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Absorbancia a 260 nm
3,20
0,363
0,046
0
8,5
0
1
8,5
0,388
2
9,5
0,422
3
10,5
0,424
Tabla 1
Con los datos de la tabla 1 se obtuvo, entonces la grfica 1.
4
11,5
0,467
5
12,5
0,531
0.6
0.5
0.4
Absorbancia a 260 nm
0.3
0.2
0.1
0
5
10
15
pH
Grfica 1
En la grfica 1 se observa que entre los pH contemplados, el 8,5 es en el cual
el DNA muestra mayor estabilidad y a partir de este se observa el efecto
hipercrmico. En esos pH alcalinos, se produce un cambio de carga de diversos
sustituyentes en las bases nitrogenadas, as se elimina la posibilidad de que
esos grupos formen puentes de hidrgeno.
Tambin se observ el efecto del calentamiento y el enfriamiento rpido. Para
lo cual se tomaron 8 tubos y se agreg en cada uno disolucin stock 1 de DNA
y buffer de borato 0,05 M, pH ,5, en las cantidades que se indican en la
siguiente tabla:
7
1,5
1,5
85
8
1,5
1,5
92
20
37
60
70
80
0,47 0,51 0,53 0,54
4
8
5
6 0,569
82
85
0,59
0,572
3
92
0,599
0.7
0.6
0.5
0.4
Absorbancia a 260 nm 0.3
0.2
0.1
0
0
50
100
Temperatura (C)
Grfica 2.
La grfica 2 no representa el comportamiento esperado, ya que se esperaba un
comportamiento similar al mostrado en la siguiente figura:
8
1,5
1,5
92
20
0,474
37
0,518
60
0,535
70
0,546
80
0,569
82
0,572
85
0,593
0.7
0.6
0.5
0.4
Absorbancia a 260 nm 0.3
0.2
0.1
0
0
50
100
Temperatura (C)
Grfica 3.
El formaldehido reacciona con el grupo amino libre de las bases nucleosidas,
formando derivados de metilol y consecuentemente desnaturalizando el DNA.
La desnaturalizacin es fcilmente detectada midiendo la hipercromicidad del
DNA a 260 nm. De manera que los datos obtenidos y la grfica 3, permiten
evidenciar el efecto hipercrmico esperado.
Para evidenciar el efecto del calor y formaldehido en sal 1M, se prepararon 8
tubos con los reactivos y las cantidades mostradas en la siguiente tabla:
7
1,5
1,5
85
8
1,5
1,5
92
20
0,489
37
0,488
60
0,513
70
0,501
80
0,514
82
0,512
85
0,545
0.56
0.54
0.52
Absorbancia a 260 nm
0.5
0.48
0.46
0.44
0
50
100
Temperatura (C)
Grfica 4
Con el aumento de la fuerza inica los puentes de hidrgeno (intraccatenarios
e intercatenarios) se reconstituyen al azar, de manera que en un medio con
fuerza inica elevada, el DNA desnaturalizado se agrega. En esta parte del
experimento se esperaba ver el efecto combinado del desnaturalizante
(formaldehdo) del DNA con el NaCl, que aumenta la fuerza inica. Se obtuvo la
grfica 4 con los datos experimentales, pero en estos no se observa una
tendencia clara, ya que se esperaba el efecto hipercrmico dado por la
desnaturalizacin causada por el formaldehdo
Solubilidad DNA
http://books.google.com.co/books?
id=E6XFouOOv38C&pg=PA56&dq=DNA+soluble+agua&hl=es419&sa=X&ei=ORFDVL_MAcPJggTp7YEY&ved=0CBoQ6AEwAA#v=onepage&q
=DNA%20soluble%20agua&f=false