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Material und Methoden:

Fr den Versuch wurden drei europischen Wanderheuschrecken (Locusta Migratoria) mithilfe von
Ethylessigsure euthanasiert und anschlieend der Verdauungstrakt in einem Wachsbecken
herausprpariert. Der Verdauungstrakt wurde daraufhin in den Vorderdarm, Mitteldarm und
Enddarm zerschnitten, damit man am Ende des Versuches wei, welche Enzyme (Sucrase, Amylase,
Lipase und Protease) sich in welchem Darmtrakt befinden. Die jeweiligen Darmtrkte wurden in die
Reaktionsgefe mit den verschiedenen Nachweisreaktionen gefllt.
Diese Reaktionsgefe wurden vorbereitet (siehe Skript Tabelle 1). Die beinhalteten Substanzen fr
den Nachweis der Stoffe, die von den Enzyme im Darmtrakt zersetzt werden und man somit
nachweisen konnte in welchem Darmtrakt sich ein und welches Enzym befindet. Es wurden auch
Positiv und Negativkontrollen angefertigt, damit man erkennen kann ob die Versuche auch wie
erwartet aufgetreten sind.
Als Nachweisreaktion fr die Protease-Aktivitt benutze man eine Gelantineschicht auf einem
photographischen Film. Den Nachweis erhlt man durch entstehende helle Lcher in der
Gelantineschicht, also durch die oberste Proteinschicht , welche mit dem photographischen
Farbstoffen verknpft war. Diese Schicht wurde von der Protease verdaut, sodass die Verbindung
zwischen der Gelantine und dem Farbstoff aufgelst wurde. Die Extraktlsung wurde auf die matte
Seite der Filmstreifen getropft und verteilt. Daraufhin wurden die Filmstreifen fr ca. 1 Stunde im
Wrmeschrank bei 36C inkubiert, danach wurden sie mit Wasser abgesplt und die Ergebnisse
wurden berprft.

Der Nachweis fr die Sucrase wurde mit der Fehling Probe durchgefhrt. Man hat die
Eppendorfgefe mit je 300l Extraktionslsung und 50l 5%ige Saccharoselsung bei 36C fr 30
min im Wrmeschrank inkubiert. Anschlieend gibt man 50 l Fehling 1 und 50 l Fehling 2 dazu und
kocht die Lsung bei 10 min im Wasserbad.
Die Fehlingprobe dient als Nachweis fr Aldehyde und reduzierten Zuckern. Bei dem Versuch
entsteht aufgrund der Sucrase aus Saccharose, einem Disaccharid, die Monosaccharide Glucose und
Fruchtose, welche an der Aldehydgruppe von der Fehlinglsung nachgewiesen werden.
Die Fehlinglsung besteht aus zwei verschiedenen Lsungen, diese sind eine verdnnte Kupfer(II)sulfar-Lsung und eine alkalische Kaliumnatriumtartrat Lsung. Die typische dunkelblaue Farbe, nach
dem Zusammenschtten der Lsungen, entsteht durch die Komplexbildung der Kupfer(II)-Ionen und
den Tartrationen. Dies schtzt die Kupfer(II)-Ionen eine Bindung mit dem vorliegenden
Hydroxidionen einzugehen und somit zu Kupfer(II)-Hydroxid zu reagieren und die Nachweireaktion

knnte nicht mehr stattfinden. 1

Abbildung 1 http://www.chempage.de/versuche/NW%20OC/NW%20OC%20002/Vorlag10.gif

Die Reaktion wird whrend der Erwrumg gem der RGT-Regel beschleunigt. Die Monosaccharide
werden in der offenkettigen Form an der Aldehydgruppe nachgewiesen. Nach der Zugabe der
Substanz werden die Kupfer(II)-Ionen reduziert und dehydratisiert zu Kupfer(I)-Oxid (Cu2O) (welches
als roter Niederschlag ausfllt und somit zum Nachweis dient), whrenddessen werden die
Aldehydgruppen zu Carbonsuren oxidiert.

Fr den Nachwei der Amylase-Aktivitt nimmt man eine Iod/Kaliumiodid-Lsung, auch bekannt als
Lugolsche Lsung. Der Strkenachwei funktioniert, indem sich die I5Ionen in die, bei Amylose,
schraubenfrmig gedrehten Strke-Molekle einlagern und somit eine blaue Farbe entsteht,
aufgrund der Delokalisierung der Iodidionen verringert sich die Anregungsenergie der
Valenzelektronen, sodass sie im langwelligerem Licht absorbieren und dazu komplementr blau
erscheinen2. Fr die Durchfhrung wird ein Eppendorfgef wieder mit 300l Extraktionslsung
befllt und es werden 200l 0,2M Strkelsung hinzugegeben. Dieses Gemisch wird fr 30 min im
Wrmeschrank bei 36C inkubiert und anschlieend gibt man 20l Lugolsche Lsung dazu.

Fr den Nachwei der Lipase-Aktivitt nimmt man 5ml Vollmilch, welche eine Emulsion von
Fetttrpfchen darstellt und gibt 5 Tropfen des pH-Indikators Phenolphtalein dazu. Anschlieend
bringt man den pH-Wert der Milch ein bisschen ber den Umschlagpunkt des pH-Indikators
Phenolphtalein (ca. pH=8,2)3. Dies erreicht man durch die vorsichtige(tropfenweise) Zugabe von
Na2CO3-Lsung. Danach werden 500l roteMilch und 100l Extraktionsflssigkeit in ein
Eppendorfgef gegeben und fr 30 min bei 36C im Wrmeschrank inkubiert. Da bei der Verdauung
von Fetten die Esterbindungen gespalten werden entstehen Carbonsuren, welche den pH-Wert
sinken lassen sollten, sodass der Indikator farblos wird und eine Vernderung im pH-Wert anzeigt.

https://de.wikipedia.org/wiki/Fehling-Probe#Fehlingsche_L.C3.B6sung
https://de.wikipedia.org/wiki/Iodprobe
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https://de.wikipedia.org/wiki/Phenolphthalein#Struktur_und_Farbumschlag
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