PRCTICA N 03

ENSAYO DE ANLISIS POR CCD DE UN EXTRACTO

I.

INTRODUCCIN

En el anlisis fotoqumico del diente de len (Taraxacum officinale)

realizado en el extracto alcohlico, etreo y acuoso se puede
apreciar la existencia de alcaloides, flavonoides, triterpenos y/o
esteroides,

quinonas,

compuestos

lactnicos,

alcaloides

compuestos fenlicos y/o taninos en una proporcin representativa

vista en el vegetal.
Adems tambin se encontr la presencia de saponinas y azcares
reductores. El anlisis fotoqumico comprueba la presencia de
compuestos lactnicos y principios amargos que le otorgan la
cualidad de hepatoprotector al diente de len.
La muestra a analizar se deposita cerca de un extremo de una
lmina de plstico o aluminio que previamente ha sido recubierta
de una fina capa de adsorbente (fase estacionaria). Entonces, la
lmina se coloca en una cubeta cerrada que contiene uno o varios
disolventes mezclados (diluyente o fase mvil). A medida que la
mezcla de disolventes asciende por capilaridad a travs del
adsorbente, se produce un reparto diferencial de los productos
presentes en la muestra entre el disolvente y el adsorbente.

II.

OBJETIVOS

Conocer la tcnica de cromatografa en capa delgada, (CCD), sus

caractersticas y los factores que en ella intervienen.

Calcular valores de Rf de cada substancia separada; aplicando la
tcnica de cromatografa de capa delgada.
III.

REVISIN BIBLIOGRFICA

La cromatografa capa delgada es tambin llamada cromatografa de

capa fina (en ingls thin layer chromatography o TLC) es una tcnica
analtica rpida y sencilla, muy utilizada en un laboratorio de Qumica
Orgnica. Entre otras cosas permite:
- Determinar el grado de pureza de un compuesto. Se puede
determinar as, por ejemplo, la efectividad de una etapa de
purificacin.
- Comparar muestras. Si dos muestras corren igual en placa podran
ser idnticas. Si, por el contrario, corren distinto entonces no son la
misma sustancia.
- Realizar el seguimiento de una reaccin. Es posible estudiar cmo
desaparecen los reactivos y cmo aparecen los productos finales o, lo
que es lo mismo, saber cundo la reaccin ha acabado.
La muestra a analizar se deposita cerca de un extremo de una lmina
de plstico o aluminio que previamente ha sido recubierta de una fina
capa de adsorbente (fase estacionaria). Entonces, la lmina se coloca
en una cubeta cerrada que contiene uno o varios disolventes
mezclados (diluyente o fase mvil). A medida que la mezcla de
disolventes asciende por capilaridad a travs del adsorbente, se
produce un reparto diferencial de los productos presentes en la
muestra entre el disolvente y el adsorbente.
Adsobentes y eluyentes

Los dos adsorbentes (fase estacionaria) ms ampliamente utilizados

son la gel de slice (SiO2) y la almina (Al2O3), ambas de carcter
polar. La almina anhidra es el ms activo de los dos, es decir, es el
que retiene con ms fuerza a los compuestos; por ello se utiliza para
separar compuestos relativamente apolares (hidrocarburos, haluros
de alquilo, teres, aldehidos y cetonas). La gel de slice, por el
contrario, se utiliza para separar sustancias ms polares (alcoholes,
aminas, cidos carboxlicos). El proceso de adsorcin se debe a
interacciones intermoleculares de tipo dipolo-dipolo o enlaces de
hidrgeno entre el soluto y el adsorbente. El adsorbente debe ser
inerte con las sustancias a analizar y no actuar como catalizador en
reacciones de descomposicin. El adsorbente interacciona con las
sustancias mediante interaccin dipolo-dipolo o mediante enlace de
hidrgeno si lo presentan.

El orden de elucin de
un

compuesto

se

incrementa al aumentar
la polaridad de la fase
mvil o eluyente. El eluyente puede ser un disolvente nico o dos
miscibles de distinta polaridad. En el siguiente recuadro se recoge por
orden creciente de fuerza eluyente los disolventes ms comunmente
empleados.
Hexano < tetraclorometano < cloroformo < diclorometano < acetato
de etilo < acetona < 2-propanol < metanol < agua

En general, estos disolventes se caracterizan por tener bajos puntos

de ebullicin y viscosidad, lo que les permite moverse con rapidez.
Raramente se emplea un disolvente ms polar que el metanol.
Usualmente se emplea una mezcla de dos disolventes en proporcin
variable; la polaridad de la mezcla ser el valor promediado en
funcin de la cantidad de cada disolvente empleada. El eluyente
idneo para cada caso ha de encontrarse por "el mtodo del ensayo y
del error".

Determinacin del Rf
La retencin se puede explicar en base a la competencia que se
establece entre el soluto a separar y la fase mvil por adsorberse a
los centros activos polares de la fase estacionaria. As, las molculas
de soluto se encuentran adsorbidas en la fase estacionaria y a
medida que se produce la elucin van siendo desplazadas por la fase
mvil. La retencin y la selectividad en la separacin dependen de los
valores respectivos de las constantes de los diferentes equilibrios
qumicos que tienen lugar, que estn en funcin de:
- la polaridad del compuesto, determinada por el nmero y naturaleza
de los grupos funcionales presentes. Los solutos ms polares
quedarn ms retenidos puesto que se adsorben ms firmemente a
los centros activos de la fase estacionaria, mientras que los no
polares se eluirn con mayor facilidad.
- naturaleza del disolvente. As, para un mismo compuesto, un
aumento en la polaridad del disolvente facilita su desplazamiento en
la placa.
La relacin entre las distancias recorridas por el soluto y por el
eluyente desde el origen de la placa se conoce como Rf, y tiene un
valor

constante

para

cada

compuesto

en

unas

condiciones

cromatogrficas determinadas (adsorbente, disolvente, tamao de la

cubeta, temperatura, etc.). Debido a que es prcticamente imposible

reproducir

exactamente

las

condiciones

experimentales,

la

comparacin de una muestra con otra debe realizarse eluyendo

ambas en la misma placa.
Para calcular el Rf se aplica la siguiente expresin:
Rf =

h h
Distancia recorrida de la substancia
;o 1 , 2
Distancia recorrida por el disolvente D D

Dnde: h1 = sustancia uno (1)

h2 = sustancia dos (2)

La distancia recorrida por el compuesto se mide desde el centro de la mancha. Si sta es

excesivamente grande se obtendr un valor errneo del Rf.
Se recomienda elegir un eluyente en el que los componentes de la mezcla presenten un
Rf medio entorno a 0.3-0.5. Para compuestos poco polares, se debe utilizar un
disolvente apolar como el hexano.
En el caso de compuestos con polaridad media, se aconseja utilizar mezclas
hexano/acetato de etilo en distintas proporciones. Los productos ms polares, requieren
disolventes ms polares como mezclas de diclorometano/metanol en distintas
proporciones.
Revelado de las placas
La mayor parte de las placas de cromatografa llevan un indicador fluorescente que
permite la visualizacin de los compuestos activos a la luz ultravioleta (254 nm). El

indicador absorbe la luz UV y emite luz visible. La presencia de un compuesto activo en

el UV evita que el indicador absorba la luz en la zona en la que se encuentra el
producto, y el resultado es la visualizacin de una mancha en la placa que indica la
presencia de un compuesto.
En el caso de compuestos que no absorben luz UV, la visualizacin (o revelado) del
cromatograma requiere utilizar un agente revelador. Este tiene que reaccionar con los
productos adsorbidos proporcionando compuestos coloreados.

IV.

MATERIALES Y PROCEDIMIENTO

Muestra: extracto de material vegetal (diente de len)

Materiales: solventes de extraccin, pueden ser etanol, MeO, CH2Cl2, hexano, etc.
Procedimiento:
1. Diluir un aproximado de 0.01 mg de extracto de diente de len, en 0.5 ml de
metanol.
2. Aplicar 10 microlitros del diluido en la placa, cuidando que no se expanda en la
placa. Dejar secar despus de cada aplicacin.
3. Desarrollar la CCD en un sistema tolueno acetato de etilo relacin 9:1 (primer
ensayo) y 8:2 (segundo ensayo).
4. El desarrollo de la CCD debe alcanzar aproximado de 8 cm del recorrido de la
placa.
5. Se introduce la placa en la cuba cromatogrfica, hasta que el solvente recorra las
partes de la placa.
6. Luego del desarrollo secar la placa al aire y observar el resultado; asimismo en
cmara oscura y en ultra violeta (UV).
7. Revelar la placa y determina los Rf.
8. Las coloraciones variadas nos indican presencia del nmero de metabolitos
secundarios.
V.

RESULTADOS Y DISCUSIONES

V.1.

RESULTADOS

Rf con un sistema de tolueno: acetato de etilo 9:1

substanci

mm

Rf

a
A0
4.2
0.053
B0
8.5
0.106
C0
18
0.225
D0
28.5
0.356
Distancia recorrida por el solvente 80 mm

Rf con un sistema de tolueno: acetato de etilo 8:2

substanci
mm
Rf
a
A1
2.5
0.031
B1
6
0.075
C1
9.5
0.119
D1
20
0.250
E1
29
0.363
F1
38
0.475
Distancia recorrida por el solvente 80 mm

9:1

V.2.

8:2

DISCUSIONES

Durante la prctica se realiz con diferente proporcin de solvente tolueno - acetato

de etilo:
Primer ensayo:

Tolueno acetato de etilo (9:1): se prepar 3 ml de solvente (2.7 ml de tolueno y 0.3

ml de acetato de etilo), en esta proporcin se lleg a observar el recorrido de los
metabolitos secundarios, en la cual se identific 4 puntos (manchas verdes).
Segundo ensayo:
Tolueno acetato de etilo (8:2): se prepar 3 ml de solvente (2.4 ml de tolueno y 0.6
ml de acetato de etilo), en esta proporcin se lleg a observar el recorrido de los
metabolitos secundarios, en la cual se identific 6 puntos (manchas verdes).
En la proporcin de solvente de 9:1 el recorrido es menor con respecto a la del
solvente que est en proporcin de 8:2, esto se debi a que a la polaridad del
solvente, ya que a usar en mayor cantidad el acetato de etilo muestra un recorrido
del metabolito secundario bien definido, es decir los puntos estn bien establecidos
y aparecen ms puntos (manchas verdes).
Por otro lado la ubicacin del papel cromatogrfico, en el primer ensayo no se
coloc correctamente, al momento de ubicar la placa dentro de la cmara
cromatogrfica se desvi quedando de manera incorrecta, lo que no ayud al
correcto desplazamiento de la substancia como se observ en el segundo ensayo, en
donde s se ubic la placa de la manera adecuada.
Segn, HILDEBERT WAGNER. SABINE BLADT. Muestra los siguientes
resultados realizados en cromatografa en el extracto de diente de len:

Comparando con los resultados obtenidos de los Rf obtenidos, con los Rf de

bibliografa, las lactonas sesquiterpnicas presentes en el diente de len (Taraxacum
oficinale) podran ser:
Rf: 0.27 (Harpagsidos)
Solo muestra resultados aproximados en el segundo ensayo:
D1 con Rf=0.25; que da a conocer la presencia de Harpagsidos.
Rf: 0.48 (catalpol)
Solo muestra resultados aproximados en el segundo ensayo:
F1 con Rf=0.475; que da a conocer la presencia de Catalpol.

VI.

CONCLUSIONES

El segundo ensayo con proporcin de tolueno acetato de etilo (8:2), es el adecuado

para determinar substancias en el diente de len, a travs de cromatografa de capa
delgada.
Se identific las siguientes lactonas sesquiterpenicas:
o Harpagsidos
o Catalpol

VII.

ANEXOS

VIII.

BIBLIOGRAFIA

CASTRO, M., Determinacin de metabolitos en las estructuras de Diente de len.,

Fitoqumica., 3a ed., Bucaramanga - Colombia., 2005., Pp., 38-44.
JIMNEZ, H., Diente de len: Maleza, alimento o medicamento., Fitoqumica.,
Xochimilco-Mxico., 2008., Pp., 122.
OSORIO, D., Plantas Aromticas y Medicinales., Bogot-Colombia., Grupo
Latino., 2003., Pp., 13-14.
PAMPLONA, J., Enciclopedia de las Plantas Medicinales., 2a ed., Buenos
Aires-Argentina., Safeliz., 2006., Pp., 378- 380, 397-398.

BIBLIOGRAFIA DE INTERNET

DIENTE DE LEN
http://saludquillota.cl/vademecumdientedeleon/ /A42.HTM
2011/12/12

PROPIEDADES DEL DIENTE DE LEN

http://www.vitadelia.com/miscelanea/propiedades-del-diente-delen
2011/11/21

PLANTAS MEDICINALES
http://www.webdehogar.com/salud-familiar/05060104.htm
2011/11/02

UNIVERSID
AD DE INGENIERIA
FACULTAD
NACIONAL
DEPARTAMENTO
ACADEMICO DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
AGROINDUSTRIAL
AREA
ACADEMICA
DE
SAN DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
MARTIN
QUIMICA
DE PRODUCTOS NATURALES NO
ALIMENTOS

PRACTICA N03

ENSAYO DE ANLISIS POR CCD DE UN EXTRACTO (DIENTE DE LEON)

INTEGRANTES

Wilson Clavo Campos

David Santos Huancas
Mara Reina Medina Garca
Jos Asencio Len Tenazoa

DOCENTE

Ing. Msc. Alejandro A. Cruz Rengifo

FECHA DE EJECUSIN :

18/11/14

FECHA DE PRESENTACIN:

01/12/14

TARAPOTO PERU
2014