Recomendaciones tcnicas sobre el manejo y funcionamiento de bancos de

tejidos para investigacin

(1 versin)

Mar Abad, Centro de Investigacin del Cncer, Salamanca

Aurora Astudillo, Hospital Central de Asturias
Pedro L. Fernndez, Hospital Clnico de Barcelona
Manuel Morente, CNIO
Jess Javier Sola, Clnica Universitaria de Navarra
Enero de 2002

El gran desarrollo de la biologa molecular y, mas recientemente, la informacin

generada por el Proyecto Genoma tiene una de sus mayores aplicaciones en el
conocimiento de las alteraciones genticas y moleculares de las enfermedades humanas.
Uno de los recursos ms importantes para el desarrollo de estos estudios son los propios
tejidos y otras muestras (suero, cultivos celulares para estudios citogenticos, lneas
celulares) normales y patolgicos procedentes de pacientes afectos de diversas
enfermedades. Asimismo, son tambin importantes las muestras provenientes de
controles sanos. La obtencin de estas muestras, su mantenimiento y la distribucin a
los investigadores interesados constituyen los objetivos bsicos de los bancos de tejidos
y tumores.
Dado que en un futuro prximo previsiblemente proliferar este tipo de bancos, estando
presentes en muchas de nuestras instituciones sanitarias, es deseable la existencia de una
uniformidad de criterios en el funcionamiento y gestin de los mismos que permitan la
mxima calidad de sus servicios y la posibilidad de una coordinacin entre ellos.
Debido a esto se exponen a continuacin las recomendaciones de un panel de
especialistas en este campo.
Las recomendaciones se organizarn segn el flujo y manejo de muestras:
1- SELECCIN:
Es recomendable decidir con antelacin si se almacenarn indiscriminadamente TODAS
las muestras posibles recibidas en los servicios de Anatoma Patolgica o si hay una
lista de SELECCIN basada en criterios de inters del propio servicio o de los grupos
solicitantes. En el primer caso, se habr de contar con una gran capacidad de
almacenamiento. En el segundo caso, cada servicio debe tener listas actualizadas de
tejidos a congelar y que se deben de difundir al personal que recibe, clasifica y procesa
las muestras.
Conviene sealar aqu la conveniencia, siempre que sea posible, de obtener tejido
patolgico (Ej. tumoral) y contrapartida normal, lo que ser imprescindible en muchos
estudios moleculares. Cuando esto ltimo no sea posible, se puede plantear la toma de
muestras de mucosa bucal del paciente con torunda que se lavan en un medio adecuado
y se pueden congelar
2- OBTENCIN:
Resulta evidente que la prontitud en la obtencin de la muestra redunda en la mejor
calidad de la misma, sobre todo cuando se pretende la extraccin de cidos nucleicos, en
particular ARN. En este ltimo caso es recomendable un inmediato traslado de los
especmenes quirrgicos al servicio de Anatoma Patolgica donde se realizar la toma.
En algunos casos, cuando este circuito no sea lo suficientemente rpido por limitaciones
logsticas de los quirfanos, puede requerirse que los propios investigadores interesados
o personal adscrito al banco se desplacen a los pabellones quirrgicos.
La toma de muestras de especmenes quirrgicos debe de cumplir los siguientes
requisitos:
1.- que no interfiera ni con el diagnstico histopatolgico del caso ni con su uso para
otros fines primordiales para el paciente como determinar parmetros pronsticos. Por
tanto, slo podr utilizarse el material excedente de los anteriores fines.

2.- la realizar una persona con capacitacin para asegurar lo anterior. Por tanto, ha de
ser realizada por personal capacitado de un servicio de Anatoma Patolgica.
3.- debe realizarse garantizando la calidad del procedimiento para asegurar su utilidad
futura.
Manipulacin:
Aunque sera deseable, habitualmente no podr garantizarse condiciones de esterilidad
en la toma de muestras, lo cual no impide que se deban tomar las mayores precauciones
para evitar contaminaciones del tejido de inters. En este sentido es recomendable:
- Uso de guantes a lo largo de todo el proceso para evitar contaminar la muestra por el
manipulador y minimizar el riesgo de infeccin del mismo dado que no siempre se
conocer la capacidad infecto-contagiosa de las muestras.
-El uso de cuchillas desechables y nuevas de bistur, tijeras bien afiladas y limpias y
pinzas en similares condiciones. Cambiar este material tras cada muestra (incluyendo
muestras de tejido normal y tumoral de un mismo caso). Resulta aconsejable realizar
primero la toma del tejido normal si alguna pieza del instrumental se va a utilizar varias
veces.
- Utilizar una base limpia para el manejo de las muestras ( Ej. papel desechable limpio)
La toma de los fragmentos tisulares se harn de reas en las que no se sospeche
fenmenos de necrosis o isquemia que redundaran en una pobre preservacin
Adicionalmente, es recomendable tomar de cada muestra tumoral improntas sobre
portaobjetos, que se fijan en alcohol o acetona y se pueden almacenar para su uso en
estudios o teir para control inmediato de calidad del tejido seleccionado.
Congelacin:
Existen dos posibles mtodos principales de congelacin de tejidos: congelacin directa
en isopentano o en molde con medio OCT, cada una con ventajas e inconvenientes.
a) Congelacin directa:
El fragmento de tejido seleccionado se sumerge directamente en isopentano frio
(histobath, isopentano extraido de arcn a 80C). Cuando el tejido se ha endurecido y
queda blanco se introduce en tubos de almacenamiento de entre 1 y 2 cc. La ventaja de
esta tcnica es su rapidez y que el contenedor ocupa muy poco espacio a la vez que
tiene gran capacidad. El inconveniente principal es que para comprobar la calidad de lo
congelado, aparte del aspecto macroscpico previo a la toma, se debe incluir en OCT y
realizar cortes congelados para su anlisis histopatolgico.
b) Congelacin en molde de OCT:
El fragmento seleccionado se coloca en un criomolde con OCT que se congela como en
el caso anterior. Este mtodo es algo ms lento y ocupa ms espacio en su
almacenamiento pero permite la realizacin rpida de cortes de control de calidad as
como almacenar de forma inmediata muestras de estudios peroperatorio sin necesidad
de volver a congelar.
Tanto en un caso como en otro resulta obvio la necesidad de identificar las muestras,
para lo cual existen varios sistemas: escritura de nmero o palabras sobre el bote con
tinta indeleble, pegatinas con cdigos de barra o puntos para lectores lser, etc. Estos
ltimos mtodos garantizan una rapidez de etiquetado, identificacin y volumen de

informacin que los hace recomendables. Cuando no estn disponibles se deber

etiquetar los tubos o moldes con un nmero de identificacin de la muestra (Ej. nmero
de biopsia) y con una letra que defina el tipo de tejido ( Ej.:tumor vs normal (T/N)).

3- ALMACENAMIENTO
El tipo de almacenamiento viene determinado por la temperatura que se desee utilizar.
Existen congeladores de 40 (poco recomendables), -80 C y congeladores de nitrgeno
lquido a muy inferior temperatura. Probablemente sean estos ltimos los ms
recomendables dada su capacidad de conservacin, si bien su precio y necesidades de
mantenimiento los hacen menos asequibles. En cualquier caso, es imprescindible, sea
cual sea el equipo, que disponga de los adecuados sistemas de seguridad que garanticen
la preservacin de muestras (alarmas de temperatura, de corriente elctrica, generadores
de emergencia, etc.).Estas alarmas deberan estar conectadas a una central que avise a
los encargados del banco del problema. En los equipos con suministro de N2 lquido
debe existir un sistema de apoyo (back-up) para suplir deficiencias en el anterior.
Resulta difcil hacer recomendaciones respecto al nmero total de congeladores
necesarios ya que depender del ritmo de entrada de muestras que, tengamos muy
presente, siempre ser muy superior al de salida, por lo que habr que ir previendo con
suficiente antelacin la adquisicin de nuevos equipos y/o eliminacin de muestras que
se consideren innecesarias.
Cualquiera que sea el equipo, las muestras deben estar bien organizadas dentro del
mismo. Esto se consigue por medio de cajas dispuestas de forma ordenada en estantes
(racks).
Es necesario seguir un programa de mantenimiento del equipo con revisiones
peridicas, limpieza de escarcha y eliminacin de muestras obsoletas.
Es tambin conveniente tener localizados otros contenedores con espacio libre dentro de
la institucin para casos de extrema emergencia.
4- GESTIN DE LA INFORMACIN
Resulta evidente que en un banco de estas caractersticas es de la mxima importancia
un correcto registro y almacenamiento de la informacin de los casos. Para ello es
imprescindible un programa informtico que, con un diseo de bases de datos, gestione
toda esa informacin. En el mercado existen diversos programas de estas caractersticas
aunque no diseados especficamente para este tipo de gestin. Existen tambin algunos
otros desarrollados con este fin para bancos de tejidos y que incorporan sistemas de
etiquetado con cdigo de barras y lectores lser (Freezerworks).
Cualquiera que sea el programa debe de cumplir una serie de caractersticas:
1.- Fcil manejo para personal con categora de tcnico de laboratorio
2.-Exhaustividad: debe tener capacidad para almacenar una gran cantidad de
informacin de cada caso (nmero de registro, de biopsia, diagnstico, localizacin,
fecha, etc.).
3.- Accesibilidad: la informacin debe poder extraerse de forma fcil y completa por el
personal autorizado.
4.- Confidencialidad y cumplimiento de los requisitos legales de toda base de datos.
Entre los datos a recoger de cada muestra destacan:

N de registro del banco

N de biopsia
rgano
Tipo de tejido (normal/tumor)
Diagnstico histopatolgico
Tiempo desde la extraccin quirrgica hasta congelacin
Lugar de almacenamiento: n de arcn, rack, caja
Tipo de muestra (tubo, criomolde, etc.)
5- PERSONAL
Debido a la importancia y volumen de material almacenado en un banco de tejidos se
genera una gran cantidad de trabajo que requiere una preparacin y cantidad de personal
a su cargo suficientes. La cantidad de personal necesario vara obviamente con el
volumen de casos generados, pero consideramos que para un banco de un hospital de
tercer nivel debera existir como mnimo un tcnico de laboratorio a tiempo completo y
un especialista en Anatoma Patolgica a tiempo parcial. En el caso de bancos con
varios aos de evolucin y con gran volumen de muestras y distribucin establecidas de
las misma a otros grupos, o bien se trate de un ncleo receptor y organizador de bancos
ms pequeos a nivel local o regional creemos imprescindible la existencia de 1 2
tcnicos de laboratorio (uno de ellos con conocimientos de manejo informtico de
datos) y un tcnico superior especialista en Anatoma Patolgica a tiempo completo. La
necesidad de personal puede incluso aumentarse si el banco se convierte en
megaestructura de almacenaje, organizacin y distribucin de muestras a nivel nacional.
Aunque la capacitacin del personal ha quedado ms o menos esbozada, es evidente que
existen, al menos, dos categoras profesionales necesarias: tcnico de laboratorio de
Anatoma Patolgica, para las tareas tcnica (congelacin, gestin de almacenaje, etc.) y
especialista en Anatoma Patolgica, que realizar el estudio macroscpico, la toma de
muestras y los estudios microscpicos de control de calidad. Este especialista, cuando
sea nico, sera el responsable de la buena gestin del banco, incluyendo relacin con
los clnicos proveedores, grupos solicitantes de material y controles de calidad.
Queda por mencionar que el manejo de la informacin puede requerir una capacitacin
informtica que en algunos casos no pueda asumir un tcnico de laboratorio o
especialista, por lo que puede plantearse la necesidad de personal informtico
especializado con mayor o menor dedicacin al banco.
6- CONTROLES DE CALIDAD
La creacin de un banco de tejidos supone la asuncin de una importante
responsabilidad dada la naturaleza del material almacenado. Por ello debe existir un
compromiso de mantener los mximos niveles de calidad, lo que se debe intentar
conseguir con el diseo de un programa de controles de calidad, muchos de los cuales
deben ser comunes en todas las instituciones y otros se adaptarn a la idiosincrasia de
cada banco. Estos controles se deben aplicar a cada uno de los procesos anteriores:
Obtencin:
- Se debera establecer un mximo de tiempo desde la extraccin quirrgica a la
congelacin a partir del cual el material se rechazar. Este tiempo puede variar con
el tipo de tejido y con el objetivo para el cual se ha obtenido (extraccin de ARN,
ADN, protenas, histologa, etc.). Como regla general, toda muestra que haya

tardado mas de 2 horas y haya estado a temperatura ambiente ser poco til y en
caso de pretender extraerse ARN sera recomendable menos de media hora. Estos
tiempos varan con el tipo y tamao del tejido. Como se ha mencionado ya, la
entrada de la muestra en la base de datos debera recoger el tiempo pasado desde su
extraccin a su congelacin, lo cual no es siempre posible de precisar.
La siguiente garanta de calidad de las muestras est en que la persona que las
selecciona de los especmenes quirrgicos est formada para ello, lo que
habitualmente queda garantizado si dicha persona tiene la categora de especialista
en Anatoma Patolgica, evitando as la interferencia con otros procesos
diagnsticos primordiales a los que debe someterse la muestra.
Dado que no siempre es posible decidir macroscpicamente la naturaleza o calidad
de las muestras puede resultar necesario el estudio histopatolgico (Ej. corte de
congelacin) antes del almacenamiento de las mismas. Este estudio complementa al
que en todos los casos se realiza de forma rutinaria de los especmenes quirrgicos,
que establecen de forma definitiva y precisa el diagnstico pero que en algunos
casos puede no corresponder con precisin a la muestras congelada (tumores
parcialmente necrticos, tejidos supuestamente normales con lesiones neoplsicas
preinvasivas y no visibles macroscpicamente, etc.). Idealmente, debera existir un
sistema de almacenamiento temporal hasta que se confirma el diagnstico de tal
manera que toda muestra admitida al banco tiene un diagnstico cierto y definitivo.
El corte por congelacin de control puede sustituirse en muchos casos por la
confeccin de un bloque de parafina de tejido adyacente al de la toma que permita
confirmar con precisin la calidad y diagnstico.

Almacenamiento:
Dada la posibilidad de que el material almacenado se vaya degradando con el tiempo,
tanto ms cuanto mayor es la temperatura del congelador, as como los posibles
problemas tcnicos del mismo, es conveniente de forma peridica y aleatoria comprobar
la calidad de algunas muestras realizando estudio histolgico y extraccin de cidos
nucleicos, sobre todo ARN, y comprobar su integridad. Otro posible control es la
comprobacin de la antigenicidad de las muestras para estudios inmunohistoqumicos
(Ej. expresin de vimentina)
Gestin de la informacin:
Como en cualquier base de datos se debe asegurar la correspondencia perfecta entre los
datos recogidos en la base de datos y las muestras a que pertenecen, lo que se consigue
con una cuidadosa introduccin de los mismos y la comprobacin aleatoria y espordica
de ellos.
Dado que cuando no exista posibilidad de almacenamiento temporal en muchos casos se
introduce el previsible diagnstico de las muestras en el momento de la toma es preciso
asegurarse de que este coincide con el diagnstico definitivo tras el estudio rutinario,
para lo que habr que acudir a los informes AP finales y realizar las oportunas
correcciones en el campo de diagnstico de la base de datos.
7- BIOSEGURIDAD

Debido la naturaleza de las muestras almacenadas en los bancos de tejidos y tumores

resulta imposible conocer en todo momento la posible capacidad infecto-contagiosa de
los tejidos. Es por ello que este material ha de ser siempre manejado con las mximas
precauciones. Debera conseguirse que todos los casos con reconocida capacidad
infecciosa llegaran al banco marcados como tales para la toma de medidas especiales
(manipulacin, almacenamiento separado especfico) o, incluso, su rechazo si el banco
no se encuentra preparado para asumir los riesgos inherentes a estas muestras.

Todas estas recomendaciones son generales y en gran parte aplicables a la mayora de

bancos de tejidos para investigacin. No obstante, las peculiaridades de cada centro
(volumen de muestras, tipo de patologa atendida, capacidad econmica y de gestin)
harn necesario la adecuacin de las mismas a la idiosincrasia de cada institucin.

ANEXO I: Equipo mnimo recomendable (para un hospital de 3er nivel)

1-2 arcones de 80 con suficientes sistemas de seguridad
1 histobath de isopentano
1 criostato
1 ordenador con base de datos especfica para la gestin de bancos de tejidos
racks y cajas, fungibles (OCT, criomoldes, etc.)