Antivirales vas de la inmunidad innata

Estudios recientes han descubierto dos vas de sealizacin que activan

la inmunidad innata del husped contra la infeccin viral. Una de las vas
utiliza los miembros de la familia de receptores de tipo Toll (TLR) para
detectar los virus que entran en el endosoma a travs de endocitosis. La
va de TLR induce la produccin de interfern a travs de varias
protenas de sealizacin que en ltima instancia conducen a la
activacin de los factores de transcripcin NF-kB, IRF3 y IRF7. La otra va
antiviral utiliza el ARN RIG-I helicasa como el receptor de intracelular de
ARN de doble cadena viral. RIG-I activa NF-kB y los FIR a travs de la
recientemente identificado MAVS adaptador de protenas, una protena
que contiene el dominio CARD que reside en la membrana mitocondrial.
MAVS es esencial para la inmunidad innata antiviral, sino que tambin
sirve como un objetivo de virus de la hepatitis C (HCV), que emplea una
proteasa viral para escindir MAVS fuera de la mitocondria, lo que permite
HCV para escapar del sistema inmune del husped.
Los virus son agentes patgenos altamente infecciosas que dependen
de sede de la maquinaria celular para la supervivencia y la
reproduccin. Ms infecciones virales, como el resfriado comn causada
por rinovirus virus, se resuelven de manera eficiente por la innata del
husped y sistemas inmunes adaptativas. La respuesta inmune innata
es la primera lnea de defensa contra un patgeno invasor. UN aspecto
clave de la respuesta inmune innata antiviral es la sntesis y secrecin
de interferones de tipo I (IFN), tales como
IFN- e IFN-, que exhiben antiviral, antiproliferativa y las funciones
inmunomoduladoras [1]. Dos eventos necesaria para desencadenar un
eficaz anti-viral respuesta inmune innata son: a) deteccin de la
invading virus por los receptores del sistema inmune; y b) la iniciacin
de sealizacin de la protena cascadas que regulan la sntesis de los
IFN. Las clulas del sistema inmune innato expresan receptores de
reconocimiento de patrones (PRR) que detectan invariante estructuras
moleculares compartidos por agentes patgenos de origen diverso
(patrones moleculares asociados a patgenos, PAMP) [2] .Toll-al igual
que los receptores (TLRs) 3, 7, 8 y 9 son las principales
responsabilidades parentales que reconocer distintos tipos de cidos
nucleicos derivados de virus-y activar cascadas de sealizacin que dan
lugar a la induccin de IFN tipo I (Figura 1) [3]. Recientemente, el cido
retinoico inducible gen - I (RIG-I) se ha identificado como un receptor
citoslico para intracelular dsRNA [4]. RIG-I induce IFN en respuesta a
manera dsRNAin aTLR independiente viral intracelular. Por lo tanto, hay
dos sistemas de receptores en lugar de detectar la presencia de virus y
montar una respuesta inmune. Estas sistemas receptores se localizan en
diferentes compartimentos dentro de

una clula y reconocer diferentes ligandos. Nuestra comprensin actual

pie de estos sistemas de receptores en la inmunidad antiviral y sus
cascadas de sealizacin corriente abajo es el foco de esta resea.
La regulacin de IFN tipo I transcripcin gnica
IFNs de tipo I incluyen varios subtipos IFN-a y un solo Subtipo IFN-
[1]. La induccin de genes del IFN de tipo I es regulado en la etapa de la
transcripcin y se entiende mejor para el promotor de IFN-. Complejo
amulti-protena llamada enhanceosome se monta en el promotor de IFN en la respuesta a un desafo viral [5] .El enhanceosome consiste de al
menos tres clases de factores de transcripcin - ATF-2 / c-Jun, el factor
nuclear (NF) y -B factor regulador de interfern 3 (IRF3). De stas, las
actividades de NF-kB y son IRF3
regulada por su localizacin subcelular. En los inactivos estado, NFkappa B se lleva a cabo en el citosol por inhibidoras kappa B (I? B)
NPG
miembros de la familia [6]. En presencia de diversos estmulos, tales
como IL-1, TNF-, y los virus, la I? B quinasa (IKK) se activa y se
fosforila I? B. Una vez fosfato phorylated, I? B es ubiquitinated y
posteriormente degradado por el proteasoma. Libre de NF-kB se
transloca en el ncleo y gira sobre sus genes diana. Similar a NF-kB, la
forma inactiva de IRF3 tambin es citoslica. En respuesta a un desafo
viral, IRF3 es fosforilada por la IKK-como quinasas TBK-1 y ikke [7, 8]. La
fosforilacin de IRF3 conduce a su dimerizacin y translocacin en el
ncleo.
La infeccin viral tambin conduce a la activacin de las quinasas de
estrs tales como JNK y p38 quinasa, que phosphorylateATF2 / c-Jun en
la nucleus.Together con la protena nuclear de arquitectura HMG-I (Y),
NF-kB, IRF3 y ATF2 / c-Jun se ensamblan para formar
un complejo estereoespecfica enhanceosome que remodela el la
cromatina en el promotor de IFN-, que resulta en su transcriptional
iniciacin. IFN- se une a la / receptor de IFN (IFNAR) en autocrine y
manera paracrina para iniciar una retroalimentacin positiva bucle que
se traduce en an ms la produccin de IFN tipo I [1]. IFNARs
desencadenar la activacin de la quinasa Janus (JAK) miembros de la
familia JAK1 y Tyk-2. Estas quinasas, a su vez fosforilar y activar el
transductor de seal y activacin tor de la transcripcin 1 (STAT1) y las
protenas STAT2. Estas factores de transcripcin asocian con irf9 para
formar un heterocomplejo trimrico, IFN-estimulado factor de gen 3
(ISGF3).
ISGF3 inicia la transcripcin de varios interfern genes estimulados
(ISGs) por la unin a la estimulada por IFN elementos de respuesta
(ISRE) en sus regiones promotoras. Los ISGs inhiben las diferentes
etapas de la replicacin del virus y elicit un estado antiviral en el
husped. IRF7, uno de los ISGs sintetizados, es un miembro de la familia

de factores de transcripcin IRF que regula la la transcripcin del gen de

IFN-. Un modelo inicial sugiri
que IRF-7 no est involucrado en la fase inicial de IFN- induccin tal
como se expresa en niveles bajos en la mayora de las clulas en Figura
1 TLR y RIG-I - dos vas antivirales inmunidad innata: Algunos virus
entran en las clulas a travs de la maquinaria endoctica. Los genomas
de estos virus son detectados por los miembros ofTLR familia de
receptor includingTLR3, TLR7, TLR8 receptores andTLR9.These tienen un
nico dominio transmembrana y reconocer sus ligandos a travs de las
repeticiones ricas en leucina (LRR) en sus dominios luminales. La cifra
citoplasmtica / receptor de IL-1 (TIR) de dominio de estos receptores
permiten el reclutamiento de los adaptadores tales como TRIF o MyD88
que seal para la transcripcin aguas abajo factores de ATF-2 / cJun, NFkB y la FIC. RIG-I es un receptor para intracelular dsRNA. El C-terminal
dominio de la helicasa de RIG-I se une dsRNA y activa los dominios CARD
N-terminal de tal manera que la cascada de sealizacin intermedios, se
ha iniciado. MAVS es una protena mitocondrial que participa en la va de
sealizacin anti-viral aguas abajo de RIG-I. La activacin de ya sea va
conduce a la induccin de IFN-.
la ausencia de virus. IFN- produce en respuesta a un viral desafiar por
la va dependiente de IRF3 se ha descrito anteriormente, induce la
transcripcin de la FIC-7. IRF7 se activa entonces por fosforilacin en
determinados residuos clave por TBK-1 / ikke de tal manera que se une
e induce el promotor del gen de IFN-.
Un estudio reciente utilizando ratones knockout IRF7 ha demostrado que
la transcripcin de ambos IFN- y IFN- depende en IRF7 [9], lo que
indica que IRF7 es un regulador maestro de IFN tipo I.
IRF5 es otro miembro de la familia IRF que ha sido sugerido para regular
la expresin de IFN de tipo I. Sin embargo, recentgeneticexperimentsusingIRF5-deficientmiceshowed
que IRF5 no se requiere para la induccin de IFN tipo I, pero es necesaria
para la induccin de citoquinas proinflamatorias por la estimulacin de
TLRs [10].
La va de RIG-I de la inmunidad innata antiviral
El cido retinoico gen inducible I (RIG-I) ha sido recientemente
identificado como un receptor intracelular para dsRNA viral [4]. RIG-I es
un miembro de la DExD / H que contiene la caja-RNAhelicase familia de
protenas que relajarse dsRNAin una ATPasa
de manera dependiente. El dominio helicasa de RIG-I puede unirse tanto
sinttico dsRNA [poli (I: C)] y dsRNA viral. Ser-lados del dominio helicasa
C-terminal, RIG-I tambin contiene dos dominios de reclutamiento en
tndem caspasa (CARDS) en su N-terminal. La sobreexpresin de la
regin N-terminal de RIG-I que comprende los dos dominios tarjeta es
suficiente para activar NF-kappa B y IRF3 en ausencia de un desafos

viral desa-, mientras que los de larga duracin RIG-I se activa slo en la
presencia de dsRNA. Por lo tanto, la unin de la dsRNAto RNAhelicase
dominio de RIG-I probablemente induce una conformacional cambio
cional que expone los dominios CARD N-terminal para reclutar protenas
de sealizacin corriente abajo. adems estructural se requiere un
anlisis para determinar el mecanismo exacto de cmo RIG-I est
regulado por la unin ARN de doble cadena.
La importancia funcional de RIG-I en im- anti-viral comunidad fue
mostrado por primera vez por los estudios de ARNi y confirmado por los
estudios del ratn knockout [4, 20]. RNAi de RIG-I en L929 clulas, una
lnea celular de fibroblastos de ratn, inhibe no slo IRF3 la activacin
sino tambin la posterior induccin de IFN tipo I en respuesta a
RNAviruses. Los embriones de RIG-I nocaut ratones muestran una
degeneracin severa del hgado y la mayora eran embriones letal. El
mecanismo subyacente a la letal fenotipo de RIG-I ratones mutantes no
se entiende todava.
En fibroblastos de embriones de ratn (MEFs) y fibrosis pulmonar
explosiones, se demostr que la induccin de IFN- y ISGs por varios
virus de ARN fue abolida. El pretratamiento de los fibroblastos con IFN-
aument la resistencia de la RIG-I deficientes fibroblastos a VSV, lo que
indica que RIG-I se requiere para la induccin de IFN- y no afecta la va
de sealizacin de IFN- de aguas abajo.
Una cuestin importante es la importancia relativa de la sealizacin
mediada por RIG-I vs TLRs en un sistema in vivo. Esta cuestin se ha
abordado mediante la comparacin de la inter-induccin de interfern en
fibroblastos y la mdula sea deriva clulas dendrticas de RIG-I - / - vs
MyD88 - / - TRIF - / - ratones, que carecen de toda la sealizacin de TLR
[20]. La capacidad de inducir IFN- cuando desafiado por NDV fue
severamente compromised en el RIG-I - / -, pero no MyD88 - / - TRIF - / -, y CDCs
fibroblastos. Se observaron resultados opuestos a los PDC, que inducen
IFN- normalmente en ausencia de RIG-I,
pero no en la ausencia de MyD88 y TRIF. Por lo tanto, RIG-I y las vas TLR
no son redundantes, sino que median sealizacin antiviral en diferentes
tipos de clulas.
Adems de RIG-I, MDA-5 y Lpg2 tambin se han idenficados como
DExD / H cuadro de RNA helicases que funcionan en el respuesta inmune
antiviral [22, 23]. Al igual que RIG-I, MDA-5 tambin contiene dos
dominios CARD N-terminales que pueden activar el promotor de IFN. La importancia de MDA-5 como se haba sugerido una protena
antiviral basado en el encontrando que la protena se une paramixovirus
V MDA-5 y
inhibe su funcin [24]. Lpg2 carece del dominio CARD y acta como un
regulador negativo de la va de RIG-I. La sobreexpresin de la Lpg2
inhibe la activacin de IFN- promotor de virus Sendai, pero no interfiere
con la TLR3 va de sealizacin.

MAVS sealizacin en la va de RIG-I

Estudios recientes han identificado un dominio CARD contencin ing
protena que acta aguas abajo de RIG-I. Esta protena, identificado
independientemente por cuatro grupos diferentes, ha sido mitocondrial
llamada protena de sealizacin antiviral (MAVS)
[25], el IFN- promotor estimulador 1 (IPS-1) [26], virus in-Adaptador
producido sealizacin (VISA) [27] y el adaptador de tarjeta la induccin
de IFN- (CARDIF) [28]. Sobre la base de sus aspectos biolgicos funcin
como una protena antiviral y la importancia de localizacin mitocondrial
para la funcin de esta protena
(vase ms adelante), nos referiremos a esta protena como MAVS en
esta revisin.
Varias lneas de evidencia demuestran un papel esencial
para MAVS en la va de sealizacin antiviral. En primer lugar, superar
expresin de MAVS conduce a la activacin de NF-kB y IRF3, y por lo
tanto el tipo de produccin que IFN. Segundo, desmontables expresin
MAVS por RNAi suprime la induccin de IFN por virus, as como por RIG-I
sobre-ex-sin. En tercer lugar, la activacin de las quinasas responsables
de laLa activacin de NF-kB y IRF3 se suprime en ausencia MAVS de
expresin. En cuarto lugar, la sobre expresin de MAVS protege las
clulas de los efectos citopticos del VSV, mientrasRNAi de MAVS hace
que las clulas sean ms susceptibles a kill-ing por el virus. Otros
estudios muestran que epistasis MAVS funciones aguas abajo de RIG-I y
aguas arriba de IKK yTBK1 (Figura 2).
Adems el dominio CARD N-terminal, tambin MAVS contiene una regin
rica en prolina (PRO) y un C-terminal hidrfoba transmembrana (TM)
regin [25]. Supresin los anlisis han demostrado que el dominio CARD
y la TM dominio son esenciales para la funcin de MAVS. ni idea CARD
dominios RIG-I, la sobreexpresin de TARJETA MAVS dominio no es
suficiente para inducir IFN-. Pero cuando el Dominio CARD se fusiona
con el dominio TM C-terminal, este "mini-Mavs protena truncada, lo que
representa slo una cuarta parte de la longitud total de MAVS, es
suficiente para activar la ruta aguas abajo. La secuencia de TM MAVS se
asemeja a la orientacin mitocondrial secuencias de varios C-cola
anclado protenas de la membrana mitocondrial, incluyendo las
protenas de supervivencia celular Bcl-2 y Bcl-XL. En- de hecho,
bioqumicos y experimentos de imgenes microscpicas demuestran
que el dominio TM C-terminal de MAVS se dirige a la protena de la
membrana externa mitocondrial. En tono rimbombante, la localizacin
mitocondrial de MAVS es esencial para su actividad debido a la supresin
del dominio TM, lo cual mislocalizes la protena al citosol, suprime la
sealizacin la funcin de MAVS ing. Cuando el dominio TM de MAVS fue
reemplazado con la orientacin de la membrana mitocondrial
dominio de la Bcl-2 o Bcl-xL, la funcin de MAVS era totalmente
restaurado, que indica que es la localizacin mitocondrial pero no la

secuencia del dominio TM que es esencial para MAVS actividad. Esta

conclusin se ve apoyada por los experimentos que muestran que
mislocalization de Mavs otros compartimentos de membrana como
membrana
plasmtica
y
retculo
endoplasmtico
perjudica
enormemente la capacidad de MAVS para inducir IFN.
Figura 2 La RIG-I - MAVS va de sealizacin: RIG-I es un receptor para
el dsRNA intracelular. Contiene una RNAhelicase C-terminal dominios de
dominio que se une a dsRNA viral, y la tarjeta de dos tndem en el
extremo N-terminal. La unin de dsRNAto el dominio helicasa
presumiblemente induce un cambio conformacional que expone los
dominios tarjeta para iniciar una cascada de sealizacin. MAVS es una
tarjeta dominio que contiene la protena mitocondrial que funciona
aguas abajo de RIG-I. MAVS pueden sealar tanto a NF-kB y la
sealizacin IRF3 vas mediante la activacin de los complejos de
quinasa IKK y TBK-1 / ikke. Una vez activado, el NF-kB y IRF3 translocan
en el ncleo y encienda el promotor del gen de IFN-. El mecanismo por
el cual MAVS activa vas quinasa aguas abajo no est claro, aunque se
ha demostrado que la localizacin en la membrana mitocondrial de
MAVS es esencial para su funcin de sealizacin. La importancia de la
localizacin mitocondrial de MAVS es subrayada por el reciente
descubrimiento de que la proteasa del virus de la hepatitis C se unir
NS3 / 4 MAVS fuera de la mitocondria para evadir el sistema inmune
innato de acogida.
Los mecanismos por los que se regula por MAVS RIG-I y cmo Mavs
seales a quinasas aguas abajo quedan por investigarse ms a
fondo. Aunque se ha demostrado MAVS para interactuar con RIG-I en la
sobre expresin experimentos varios grupos, no ha sido claramente
demostrado que MAVS endgenos y RIG-Puedo participar en un virus-dede manera colgante. El mecanismo de sealizacin de MAVS es una
objeto de debate en la actualidad. Dos grupos muestran que MAVS
pueden interactuar con TRAF6 y ambos TRAF6 identificado sitios de
unin dentro de MAVS [25, 27]. Sin embargo, Seth y col
evidencia presentada que el mutante MAVS (mini-MAVS) que carece de
todos los sitios de unin de TRAF es todava capaz de inducir IFN. Adems, las clulas con deficiencia de TRAF6 tienen normales
inductionofIFN-followingviralinfection [25,29] .Kawai
et al demostraron que MAVS interactu con RIP-1 y FADD, y propusieron
que estas molculas ligadas Mavs IKK la activacin [26] .Sin embargo,
RIP1-deficientMEFcellsarealso
plenamente capaz de inducir IFN- siguientes desafos virales [25,
30]. Meylan et al informaron de que MAVS obligado a IKK y Zona no
directamente, sino que dicha interaccin no ha sido encontrado por los
otros grupos. Por lo tanto, no existe un mecanismo de consenso que
surge de estos estudios independientes. Promover estudios estn

claramente necesarios para dilucidar el mecanismo de MAVS de

sealizacin.
El descubrimiento de MAVS tambin ha proporcionado un desglose a
travs en el campo de la investigacin del virus de la hepatitis C (VHC).
HCVinfects ms de 170 millones de personas en todo el mundo, y
aproximadamente el 80% de los individuos infectados desarrollan
persistencia de la infeccin [31] .El persistencia de HCVinfection es
causada en parte por la supresin de la inmune del husped sistema por
las protenas virales del VHC, tales como el / serina NS3 4
proteasa. Estudios anteriores han demostrado que NS3 / 4Ainhibits la
induccin de IFN- por la va de sealizacin de RIG-I [32-34], sin
embargo, el objetivo de NS3 / 4A no se conoca previamente. Dos grupos
han demostrado ahora que es el MAVS objetivo buscado largo de NS3 /
4A [28, 35]. Escinde NS3 / 4 MAVS en Cys-508, que se encuentra a slo
unos residuos antes de que el dominio de direccionamiento mitocondrial
de MAVS. Como
resultado de la escisin proteoltica, MAVS se desaloja de la mitocondria
y se convierte en un citoslica inactivo fragement. Li et al tambin
mostr que NS3 / 4A se une a y co localiza con MAVS en la membrana
mitocondrial, y se puede escindir MAVS directamente in vitro. El uso de
un replicn sistema de cultivo celular en el que el genoma de ARN de
VHC replica de forma autnoma, Li et al demostraron que en- MAVS
endgenas es, en efecto escindidos por NS3 / 4A, y que una mutacin en
la C508 de MAVS que impide su escote restaura la induccin de IFN en
las clulas de replicn. Meylan et al
tambin mostr que MAVS transfectadas se escinde en una clula del
hgado lnea infectado con el HCVvirus.Taken recientemente desarrollado
En conjunto, estos resultados muestran que el VHC paraliza el anfitrin
sistema inmunolgico mediante la escisin MAVS fuera de la
mitocondria, subraya adems la importancia de la mitocondrial
localizacin de MAVS en su sealizacin antiviral.