes del polvo de la droga.
Extraccin en medio cido
La diferencia con respecto al procedimiento anterior estriba en el inicio del
proceso. En este caso, se extraen los alcaloides del polvo de la droga al estado
de la sal. Para ello, se trata con agua cida (HCL 1%, por ejemplo) varias veces,
agitando. Se filtra y los lquidos filtrados se alcalinizan hasta un pH bsico; se
adiciona un disolvente lipdico, con lo que los alcaloides se disolvern en la capa
orgnica. A continuacin se sigue el mismo procedimiento que en la extraccin en
medio bsico.
Mtodo de Stas-Otto
Es un procedimiento de extraccin utilizado cuando se investiga la presencia de
alcaloides de naturaleza desconocida en una droga. Se trata el polvo de la droga
repetidas veces con una solucin de cido tartrico en etanol (2%), reunindose
las soluciones alcohlicas. A continuacin se destila el etanol y el residuo se trata
con agua y se filtra. Los alcaloides se encontraran en forma de tartratos disueltos
en el agua. Se alcaliniza hasta pH bsico y se extrae con un disolvente lipdico.
Se separa dicha capa; se deshidrata y se destila el disolvente, obtenindose un
residuo de alcaloides totales en forma de bases.
Valoracin
Adems de los diferentes procedimientos particulares que permiten determinar
alcaloides concretos, es posible establecer un mtodo general de valoracin de
los alcaloides totales existentes en una droga.
El fundamento reside en la capacidad de los alcaloides de combinarse con los
cidos para dar las sales correspondientes. Por los que se puede establecer una
volumetra de neutralizacin (puede ser directa o por retroceso), y en funcin de la
cantidad del cido gastado en la neutralizacin conocer la cantidad de alcaloides
presentes.

35

MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPO

Reactivos

Materiales

25ml de Cloroformo
7ml de NH4OH
Gotas de NaOH
0.1g de Sulfato de Sodio anhidro
1ml de Metanol
203 Gotas de Reactivo de Dragendorff
Gotas de Reactivo de Mayer
Solucin
(Cloroformo:Dietilamina)
(90:10)(v/v)
Gotas de solucin saturada de cido
pcrico en agua
H2SO4 2% (v/v)
15ml de H2SO4 10% (v/v)
Gotas de Bromo/H2O al 2%(v/v)
Papel pH
Muestra

Cmara de cromatografa
Cromatofolios
Porta objetos.
Matraz Erlenmeyer de 50ml
Agitador de vidrio
4 tubos de ensaye
Vaso de 50 mL
Embudo de separacin de 100 mL
Equipos
Lmpara UV
Parrilla

METODOLOGA
Extraccin de alcaloides
Se pesa 1 g de polvo de la planta y se coloca en un matraz Erlenmeyer de 50
mL y agregue 1 mL de NH4OH concentrado, remueva el slido con un agitado.
Aada 25 mL de cloroformo (asegrese que el extractor este encendido) y agite
durante 15 minutos.
Se decanta a un embudo de separacin, evitando que el slido se pase al
embudo.
Se agregan al embudo 15 mL de una solucin de H2SO4 al 2%(v/v).
Agite y libere presin, varias veces, para realizar la extraccin. Separe la fase
acuosa, colquela en un recipiente aparte.
Vuelva a extraer la fase orgnica con otros 15 mL del cido. Junte los extractos
acuosos.
Caracterizacin de alcaloides
Se toman cuatro tubos de ensaye y a cada uno de ellos se agrega 1 mL de la
solucin acuosa anterior, efecte con ellos las siguientes pruebas:
Tubo1. Observacin a la luz ultravioleta de la fluorescencia azul, tpica de las
sales de estos alcaloides con cidos oxigenados. Por adicin de unas gotas de
reactivo Mayer se aprecia la formacin de un precipitado y desaparicin de la
fluorescencia.
Tubo 2. Adicione 2 3 gotas de reactivo Dragendorff. La formacin de un
precipitado, el cual se puede disolver si se agrega NaOH hasta un pH alcalino.
Tubo 3. Adicione 2 3 gotas de solucin acuosa de cido pcrico. Se formar un
36

precipitado, que se disuelve al calentar, volviendo a formarse al enfriar el tubo.

Tubo 4. Se le aada, gota a gota, una solucin de agua de bromo al 2%(v/v)
recin preparada hasta que la solucin adquiera un color amarillo permanente. A
continuacin se aade aproximadamente 1 mL de NH4OH, hasta la aparicin de
un color verde esmeralda.
Cromatografa en capa fina
Preparacin de la muestra
A 15 mL de la solucin cida recuperada en la extraccin, se alcaliniza hasta un
pH bsico con NH4OH.
Dicha solucin alcalinizada se coloca en un embudo de separacin, se aaden
20 mL de cloroformo, se agita y se efecta la extraccin:
La fase orgnica (clorofrmica) se separa, se coloca en un recipiente limpio y se
le aade 0.1g de sulfato de sodio anhidro para secarla. Se deja reposar unos
minutos con el agente desecante.
Decante el cloroformo a un vaso pequeo (limpio y seco), previamente pesado,
evapore en parrilla dicho cloroformo a sequedad, pese el vaso nuevamente.
Redisuelva el residuo en 1 mL de metanol.
De esta solucin tome la muestra con un capilar para su placa de cromatografa.
Prepare 2 placas de Silica gel G.
Eluente: (Cloroformo: Dietilamina) (90:10) (v/v)
Revelador: Acido sulfrico 10% en metanol.
RESULTADOS Y OBSERVACIONES
1.- Rendimiento.
2.- Caractersticas y usos de la planta que utiliz.
3.- Caractersticas fsicas de producto.
CUESTIONARIO
1. Por qu se considera que los alcaloides son bases vegetales
nitrogenadas? De ejemplos.
2. En donde se pueden encontrar alcaloides?
3.

Nombre 5 alcaloides obtenidos de las plantas. Escriba su frmula.

4. Por qu son importantes los alcaloides?

5. Con qu tcnicas es posible identificar alcaloides?

37

DISCUSION DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

CONCLUSIONES
BIIBLIOGRAFA CONSULTADA

38

PRCTICA 7
RECONOCIMIENTO DE TANINOS
INTRODUCCIN
Los taninos son compuestos polifenlicos muy astringentes (capacidad para
secar las mucosas) y de gusto amargo, su color va desde el amarillo hasta el
castao oscuro. De origen vegetal, masa molecular relativamente elevada. Los
taninos son sustancias amorfas solubles en agua, que forman soluciones
coloidales, en alcohol y en acetona. Son insolubles en solventes apolares. Poseen
la habilidad de reaccionar y precipitar con alcaloides, gelatinas y otras protenas.
Los taninos se encuentran en gran cantidad de rboles, siendo las agallas de
roble y la corteza de zumaque las mejores materias para su obtencin. Tambin
se utilizan las hojas del aliso, nogal, frambueso, fresal y zarza; frutos y hojas del
arndano; sumidades de agrimonia; raz de tormentila, bistorta y pimpinela, entre
otros.
Entre las actividades farmacolgicas de los taninos podemos destacar las
propiedades astringentes, tanto por va interna como tpica; por va interna se
emplean como antidiarreicos, ya que precipitan los enzimas extracelulares
secretados por los microorganismos causantes de las infecciones. Poseen
tambin propiedades vasoconstrictoras, por lo que se utilizan tanto interna como
tpicamente en el tratamiento de afecciones vasculares como varices o
hemorroides y en pequeas heridas. En uso tpico estn indicados en diversos
problemas de la piel, emplendose en ciertas dermatosis as como en cosmtica
como tnicos astringentes.
MATERIALES Y REACTIVOS
Reactivos
FeCl3 al 1%
Solucin de gelatina al 1%
Materiales
1 mortero con pistilo
Bao Mara
Embudo de vidrio de vstago largo
Papel filtro
Arillo

Soporte
Vidrio de reloj
2 Erlenmeyer de 150 mL
2 tubos de ensayo
Pipeta de 1mL
Pipeta beral
Equipos
Balanza granataria

39

METODOLOGA
1. Tomar aproximadamente 5 g del material vegetal fresco.
2. Macerar en un mortero hidratando la muestra, para facilitar el rompimiento
de los tejidos.
3. Pasar la muestra completamente macerada a un beaker y adicionar
cantidad suficiente de agua para cubrir la muestra.
4. Calentar en bao mara de 10 a 15 minutos, filtrar en caliente.
5. Tomar 1 ml del filtrado en un tubo de ensayo y adicionar dos gotas de
solucin de tricloruro frrico (FeCL3 al 1%).
a. La aparicin de un color verde, azul o negro es prueba positiva (+)
para compuestos fenlicos.
6. En un segundo tubo de ensayo tomar otro mililitro del filtrado y agregar
unas gotas de gelatina sal, si hay turbidez o formacin de precipitado es
prueba positiva para taninos en la muestra.
Las dos pruebas son necesarias para comprobar la presencia de taninos.
Gelatina-sal: Solucin al 1% de gelatina y al 10% de cloruro de sodio.
RESULTADOS Y OBSERVACIONES
CUESTIONARIO
1. En dnde se pueden encontrar taninos?
2. Por qu son importantes los taninos en la industria alimenticia?
3. Con qu tcnicas es posible identificar taninos?

DISCUSION DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA CONSULTADA

40

PRCTICA 8
OBTENCIN DE UN EXTRACTO VEGETAL
OBJETIVO
Obtener un extracto de mediana polaridad de la planta asignada por el
profesor
INTRODUCCIN
Un extracto vegetal es lo que obtenemos de las plantas con ayuda de
disolventes y que permite extraerles los compuestos activos o tiles, las que
pueden tener diferentes usos, en el control de enfermedades, plagas, etc. ste
contiene una mezcla muy grande de compuestos que deben ser purificados
posteriormente para su mejor aplicacin o uso.
El extracto vegetal se puede obtener por maceracin, extraccin continua en
Soxhlet, o algn otro procedimiento de extraccin.
MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS
Reactivos
100 gramos de planta seca
CHCl3
CH3OH

Agitador de vidrio
Esptula
Embudo de vstago largo
Algodn
Equipos

Materiales
Rotavapor y bomba de vaco
Erlenmeyer 1000 mL
Matraz baln de 250 mL (boca 24/40)

METODOLOGA
Obtencin del extracto por maceracin
Una vez seco el material vegetal, se realiza el extracto clorofrmico de hojas
y/o tallos.
Se colocan 100 gramos del material vegetal seco en el erlenmeyer de
capacidad apropiada y se agrega cloroformo hasta cubrirlo completamente, se
deja macerar durante 3 das a temperatura ambiente con agitacin ocasional
con agitador de vidrio, al cabo de este tiempo, se filtra y se evapora el solvente
en un rotavapor a temperatura inferior a los 40C.

41

RESULTADOS Y OBSERVACIONES
1.- Rendimiento.
2.- Caractersticas y usos del extracto obtenido.
3.- Caractersticas fsicas del extracto obtenido.
CUESTIONARIO
1.
2.

Investigue en qu consiste el mtodo de obtencin continua en Soxlet.

Por qu es importante la obtencin cuidadosa de un extracto?
(cuidado de temperatura y tiempo de evaporacin del solvente)
3.
Qu tipo de estructuras qumicas puede esperar a encontrar en su
extracto?, mencione 4 de las vistas en clase.
4.
Qu aplicaciones puede tener un extracto vegetal?, mencione por lo
menos 2.

DISCUSION DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA CONSULTADA

42

PRCTICA 9
CROMATOGRAFA DE COLUMNA Y PLACA FINA
OBJETIVO
Realizar una columna cromatogrfica y seguirla con cromatografa en placa
fina.
INTRODUCCIN
La cromatografa es una tcnica de separacin y purificacin de compuestos
presentes en una mezcla, la cual puede ser de origen variado, por lo general, de
origen biolgico. En algunos casos muy especficos, se puede utilizar esta tcnica
como un mtodo de identificacin, utilizando sustancias patrones. Sin embargo,
sta es una tcnica intrnsecamente de separacin y purificacin ms que de
identificacin de compuestos.
Esta tcnica se basa en las diferentes interacciones que presentan los
constituyentes de una mezcla con dos fases. Estas fases se denominan fase
estacionaria y fase mvil. La fase estacionaria suele ser un slido o un lquido
adsorbido o unido qumicamente a un slido y normalmente esta fase est
contenida en un tubo de vidrio o metal llamado columna. La fase mvil puede ser
un lquido o un gas que impregna y se mueve a travs de la columna.
La cromatografa puede clasificarse de acuerdo al estado de agregacin de la
fase mvil y de la estacionaria, en este orden, de la siguiente manera:
cromatografa gas-slida (GSC), gas-lquida (GLC), lquida-slida (LSC) y lquidalquida (LLC). En general, cuando la fase mvil es gaseosa, dicha cromatografa
recibe el nombre de Cromatografa Gaseosa (CG o GC), mientras que si la fase
mvil es lquida, sta recibe el nombre de Cromatografa Lquida (CL o LC).
Por otra parte, la cromatografa puede ser clasificada de acuerdo al fenmeno
principal que se lleve a cabo dentro de la columna y que conduzca a la separacin
de los componentes de la mezcla. As, por ejemplo, puede haber cromatografa
de adsorcin o particin.
MATERIALES Y REACTIVOS
Reactivos
CHCl3
CH3OH
Hexano
Materiales
Cuba de corrida (o vaso de 150 mL y
caja Petri de vidrio)
Capilares
Placas cromatogrficas o cromatofolios

Slica gel 60-230 Mesh

pipeta de 5mL
pipeta de 1mL
bureta de 25 mL
embudo de vstago largo
pinzas
6 Erlenmeyer de 50 mL
Equipos
Rotavapor y bomba de vaco

43

METODOLOGA
Primero se ensayan el extracto por cromatografa en capa fina (CCF) con
diferentes sistemas de solventes de elucin, seleccionando al que d una mejor
separacin de los componentes. Este sistema de solventes se utilizar para una
primera cromatografa en columna (CC), denominada columna madre y tiene por
objeto separar paquetes de compuestos. Estos paquetes se trabajan por
separado, y de acuerdo a la complejidad de las mezclas se utilizan diferentes
tcnicas cromatogrficas para resolverlas. Estas tcnicas pueden ser:
cromatografa en columnas, utilizando diferentes tamaos de slica, y en los casos
que por estas tcnicas no se puedan purificar totalmente los compuestos, se
utiliza la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC).
En la CCF se utilizan cromatofolios marca Merck.
En la CC se utiliza como adsorbente slica gel de diferentes tamaos de partcula,
de acuerdo al tipo de dificultad de separacin. Por lo general en columnas madres
se usan grnulos grandes (60-230 Mesh). La aplicacin de la muestra en la
columna cromatogrfica depender de la solubilidad del extracto en la fase mvil
y de su consistencia. En el caso de un extracto insoluble en la fase mvil y/o de
consistencia chiclosa se debe elaborar una pastilla para la cual se utiliza slica gel
en polvo y para lo cual el Maestro le dar las indicaciones necesarias. Una vez
obtenido el extractoen forma de pastilla, se vierte sobre la slica gel ya
compactada y con disolvente en la columna, se agrega ms disolvente de fase
mvil y se procede con el mtodo cromatogrfico de columna.
En el caso de un extracto soluble en el disolvente escogido como fase mvil, se
disuelve la cantidad del extracto a cromatografiar con la mnima cantidad del
disolvente y se aplica con ayuda de una pipeta Pasteur sobre la slica gel
compactado y se procede con el mtodo cromatogrfico de columna.
RESULTADOS Y OBSERVACIONES
1.- Cantidad y caractersticas fsicas de las fracciones colectadas.
2.- Caractersticas de las placas cromatogrficas realizadas.

CUESTIONARIO
1. Para qu se realiza la separacin de un extracto vegetal por
cromatografa en columna?
2. Qu otros mtodos se pueden ocupar para separar y/o purificar un
extracto?.
3. Cules son los pasos siguientes a la obtencin de fracciones de una
columna cromatogrfica?
44

DISCUSION DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA CONSULTADA

45

BIBLIOGRAFA

1. Villar A. M. y W. C. Evans. Farmacognosia General, 5a Ed. New York: W. B.

Saunders, 2002.
2. Maiti R., Sanchez E., Manual de Farmacognosia. Puebla: Universidad de las
Amricas, Puebla, 2001.
3. Heinrich M., J. Barnes, S. Gibbons y E. M. Williamson.Fundamentals of
Pharmacognosy and Phytotherapy. Amsterdam: Elsevier, 2003.
4.Rahman Atta-ur. Studies in Natural Products Chemistry: Structure and
Chemistry. Amsterdam, Elsevier, 2005.
5. Casadevall E. Progressin the Chemistry of Organic Natural Products, New York:
Springe Verlag, 2002.
6. AVANCES EN AGROECOLOGA Y AMBIENTE VOL. I. Lpez-Olgun J.F., A.
Aragn G. y A.M. Tapia R. (Eds.). 2007. Purificacin cromatogrfica de
metabolitos secundarios de origen vegetal, Luis Ricardo Hernndez
Molina.Publicacin especial de la Benemrita Universidad Autnoma de Puebla.
Puebla, Mxico. pp. x-xx. ISBN: 978 968 9391 07 4

46