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REACTIVOS
BD Mueller Hinton Chocolate Agar
Frmula* por litro de agua purificada
Extracto de carne bovina
2,0 g
Hidrolizado cido de casena
17,5
Almidn
1,5
Hemoglobina
10,0
10,0 mL
IsoVitaleX
Agar
17,0 g
pH 7,3 0,2
* Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
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BD IsoVitalex Enrichment contiene los siguientes factores de crecimiento (frmula* por litro de
agua purificada):
Vitamina B 12
L-glutamina
Adenina
Clorhidrato de guanina
cido p-aminobenzoico
Nicotinamida adenina dinucletido (NAD)
Pirofosfato de tiamina
Nitrato frrico
Clorhidrato de tiamina
Hidrocloruro de cistena
L-cistina
Glucosa
0,01 g
10,0
1,0
0,03
0,013
0,25
0,1
0,02
0,003
25,9
1,1
100,0
PRECAUCIONES
. Solamente para uso profesional.
PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados
BD Mueller Hinton Chocolate Agar (placas Stacker de 90 mm). Controladas
microbiolgicamente.
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Materiales no suministrados
Medios de cultivo auxiliar, reactivos y equipo de laboratorio que se requiera.
Tipos de muestras
BD Mueller Hinton Chocolate Agar se puede utilizar para todo tipo de muestras clnicas
potencialmente infectadas con organismos exigentes, en especial (pero no exclusivamente) las
muestras de zonas corporales esencialmente estriles (por ejemplo, lquido cefalorraqudeo,
abscesos) y como medio de subcultivo de hemocultivos. Se utiliza principalmente para el
aislamiento no selectivo de Neisseria, Haemophilus y otras bacterias que pueden no crecer en
los medios de agar sangre utilizados normalmente, tal como el agar Columbia con sangre de
carnero al 5%. (Vase tambin CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO Y LIMITACIONES
DEL PROCEDIMIENTO).
El uso de este medio para pruebas de sensibilidad sistemticas de Neissseria gonorrhoeae con
penicilina G y estreptomicina requiere el uso de cultivos puros. No inocular la muestra para
realizar pruebas de sensibilidad directas!
Recogida y transporte de las muestras
Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidis, Haemophilus y otros organismos exigentes son
sensibles a las condiciones ambientales adversas. Por consiguiente, se deben utilizar medios
de transporte adecuados para todas las muestras. Las muestras deben ser enviadas al
laboratorio tan pronto como sea posible y no deben transcurrir ms de 24 horas, incluso si se
utilizan medios de transporte. La temperatura de transporte ptima es de 20 25 C. No
refrigerar!9,10
Procedimiento de anlisis
Para el aislamiento de organismos exigentes, extender las muestras tan pronto como se reciban
en el laboratorio. La placa de extensin se utiliza principalmente para aislar cultivos puros de las
muestras que contienen flora mixta.
Si, por el contrario, el material se cultiva directamente empleando una torunda, hacerla girar en
una seccin pequea cercana al borde, extendiendo luego para hacer el aislamiento a partir de
esta rea inoculada.
Si la muestra se ha obtenido de una zona corporal con flora normal, tambin debe inocularse en
los medios selectivos adecuados, segn el agente patgeno que se desee aislar. Para
Neisseria gonorrhoeae, se debe incluir una placa BD Martin-Lewis Agar, modified o BD GCLect Agar y, para Haemophilus, una placa BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and
Bacitracin.
Incubar las placas a una temperatura de 35 2 C en una atmsfera aerobia con dixido de
carbono. Efectuar lectura de las placas despus de 18 24 h y 42 48 h de incubacin.
Para pruebas de sensibilidad sistemticas de N. gonorrhoeae, el aislado, que debe ser un
cultivo puro, se suspende en BD Trypticase Soy Broth para lograr el equivalente del patrn de
turbidez 0,5 de McFarland. En un plazo de 15 min despus de ajustar la turbidez del inculo,
sumergir una torunda estril en el inculo diluido correctamente y hacerla rodar con firmeza
varias veces contra la pared interna superior del tubo para exprimir el exceso de lquido.
Inocular toda la superficie del agar de la placa tres veces, girando la placa 60 grados cada vez
para obtener una inoculacin uniforme.
Aplicar los discos mediante un dispensador de discos antimicrobianos, empleando precauciones
aspticas. Depositar los discos de modo que los centros queden a no menos de 24 mm de
distancia. Es preferible depositar los discos de penicilina de manera que no queden a menos de
10 mm del borde de la placa de Petri. Una vez colocados los discos sobre el agar, presionarlos
con una aguja o pinza estril hasta obtener un contacto completo con el medio. Este paso no es
necesario si los discos se colocan con el dispensador de autoapisonamiento de 6 u 8 posiciones
BD Sensi-Disc.
15 minutos o menos despus de aplicar los discos, invertir las placas e incubarlas en una
atmsfera aerobia enriquecida con dixido de carbono al 5% a 35 37 C durante
20 24 horas.
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Resultados
Morfologa tpica de colonias en BD Mueller Hinton Chocolate Agar:
Haemophilus influenzae
Neisseria gonorrhoeae
Neisseria meningitidis
Streptococcus pneumoniae
Pruebas de sensibilidad: Se debe efectuar la lectura de las zonas desde la parte superior de la
placa. La sensibilidad a la penicilina debe confirmarse con una prueba de beta-lactamasa, por
ej., la prueba BD Cefinase.
REFERENCIAS
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testing by a standardized single disk method. Am. J. Clin. Pathol. 45: 493-496.
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Practice 5:91-100.
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P. R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical
microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
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E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical
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clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
ENVASE/DISPONIBILIDAD
BD Mueller Hinton Chocolate Agar
N de cat. 254035
Medios en placa listos para usar, 20 placas
N de cat. 254082
Medios en placa listos para usar, 120 placas
INFORMACIN ADICIONAL
Para obtener ms informacin, dirjase a su representante local de BD.
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