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Preparacin de 5X tampn TBE electroforesis

Visin de conjunto
TBE es uno pf los tampones de electroforesis muy comunes, que se utiliza para
el anlisis en gel de agarosa de ADN.
Contiene Tris, cido brico y EDTA.
Tris-borato proporciona conductividad elctrica, as como mantiene el pH.
EDTA inhibe nucleasas dependientes metlicos por quelacin de los cationes
divalentes (Ca2 +, Mg2 +), por lo tanto
proteger el ADN de las nucleasas durante la carrera.
Tampn TBE tiene mejor capacidad tampn TAE a continuacin, por lo tanto, se
puede utilizar para extendida y
electroforesis repetido.
Borato de tampn TBE se inform de interactuar con el ADN, lo que puede
causar problemas en posteriores
modificacin enzimtica de fragmento de ADN eluido de gel. En tales casos, el
uso de tampn TBE debe ser
evitado. TAE es tampn adecuado para este propsito.
Preparacin de 5X Tris-glicina SDS Tampn de electroforesis | Preparacin de
colorante de carga 6X DNA |
Salina tamponada con fosfato | TAE Vs tampn TBE | Electroforesis en gel de
agarosa de ADN | Preparacin
de gel de agarosa para anlisis de ADN | Preparacin de 50X Tampn de
electroforesis TAE

Preparacin de 0,5 M cloruro de rubidio solucin (RbCl)

Preparacin de cloruro de calcio 1 M solucin (CaCl2)
Preparacin de solucin 1 M MOPS
Preparacin de 50x TAE electroforesis buffer.htm
Requisito
reactivos
Tris base (C4H11NO3, Peso molecular: 121,14)
El cido brico (H3BO3, Peso molecular: 61.83)

Solucin de EDTA de stock 0,5 M (pH 8,0)

Desionizada / agua Milli-Q
Equipos y material desechable
Cilindro de medicin
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Matraz cnico / Vaso

agitador magntico
Composicin de 5X tampn TBE electroforesis
Borato 0,445 M Tris
0,01 M EDTA
pH 8.2 a 8.4 (a 25 C)
Composicin de 1X TBE Tampn de electroforesis
Borato 89 mM Tris
EDTA 2 mM
pH 8.2 a 8.4 (a 25 C)
Objetivo
Preparacin de 1000 ml de tampn de electroforesis TBE 5X, pH 8,3.

Preparacin
Para preparar 1000 ml de tampn TBE 5X, pesar 54 g de base Tris y 27,5 g de
cido brico. transferirlos
a 2 L vaso de precipitados / matraz cnico. Aadir 800 ml de agua desionizada /
Milli-Q. Aadir 20 ml de EDTA 0,5 M
solucin. Mezclar hasta que todos los ingredientes se disuelven por completo.
Consejos):
1. Uno puede usar agitacin manual utilizando una pipeta de vidrio para mezclar
los ingredientes. Agitador magntico hace
el proceso de disolucin fcil y conveniente.
2. Recomendamos aadir solucin 0,5 M EDTA despus de aadir agua.
Precaucin (s):
No se disuelven en 980 ml de agua / Milli-Q desionizada. En la mayora de los
casos, aumenta el volumen de solucin
cuando la gran cantidad de soluto se disuelve en disolvente. ver preparacin de la
solucin
Ajustar el pH 8,3 si es necesario.

Precaucin (s)

Como el pH depende de la temperatura, se recomienda ajustar el pH de la

solucin en la sala
la temperatura (25 C).
Ajustar el volumen de la solucin a 1000 ml con agua desionizada / MilliQ. Mezclar de nuevo.
Opcional: se puede filtrar la solucin para eliminar cualquier material no
disuelto.
Transferir la solucin a la botella en autoclave.
Consejos):
Dependiendo del consumo, se puede hacer pequeas alcuotas de la solucin.
Esterilizar la solucin por autocaving (20 minutos a 15 lb / sq.in. (Psi) a partir de
121-124 C en el ciclo de lquido).
Nota (s):
Se puede esterilizar la solucin pasando a travs de 0,22 unidad de
filtro. Strilization filtro elimina todo
partculas en suspensin con un tamao de ms de 0,22 , que incluye la mayora
de las bacterias, pero no sus esporas
micoplasma. Cabe agregar, que no inactiva las actividades enzimticas (por
ejemplo, DNasas). El tratamiento en autoclave
inactiva la mayora de las enzimas, excepto algunos (por ejemplo, RNasas) y
mata a la mayora, los microorganismos incluidos
micoplasma.

lmacenamiento La solucin se puede almacenar a 15 - 25 C (temperatura

ambiente) durante varios meses

aplicaciones Electroforesis en gel de agarosa de ADN Electroforesis no

desnaturalizante en gel de agarosa de RNA (tampn MOPS se utiliza para geles
desnaturalizantes) Electroforesis en gel de poliacrilamida de cido nucleico
(tanto no desnaturalizacin o desnaturalizacin) DNA gel de secuenciacin
automatizada Cambio de movilidad electrofortica de ensayo (EMSA