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REALIZACION DE EXAMENES DE HEP B,HEP C Y VIH


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REVISIONES DEL PROCEDIMIENTO


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1. Objetivos
Determinar reactividad o no reactividad en una muestra de sangre
frente a virus de
Hep B,Hep C y VIH.
2. Alcance
-Pacientes del area (centros de atencin de salud primaria adscritos a
la red Minsal)
-Pacientes procedentes de Policlinicos(Infectologia,Ets,Nefrologia).
-Pacientes de Pabellon(Partos).
-Pacientes con evento de accidente cortopunzante.
3. Referencias (Normativas y/o bibliogrficas)
-Ley del sida: Ley 19779 (Normativa Ministerial).
4. Definiciones
5. Responsabilidades
-Tm.lic. Seccion de Bacteriologia responsable VIH.
-Tm. lic. Seccion de Bioquimica.
6. Modo de operacin desarrollo
6.1.Utilidad clnica del test o analito
-Determinacion del virus de VIH:
El virus de inmunodeficiencia humana (VIH) constituye el agente
causante del sindrome de inmunodeficiencia adquirida(SIDA) y
pertenece a la familia de los retrovirus.El VIH puede transmitirse por
sangre o hemoderivados,por contacto sexual o de una madre
infectada a su nio antes, durante y tras del parto.
Los anticuerpos contra las proteinas del VIH que indican la
presencia de una infeccion por VIH pueden encontrarse en suero
generalmente dentro de 6-12 semanas tras contraer la infeccion.
Esta tecnica permite detectar simultaneamente y en una unica
determinacin el antigeno p24 del VIH-1 y los anticuerpos anti- VIH-1
y anti-HIV-2.
-Determinacion del virus de Hepatitis B:
El antigeno desuperficie del virus de la hepatitis B,un polipeptido de
tamao variable,es un componente de la envoltura externa de la
particula del virus de la hepatitis B(VHB).La deteccion del HBsAg en
suero o plasma humanos indica una infeccion por el virus B de la
hepatitis.

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La determinacin del HBsAg se aplica en el marco del proceso


diagnostico para identificar personas infectadas por el virus de la
hepatitis B,asi como para evitar su transmisin mediante la sangre y
los hemoderivados.
Las pruebas de HBsAg tambien se emplean en el seguimiento del
curso de la enfermedad en personas con una infeccion aguda o
cronica y,en ciertos casos,para controlar la eficacia del tratamiento
antiviral.Adicionalmente,los test de HBsAg se recomiendan como
parte de la profilaxis prenatal.
-Determinacion del virus de Hepatitis C:
El virus de la hepatitis C,identificado por vez primera en
1989,constituye el tipo de hepatitis no A,no B mas comun a nivel mundial
trasmitido por transfusiones sanguineas y en colectivos especificos.La
hepatitis C es transmitida primordialmente mediante sangre y
hemoderivados contaminados y,en menor medida,por secreciones del
organismo humano.
Los resultados obtenidos con los ensayos de anticuerpos anti-HCV
se emplean aislados o en combinacin con otros ensayos para detectar una
infeccion por el virus de la hepatitis C y para identificar sangre o
hemoderivados obtenidos de personas infectadas con el VHC.
6.2.Mtodo utilizado
Inmunoensayo de Electroquimioluminiscencia.
6.3.
Muestra requerida:
Tipo de muestra: suero recogido en tubos con gel de separacion
(tubo color rojo tapa amarilla)
Volumen de muestra:Se requieren 4 ml de sangre total.
Preparacin del paciente:Sin requerimientos particulares.
Centrifugacion::Las muestras deben centrifugarse a 4000 rpm
durante 20 minutos, en Equipo preanalitico.
Almacenamiento:
Determinacion de virus de VIH:
Estabilidad de la muestra: 10 dias a 2-8 C,3 dias a 25 C, 3 meses
a -20 C.Las muestras pueden congelarse hasta 6 veces.
Determinacion de virus de Hepatitis B:
Estabilidad de la muestra: 5 dias a 2-8 C, 3 meses a -20 C.Las
muestras pueden congelarse hasta 4 veces.
Determinacion de virus de hepatitis C:
Estabilidad de la muestra: 21 dias a 2-8 C, 3 DIAS A 25 C, 3
meses a -20 C.Las muestras pueden congelarse hasta 6 veces.
6.4.
test:
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Equipo o sistema analtico utilizado para la ejecucin del

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Estas tecnicas se realizan durante el horario habil en el equipo


analitico Cobas e 411 de rutina y como respaldo en el quipo Cobas
6000.En horario no habil,las muestrasrecepcionadas se analizaran
mediante un Test de Elisa.
6.5.Reactivos necesarios:
Determinacion de virus de VIH:
-Estuche de reactivos Elecsys HIV combi
(M,R1,R2)M(microparticulas recubiertas de estreptavidina)R1(Anticuerpo
anti-Ag p-24,anticuerpo especifico recombinado de los HIV-1/2(E.coli),pptidos especficos del HIV -1/-2-biotina,tampn Tris 50
mmol/L,pH 7,5.R2((Anticuerpo anti-Ag p-24, anticuerpo recombinado del
HIV-1/-2(E.coli),pptidos especficos del HIV -1/-2-Ru(bpy),tampn Tris 50
mmol/L,pH, estan listos para ser usados.La estabilidad en frasco cerrado,a
2-8C es hasta la fecha de caducidad indicada en el envase;una vez
abiertos a 2-8C es de 4 semanas,si se conserva alternadamente en el
refrigerador y en los analizadores(hasta un total de 70 hrs a 20-25C).
-Elecsys HIV combi Cal 1 y Cal 2:Conservar a 2-8 C una vez
reconstituidos, se pueden alicuotar en ependorf(200ul) y usar una alicuota
en cada determinacin,o se pueden sacar y utilizar trasvasijando en un
vial,para guardar enseguida luego de usada. Dejar a temperatura ambiente
por 20 minutos antes de usar. En ambas condiciones nunca congelar.
-Elecsys PreciControl HIV combi niveles 1,2 y 3:Conservar a 2-8
C,vienen liofilizados y se deben reconstituir para su uso.Pueden utilizarse
trasvasijando a un vial,de esta forma tiene una estabilidad a 2-8 C de 8
semanas.El suero control reconstituido puede alicuotarse en ependorf y la
estabilidad a -20 C es de 3 meses.El suero control liofilizado tiene una
estabilidad que se mantiene hasta la fecha de caducidad indicada en el
envase.
-ProCell,Clean Cell: Se mantienen estables conservados a
temperatura ambiente hasta la fecha de caducidad indicada en el envase.
-Elecsys SysWash,Elecsys SysClean: Se conservan a 2-8 C ,de
esa forma son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el envase.
-PreciControl HIV..El suero control liofilizado permanece estable
a 2-8 ~C hasta la fecha de caducidad indicada en el envase,un vez
reconstituido la estabilidad a 2-8 ~C es de 8 semanas,a -20 ~C es de 3
meses.
Determinacion de virus de Hep B:
-Estuche de reactivos Elecsys HBsAg
(M,R1,R2)..M(microparticulas cubiertas de estreptavidina)R1(Anticuerpos
anti-HBsAg-biotina,tampon fosfato)R2(Anticuerpo anti-HBsAgRu(bpy),tampn fosfato 100mm/L,pH 8,0).esta listo para ser
usado.Mantener en posicin vertical.La estabilidad en frasco cerrado,a 2-8C
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es hasta la fecha de caducidad indicada en el envase;una vez abiertos a 28C es de 8 semanas,si se conserva alternadamente en el refrigerador y en
los analizadores,hasta un total de 42 hrs a 20-25C.
-Elecsys HBsAg Cal 1 y Cal 2:(Negativo y positivo
respectivamente)Conservar a 2-8 C una vez abiertos, son estables hasta
por 8 semanas, luego de reconstituidos se pueden utilizar trasvasijando en
un vial para guardar enseguida luego de usada, o se pueden alicuotar en
ependorf(200ul) y usar una alicuota en cada determinacin,. . En ambas
condiciones nunca congelar. Dejar a temperatura ambiente por 20 minutos
antes de usar.
-ProCell,Clean Cell: Se mantienen estables conservados a
temperatura ambiente hasta la fecha de caducidad indicada en el envase.
-Elecsys SysWash,Elecsys SysClean: Se conservan a 2-8 C ,de
esa forma son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el envase.
-PreciControl HBsAg IILos viales vienen listos para su uso,una
vez terminado el proceso de control deben ser guardados a 2-8 ~C bien
tapados y en posicin vertical,evitando asi que las partculas se peguen en
la tapa.Sin abrir permanecen estables hasta la fecha de caducidad indicada
en el envase.Una vez abiertos,son estables hasta por 8 semanas.
Determinacion de virus de Hep C
-Estuche de reactivos Elecsys HCV (M,R1,R2).Sin abrir a 2-8 `C,es
estable hasta la fecha de caducidad indicada en el envase. El
Reactivo M(microparticulas recubiertas de estreptavidina) esta listo
para su uso,R1 y R2(tampn HEPES pH 5,0),R1a y R1b(antgeno HCV
liofilizado biotilinado y marcado con rutenio,respectivamente) deben
ser preparados(ver anexo Preparacion de soluciones de trabajo).La
bandeja de reactivos(incluyendo el antgeno reconstituido) a 2-8 C
permanece estable por 2 semanas.Conservar el estuche en posicin
vertical.
-Elecsys HCV Cal 1 y Cal 2:(Negativo y positivo respectivamente)
Una vez abierto,a 2-8 C,tiene una estabilidad de 8 semanas,en el analizador
cobas e 411,a 20-25 C,permanece estable hasta 5 hrs en total.Guardar los
calibradores en posicin vertical.
-ProCell,Clean Cell: Se mantienen estables conservados a
temperatura ambiente hasta la fecha de caducidad indicada en el envase.
-Elecsys SysWash,Elecsys SysClean: Se conservan a 2-8 C ,de esa
forma son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el envase.
-PreciControl HBsAg II 1 y 2Los viales vienen listos para su uso,
una vez terminado el proceso de control deben ser guardados a 2-8 ~C
bien tapados y en posicin vertical,evitando asi que las partculas se
peguen en la tapa.Sin abrir permanecen estables hasta la fecha de
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caducidad indicada en el envase.Una vez abiertos,son estables hasta por 8


semanas.
6.6: Volumen de muestra para el anlisisSe requiere un
volumen minimo de 100 ul en copa Hitachi,y de 1 ml en los tubos de
recogida.
-Volumen de reactivo,Se requiere un volumen minimo de
reactivo de 200 ul de los calibradores,2 ml de ProCell,
-Tipo de calibracinSe utiliza una calibracin de dos
puntos(a partir de una curva maestra realizada por el fabricante).
-Intervalo de CalibracionesEfectuar la calibracin con cada
nuevo lote de estuche de reactivos empleando los calibradores Elecsys HIV
combi Cal1 y Cal2 (se recomienda realizarla antes de 24 hrs de su registro
en el analizador),esta calibracio antes de , conducta a seguir en caso de
fallo de la calibracin, interferentes, intervalo d e medicin, unidades de
medicin, conducta a seguir en caso de dilucin de muestras, intervalos de
referencia, control de calidad interno (niveles de control, nombre del control
asociado, ubicacin del control, registro del control, evaluacin del control,
forma de solicitar los controles), control de calidad externo, criterios para
repetir el anlisis, valores crticos asociados, solicitud del exmen
automatizado, solicitud del exmen manual, estilo de informe de los
resultados (ej: +++ o abundantes, criterios de informe en casos de
resultados extremos), etc.
7. Instrucciones de trabajo (instructivos asociados)
8. Formularios, registros y anexos

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