Introduo

O clcio (Ca2+) desempenha papel determinante em muitas das atividades

desenvolvidas pela membrana e em outras estruturas da clula: atua na ativao
da fosforilao oxidativa, no auxlio manuteno da integridade sarcolemal e,
principalmente, na ativao das protenas contrteis (Hansford, 1994). A sua ao
nos eventos da contrao muscular o fator regulatrio desde o momento gerador
do potencial de ao at o estgio que determina o fim do processo de
acoplamento excitao-contrao. O nvel de Ca2+ liberado e a proporo
reabsorvida pelo retculo sarcoplasmtico, portanto, definem a conduta funcional do
ciclo contrtil (Figura 1).

Figura 1. Relaes estabelecidas entre potencial de ao muscular, nvel citoplasmtico de Ca2+ e

desenvolvimento de tenso pelos sarcmeros durante um abalo. Adaptado de Schauf et al. (1993)

Estudos tambm relatam que a impossibilidade de captao do Ca2+ do

citoplasma para o interior do retculo sarcoplasmtico, em condio aps a
contrao muscular, pode desencadear seqncias de eventos lesivos em
estruturas celulares. Isso indica que h uma concentrao de Ca2+ favorvel para a
manuteno da homeostasia celular (Antunes Neto et al., 1998). O objetivo deste
trabalho apresentar a atuao do Ca2+ nas situaes de equilbrio do

funcionamento contrtil e sua influncia na ativao de mecanismos lesivos

celulares.
Ao do clcio nos eventos funcionais celulares
No msculo esqueltico, a excitabilidade e contratilidade dependem do potencial
de membrana e dos gradientes de concentrao transmembrana para sdio (Na+)
e potssio (K+). Estes gradientes so mantidos por transporte ativo eletrognico
atravs do sarcolema, sendo os potenciais de ao obtidos por influxo de Na+ e
refluxo de K+. Por causa da ampla e rpida mudana de permeabilidade, a
capacidade da bomba Na+-K+ para liberao de Na+ e acumulao de K+ pode,
transitoriamente, exceder-se durante determinado esforo muscular. Dependendo
da freqncia de excitao, a condio excedente leva a um aumento em Na+
intracelular e K+ extracelular, o que pode interferir na capacidade da bomba Na+K+ em relao performance contrtil (Nielsen, Clausen, 1996).
Em condies ideais, a despolarizao propagada conduzida para o interior da
fibra muscular pelo sistema tubular transverso. O sistema tubular transverso
invagina do sarcolema em direo ao interior da fibra muscular em intervalos
regulares, tendo como funo dispersar rapidamente o potencial de ao. A rede
tubular transversa atua como uma barreira para Ca2+ extracelular milimolar,
assegurando a permanncia da condio basal do Ca2+ sarcoplasmtico no nvel
nanomolar. Tal como na membrana plasmtica de outros tipos celulares, tanto o
sarcolema quanto as membranas do sistema tubular transverso contm processos
de transporte ATP-Ca2+ dependente que movem Ca2+ para fora da clula
muscular. A atividade da bomba Na+/Ca2+ tambm atua neste sistema de
superfcie da membrana para transporte de Ca2+ (Mickelson, Louis, 1996).
O complexo excitao-contrao envolve todos os estgios entre o potencial de
ao e a ligao de Ca2+ troponina, levando ao desenvolvimento de tenso:
Quadro 1. Seqncia dos eventos excitao-contrao do msculo

O processo de contrao muscular baseia-se na teoria do deslizamento dos

filamentos do sarcmero. Cinco fases podem ser delineadas em relao aos eventos
mecnicos e fisiolgicos deste processo: repouso, excitao-juno, contrao,
restaurao e relaxamento (Antunes Neto, 1998; Fox et al., 1991):
1.

Repouso. Neste momento, no h interao entre actina e miosina, pois o

complexo ATP-ponte cruzada est desativado. O Ca2+, elemento fundamental para

a mudana

da configurao

troponina/tropomiosina

(em repouso,

as duas

estruturas cobrem os stios de ligao entre actina e miosina), encontra-se

armazenado nas vesculas do retculo sarcoplasmtico. Quando a membrana est
em repouso ou numa condio de equilbrio (sem conduo de sinal), o potencial
eltrico atravs da membrana permanece relativamente constante. O potencial de
repouso da membrana da ordem de 60-90 mV, com o lado interior da membrana
sendo negativo em relao ao exterior. A distribuio inica pela membrana
representa o equilbrio das foras eltricas entre os ons positivos e negativos e
suas foras associadas de concentrao. A bomba sdio-potssio (bomba Na+-K+)
responsvel pela manuteno deste balano inico: no estado de repouso, Na+
impedido de entrar na clula por meio da atividade da bomba, sendo transportado
do fluido intracelular para o fluido extracelular; a concentrao de K+ mantida
internamente pela atividade da bomba Na+-K+ e pela atrao eltrica a vrios
nions orgnicos.
2.

Excitao-Juno. A ruptura da distribuio inica atravs da membrana

resulta em mudana do potencial de ao: por exemplo, o movimento de ons

negativos para o exterior da membrana e positivos para o lado interno produzir um
decrscimo

no

potencial

da

membrana

(despolarizao),

enquanto

que

movimento de ons negativos internamente ou a deposio de ons positivos

adicionais externamente causar uma hiperpolarizao da membrana. Quando um

impulso vindo de um nervo motor atinge a placa motora terminal ou juno

neuromuscular (ponto onde a fibra nervosa motora se invagina para dentro da fibra
muscular), h a liberao de acetilcolina, tornando possvel a transmisso do
impulso neuronal atravs da fenda sinptica e tambm criando um potencial pssinptico excitatrio na fibra muscular. O potencial ps -sinptico excitatrio se d
em decorrncia do aumento no potencial eltrico no neurnio ps-sinptico. A
gerao de potenciais de ao sofre propagao pelo sarcolema e tbulos
transversos, tendo como evento final a estimulao das vesculas do retculo
sarcoplasmtico e a liberao de Ca2+ no meio intracelular. O aumento na
concentrao interna celular de Ca2+ propiciar a este ligar-se s molculas de
troponina, que cobrem os stios de ligao da actina junto miosina. A ligao do
Ca2+ com a troponina desencadear uma alterao na conformao do complexo
troponina/tropomiosina, levando ativao do ATP- ponte cruzada e a um
acoplamento fsico-qumica entre actina e miosina.
3.

Contrao. Com o acoplamento entre actina e miosina, tem-se a ativao da

enzima ATPase dependente de Mg2+ e a subseqente hidrlise do ATP, permitindo

a desintegrao de ATP em ADP e Pi. A hidrlise permite a liberao de energia e a
mudana de angulao das pontes cruzadas, acarretando na sobreposio dos
filamentos de actina aos de miosina e gerando a contrao muscular.
4.

Restaurao. A formao de uma nova ligao entre actina e miosina se d

atravs da ressntese do ATP. A energia para a ocorrncia da ressntese deriva da

decomposio de glicose, glicognio, cidos graxos livres ou da combinao de ADP
(adenosina difosfato) com grupos fosfato da fosfocreatina. A restaurao de alguns
poucos moles de ATP pode ser obtida ainda pela via da gliclise anaerbia,
resultando na produo de cido ltico.
5.

Relaxamento. Quando h o cessamento dos impulsos nervosos e a

diminuio de estmulo sobre o nervo motor, os ons de Ca2+ ligados aos stios da
troponina so seqestrados de volta s cisternas do retculo sarcoplasmtico.
Com a diminuio da concentrao intracelular de Ca2+, o complexo ATP-ponte
cruzada desativado e os miofilamentos de actina retornam posio inicial para
propiciarem a ocorrncia de um novo ciclo contrtil.
A Figura 2 representa esquematicamente os principais eventos envolvidos no
processo de contrao muscular:

Figura 2. O processo de contrao-relaxamento muscular (Antunes Neto, 1998)

Bombas de clcio, retculo sarcoplasmtico e desempenho contrtil

Martonosi (1984) descreve os dois tipos de bomba de Ca2+ presentes na
superfcie das membranas celulares:

uma enzima ATPase ativada por ons magnsio e clcio ([Mg2+ + Ca2+] ATPase) est presente na membrana plasmtica da maioria das clulas
eucariticas; esta ATPase modulada pela calmodulina e requer fosfolipdios
da membrana para a atividade. A clivagem Ca2+-dependente de ATP ocorre
com formao transitria de uma enzima acilfosfato intermediria, que
mecanicamente ligada translocao de Ca2+.

o sistema de permutao Na+-Ca2+ catalisa a troca eletrognica de sdio e

clcio atravs da superfcie da membrana. A bomba Na+-Ca2+ est
presente em alta concentrao nas superfcies de membranas de clulas
excitveis (por exemplo, clulas do corao e axnios). A bomba Na+Ca2+ no est ligada hidrlise do ATP, mas o ATP pode servir como um
ativador fisiolgico. Nas superfcies de membranas de micro-organismos,
anti-carregadores H+:Ca2+ podem desempenhar uma funo regulatria
similar.

Ainda em relao s bombas de Ca2+, o retculo endoplasmtico da maioria das

clulas eucariticas contm uma bomba ATP-Ca2+ dependente, que distinta
da [Mg2+ + Ca2+] - ATPase da superfcie de membrana. A bomba de Ca2+ um
componente intrnseco da membrana do retculo endoplasmtico e em certas
clulas (por exemplo, nas clulas musculares) ela pode representar 50-80% do
contedo

total

de

protena

do

retculo

endoplasmtico.

bomba ATP-

Ca2+ dependente cataliza o transporte eletrognico de 2 Ca2+ ligados hidrlise

de 1 mol de ATP, contra um largo gradiente eletroqumico de Ca2+. A atividade do
transporte ATPase depende absolutamente dos fosfolipdios da membrana, sendo a
fosforilao transitria da enzima pelo ATP um essencial passo na translocao do
clcio. Diferente da superfcie da membrana Ca2+-ATPase, a enzima do retculo
endoplasmtico relativamente insensvel calmodulina. Um exemplo bem
caracterizado deste sistema de transporte de clcio a ATPase transportadora de
clcio do retculo sarcoplasmtico (Martonosi, 1984).
O retculo sarcoplasmtico , primariamente, responsvel pela regulao da
concentrao de Ca2+ sarcoplasmtico. Uma rede de retculos sarcoplasmticos
envolve as miofibrilas no nvel da junoBanda A e Banda I e forma cisternas
terminais das quais estruturas so projetadas para os tbulos transversos. A
ramificao de cisternas terminais forma um alongado sistema tubular longitudinal,
que origina a poro leve do retculo sarcoplasmtico, esta que altamente
enriquecida na atividade da bomba ATP-Ca2+ dependente, enquanto a liberao de
Ca2+ e as atividades de ligao de Ca2+ so enriquecidas na poro pesada do
retculo

sarcoplasmtico

(derivada

das

cisternas

terminais).

bomba ATP-

Ca2+ dependente responsvel pela reacumulao muito rpida de Ca2+ no

interior do retculo sarcoplasmtico seguindo a sua liberao. O canal de liberao
de Ca2+ ou receptor rianodina o principal mecanismo pelo qual o clcio estocado
nas cisternas do retculo sarcoplasmtico liberado no sarcoplasma para iniciar a
contrao muscular, sendo ativado por Ca2+ micromolar e adenina nucleotdeo
milimolar (tambm sensvel mudana de pH, calmodulina, cafena, entre
outros); em contrapartida, o canal de liberao de Ca2+ inibido por Ca2+
milimolar e Mg2+ milimolar. Em conjunto com o receptor rianodina, tem-se a
atuao de receptores dihidropiridina, que, com a sua alterao estrutural
detectada atravs de movimentos intramembrana, estimulam a mudana no
potencial da membrana e parecem essenciais para a liberao de Ca2+ do retculo
sarcoplasmtico (Martonosi, 1984; Pozzan et al., 1994; Mickelson, Louis, 1996).

Figura 3. Membranas e protenas responsveis pela regulao do clcio no sistema msculo-esqueltico.

Adaptado de Mickelson e Louis (1996)

O aumento na concentrao de Ca2+ citoplasmtico dos nveis de repouso de <

10-7 M para @ 10-6 M induz a uma alterao na configurao estrutural dos
filamentos finos do sarcmero, facilitando a interao entre as pontes cruzadas e a
actina, com a subseqente ativao da clivagem cclica de ATP e o desenvolvimento
de tenso contrtil. Em termos gerais, a calsequestrina e a calreticulina, localizadas
no espao luminal das cisternas terminais do retculo sarcoplasmtico, sero as
protenas que realizaro o tamponamento luminal das mudanas de concentrao
de Ca2+ livre ([Ca2+]i). Prope-se que a protena triadina desempenhe um papel
de ancorar a calsequestrina na membrana juncional e medie interao entre
calsequestrina e o receptor rianodina (Martonosi, 1984; Pozzan et al., 1994;
Mickelson, Louis, 1996).
As evidncias experimentais sugerem que a estrutura do retculo sarcoplasmtico
e sua funo so prontamente alteradas quando o tecido muscular submetido a
uma prtica exaustiva de exerccios excntricos, de modo que possa haver um
eventual

distrbio

nas

propores

dos

canais regulatrios

de liberao e

recapturao de Ca2+ pelo retculo sarcoplasmtico (Warren et al., 1993a).

O que se pode pressupor que a instabilidade mecnica produzida durante o
exerccio excntrico afeta as ultraestruturas da clula muscular, induzindo ruptura
dos sarcmeros e sarcolema (Figura 4) (Clarkson, 1992 a,b). Porm, no se sabe

ao certo precisar a participao de demais eventos que surgem em paralelo ao

estresse mecnico, pois muitas mudanas homeostticas podem ocorrer durante a
realizao de um exerccio intenso, tais como alteraes em substratos, elevao
da temperatura local, produo de radicais superxido, depresso em pH e
elevao em concentrao de Ca2+ citoplasmtico (Byrd et al., 1989a).

Figura 4. Processos de leso induzidos pelo exerccio excntrico. Adaptado de Byrd (1992)

Os mecanismos pelos quais tornam elevados o nvel de Ca2+ no interior das

clulas musculares, sejam eles de causa intracelular ou extracelular, tambm no
esto completamente evidenciados. Duan e colaboradores (1990), utilizando-se de
modelo animal que foi submetido a um prolongado exerccio de caminhada em
esteira em plano de descida, o que eles denominaram de exerccio excntrico,
procuraram compreender a origem do Ca2+ acumulado na clula. Concluram que o
Ca2+ pode entrar na clula ou atravs dos canais de Ca2+ do sarcolema, haja visto
que a tenso ocasionada pelo exerccio excntrico favorece uma movimentao dos
ons pela membrana, ou ento que a causa seja a prpria ruptura de alguma
estrutura sarcolemal, resultada de um fator ou combinao de fatores: tenso
mecnica, ativao de Fosfolipase A2, peroxidao lipdica por radicais livres de
oxignio e aumento de temperatura local produzida durante o exerccio. O Ca2+
acumulado poder, desta forma, alterar relaes de sntese e degradao protica
no msculo por intermdio de estimulao de processos sensveis sua
concentrao elevada (Baggiolini et al., 1988; Byrd et al., 1989b). Porm, os
experimentos de Lowe e equipe (1994) demonstraram que animais que executaram

uma sesso de exerccios excntricos do msculo sleo foram capazes de tamponar

o aumentado influxo de Ca2+ extracelular, mantendo a [Ca2+] sistlica normal e
evitando a ativao de vias degradativas sensveis ao Ca2+. Desta forma, mais
investigaes so necessrias para o entendimento de leses induzidas pelo
exerccio excntrico. Armstrong (1990) apresenta o pressuposto potencial de
alcance do Ca2+ nos processos relativos aos mecanismos de leso no meio celular
(Figura 5):

Figura 5. Mecanismos potenciais envolvidos nos estgios iniciais de microleso celular

que ocorrem por aumento intracelular de clcio. Adaptado de Armstrong (1990)

Concluindo, o distrbio homeosttico do Ca2+ na clula pode conduzir alguns

processos auto-catalticos. Analisando o esquema, percebe-se que a concentrao
elevada de Ca2+ favorece a ativao da Fosfolipase A2, que possui um stio de
ligao de Ca2+. A ao da Fosfolipase A2 pode ter vrios efeitos degenerativos
para as estruturas de membrana, incluindo a produo de detergentes de cidos
graxos e lisofosfolipdios. O Ca2+ pode, tambm, ativar outras proteases sensveis,
estimulando a degradao de estruturas proticas, bem como afetando o processo
de respirao mitocondrial.