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FERMENTACIONES

Elementos

MICROORGANISMOS
O FRACCIONES

NUTRIENTES

CONDICIONES FISICOQUIMICAS

CO2, H2,
SH2, CH4

MICROORGANISMOS

PRODUCTOS

FERMENTACIONES
Microorganismo (1)
ESPECIE UNICA
Cultivo Puro
Especifico
Inocuo
Libre de Toxinas
Genticamente Estable y
Manipulable
Crecimiento y Formacin de
Producto en Corto Tiempo a
Gran Escala
Altamente Modificada para
Obtener Altos Rendimientos

DOS O MAS ESPECIES


Co-Cultivos
Consorcios
Mezclas Sintrpicas

FERMENTACIONES
Microorganismo (2)
Fermentacin acetobutlica en medio Semisinttico
Clostridium acetobutylicum
PARAMETRO
Biomasa (g/l)
Vel. Esp. Crec. () (h-1)
% Sustrato Consumido
Solventes Totales (g/l)
Rendimiento en Biomasa Y (X/S)
Rendimiento en Producto Y (P/S)
Productividad (g/l*h)
Productividad Especfica

ATCC 824

DSM 792

DSM 1732

1.86
0.124
82
2.80
0.041
0.066
0.020
0.011

1.50
0.101
74
0.92
0.037
0.024
0.007
0.005

2.25
0.110
100
8.90
0.040
0.173
0.205
0.091

PARRA et. al. 1995. Evaluacin de cepas de Clostridium acetobutylicum para la fermentacin acetobutlica
Revista Colombiana de Ciencias Qumico Farmacuticas. No.24. 40-44.

FERMENTACIONES
Microorganismo (2)
Produccin de Fructooligosacridos por Fermentacin
25

45

20

35

% Sacarosa Residual

FOS Totales (g/L)

40
30

15

25
20

10

15
10
5

5
0

0
40

74

34

68

33

Cantidad de FOS totales producidos

AN166
Aislado

40

74

34

68

33
Aislado

AN166

Porcentaje de sustrato residual

GOMEZ et. al. 2005. Produccin de fructooligosacaridos (FOS) por tecnologa de enzimas. Parte I: Evaluacin
de aislados nativos de hongos para la produccin de FOS. Revista Colombiana de Ciencias Qumico
Farmacuticas. No.34. (1) 74 - 91.

FERMENTACIONES
Microorganismo (2)
Produccin de Fructooligosacridos por Fermentacin
Fraccin del tipo de FOS producido

1,00

0,80

0,60

0,40

0,20

0,00
Aislado

40

74

34

68

33

AN166

Fraccin de los productos formados en la fermentacin de FOS


% Kestosa

% Nistosa

% FFNistosa

GOMEZ et. al. 2005. Produccin de fructooligosacaridos (FOS) por tecnologa de enzimas. Parte I: Evaluacin
de aislados nativos de hongos para la produccin de FOS. Revista Colombiana de Ciencias Qumico
Farmacuticas. No.34. (1) 74 - 91.

FERMENTACIONES
Microorganismo (2)
Produccin de Fructooligosacridos por Fermentacin

200
150
100
50
0
20

60
Tiempo (min)

180

Produccin de FOS en la reaccin de actividad


enzimtica de los aislados de mayor produccin
Aislado74 Aislado 40 Aislado 34

Aislado 68

Aislado 33

Fructosa transferida (mol/100mL)

FOS totales(g/L)

250

45000
40000
35000
30000
25000
20000
15000
10000
5000
0
0

50

100

150

200

Tiempo (min)
Fructosa transferida en el ensayo de actividad
Aislado 40
Aislado 68

Aislado 74
Aislado 33

Aislado 34
AN 166

GOMEZ et. al. 2005. Produccin de fructooligosacaridos (FOS) por tecnologa de enzimas. Parte I: Evaluacin
de aislados nativos de hongos para la produccin de FOS. Revista Colombiana de Ciencias Qumico
Farmacuticas. No.34. (1) 74 - 91.

FERMENTACIONES
Medio de Cultivo (1)
EN EL DISEO DE UN MEDIO DE CULTIVO SE DEBEN
TENER EN CUENTA LOS SIGUIENTES ASPECTOS
MICROORGANISMO
Poliovirus

Streptococcus
pneumoniae

Saccharomyces
cerevisiae

Spirulina sp.

Penicillium sp.

PROPSITO DEL PROCESO


Biomasa
Metabolitos
Enzimas
Actividad Biolgica
CARACTERISTICAS ECONOMICAS
DEL PRODUCTO
Alto Valor Agregado
vacunas, recombinantes, etc
Bajo Valor Agregado
etanol, cido lctico, etc.

FERMENTACIONES
Medio de Cultivo (2)
MEDIOS PARA LA FERMENTACION ACETOBUTILICA (ABE)
MEDIO SEMISINTETICO
Glucosa (Melaza)
60 (130) g
Triptosa
10.0 g
Peptona
10.0 g
Ext. de Levadura
5.0 g
Na2SO4
0.2 g
K2HPO4
3.5 g
PABA
0.01 g
Stock de Minerales
1 ml
Agua destilada c.s.p.
1 litro
pH antes de esterilzar
6.1

MEDIO INDUSTRIAL OPTIMIZADO


Melaza
130 g
Ext. de Levadura
3.0 g
KH2PO4
3.5 g
PABA
4 mg
Biotina
3 mg
Stock de Minerales
4 ml
Agua destilada c.s.p.
1 litro
pH antes de esterilzar
6.1

STOCK DE MINERALES
NaMoO4

2.4 g CuSO4.5 H2O

1.7 g

CoCl2.6H2O

0.24 g MgSO4.7 H2O

1.0 g

CaCl2.2 H2O

1.5 g H2SO4 concentrado

FeCl3. H2O

2.7 g Agua destilada c.s.p.

12.0 ml
1 litro

STOCK DE MINERALES
CoCl2.6H2O
0.9 g
FeCl3. H2O
3.0 g
MgSO4.7 H2O
1.3 g
H2SO4 concentrado
12.0 ml
Agua destilada c.s.p.
1 litro

FERMENTACIONES
Medio de Cultivo
Fermentacin acetobutlica en medio a base de melaza
Clostridium acetobutylicum
PARAMETRO

DSM1 DSM1 DSM2 IBUN2 IBUN2 IBUN2 IBUN2 IBUN2


1732 1732 1732
R
I
VI
VII
IV

Biomasa (g/l)

1.60

2.40

2.40

6.583

1.514

1.643

0.947

1.595

Vel. Esp. Crec. () (h-1)

0.116 0.020 0.052

0.021

0.114

0.114

0.079

0.097

% Sustrato Consumido

54.0

63.0

100

44.8

52.6

63.7

60.9

Solventes Totales (g/l)

8.86

12.30 12.30

29.41

5.69

9.29

14.59

17.46

Rendimiento en Biomasa Y (X/S)

0.069 0.071 0.037

0.114

0.068

0.088

0.046

0.073

Rendimiento en Producto Y (P/S)

0.093 0.361 0.343

0.585

0.195

0.254

0.341

0.511

Productividad (g/l*h)

0.093 0.172 0.173

0.196

0.089

0.415

0.166

0.273

Productividad Especfica

0.058 0.072 0.072

0.030

0.059

0.252

0.175

0.171

65.9

1. PARRA et. al. 1995. Evaluacin de cepas de Clostridium acetobutylicum para la fermentacin acetobutlica.
Revista Colombiana de Ciencias Qumico Farmacuticas. No.24. 40-44.
2. SIERRA et. al. 1995. Obtencin de mutantes espontaneas de Clostridium acetobutylicum Resistentes al
butanol. Revista Colombiana de Ciencias Qumico Farmacuticas. No.24. 40-44.

FERMENTACIONES
Condiciones
TEMPERATURA (C)

PARAMETRO
Biomasa (g/l)
Rendimiento en
Solv. Tot (%)
Rendimiento en
Butanol (%)
Rendimiento en
Acetona (g/l)
Productividad

25

30

37

40

40/25

2.73 2.47 2.59 2.22

2.09

29.1 28.4 25.5 24.5

26.2

21.4 21.5 20.0 20.1

20.3

6.2

3.6

4.6

0.47 0.48 0.47 0.60

-----

5.8

4.3

MCNEIL AND KRISTIANSEN. 1985. Effect of temperature upon growth rate and solvent production
in batch cultures of Clostridium acetobutylicum. Biotechnology Letters. Vol 7. No.7. 499 -502

FERMENTACIONES
Condiciones
pH

PARAMETRO
4.5

5.0

5.5

6.0

Biomasa (g/l)

2.05

2.68

2.30

2.0

% Sustrato Consumido
Solventes Totales (g/l)
Rendimiento en
Biomasa Y (X/S)
Rendimiento en
Producto Y (P/S)
Productividad (g/l*h)
Productividad
Especfica

100
17.6

100
99
18.25 10.63

84
1.13

0.046 0.073 0.088 0.043


0.320 0.332 0.201 0.024
0.303 0.315 0.183 0.019
8.585 6.810 4.622 0.565

MONOT et. al. 1984. Influence of pH and undissociated butyric acid on the production of
acetone and butanol in batch cultures of Clostridium acetobutylicum. Applied Microbiology and
biotechnology. No, 19. 422-426

FERMENTACIONES
Condiciones (2)
PARAMETRO
Biomasa (g/l)

VELOCIDAD DE
AGITACION
190
340
410
3.9

3.18

3.24

0.336

0.518

0.570

100
17.1

100
17.0

100
15.4

0.078

0.064

0.065

0.33

0.324

0.302

Productividad (g/l*h)

0.633

0.630

0.642

Productividad Especfica

0.162

0.198

0.198

Vel. Esp. Crec. () (h-1)


% Sustrato Consumido
Solventes Totales (g/l)
Rendimiento en
Biomasa Y (X/S)
Rendimiento en
Producto Y (P/S)

YERUSHALMI and VOLESKY. 1985. Inmportance of agitation in acetone-butanol


fermentation. Biotechnology and Bioengineering. Vol. XXVII, 1297-1305

FERMENTACIONES
Concepto Biolgico
PRODUCTO

PROPIEDADES
FISICAS

CINETICA DE
PRODUCCION
CINETICA DE
CRECIMIENTO

AMBIENTE
EXTRACELULAR

TRANSPORTE DE
MOMENTUM / MASA / ENERGIA

AGITACION / AIREACION

FERMENTACIONES
Concepto Ingenieril
VELOCIDAD DEL
FLUJO DE GAS
(Vg)

PARAMETROS
GEOMETRICOS

AGITACION

Pg / V
PROPIEDADES REOLOGICAS

HOLD UP
Kla
BALANCE DE
OXIGENO EN LA
FASE GASEOSA

P dP/dt

Cl*

MoX
BALANCE DE
OXIGENO
DISUELTO

X dX/dt
X

Cl

t
P

BALANCE DE SUSTRATO
F

Sf

MsX
So

FERMENTACIONES
Requerimientos (1)
INTEGRIDAD BIOLOGICA
Unicamente crecimiento del
microorganismo deseado
ECONOMIA
BUEN MEZCLADO
Medio Ambiente Uniforme
Control de Temperatura
Control de pH
Mezclado y liberacin de nutrientes y
productos

FERMENTACIONES
Requerimientos (2)
ENTRADA/SALIDA DE MATERIALES
BUENA AIREACION
El crecimiento aerbico es limitado por la
disponibilidad de O2
CONDICIONES FAVORABLES
ESTERILIZACION
TRANSFERENCIA DE CALOR
BUEN CONTROL
SEPARACION DE GAS
TIEMPOS DE REACCION CORRECTOS

FERMENTACIONES
Compromiso
Condiciones
Apropiadas

Mezclado
Aireacin
Transferencia de Calor

Integridad
Biolgica

Entrada/Salida
Medida
Control

Bajo Costo

Rene Todos los


Requerimientos
Totalmente

FERMENTACIONES
Compromiso Optimo
Costo $

Costo Total de Produccin


Optimo
Costo de Equipos
Costo de Operacin
Grado al Cual Todos los Requerimientos son Logrados
Ms Fallas de Produccin
Calidad Variable del Producto
Uso Ineficiente de Materias Primas
Altos de Costos de Recuperacin

Menos Fallas de Produccin


Calidad Consistente del Producto
Uso Eficiente de Materias Primas
Menores Costos de Recuperacin

FERMENTACIONES
Diseo del Bio-reactor

Mantenerlo Simple
Minimizar Entradas y Salidas
Eliminar Puntos Muertos, Ej. Vlvulas, Drenajes
Mantener Partes Internas al Mnimo
Lograr el Mejor Compromiso Contra los
Requerimientos Mezclado, Control y
Condiciones Apropiadas
Evite los procesos Continuos a Menos que la
Economa de la Escala lo Justifique
Disee Procesos Limpios para el Peor de los
Casos

FERMENTACIONES
Factores de la Bio-reaccin

ENTRADAS

PATRONES DE
INTERACCION

DESEMPEO

FERMENTACIONES
Desempeo del Bio-reactor
Tipo de Bio-reactor
Funcin de Factores Biolgicos y Fsicos.
Crecimiento del organismo
Cintica de la enzima
Co-factores y nutrientes
Densidad celular
Competidores y venenos
Patrones de interaccin

FERMENTACIONES
Patrones de Interaccin (1)
Clula Libre en
Suspencin

Clula
Inmovilizada

Pelcula de Fluido

FERMENTACIONES
Patrones de Interaccin (2)
Zona Muerta en el Mezclado

El transporte en la zona
muerta solo se realiza por difusin

FERMENTACIONES
Bio-reactor Ideal
REACTOR BATCH

REACTORES CONTINUOS
TANQUE AGITADO

Mezclado perfecto
Composicin uniforme
Composicin variable
en el tiempo

Mezclado perfecto
Composicin uniforme
Composicin constante
en el tiempo

FLUJO PISTON

Mezclado perfecto a
travs del reactor pero
no a lo largo del mismo
Composicin variable
con la longitud
Composicin constante
en el tiempo

FERMENTACIONES
Bio-reactor

FERMENTACIONES
Bio-reactor

TIPO DE
IMPULSOR

Dt/Di HL/Dt Hb/Di

Nb

Wb/Dt

Turbina Roushton
Li/Di = 0.25, Wi/Di = 0.2

0.1

Paletas
Wi/Di = 0.2

0.1

Propela Marina
Pitch = Di

Wb

HL

Li
Di

0.1
Hb

Dt

Wi

FERMENTACIONES
AGITACION Y MEZCLADO
UNA FERMENTACION SE CONSIDERA UN SISTEMA DE TRES
FASES QUE IMPLICAN REACCIONES LIQUIDO-SOLIDO,
GAS-SOLIDO Y GAS-LIQUIDO

FASE GASEOSA
Reservorio de O2
Evacuacin de CO2, H2
H2S, CH4, y
metabolitos evaporados

FASE LIQUIDA
Sales
Sustratos
Metabolitos

FASE SOLIDA
Clulas Individuales
Bolitas de Micelio
Sustratos Insolubles
Metabolitos Precipitados

DISPERSIN DEL AIRE


HOMOGENEIZACIN DEL SISTEMA
SUSPENSIN DE M..O. Y NUTRIENTES SLIDOS
DISPERSIN DE LQUIDOS NO MISCIBLES

FERMENTACIONES
Mezclado Mecnico

Np
Nre
P
gc

:Nmero de potencia
:Nmero de Reynolds
:potencia de la agitacin (Kg*m/sec)
:Factor de Conversin

N
Di

:velocidad de agitacin (sec-1)


:dimetro del impulsor (cm)
:densidad del medio (g/cm3)
:viscosidad del medio g/cm*sec)

FERMENTACIONES
Mezclado Mecnico

Flujo Axial
Alta Eficiencia

Flujo Axial

Flujo Radial
Dispersiones

Flujo Semi-Axial
Alta Viscosidad

Bajo Flujo
Alto Corte
Dispersin de
slidos y lquidos

Flujo Radial
Alto Corte
Dispersin de Gases

Flujo Radial
Alto Torque
Alta Viscosidad
Dispersin de Gases

FERMENTACIONES
Transferencia de Oxigeno
Fluido

C* = Po/H
Clula

Burbuja

O2

O2

O2

C* = 468 / (31.6 + T)
C*

:Conc. de O2 a saturacin
disuelto en la interfase (mM/L)
Po :Presin parcial de O2 en la
fase gaseosa
H :Cte. De Henry
T
: Temperatura (C)

NA = KL a (C* - CL) = OTR

2
3

NA: Velocidad Volumtrica de


transferencia de O2 (mM 2/L.h)
5
KL: Coeficiente de Transferencia
en al interfase
a: Superficie especfica de
Pelcula
intercambio
Fluido de Fluido Clula
KLa: Coeficiente Volumtrico de
transferencia de O2 (1/h)
Fase Delimitante entre CL: Concentracin de O2 disuelto
(mM/L)
Fluido y Clulas

Burbuja
de Gas

Pelcula Pelcula
de Gas de Fluido

Fase Delimitante
entre Gas - Fluido

FERMENTACIONES
Cintica Batch (1)
Ln (X)

X3

Ln X3
Ln X2

X2

X1
X0

1 2

1 2

dX / dt = X

X1
t1

t2

X2

tiempo

= Ln (X2/X1) / (t2 t1)

t2

dX/X = dt
t1

td = Ln2 /
Ln X1
Ln X0

t1

t2

tiempo

FERMENTACIONES
Cintica Batch (2)
RENDIMIENTO DE SUSTRATO
EN BIOMASA

Pf
Xf

Producto 2
Biomasa

So

Biomasa Producida
Sustrato Consumido
YX/S = DX / DS = -(dX/dt)/(dS/dt)
YX/S = -dX/dS = (Xf - Xo)/(So - Sf)
RENDIMIENTO DE SUSTRATO
EN PRODUCTO

Po
Producto 1
Xo
Sf

Sustrato
TIEMPO

Producto Formado
Sustrato Consumido
YP/S = DP / DS = -(dP/dt)/(dS/dt)
YP/S = -dP/dS = (Pf - Po)/(So - Sf)

Formacin de
Producto
Llenado

Limpieza

Latencia

TIEMPO (h)
Fase de Produccin

Terminacin del proceso

Concentracin de Producto

FERMENTACIONES
Cintica Batch (3)

PRODUCTIVIDAD
Concentracin de Producto
Tiempo de Fermentacin
t = (1/m)*Ln(Xf/Xo) + tL + tD + tT)
P = Xf / [(1/ m)*Ln(Xf/Xo) + tL + tD + tT)]

FERMENTACIONES
Cintica Batch (4)
CRECIMIENTO
Acumulacin
de Biomasa

Crecimiento

dX/dt

*X

Remocin
de Biomasa
Fo * X/V

UTILIZACION DE SUSTRATO
Acumulacin
de Sustrato

= -

Suministro
de Sustrato
Fi * So/V

-dS/dt

Crecimiento

* X/YX/S

Sntesis de
Producto

qP * X/ Yp/S

Manteni
miento

m*X

FORMACION DE PRODUCTO
Acumulacin
de Producto
dP/dt

Sntesis de
Producto

qP * X/ Yp/S

Remocin
de Producto
Fo * P/V

Destruccin
de Producto

k*P

Remocin
de Sustrato
Fo * S/V

FERMENTACIONES
Cintica Batch (5)
CONCENTRACION DE SUSTRATO vs.

max

1/2

max
-1/Ks
1/max

Ks
0.01 a 100 mg/l

S
2 a 200 g/l

= max * So / (So + Ks)

1/ = Ks/max * 1/ S + 1/max

FERMENTACIONES
Cintica Batch (6)
TIPOS DE FEREMENTACION SEGN GADEN
Formacin de Producto Directamente
Asociado al Consumo del Sustrato
Formacin de Producto Indirectamente
Asociado al Consumo del Sustrato
Formacin de Producto Aparentemente
No Asociado al Consumo del Sustrato

50

2.5

5
40
4
30
3
20
2
10

0
0

10

12

0.5

0.4
1.5
0.3
1
0.2
0.5

0.1

14

0
0

TIEMPO (h)

10

12

14

TIEMPO (h)

0.8

4.5

0.7

4
0.6
3.5
3

0.5

2.5

0.4

0.3

1.5
0.2
1
0.1

0.5
0

0
0

TIEMPO (h)

10

12

14

BIOMASA (g/lh)

ALCOHOL, SUSTRATO (g/lh)

0.6

BIOMASA (g/gh)

7
ALCOHOL, SUSTRATO (g/gh)

60

BIOMASA (g/l)

ALCOHOL, SUSTRATO (g/l)

FERMENTACIONES
Cintica Batch (7)

Fermentacin Alcohlica
(a) Tiempo-Concentracin (g/l)
(b) Tasas Volumtricas (g/lh)
(c) Tasas Especficas (g/gh)

FERMENTACIONES
Cintica Batch (8)
120
10
80
5

40

0
0

40

80

120

160

200

240

0
280

0.02
0.015

0.08

0.01
0.04
0.005
0
0

TIEMPO (h)

40

80

0
120 160 200 240 280
TIEMPO (h)

1.2
1

0.14

0.8
0.12
0.6
0.1
0.4
0.08

0.2

0.06
0

40

80

120

160

TIEMPO (h)

200

240

0
280

SUSTRATO, ACIDO CITRICO (g/l)

0.16

MICELIO (g/l)

0.12

SUSTRATO, ACID CITRICO (g/gh)

160
15

0.16

0.025
MICELIO (g/gh)

200

20
MICELIO (g/l)

0.03

240
SUSTRATO, ACIDO CITRICO (g/l)

25

Produccin de Acido Ctrico


(a) Tiempo-Concentracin (g/l)
(b) Tasas Volumtricas (g/lh)
(c) Tasas Especficas (g/gh)

FERMENTACIONES
Cintica Batch (9)
0.2

30.0
0.8

0.6

20.0
15.0

0.4

PENICILINA (g/l)

25.0

10.0
0.2
5.0

0.00057
0.16
0.00056
0.00055

0.12

0.00054
0.08

0.00053
0.00052

0.04
0.00051

0.0

0.0
0.0

40.0

80.0

0.00050
0.0

120.0

40.0

80.0

120.0

TIEMPO (h)

TIEMPO (h)
0.7

0.012

0.6

0.01

0.5
0.008
0.4
0.006
0.3
0.004
0.2
0.002

0.1
0

0
0.0

40.0

80.0
TIEMPO (h)

120.0

PENICILINA (g/lh)

MICELIO, SUSTRATO, OXIGENO (g/lh)

0.00058

PENICILINA (g/gh)

1.0
MICELIO SUSTRATO OXIGENO (g/gh)

MICELIO, SUSTRATO, OXIGENO (g/l)

35.0

Produccin de Penicilina
(a) Tiempo-Concentracin (g/l)
(b) Tasas Volumtricas (g/lh)
(c) Tasas Especficas (g/gh)

FERMENTACIONES
Balance del Cultivo Continuo
F1
So

F2

X, S y P

FERMENTACIONES
Balance del Cultivo Continuo
BALANCE DE BIOMASA
Cambio Neto = Entrada + Crecimiento - Muerte - Salida
dX/dt

= (F/V)Xo +

- (F/V)X

Si Xo = 0 y >> , en el estado estacionario dX/dt = 0


= F/V = D
BALANCE DE SUSTRATO
Cambio Neto

-dS/dt

Entrada

= (F/V)So -

Si X/YX/S >> mX y

Crecimiento

mX/YX/S

Mantenimiento - Producto

mX

qpX/YP/S = 0, entonces:
X = YX/S(SO - S)

Salida

- qpX/YP/S - (F/V)X

D*(So - S) = X/YX/S

FERMENTACIONES

Biomasa

Cultivo Continuo
D<

D=

D>
Tiempo

FERMENTACIONES
Balance del Cultivo Continuo
= max * S/(S + KS)

X = YX/S * SO - {(KS * D) / (max * D)}

X, S y P

S = KS * D/ (max - D)

Si S = SO, entonces = Dcrtica

Dcrtica = max * SO / (SO + KS) (WASH OUT)

Dmxima = max * {1 - [KS / (SO + KS)]1/2}

Tasa de Dilucin (D)


Xmxima = YX/S * {SO + KS - [KS / (SO + KS)]1/2}

FERMENTACIONES
Aplicaciones del Cultivo Continuo
VARIABLES DEPENDIENTES VARIABLES INDEPENDIENTES

Tasas Metablicas

Tiempo

Concentracin Celular

Vel. Especfica de Crecimiento

Composicin Celular

Concentracin de Sustrato

Excrecin Celular

Sustrato Limitante

Morfologa Celular

Concentracin de Producto

Velocidad de Mutacin

pH

Patrones Metablicos

Temperatura

Seleccin de Microorganismos

Aireacin - Agitacin (KLa)

con una Alta

FERMENTACIONES
Aplicaciones del Cultivo Continuo
VENTAJAS

DESVENTAJAS

Establecer la a la Necesidad
del Experimento

Aparicin de Mutaciones
Deletereas Espontaneas

Obtener Clulas en un Estado


Definido Independientemente
del Tiempo

Falta de Conocimiento de la
Fisiologa Microbiana

Obtener Grandes Cantidades


de Material Celular Definido
con Equipo de Laboratorio

Operar Durante largos


Periodos Evitando la
Contaminacin del Sistema

FERMENTACIONES
Clulas Inmovilizadas
LAS CELULAS INMOVILIZADAS ESTAN
FISICAMENTE CONFINADAS O
LOCALIZADAS EN UNA REGION
DEFINIDA DEL ESPACIO RETENIENDO
SU ACTIVIDAD CATALITICA Y
-SI ES POSIBLE O AUN NECESARIOSU VIABILIDAD Y QUE PUEDAN SER
USADAS REPETIDA Y CONTINUAMENTE

FERMENTACIONES
Clulas Inmovilizadas
Consecuencias (1)
Facilita la separacin de clulas
Altas concentraciones de clulas en el reactor
Gradientes internos de condiciones fisicoqumicas dentro de
los agregados
Posible formacin de gases en el centro de los agregados
Poblaciones heterogneas Sintrpicas dentro de los
agregados
Afecta la velocidad de crecimiento

FERMENTACIONES
Clulas Inmovilizadas
Consecuencias (2)
Operar fermentadores continuos a flujo nominales mayores que
el WASH OUT
Protege de la contaminacin
Manipular la en sistemas continuos independientemente de D

Permite la manipulacin de las clulas como una fase discreta


Uso de tamaos ptimos de agregados que conducen a mximas
actividades microbianas
Ubicacin espacial dentro del reactor de diferentes poblaciones

FERMENTACIONES
Clulas Inmovilizadas
Tcnicas
ENLACES

ENLACE
SECUNDARIO

ADSORCION

ABSORCION

ENLACE
COVALENTE

FLOCULACION

UNION A
SOPORTE

ENTRECRUZAMIENTO

FERMENTACIONES
Clulas Inmovilizadas
Tcnicas de Inmovilizacin (2)

ATRAPAMIENTO FISICO
ATRAPAMIENTO

FIBRAS

MONOMEROS

MICROENCAPSULACION

POLIMERIZACION

POLIMEROS

OLIGOMEROS

ENTRECRUZAMIENTO
COVALENTE

GELIFICACION

TEMPERATURA

PRECIPITACION

IONOTROPICA

FERMENTACIONES
Clulas Inmovilizadas
Reactores
VENTEO
SUSTRATO

RECIRCULACION

PRODUCTO
SUSTRATO

PRODUCTO

PRODUCTO
SUSTRATO
AIRE

FERMENTACIONES
Clulas Inmovilizadas
Seleccin del Reactor

Viabilidad Celular
Tipo de Soporte
Tcnica de Inmovilizacin
Naturaleza del Sustrato
Cintica de las Reacciones
Requerimientos Operacionales
Facilidad de Reemplazo del Catalizador
Consideraciones Hidrodinmicas
Facilidad de Diseo, Fabricacin y Escalado
Costos del Reactor

FERMENTACIONES
Recuperacin del Producto

Esquema de Procesos
Producto en
Biomasa

Biomasa en el Fermentador/Reactor

Producto en Caldo
o Fase Acuosa

Reactor
Separador
Separacin
del Caldo

Sedimentacin
Filtracin
Centrifugacin

Producto o Desechos
de la Biomasa

Liberacin del Producto o


de Especies no Deseadas
de las Clulas

Desintegracin
de Clulas
mecnica
fsica
qumica
enzimtica

Extraccin Directa
desde las Clulas
solventes
detergentes

Liberacin del Producto desde los Fragmentos

Separadores/
Purificacin
Precipitacin
Extraccin con solventes
Intercambio inico
Adsorcin
Filtracin en gel
Mtodos de afinidad
Destilacin
Electroforesis
Ultrafiltracin
Congelamiento diferencial

Lixiviar
Secar
Bandejas, rodillos, tambores, etc.
Secado por aspersin
Lecho fluidos
Liofilizacin

Concentrar
Evaporacin, Membranas
Precipitacin, Adsorcin
Intercambio inico
Congelar - Descongelar

FERMENTACIONES
Recuperacin del Producto
Ruptura de Clulas
METODOS
MECANICOS
MEDIO
LIQUIDO

METODOS
NO - MECANICOS
DESECACION

LISIS

MEDIO
SOLIDO

Aire
Vacio
Liofilizacin
Solventes

PRESION

ULTRA
SONIDO

Hughes press
X press

AGITACION
MECANICA
Mickle
Blending
Sonomec

PRESION
French pressure
Ribi fractionater
Chaifoff press

TRITURAR
Mortero y pistilo
Molino de bolas

QUIMICA

FISICA

Detergentes
Glicina
solventes

Shock Osmtico
Cambios de Presin
Congelamiento

BIOLOGICA
Enzimas
Fagos
Antibiticos

FERMENTACIONES
Recuperacin de Producto
Separacin de E. coli
Extraccin del Pellet
de Centrifugacin con
Agente Caotrpico (GuHCl)

INSULINAHUMANA
(1979)

Precipitado
(cadena B)

Precipitacin del
Sobrenadante
a pH 5 (Cadena A)

Cromatografa en
DAE-Celulosa

Cromatografa en
Aminoetil Celulosa

Dialisis del Sobrenadante


de la Centrifugacin
Ruptura con CNBr
del Precipitado
de la Dilisis

Filtracin en gel
Extraccin del Residuo
con GuHCl y S-Sulfonacin

Dilisis

HPLC en fase Reversa

FERMENTACIONES
Recuperacin de Producto
HORMONA DE CRECIMIENTO
HUMANA (1981)

INTERFERON DE LEUCOCITOS
HUMANOS (1981)

Extraccin de E. coli por Ruptura Mecnica


Precipitacin con Polietileneimina
Precipitacin del sobrenadante
con (NH4)2SO4
Cromatografa de Intercambio Aninico
en Celulosa del Precipitado Disuelto

Dilisis del Precipitado

Cromatografa de Afinidad
(Anticuerpos Monoclonales)

Cromatografa de Intercambio
Catinico en Celulosa

Precipitacin con (NH4)2SO4


Filtracin en Sephacryl S-200

Cromatografa de Intercambio
Catinico en Celulosa

FERMENTACIONES
Escalado

FERMENTACIONES

FERMENTACIONES
Escalado

Pertinencia y Estabilidad de la Cepa


Diseo del Fermentador
Composicin del medio de Fermentacin
Perfil de la Fermentacin
Diseo del Reactor
Control del Proceso
Optimizacin del Proceso
Sistematizacin del Proceso
Separacin del Producto
Recuperacin del Producto
Pureza Final del Producto
Diseo de la Planta

FERMENTACIONES
Metabolismo
Ncleo
DNA

Ribosomas

RNA
Ribonucletidos
Almidn

Desoxiribonucletidos

Mitocondria
Flagelos

Amino
cidos

Proteinas

Glucosa
Membranas

Vitaminas
Coenzimas

Triosa

Pentosa
Piruvato

Acetil-CoA

Acidos
grasos
Lpidos

Pared Celular

Glicerol

Aminocidos

Oxalacetato

Citrato

Hexosaminas
Mucopptidos

Azucares
Azcares cidos

Polisacridos

FERMENTACIONES
Metabolismo: Regulacin
CATABOLITO

Sustrato

de Actividad
Enzimtica

Traduccin

Transcripcin

Producto

Enzima A

Sustrato

Enzima B

X
X

FERMENTACIONES
Metabolismo
Inhibicin por Retroalimentacin

E
F

Isoenzimas

Concertada

H
A

E
F

H
A

Acumulativa

FERMENTACIONES
Metabolismo
Regulacin Retroalimentada
Fosfoenolpiruvato + eritrosa-4-P

3-desoxi-Darabinoheptulosonato-7-P
(DAHP)

a-oxobutirato
(i+v+l)
a-ceto-a-hidroxi
butirato
(i+v+l)

Prefenato

L-fenil
L-tirosina alanina
L-triptfano

a-aceto
lactato

a-b-dihidroxib-metilvalerato
(i+v+l)

a-b-dihidroxib-metilbutirato

a-oxo-bmetilvalerato

a-oxo-bmetilvalerato

Corismato
Antranilato

Piruvato

L-isoleucina

L-valina
L-leucina

FERMENTACIONES
Metabolismo
Biosntesis de Metabolitos Primarios
ALTERACION DE LA REGULACION
POR RETROALIMENTACIN

ALTERACION DE LA
PERMEABILIDAD

Acumulacin de
productos finales

Acumulacin
intermediarios

Aspartato
Fosoforibosil
pirofisfato

Carencia de
a-cetoglutarato
deshidrogenasa

Aspartilfosfato

PRPP
amidotransferasa

Aspartato semialdehido

Limitacin
en Biotina

IMP
Homoserina
S-AMP

XMP
Treonina

AMP

GMP
Lisina

Adenina exgena

Metionina
Isoleucina

Superproduccin
de Glutamato

FERMENTACIONES
Metabolismo
Biosntesis de Metabolitos Secundarios
Acido fenilactico
EFECTO
PRECURSOR

Benzilpenicilina (Penicilina G)

Acido fenoxiactico

Fenoximetilpenicilina (Penicilina V)

Acido Alilmercaptoactico
INDUCCION
ENZIMATICA

Metionina
Agroclavina

REGULACION POR
RETROALIMENTACION

Elymoclavina

Lisina

Fenoximetilpenicilina (Penicilina O)
Cefalosporina C
Dimetilalil
transferasa

Homocitrato
sintetasa

Cephalosporium acremonium

Claviceps fusiformis
a-Amino
adipato

Benzil
penicilina

Glucosa
REGULACION POR
CATABOLITO

Lactosa
Acido Ctrico
Glucosa

Penicilina

Penicillium chrysogenum

Novobiocina

Streptomyces niveus

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