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Informe No.5
CUANTIFICACIN DE PROTENAS
Resumen:
Se emplearon dos mtodos para cuantificar una protena, Albumina srica bovina (BSA): el
mtodo de Bradford y el mtodo de Biuret, que mediante la preparacin de una curva de
calibracin sirvieron para determinar la concentracin de BSA en una muestra desconocida
de la protena.
Palabras claves: mtodo de Bradford, mtodo de Biuret, curva de calibracin, Ley de
Lambert-Beer.
1. Introduccin
Mtodo de Bradford
2. Marco terico
1
Mtodo de Biuret
Blanco
1
2
3
4
0
0,2
0,6
0,8
1
0,59
M. problema M1
0,001
0,669
1,066
1,149
1,422
1,027
Mtodo de Biuret.
Blanco
5
6
7
8
9
10
0
2,5
5,0
7,5
10
15
20
5,80
Absorbancia
0,000
0,065
0,131
0,192
0,257
0,366
0,478
0,150
Concentracin(mg/
ml)
M. problema
M2
Tabla 2. Datos espectrometricos obtenidos durante el ensayo de
Biuret
3. Resultados y discusin
tubo
tubo
Absorbancia
2
Mtodo de Bradford
Mtodo de Biuret
1.42
1.07
1.15
f(x) = 0.02x + 0.01
R = 1
0.67
1,0270,4902
=0,59 mg/ml
0,902
C=
0,1500,0135
=5,80 mg/ml
0,0235
3
patrn
absorbanci
a
Protena (mg/ml)
Factor de dilucin*
Protena (mg/ml)
Concentracin medida
Protena (mg)**
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
M1
M2
0,669
0,2
0,1/1,1
0,018
0,020
1,066
0,6
0,1/1,1
0,054
0,055
1,149
0,8
0,1/1,1
0,072
0,079
1,422
0,1/1,1
0,090
0,01
0,065
2,5
0,1/1,1
0,225
0,248
0,131
5,0
0,1/1,1
0,45
0,5
0,192
7,5
0,1/1,1
0,675
0,742
0,257
10
0,1/1,1
0,9
0,99
0,366
15
0,1/1,1
1,35
1,49
0,478
20
0,1/1,1
1,8
1,98
1,027
0,61
0,1/1,1
0,055
0,06
0,150
5,80
0,1/1,1
0,522
0,57
4. Problemas propuestos
a. Defina con sus propias palabras que es una
curva patrn.
Es un mtodo que se utiliza para hallar una
concentracin desconocida de un analito, a partir
de patrones con cantidades conocidas de este.
Para utilizar la curva debe haber una relacin
lineal entre la seal aportada por el instrumento y
la concentracin del analito de inters.
Orina
La cuantificacin de protenas la hara por el
mtodo de Bradford ya que, la presencia de
nitrgeno en urea de la muestra crea interferencia,
en el mtodo de Biuret.
Durante la purificacin enzimtica
La cuantificacin de protenas la hara por el
mtodo de Bradford porque, es el mtodo ms
sensible ideal para una muestra delicada y escasa.
Adems el calentamiento al que se debe someter
la muestra en el mtodo de Biuret podra
desnaturalizar las enzimas.
En preparaciones de membranas plasmticas
solubilizadas con SDS y en preparaciones de
membranas mitocondriales solubilizadas con
Triton X-100
La cuantificacin de protenas la hara por el
mtodo de Biuret ya que, el mtodo de Bradford
presenta interferencia con detergentes.
5. Conclusiones
2. La concentracin real de la muestra analizada
por el mtodo de Bradford es menor. Las
desviaciones de la curva de calibracin generan
un aumento de la concentracin a la hora de
realizar la interpolacin con la absorbancia
obtenida.
Referencias
CESPON
ROMERO,
Rosa
Mara.
DESARROLLO
DE
MTODOS
ANALTICOS AUTOMTICOS PARA LA
DETERMINACIN DE METALES EN EL
MEDIO AMBIENTE LABORAL. Universidad
de Santiago de Compostela. Espaa, Santiago
de Compostela, 2007. Pg. 166.