I.

INTRODUCCIN
La tincin diferencial de Gram, es el mtodo ms empleado en bacteriologa, con esto se
puede clasificar en dos grandes grupos (Gram +, Gram -). La coloracin de Gram tiene
fundamental importancia en la diferenciacin morfolgica y taxonmica de las bacterias.
Recibe el nombre de tincin diferencial debido a que permite distinguir bacterias, a
veces, incluso cuando tienen igual forma y tamao. La respuesta a la prueba depende
las condiciones fsicas de la pared celular y de su permeabilidad. Las Gram positivas
poseen una capa gruesa de peptidoglucano, mientras que la Gram negativa tiene ms
delgada de peptidoglucano y poseen una membrana externa. La distincin se da segn
retengan o no el colorante de base usado en la tincin, que es el cristal violeta.
El colorante cristal violeta es de naturaleza bsica y por lo tanto tiene afinidad por
sustancias cargadas negativamente como la pared celular de cualquier bacteria. Por lo
que bacterias Gram positivas y Gram negativas son teidas de color violeta.
Casi todas las bacterias de importancia para la investigacin en microbiologa y otras
ciencias pueden detectarse con este mtodo, las nicas excepciones son los
microorganismos que se hallan casi con exclusividad dentro de las clulas husped (p.
ej clamidias), los que carecen de pared celular (p. ejmicoplasmas y ureaplasmas) y los
que tienen un tamao insuficiente para set observados con el microscopio ptico (p. ej
espiroquetas).
II. OBJETIVO
El objetivo de esta prctica fue demostrar a travs de la tcnica de tincin diferencial de
Gram la existencia de dos grupos de bacterias, de acuerdo a la coloracin final de la
muestra. Es importante sealar que tambin busca conocer los procedimientos y las
soluciones de esta tcnica, con la intencin de aplicarlo correctamente, como
consecuencia se obtendr buenos resultados.

CUESTIONARIO
1. Bajo qu circunstancias la tincin diferencial de Gram podra resultar errnea
Existen varias, por ejemplo, se ha encontrado que el mal uso del alcohol-cetona
(decolorante) en la fase de decoloracin del primer colorante, puede llegar a decolorar las
bacterias GRAM Positivas.
Cultivos y preparaciones viejas tambin pueden generar resultados atpicos, por ello se
recomienda siempre usar cultivos de 18-24 h como mximo o extensiones recientes. Otro
ejemplo es cuando al momento de fijar la muestra con el mechero, pues deben ser de 2 a
3 pasos de un segundo por llama suave, un exceso del calor puede dar coloraciones
extraas.

Para disminuir los mrgenes de error existen los controles de calidad, los cuales pueden
realizarse con bacterias Gram positivas (estafilococos) y las Gram negativas
(EcherichiaColi), y adems deben utilizarse cultivos procedentes de medios de cultivo
incubados durante 18-24 horas. (IHR DIAGNOSTICA. 2007)
2. Qu efecto traera reemplazar el lugol con otro agente oxidante?
Un mordiente es una sustancia que aumenta la fijacin de algn colorante sobre una
superficie determinada, en este caso el cristal violeta aumenta su fijacin a la pared
celular bacteriana usando de mordiente al lugol, en la pared bacteriana el lugol forma un
complejo con el cristal violeta insoluble en agua lo que evita que se disuelva y se pierda el
colorante durante el enjuague. La pared de los Gram positivos son ricos en cidos
teicoicos no saturados estos muestran gran afinidad por los agentes oxidantes, todos los
mordientes por ejemplo el lugol son agentes oxidantes y su efecto en general consiste en
dar un carcter ms acidez de los cidos teicoicos lo que aumenta la afinidad de estos por
el colorante bsico cristal violeta. (PORFIRIO, 2011)

El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio, los
cuales estn presente para solubilizar el yodo, y actan de mordiente, haciendo que el
cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la clula bacteriana. El I 2 entra en
las clulas y forma un complejo insoluble en solucin acuosa con el cristal violeta.
El lugol es preciso en la tincin Gram ya que forma un complejo insoluble con el colorante
cristal violeta es por ello que al usar otro agente oxidante que no sea el lugol no habr
formacin de este complejo y no se podr diferenciar correctamente entre las Gram
positivas y Gram negativa.

BIBLIOGRAFIA

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Disponible en: www.codeinep.org/control/Enterococcus.pdfConsultado el 05 de
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BEERS, M; BERKOW, R. 1999. El Manual Merck de diagnstico y tratamiento.
Dcima Edicin. Editorial Harcourt. Espaa
SANTAMBROSIO, E; ORTEGA, M. 2009. Tincin y observacin de
microorganismos.
UNIVERSIDAD
TECNOLOGICA
NACIONALhttp://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnol
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