EL MICROSCOPIO

ADA LUZ ATENCIA LAMADRID

MARA JOS QUIROZ BARRETO
VICTOR JESS YEPES YANEZ
DOCENTE: CAROLINA ARANGO RIVAS
UNIVERSIDAD DE CRDOBA
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS
PROGRAMA DE QUMICA
CURSO DE BIOLOGA GENERAL
MONTERA CRDOBA
2016
INTRODUCCIN
El microscopio es un instrumento de vital importancia en los laboratorios, en
especial en el rea de biologa, por lo que conocer sus partes y funcionamiento
hace parte clave del desarrollo adecuado del practicante en su uso. No obstante
cabe resaltar la existencia de varias clases de microscopios, esto basndose en
las propiedades que este permita analizar as como tambin de sus caractersticas
fsicas o de funcionamiento.
En la experiencia solo se estudi el uso y manejo adecuado del microscopio
ptico o compuesto, como parte de esto se hace mencin al anlisis de las
propiedades y determinaciones o medidas que en este se puede realizar.
Ahora bien, teniendo en cuenta que este permite la examinacin de objetos
microscpicos, desde el punto en que permite la visualizacin y posterior
amplificacin o aumento de las imgenes reales invertidas obtenidas. Adems, se
conocieron las partes generales que estructuran o permiten la conformacin
adecuada de este microscopio, que son: la mecnica, ptica y lumnica, en donde
estas a su vez se encuentran conformadas por subpartes que se mencionaran
ms adelante. Con este orden de ideas, se debe hacer la inclusin del fenmeno
ptico que se lleva a cabo para la generacin de la imagen observada en el
microscopio, en donde se explica que la utilizacin de haz de luz proveniente de
una fuente, la cual atraviesa la muestra y a travs de un juego de lentes, llega al
ojo del observador como una forma de imagen aumentada.
Adems, se deben tener en cuenta las propiedades y aplicaciones que este
instrumento ptico brinda, ya que son muchas pero las principales y estudiadas
fueron las observaciones y caracterizacin de muestras de origen biolgico y
sinttico como los granos de polen, fibra de lana, epidermis de lirio acutico,
epidermis de la cebolla, cabello y el corcho.
Este proceso muestra as como el poder de magnificacin permite el estudio de
muchas estructuras u objetos que son difcilmente vista por la capacidad ocular y
de resolucin del ojo humano como objetos u organismos microscpicos.

Tambin el microscopio ptico, aparte de permitir la observacin a una gran

resolucin de objetos muy pequeos, Permite el clculo de los tamaos de lo que
se observa y del dimetro del campo visual del microscopio, en el cual para lograr
esto se debe contar con un sistema de medida externo como un papel
milimetrado.
OBJETIVOS

Identificar las diferentes clases de microscopios, reconocer cada una de las partes
del microscopio y sus funciones.
Describir y comprobar las propiedades bsicas del microscopio.
Analizar la importancia y beneficios que este instrumento aporta a los
investigadores en el avance de las ciencias biolgicas.
MATERIALES Y MTODOS
El diseo del estudio realizado fue de tipo experimental. Se conocieron las partes
del microscopio, as como sus funciones, uso y propiedades con ayuda de
diversas muestras.
En primera instancia, se realiz un reconocimiento de las partes mecnicas (cable
de encendido, brazo, base, cabezal, platina, revolver, tornillos macro y
micromtrico), pticas (oculares y objetivos) y lumnicas (Regulador de luz, foco,
condensador y diafragma). Posteriormente, se identific el funcionamiento de cada
uno para poder observar una imagen adecuadamente, para ello, se insert un
portaobjetos en el carro, subiendo la platina hasta el tope con ayuda del tornillo
macromtrico y con la de los tornillos laterales para centrar la muestra. Luego, se
identificaron los objetivos, su aumento y como calcular la magnificacin total del
microscopio (aumento del ocular x aumento del objetivo).
Seguidamente, se prepararon muestras de epidermis de lirio acutico, de cebolla
roja, granos polen, escamas del ala de la mariposa, corcho, fibras de lana,
cabello, hoja milimetrado y letra e recortada de un peridico o revista. Para ello,
se tom una pequea y homognea porcin de cada una, se adicionaron en el
portaobjeto con una gota de agua y se coloc sobre este un cubreobjetos para
realizar as el proceso dicho anteriormente para su observacin a aumentos de
4X, 10X y 40X. En el caso del polen de las flores y las escamas de la mariposa, se
realizaron delicados toques en el portaobjetos y se repiti el proceso descrito.
2
Por ltimo, con ayuda de 1 cm de hoja milimetrada, se calcul el dimetro del
campo visual utilizando el aumento de 4X, y de este modo obtener el de los dems
d 1 a2
objetivos con ayuda de la relacin d 2 = a1 . Se recort y mont el papel en una
placa para observacin con el menor aumento, este qued de tal manera que una
lnea pasaba por el centro del campo visual para poder contar las horizontales que
proporcionaron el dimetro, el cual se utiliz para calcular el largo y ancho de una
muestra de cabello.

RESULTADOS Y DISCUSIN
Actividad N 1 Conocimiento del microscopio ptico
Conocimiento del microscopio ptico
1. Identifique, ubique y describa cada una de las partes del microscopio ptico
(mecnicas, pticas y fuentes de iluminacin). Indague sobre su funcionamiento.
Imagen N 1 Partes mecnicas del microscopio ptico.

Transformador: ya que el voltaje de la bombilla es menor que el de la red, es

necesario para enchufar el microscopio. Algunos modelos ya lo llevan incorporado
en el pie del microscopio. Adems, el transformador dispone de un potencimetro
para regular la intensidad de la luz.
Tubo: cilindro hueco que forma el cuerpo del microscopio. Constituye el soporte de
oculares y objetivos.
Brazo o asa: une el tubo a la platina. Lugar por el que se debe tomar el
microscopio para trasladarlo de lugar.
Revlver portaobjetivos: estructura giratoria que contiene los objetivos.
Platina: superficie sobre la que se colocan las preparaciones. En el centro se
encuentra un orificio que permite el paso de la luz. Sobre la platina hay un sistema
de pinza o similar, para sujetar el portaobjetos con la preparacin, y unas escalas
que ayudan a conocer qu parte de la muestra se est observando. La platina
presenta 2 tornillos, generalmente situados en la parte inferior de la misma, que
permiten desplazar la preparacin sobre la platina, en sentido longitudinal y
transversal respectivamente.

Tornillo macromtrico o de enfoque grosero: sirve para obtener un primer enfoque

de la muestra al utilizrse el objetivo de menor aumento. Desplaza la platina
verticalmente de forma perceptible.
Tornillo micromtrico o de enfoque fino: sirve para un enfoque preciso de la
muestra, una vez que se ha realizado el enfoque con el macromtrico. Tambin
desplaza verticalmente la platina, pero de forma prcticamente imperceptible. Es
el nico tornillo de enfoque que se utiliza, una vez realizado el primer enfoque, al ir
cambiando a objetivos de mayor aumento.
Base o soporte: sirve como base al microscopio y en l se encuentra la fuente de
iluminacin.
Imagen N 2 partes pticas y de iluminacin del microscopio ptico.

Oculares: son los sistemas de lentes ms cercanos al ojo del observador, situados
en la parte superior del microscopio. Son cilindros huecos provistos de lentes
convergentes cuyo aumento se resea en la parte superior de los mismos
(normalmente 10X en los microscopios que se utilizaron en esta prctica).
Dependiendo de que exista uno o dos oculares, los microscopios pueden se mono
o binoculares.
Objetivos: son sistemas de lentes convergentes que se acoplan en la parte inferior
del tubo, mediante el revlver. En esta estructura se pueden acoplar varios
objetivos (ordenados de forma creciente segn sus aumentos, en el sentido de las
agujas el reloj). Un anillo coloreado es distintivo de los aumentos de cada objetivo,
que tambin van reseados en el lateral del mismo. Algunos objetivos no enfocan
bien la preparacin al aire, y se deben de utilizar con un aceite de inmersin
(normalmente van marcados con un anillo rojo).

Condensador: sistema de lentes convergentes que capta los rayos de luz y los
concentra sobre la preparacin, de manera que proporciona mayor o menor
contraste. Se regula en altura mediante un tornillo.
Fuente de iluminacin: en los microscopios a utilizar, el aparato de iluminacin
est constituido por una lmpara halgena de bajo voltaje (12V) situada en el pie
del microscopio. La luz procedente de la bombilla pasa por un reflector que enva
los rayos luminosos hacia la platina.
Diafragma o iris: sobre el reflector de la fuente de iluminacin. Abrindolo o
cerrndolo permite graduar la intensidad de la luz.

2. ubique el ocular e identifique su poder de aumento.

Imagen N3 oculares del microscopio ptico.

El ocular del microscopio que se utiliz tena un poder de aumento de 10X.

3. localice los objetivos, describa su ubicacin e indique la capacidad de aumento de
cada uno de ellos. Explique la forma cmo calcular el aumento de la imagen del
objeto observado.
Los objetivos se pueden ubicar en el revlver.
Imagen N 4 objetivos ubicados en el revlver.

El aumento de cada objetivo se muestra en la siguiente imagen.

Imagen N 5 objetivos.

AUMENTO TOTAL O MAGNIFICACIN DE LA IMAGEN

El aumento total que permite un microscopio ptico se calcula multiplicando la
magnificacin que produce el objetivo por la que produce el ocular.
Por ejemplo, si estamos usando un objetivo de 40x (aumenta 40 veces) y un
ocular de 10x (aumenta 10 veces), el resultado final ser de 400x, es decir, vemos
la muestra aumentada 400 veces.
4. Establezca la diferencia existente entre los objetivos secos y los objetivos de
inmersin qu material se usa para la inmersin y cul es su importancia? qu
importancia tiene el ndice de refraccin del aceite de inmersin?
Los objetivos secos y objetivos de inmersin difieren entre s por la naturaleza del
medio interpuesto entre el cubre-objeto de la lmina histolgica y la lente frontal
del objetivo. En los objetivos secos el medio interpuesto es el aire cuyo ndice de
refraccin (n=1) es muy diferente del ndice del vidrio porta y cubre-objeto (n=1,5).
Por el contrario, en los objetivos denominados de inmersin el medio que separa
al cubre-objeto de la lente frontal del objetivo es un lquido cuyo ndice de
refraccin es lo ms prximo al del vidrio. Este lquido puede ser agua destilada
(n=1,33) o mejor an aceite de cedro, que posee un ndice de refraccin (n=1,515)
casi idntico al del vidrio.
La ventaja de los objetivos de inmersin consiste en la disminucin o eliminacin
de la refraccin de los rayos luminosos entre el aire y el objetivo, en consecuencia
la luminosidad de la imagen est aumentada, mientras que en los objetivos secos,
est disminuida. El empleo de la inmersin aumenta el ngulo de apertura del
objetivo y permite mayor resolucin gracias a la captura de una mayor cantidad de
rayos luminosos refractados y solo puede utilizarse con objetivos de mayor
aumento.

Imagen N 6. Cdigos de color en los objetivos microscpicos.

5. Ubique el condensador. Descrbalo, explique cmo funciona.

Imagen N 7. Condensador y diafragma.

El condensador es un dispositivo que tiene por finalidad formar conos luminosos

grandes, con aperturas mayores, necesarios para ver con los objetivos de mayor
aumento. El trmino condensador puede considerarse inadecuado, ya que no
produce una condensacin de los rayos luminosos, por el contrario, produce un

aumento de la seccin del cono luminoso que a su vez forma una imagen ms
clara.
El condensador est conformado por una o varias lentes situadas debajo de la
platina del microscopio, colocadas entre la fuente de luz y el espcimen. Al igual
que en los objetivos.
El cono de luz que produce el condensador debe ajustarse de manera apropiada
para optimizar la intensidad y el ngulo de apertura. Cada vez que se cambia un
objetivo se debe realizar un ajuste para obtener el cono de luz conveniente a la
apertura numrica del nuevo objetivo. A menudo no es prctico utilizar el mismo
condensador para un amplio rango de objetivos (2x hasta 100x).
Qu fuentes de iluminacin se pueden utilizar en un microscopio ptico?
Este tipo de sistema tiene la finalidad de dirigir la luz natural o artificial de modo
que ilumine la muestra para observarla al microscopio ptico. Est formada por
cuatro partes muy importantes, como la fuente de luz, espejos, filtros y diafragma.
Aparte de la luz solar, empleada en microscopios sencillos con espejo, existen
numerosas fuentes de iluminacin artificial, tanto para la observacin rutinaria
como para la microfotografa. La luz artificial presenta numerosas ventajas tales
como la constancia, la uniformidad y la intensidad; adems es muy favorable para
los mayores aumentos. Existen varios tipos de fuentes de luz artificial:
Bombillas de tungsteno y halgenas: La mayora de microscopios de luz estn
dotados de lmparas de este tipo cuyo poder oscila entre 10W y 100W. Se
emplean como fuentes principales o accesorias. Estas lmparas son radiadores
trmicos que emiten una luz continua en un espectro comprendido entre 300
1200 nm. Estn constituidas por un bulbo de cristal relleno de un gas inerte y un
filamento de tungsteno que es activado por una corriente elctrica produciendo
una importante cantidad de luz y calor. Varan mucho en tamao, diseo y forma
(68). Producen una luz blanca pero incrementan la intensidad del azul al rojo. La
luz puede ser muy brillante para la observacin y se reduce con filtros que
disminuyen la intensidad, denominados filtros de densidad neutra, disminuyendo la
intensidad sin alterar los colores. Tambin se emplean filtros de colores que
compensen el color rojo, de manera que se pueda observar la imagen del
espcimen sobre un fondo iluminado neutro, blanco y claro. El vidrio azul corrige el
tinte amarillo que tiene la luz incandescente y se obtiene una luz suave y
agradable que aumenta la definicin.
Lmparas de arco elctrico: Son lmparas que pueden contener gases (vapor de
mercurio, xenn o circonio) y son empleadas para proveer una luz monocromtica
con filtros apropiados, ideal para microfotografa en blanco y negro o a colores.
Tambin se utilizan en microscopios especiales (fluorescencia).
Lser: En los ltimos aos se ha incrementado el uso de lser (Light
Amplification by Stimulated Emission of Radiation, Amplificacin de Luz por
Emisin Estimulada de Radiacin) (42), que consiste en un dispositivo que genera
un haz de luz con caractersticas de tamao, coherencia, forma y pureza
controladas. El lser de argn es uno de los ms utilizados, cuya emisin est en

el orden de 488-514 nm. Su costo es muy elevado y se emplea principalmente en

microscopa confocal.
LED: De las siglas en ingls Light-Emitting Diode (diodo emisor de luz) es un
dispositivo emisor de luz con caractersticas muy prximas a la luz monocromtica
(espectro reducido). La luz se produce cuando una corriente elctrica pasa a
travs del material semiconductor (arseniuro de galio-aluminio) del que estn
hechos (69). Se utilizan en una amplia gama de artefactos y lmparas. En
comparacin con las bombillas incandescentes, son ms interesantes porque
permiten ahorro de energa con un mayor rendimiento lumnico. Para microscopa
se emplean LED de larga duracin que proveen una luz muy brillante y fra; esto
ltimo es una gran ventaja, puesto que no genera calor y la observacin es ms
cmoda para el usuario. En la actualidad se producen combinaciones de diodos
que emiten una luz blanca.
PREGUNTAS DE ACTIVIDAD COMPLEMENTARIAS
1. Indique sobre los fundamentos de los diferentes tipos de microscopios pticos
y electrnicos.

Microscopios pticos
Campo claro: Consta de un conjunto de lentes dispuestas entre la muestra que se
quiere observar, y el ojo. Su accin combinada produce un aumento total de la
imagen. Normalmente tiene cuatro aumentos posibles: 4x, 10x, 40x y 100x, siendo
el 4x el menor aumento y el x100 el mayor. Para ste ltimo es necesario poner
una gota de aceite de inmersin, que concentra mejor el haz de luz.
Imagen N 8 Formacin de la imagen en microscopio de campo claro.

Este microscopio nos da las tpicas imgenes en color; es necesario teir la

muestra antes de observarla.

Campo oscuro: El microscopio de campo oscuro est constituido por un

microscopio ptico al cual se le acondiciona un condensador especial, este tiene
como fin producir una disfracen de los rayos luminosos envindolos lateralmente

sobre el objeto en forma de un cono luminoso, y de esta forma tampoco penetran

directamente al objetivo. Se interpone un dispositivo opaco entre el haz de luz y la
muestra que solo permite pasar los rayos perifricos y el objetivo solo recibe
aquellos rayos dispersados por la muestra, mientras el resto se pierde. De esta
manera observamos unos lmites muy definidos sobre un fondo oscuro. Es muy
til para muestras que no se pueden teir y preparaciones en vivo.
Imagen N 9. Formacin de la imagen en microscopio de campo oscuro.
Las

imgenes en autentico fondo negro son

remarcables por un efecto de borde, con
numerosas franjas de difraccin muy brillantes si
le
objeto es refringente. Los planos, en el centro de
una
estructura parecen pticamente vacos. Es por
ello
que deben adoptarse grandes precauciones en
el
momento de interpretar las imgenes. Dado que
la
imagen solo se forma con las luz difractada,
siempre ms dbil que la luz directa deben
formarse fuentes lumnicas muy intensas, lo que
no
siempre es fcil sobre todo cuando los objetos
son vivos y, por consiguiente, sensibles a fuertes iluminaciones

Contraste de fases: Las estructuras internas de las muestras (como por ejemplo
las clulas) tienen diferentes ndices de refraccin, al igual que el medio que les
rodea, y este tipo de microscopa intenta potenciar este fenmenos fsico (recordar
que la onda al refractarse pierde velocidad, provocando un desfase). Para poder
llevar a cabo este tipo de microscopa es necesario seleccionar tambin una parte
del haz de luz, que afecta tanto al haz antes de atravesar la muestra como a los
rayos que la han atravesado. Por esta razn, se utiliza un condensador y un
objetivo especiales llamados de fase, y cada objetivo de aumento ha de estar
compaginado con el del condensador. El resultado es un fondo grisceo donde la
muestra queda muy contrastado y el interior con diferentes grados de gris.
Tambin es til para muestras que no se pueden teir, que se han de estudiar en
vivo, o que tienen numerosas ornamentaciones, como pelos, escamas, etc.

Imagen N 10. Formacin de la imagen en microscopio de contraste de fases.

Contraste de interferencia (Nomarski y polarizacin): es una tcnica de

microscopa de luz que emplea filtros polarizadores y prismas que producen
imgenes con tridimensionalidad, aunque el relieve obtenido no es real. El paso de
la luz a travs de los prismas produce birrefringencia, que es el fenmeno fsico
que explota esta tcnica. La polarizacin de la luz produce un mayor grado de
contraste de la imagen en los bordes de la muestra. Este tipo de microscopa se
caracteriza por su buena resolucin y contraste que ayudan a discernir tanto
detalles superficiales como estructuras internas. Adems, el uso de prismas
permite obtener imgenes de colores brillantes sin necesidad de aplicar protocolos
de tincin, ni de preparacin de muestras.
Imagen N 11. Disposicin de los componentes bsicos del microscopio de
contraste por interferencia diferencial.

Epifluorescencia: la fluorescencia es la capacidad que tienen algunas sustancias

de emitir luz en una longitud de onda determinada, bien de forma espontnea
(natural) o bien provocada, cuando se excita mediante una onda electromagntica
de longitud de onda caracterstica. El microscopio de fluorescencia aprovecha esta
propiedad de las sustancias al poder manejar mediante filtros la longitud de onda
que incide y que emite una muestra determinada. Actualmente, el microscopio de
fluorescencia ms utilizado es el de epifluorescencia, que simplemente indica que
la luz filtrada no atraviesa la muestra sino que incide sobre ella a travs de la lente
objetivo, y esta misma lente es la encargada de recoger la luz que emite la
muestra excitada. Generalmente, en microscopa de fluorescencia la muestra es
tratada con marcadores fluorescentes, basados en fluorocromos (sustancias

capaces de emitir luz en una longitud de onda determinada), de tal forma que se
puede controlar el tipo de fluorescencia que se quiere observar y relacionarla con
la estructura marcada.
Imagen N 12. Esquema de la organizacin interna de un microscopio de
fluorescencia y movimiento y filtrado del haz luminoso.

Electrnicos
Microscopio electrnico de transmisin (MET): permite la observacin de muestra
en cortes ultrafinos. Un TEM dirige el haz de electrones hacia el objeto que se
desea aumentar. Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el
objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada del espcimen. Para
utilizar un TEM debe cortarse la muestra en capas finas, no mayores de un par de
miles de angstroms. Se coloca una placa fotogrfica o una pantalla fluorescente
detrs del objeto para registrar la imagen aumentada. Los microscopios
electrnicos de transmisin pueden aumentar un objeto hasta un milln de veces.
Microscopio electrnico de barrido (MEB): Crea una imagen ampliada de la
superficie de un objeto. No es necesario cortar el objeto en capas para observarlo
con un SEM, sino que puede colocarse en el microscopio con muy pocos
preparativos. El SEM explora la superficie de la imagen punto por punto, al
contrario que el TEM, que examina una gran parte de la muestra cada vez. Su
funcionamiento se basa en recorrer la muestra con un haz muy concentrado de
electrones, de forma parecida al barrido de un haz de electrones por la pantalla de
una televisin. Los electrones del haz pueden dispersarse de la muestra o
provocar la aparicin de electrones secundarios. Los electrones perdidos y los
secundarios son recogidos y contados por un dispositivo electrnico situado a los
lados del espcimen. Cada punto ledo de la muestra corresponde a un pxel en

un monitor de televisin. Cuanto mayor sea el nmero de electrones contados por

el dispositivo, mayor ser el brillo del pxel en la pantalla. A medida que el haz de
electrones barre la muestra, se presenta toda la imagen de la misma en el monitor.
Los microscopios electrnicos de barrido pueden ampliar los objetos 200.000
veces o ms. Este tipo de microscopio es muy til porque, al contrario que los
TEM o los microscopios pticos, produce imgenes tridimensionales realistas de la
superficie del objeto.
2. Por qu el microscopio electrnico tiene mayor poder de resolucin que el
microscopio ptico?
Conforme menos longitud de onda tengan los fotones empleados para ver, ms
potencia de ampliacin tendr el instrumento con el que veamos. El microscopio
electrnico es aqul que utiliza electrones, en lugar de fotones de luz visible para
formar las imgenes de los objetos pequeos. Dado que la longitud de
estas partculas elementales est comprendida entre 0,005 nm y 0,003 nm, es
decir bastante ms cortas que la de la luz visible, por lo que su poder de
resolucin ser mayor.
Qu procesos fundamentales permiten la alta resolucin de un microscopio de
barrido confocal?
En un barrido puntual confocal, las lentes del microscopio enfocan la luz lser
sobre un solo punto de la muestra (el punto focal). A continuacin, el lser explora
la muestra punto por punto y genera la imagen barrida. La fluorescencia y la luz
reflejada por la muestra vuelven atravesando el objetivo. El microscopio y el
sistema ptico del mdulo de barrido enfocan la luz emitida por el punto focal
sobre un segundo plano, el punto confocal. A travs de la pequea abertura de
este punto (denominada pinhole), la luz del punto focal llega hasta el detector. La
luz que no procede de este foco no atraviesa la abertura.
Gracias a ello se consigue un aumento en la resolucin y la obtencin de
imgenes de secciones pticas extremadamente finas mediante el sistema de
barrido lser que permite que la estimulacin no sea en toda la muestra a la vez
sino solo en reas muy pequeas, el rea de estimulacin (y de recepcin) va
movindose a lo largo de toda la muestra (barrido) de modo que en un tiempo
determinado, tiempo de barrido, la totalidad de la muestra ha sido sondeada.,
eliminando as la interferencia que produce la luz que llega de los diferentes
campos pticos de todo el grosor de la muestra que se observa, consiguiendo as
que el enfoque se realice sobre un nico plano(confocal).

3. En qu casos se utiliza el microscopio de inmunoflorescencia?

La microscopia de inmunofluorescencia es una tcnica inmunohistoqumica que
consiste en conjugar colorantes fluorescentes (isotiocianato de fluorescena,
rodamina B de lisamina o cido 1-dimetilaminonaftalen-5-sulfnico) con
anticuerpos o antgenos, exponiendo despus este conjugado a los anticuerpos o
antgenos correspondientes en cortes de tejidos, frotis de microorganismos o de
clulas, o cultivo de tejidos en capa nica. Cuando la reaccin es positiva y se
expone a la luz ultravioleta se producir fluorescencia observable bajo el
microscopio de inmunofluorescencia.
Qu ventajas tiene el uso del microscopio de inmunoflorescencia?
-Se pueden obtener resultados rpidos
-No es necesario realizar cultivos
-Se puede identificar microorganismos especficos en un grupo mixto
-Determina la identidad de un organismo muerto
-Es sensible
4. Identifica en un grfico un microscopio compuesto y todas sus partes.
(se encuentra en la actividad 1)
5. Explique la trayectoria del rayo de luz a travs del microscopio
Imagen N 13. Trayectoria de los rayos en el sistema ptico de un microscopio
ptico compuesto

1) Formacin de la imagen en el globo ocular

2) trayectoria de los rayos en el ocular
3) Longitud fsica o mecnica del tubo del microscopio
4) Trayectoria de los rayos en el objetivo
5) Trayectoria de los rayos en el condensador

6) Diafragma del condensador

7) Diafragma de la fuente luminosa
8) Fuente luminosa.
Por qu se invierte la imagen que observamos?
El lente objetivo de un microscopio compuesto tiene una corta longitud focal.
Despus de que la luz pasa a travs de la muestra, pasa al lente objetivo y
despus al punto focal del lente objetivo, as la imagen formada se invertir.
Esta imagen es el objetivo que se ve a travs de la lente del ocular. ste acta
como un aumentador sencillo y alarga la imagen creada por el lente objetivo.
Como resultado, la imagen que se ve a travs de un microscopio compuesto se
invierte al compararla con la muestra que se est examinando.
El principal causante de este efecto es un prisma de cristal que se encuentra en el
interior del microscopio a la altura de la base del ocular, la funcin de este prisma
es concentrar la luz o imagen aumentada por los objetivos y dirigirla hacia los
oculares.
Actividad N 2 uso y manejo del microscopio
Muestra n 1. Epidermis de lirio acutico Eichhornia crassipes
Aumento del objetivo: 4x
Magnificacin total: 40x

Aumento del objetivo: 10x

Magnificacin total: 100x

Aumento del objetivo:40x

Magnificacin total:400x

Al observar la epidermis de lirio acutico con el objetivo de 4x se evidenciaron una

serie de puntos negros correspondientes a las estomas. Luego, con el objetivo de
10x se pudo examinar otras partes como la pared celular de las distintas clulas
vegetales que son de forma alargada e incoloras y la membrana celular en la cual
est contenido el citoplasma y el ncleo (apareca como puntos ms pequeos
que los estomas). Al cambiar al objetivo de 40x ya se podan ver los ostiolos que
conforman a la estoma.
La epidermis es una capa de clulas transparentes recubierta por una cutcula,
complementada a menudo por ceras, que es esencialmente impermeable y limita
la prdida de agua por transpiracin. Por otra parte, el estoma est formado por
dos clulas estomticas que son las nicas que tienen unos orgnulos
denominados cloroplastos que contienen clorofila y, por tanto, son de color verde.
Entre las dos clulas estomticas aparece un orificio de forma oval denominado

ostiolo que son como pequeos ojales de apertura. . Los intercambios gaseosos
entre la hoja y el ambiente se efectan principalmente a travs de estos.
Muestra N2 epidermis de la cebolla. Allium cepa.
Aumento del objetivo: 4x
Magnificacin total: 40x

Aumento del objetivo: 10x

Magnificacin total: 100x

Aumento del objetivo:40x

Magnificacin total:400x

Se observ las diferentes clulas vegetales de forma alargadas contenidas en la

epidermis de la cebolla, en los objetivos de 10x y 40x se notaron los ncleos de
estas.
Se puede analizar que el lmite ms externo es la pared celular, que rodea el
material vivo de la clula: el protoplasma. La parte que rodea todo el protoplasma
y que est en contacto con la pared celular, es la membrana celular. Dicha
membrana no es visible en estas clulas porque est aprisionada contra la pared
celular. Prxima a esta pared hay una capa irregular, granular, que constituye el
citoplasma. El ncleo aparece homogneo. (Lupiz, 2009).
Muestra N3 escamas del ala de la mariposa.
Aumento del objetivo: 4x
Magnificacin total: 40x

Aumento del objetivo: 10x

Magnificacin total: 100x

Aumento del objetivo:40x

Magnificacin total:400x

se notaron una serie de escamas que al ir aumentando del objetivo 4x a 40x se

observaban ms definidas.
Las alas de mariposas estn hechas de dos capas (membranas) que son
alimentadas por venas tubulares. Las venas funcionan tambin en el intercambio
de oxgeno (respiracin). Las alas poseen miles de escamas de colores, junto
con muchos pelos. Estas escamas en sus alas son pequeas piezas superpuestas
(miden entre 70 y 250 micras ) de quitina en el ala de una mariposa, La cual es el
componente principal de las escamas, un material natural muy resistente que dota
a las alas de la fortaleza y ligereza necesaria para poder volar. (Fernndez, R.,
2012).

Muestra N 4. Granos de polen.

Aumento del objetivo: 4x
Magnificacin total: 40x

Aumento del objetivo: 10x

Magnificacin total: 100x

|
Aumento del objetivo:40x
Magnificacin total:400x

Saco polnico

En el objetivo de 4x y 10x se observaron los granos de polen de forma circular, en

el objetivo de 40x se pudo notar la intina, exina y el protoplasma. Adems,
observamos el saco polnico que es el recipiente que contiene los granos de
polen.

El grano de polen es el elementos reproductivo que mantiene la continuidad

gentica en las plantas superiores (angiospermas y gimnospermas) de una
generacin a otra. Este como cualquier otra celula vegetal, est formada por dos
componentes: el protoplasma (la parte viviente) y la pared celular (la parte inerte).
Sin embargo, la pared celular del polen (esporodermo) es algo diferente de la
pared celular en general, porque el esporodermo generalmente es ms grueso y
adems est constituido por dos capas, una interior (la intina) y otra exterior (la
excita). La intina est en contacto directo con la membrana celular, es delagada y
su composicin qumica es de celulosa, la exina es exterior a la intina, es mas
gruesa que esta,y su composicin qumica es principalmente de esporopolenina,
un polmero de cidos grasos mono- o dicarboxilicos con peso molecular alto.
(Soejarto, D. y Fonngra, R., 2009)
Muestra N 5. Clulas de corcho
Aumento del objetivo: 4x
Magnificacin total: 40x

Aumento del objetivo: 10x

Magnificacin total: 100x

Aumento del objetivo:40x

Magnificacin total:400x

Al observar el corcho con el menor aumento se pudieron apreciar celdas muy

pequeas que se encontraban agrupadas. Pero, al ir cambiando de aumento se
not la presencia de membranas celulares, que solo poseen el citoplasma y no
organelos, ya que estas clulas se encontraban muertas.
El tejido sber se denomina comnmente "corcho". Son clulas muertas que
tienen la particularidad de que sus paredes primarias (principalmente celulsica)
est cubierta hacia el interior de la clulas por una capa relativamente gruesa de
suberina, formada por laminillas alternas de suberina y ceras. La capa de suberina
es impermeable al agua y a los gases y soporta la accin de los cidos. El
protoplasma desaparece y el lumen aparece lleno de aire o de sustancias
pigmentadas. El corcho es la corteza de los alcornoques (Quercus suber) que los
protege frente a las condiciones extremas del clima mediterrneo, como son la
sequa, las altas temperaturas estivales y los incendios. Est constituido por
clulas muertas cuyo interior se llena de un gas similar al aire. Ese gas constituye
casi el 90% del corcho, de ah su levsimo peso y su compresibilidad. Las paredes
de esas clulas, que son como minsculos compartimentos estancos, estn
constituidas fundamentalmente por suberina y cerina, substancias que lo hacen
bastante ignfugo, muy flexible y prcticamente imputrescible. El corcho es, pues,
un material extraordinario, de propiedades nicas. Es un producto completamente
natural, renovable y biodegradable. Por ello, su produccin no produce ninguna
contaminacin ni perjuicio al ecosistema del que se extrae, ya que se obtiene por
descortezamiento del alcornoque.

PREGUNTAS DE ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA

Por qu se usa aceite de inmersin para utilizar el objetivo de 100x, cual es la
funcin?
El aceite de inmersin se utiliza cuando se va hacer uso de un objetivo 100x de
un microscopio en este caso en un microscopio estndar-binocular, para generar
una buena resolucin de la imagen observada, debido a que la distancia focal y el
dimetro de este objetivo es muy pequea, lo que repercute en una dificultad de
penetracin de la luz en el centro ptico del objetivo generando as un problema
en la visin.
Los rayos de luz que desde la muestra llegan al objetivo, tuvieron que haber
atravesado el vidrio del cubre objeto, por lo que al pasar al aire estos se separan
mucho o pueden haber sufrido una reflexin total entre la interface vidrio-aire, es
decir que la intensidad de luz observada es mnima. En este caso la principal
funcin del aceite de inmersin es generar una solucin a este problema ya que el
genera un direccionamiento mucho ms efectivo de los rayos de luz hacia el
objetivo, en donde este aceite es dispuesto o colocado entre el vidrio del
cubreobjetos y el objetivo ya que el ndice de refraccin de este aceite es muy
parecido al del vidrio por lo que los rayos de luz siguen su camino ptico sin sufrir
perturbaciones notables.
Actividad N 3. Estudio de las propiedades del microscopio
Muestra N 6 fibras de lana
Aumento del objetivo: 4x
Magnificacin total: 40x

Aumento del objetivo: 10x

Magnificacin total: 100x

Aumento del objetivo:40x

Magnificacin total:400x

Al examinar la fibra de lana, se pudo comprobar el poder de penetracin del

microscopio ptico, que permiti la observacin simultnea de varios planos.

Muestra N 7. Letra e de un peridico

Aumento del objetivo: 4x
Magnificacin total: 40x

Aumento del objetivo: 10x

Magnificacin total: 100x

Aumento del objetivo:40x

Magnificacin total:400x

Con la letra se pudo notar la propiedad de resolucin que posee el microscopio

ptico, que distingue puntos muy prximos separados entre s, es decir, su
capacidad de reproducir detalles.
La inversin de la letra se puede analizar teniendo en cuenta las lentes convexas
que se encuentran dentro del tubo donde se sujetan los oculares, estos permiten
modificar el tamao de las imgenes que las atraviesan, este fenmeno se
presenta cuando la luz que viene desde el objetivo atraviesa las determinadas
lentes, en el cual de manera directa ocurre una inversin natural de su posicin,
de tal manera que la nueva imagen se forma invertida si la comparamos con la
imagen original, en el cual este fenmeno es corregible si se utiliza un juego de
lentes que generen una modificacin o ajuste de la imagen invertida. En todo
caso es importante aclarar que no slo las letras se ven al revs, sino que todo
aquello que se observa en un microscopio se ve invertido.
PREGUNTAS DE ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA
1. Explique las principales propiedades bsicas del microscopio de luz: poder de
aumento, poder de penetracin o profundidad de foco, poder de definicin, poder
de resolucin, campo visual del microscopio.
Cuatro son las caractersticas que definen la calidad de un microscopio
compuesto: La luminosidad, el poder de definicin, el poder de penetracin y la
potencia.
La Luminosidad es la cantidad de luz que alcanza al ojo del observador. Las
imgenes deben poseer buena iluminacin la cual depende del sistema de
iluminacin del microscopio y de la calidad del sistema ptico.
El poder de definicin que es la capacidad de proporcionar imgenes con
contornos ntidos. Esta tambin depende de la calidad del sistema ptico. Un
microscopio definir bien cuando tenga objetivos apocromtico y oculares
compensados, es decir cuando se hayan corregido las aberraciones de esfericidad
y cromtica.

El poder de penetracin que es la capacidad de permitir la observacin simultanea

de dos o ms planos en el objeto observado.
La potencia total del microscopio que se calcula multiplicando la potencia
(aumentos) del objetivo por la potencia del ocular y por el factor de tubo
(normalmente igual a 1, si la longitud del tubo es la correcta, generalmente de 160
mm y si no hay ninguna lente intermedia). En el caso de un objetivo 25/0.55 y un
ocular 10X/18, con un factor de tubo 1, la potencia del microscopio es de 25X10X1
= 250:1. La potencia depende del poder de resolucin del microscopio.
poder de resolucin de un sistema ptico entendemos su capacidad para
distinguir como distintos y separados dos puntos muy prximos entre si. Es pues
su capacidad de reproducir detalles. El limite de resolucin de un microscopio se
define como la distancia mnima a partir de la cual ya no es posible distinguir la
separacin entre dos puntos. El poder de resolucin de un microscopio ptico y
por consiguiente su limite de resolucin se calcula con la formula recogida en la
formula. En dicha figura se ve como el poder de resolucin depende de la longitud
de onda de la luz empleada del ndice de refraccin (n) del medio por el que pasa
la luz y del ngulo de desviacin () que esta sufre y por lo tanto de la apertura
numrica (AN) del objetivo.

Frmula del poder de resolucin (PR) y de la apertura numrica (AN) de un

microscopio ptico compuesto:
0,61
PR=
n sen
Donde,
0,61= constante
= longitud de onda de la luz usada.
n=ndice de refraccin del medio
sen = seno del ngulo
n sen

= apertura numrica

2. cmo se determina el aumento total del microscopio ptico compuesto?

El aumento total que permite un microscopio ptico se calcula multiplicando la
magnificacin que produce el objetivo por la que produce el ocular.
Por ejemplo, si estamos usando un objetivo de 40x (aumenta 40 veces) y un
ocular de 10x (aumenta 10 veces), el resultado final ser de 400x, es decir, vemos
la muestra aumentada 400 veces.

Actividad N 4. Determinacin de medidas el microscopio

Aumento del objetivo: 4x
Magnificacin total: 40x

Aumento del objetivo: 10x

Magnificacin total: 100x

Aumento del objetivo:40x

Magnificacin total:400x

DIMETRO DEL CAMPO VISUAL

Objetivo de 4X

Dimetro (d) = 4.100

Objetivo de 40X

Utilizando la relacin:
d 1 a2
=
d 2 a1
Donde:
d 1 = Dimetro del campo visual con el objetivo de 4X
d2

= Dimetro del campo visual con el objetivo de 40X

a1

= Aumento (4X)

a2

= Aumento (40X)

Luego:
d 2=

a1 d 1 4 X4100
10.000
=
=410
=4,1 x 1 06
a2
40 X
1

REA DEL CAMPO VISUAL

A= r 2

r=

d
2

rea del campo visual de menor aumento (

r 1=

d 1 4.100
=
=2.05
2
2
2

2.05 mm =13.20 mm
2
A 1= r 1 =

rea del campo visual de mayor aumento (

r 2=

A1

A2

d 2 410
=
=205
2
2

0.205 mm 2=0.13 mm 2
A 2= r 22=
MUESTRA DE CABELLO
Largo
3.500
3.500

100
=77.70
( 4.100
)

El cabello ocupa el 77.70 % del dimetro del campo visual.

Ancho
1/12 = 0,08 mm
CONCLUSIN
Despus de haber reconocido las partes generales y especficas que conforman el
microscopio ptico, adems el funcionamiento y uso especfico, se demostr su
versatilidad en diferentes aplicaciones en actividades investigativas en el rea de
biologa.
Entonces, durante la experiencia se hizo uso de definiciones y pautas para
demostrar como el microscopio ptico posee una serie de poderes que de manera
convergente actan en la generacin y posterior observacin de imgenes a
resoluciones extremadamente til. Tambin, se logr analizar como a travs de
ecuaciones sencillas se pueden conocer informaciones, como el aumento o
magnificacin total, el dimetro del campo visual del microscopio, y hasta el
tamao de un objeto (fraccin de cabello); realizando las medidas con un
segmento de 1cm2 de hoja milimetrada.

Por ltimo, se puede inferir que la evolucin del microscopio hasta la actualidad ha
sido de gran ayuda en la caracterizacin de cada una de las muestras o
microorganismos.
BIBLIOGRAFA
BARRERA, H. (1997) El microscopio ptico. Pg. 88.
DARNELL, J. (2003) Biologa Celular y Molecular. Editorial Mdica Panamericana,
Barcelona, 4ta edicin.
LODISH, H. (2005). Biologa Celular y Molecular. Editorial Panamericana. 5ta
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SOLOMN. (2008) Biologa. 8va edicin Editorial Mc Graw-Hill. EGERTON, R.
(1996).
Electrones de alta energa para bajar de Espectroscopia en el
microscopio electrnico. 2da Edicin.
GONZLEZ, R. PAREJA, R y BALLESTEROS, C. (1991) Microscopa Electrnica.
Eudema Universidad Complutense
KARP, G. (1991) Biologa Celular y Molecular, Mxico. 2da edicin McGraw Hill.
Pg. 864-867, 870-871.