FRAGILIDAD OSMTICA

Es la susceptibilidad que presentan los

eritrocitos a la lisis en concentraciones
decreciente de una solucin salina
hipotnica
Indica la resistencia de los eritrocitos a la
lisis por accin de la presin osmtica,
ejercida sobre su membrana
La resistencia osmtica depende de la
relacin volumen/superficie celular. El eritrocito normal debido ala forma
bicncava puede aceptar una entrada de agua aumentando su volumen
hasta un 70% sin hemolizarse.
El anlisis se basa en la medicin espectrofotomtrica de la hemlisis
que presentan los eritrocitos
Mtodo espectrofotomtrico de Dacie
Reactivos: solucin de cloruro
de sodio al 1% tamponado
Agua destilada
Tubos de vidrio centrfuga
Gradilla

Centrfuga
Pipetas
Espectrofotmetro
Parafilm


Muestra: 2 tubos sangre heparinizada, una muestra se procesa
realizando las diferentes diluciones a temperatura ambiente y la otra
muestra con las diferentes diluciones se deja incubando a 37 C x 24
hrs.

Preparacin de los tubos 0 hrs. Y 24 hrs. Rotular con la concentracin de

NaCl
Agregar a cada tubo 100 uL de muestra en estudio

T
u
b
o

NaCl 1%
ml

Agua bidestilada ml

Concentracin NaCl final

8,5ml

1,5ml

0,85 Blanco 0% hemolisis

7,5

2,5

0,75

6,5

3,5

0,65

6,0

4,0

0,60

5,5

4,5

0,55

5,0

5,0

0,50

4,5

5,5

0,40

4,0

6,0

0,35

3,5

6,5

0,35

1
0

3,0

7,0

0,30

1
1

2,5

7,5

0,25

1
2

2,0

8,0

0,20 100% hemlisis

Mezclar colocando parafilm

Incubar a temperatura ambiente x 30 min (15- 30)
Posteriormente mezclar por inversin y centrifugar por 5 min a 2000
rpm
Leer la hemlisis (absorbancia) a 540 nm
Usando tubo 1 como blanco y el tubo n 12 como 100 % hemolisis
Se repite lo mismo dejando la otra serie de tubos incubados a 37C por
24 hrs
Realizar un grfico a las 0 y 24 hrs % de Lisis versus concentracin de
Na Cl
Control
Paciente

En condiciones normales, suele producirse una hemlisis del 50 % a una

concentracin de 0,45 y 0,5 g/dl.

de hemlisis=

D .O . muestra
x 100
D . O. muestra 100 hemlisis( tubo 12)

Esferocitosis hereditaria

Existe una alteracin de las protenas plasmticas del citooesqueleto,

con prdida de parte de la membrana eritrocitaria y aumento en la
permeabilidad iica. Disminuye la relacin superficie/volumen del
hemate.
Esto da lugar a la fragilidad osmtica y disminucin de la elasticidad, los
hemates toman aspecto de globo que al pasar por el bazo son
destruidos.

Interpretacin
Los esferocitos tienen un volumen muy pequeo para su contenido, y su
capacidad de expansin est limitada. Los esferocitos presentan una
relacin volumen/superficie aumentada, por lo que incorporan menos
agua que los glbulos rojos normales en una solucin hipotnica antes
de romperse, Por consiguiente, estallan al absorber pequeas cantidades
de agua a concentraciones relativamente altas de sal. La curva se
desplaza a la derecha
Su fragilidad osmtica est aumentada y su resistencia osmtica
disminuida. Esto ocurre en la esferocitosis hereditaria y en las anemias
hemolticas autoinmunes, en la enfermedad hemoltica del recin nacido
y en las anemias hemolticas sintomticas adquiridas en las cuales
existe tendencia a la esferocitosis.

En cambio, la clula delgada o aplanada de la anemia hipocrmica, por

deficiencia de hierro, en la talasemia, anemia de clulas falciformes,
despus de una esplenectoma y en varias anemias en las que se
encuentran hemates en diana, son inusualmente resistentes a la lisis
osmtica, debido a que presentan una razn volumen/superficie
disminuida, absorbe cantidades considerables de agua y alcanza el
volumen crtico para la lisis en concentraciones menores de NaCl.
Su fragilidad osmtica est disminuida y su resistencia aumentada. La
curva se desplaza a la izquierda.
Se produce una disminucin de la ROE en la esferocitosis hereditaria, en
la eliptocitosis u ovalocitosis congnita y en la estomatocitosis
hereditaria.
Cuando la ROE es baja: aumenta la hemlisis en los tubos que
contienen solucin salina a mayor concentracin. Esto sucede en la

esferocitosis hereditaria, en la eliptocitosis u ovalocitosis congnita y en

la estomatocitosis hereditaria, debido a que la superficie de los hemates
est disminuida con respecto a su volumen, no toleran la entrada de
agua y tienen aumentada su fragilidad osmtica.
Cuando la ROE es alta, la aparicin de la hemlisis se retarda y
empieza a nivel de tubos que contienen solucin salina a una
concentracin menor que lo previsto. Esto acontece con los reticulocitos
y con los glbulos rojos propios de la talasemia y de la anemia
ferropnica, debido a que estas clulas tienen incrementada su
superficie en relacin con su volumen, por lo que toleran mejor la
entrada de agua y tienen disminuida su fragilidad osmtica.

Clasificacin de esferocitosis hereditaria, segn niveles de Hb:

Severa: Hb <8g/L
Moderada: Hb 8-10 g/L
Mnima: HB 10-11,5 g/L en mujeres. Y 10-13,5 g/L en hombres.

HEMOGLOBINAS
La hemoglobina puede unirse a
Hb + O2 ---------------oxihemoglobina
Hb + CO --------------carboxihemoglobina
Hb +CO2--------------carbaminohemoglobina
Hb + glucosa-----------hemoglobina glucosilada (HbA1c)
TIPOS DE HEMOGLOBINA

HEMOGLOBINA A o HbA: Es llamada tambin hemoglobina del adulto

o hemoglobina normal, representa aproximadamente al 97% de la
hemoglobina degradada en el adulto, formada por dos globinas alfa y
dos globinas beta.

HEMOGLOBBINA A2: Representa menos del 2,5% de la hemoglobina

despus del nacimiento, formada por dos globinas beta y dos globinas
delta, que aumenta de forma importante en la beta-talasemia, al no
poder sintetizar globinas beta.
HEMOGLONA FETAL O HEMOGLOBINA F O HbF: Es la hemoglobina
normal del feto que en su mayor parte se degrada en los primeros das
de vida del nio siendo sustituida por la hemoglobina A.
Durante toda su vida el sujeto normal produce pequeas cantidades de
hemoglobina F. La hemoglobina fetal tiene ms afinidad que la
hemoglobina adulta.

TIPOS DE
CADENAS
ETAPAS DE VIDA
HEMOGLOBINA
Hemoglobina
2 2
Embrin
embrionaria
Hemoglofina F
2 2
Feto <2%

 Hemoglobina A

2 2

Hemoglobina A2

2 2

Adulto normal
90%
Adulto normal 25%
3-9%

Hemoglobina A1c
2 2 glucosa

Tipos de hemoglobina
Hemoglobina
A o HbA,
tambin
llamada hemoglobina
del
adulto o hemoglobina normal, representa aproximadamente el 97 %
de la hemoglobina en el adulto. Est formada por dos globinas alfa y dos
globinas beta.
Hemoglobina A2: Representa menos del 2,5 % de la
hemoglobina despus del nacimiento. Est formada por dos globinas alfa
y dos globinas delta. Sufre un aumento marcado en la beta-talasemia, al
no poderse sintetizar globinas beta.
Hemoglobina S: Hemoglobina alterada genticamente y presente en la
anemia de clulas falciformes. Afecta predominantemente a la poblacin
afroamericanay amerindia.
Hemoglobina F: Hemoglobina fetal: formada por dos globinas alfa y
dos globinas gamma. Tras el nacimiento desciende la sntesis de
globinas gamma y aumenta la produccin de globinas beta.
Oxihemoglobina: Representa la hemoglobina que posee unido oxgeno
(Hb+O2)
Metahemoglobina: Hemoglobina cuyo grupo hemo tiene el hierro en
estado frrico, Fe (III) (es decir, oxidado). Este tipo de hemoglobina no
puede unir oxgeno. Se produce por una enfermedad congnita en la
cual hay deficiencia de metahemoglobina reductasa, enzima encargada
de mantener el hierro como Fe(II). La metahemoglobina tambin se
puede producir por intoxicacin de nitritos.
Carbaminohemoglobina: se refiere a la hemoglobina que ha unido
CO2 despus del intercambio gaseoso entre los glbulos rojos y los
tejidos (Hb+CO2).
Carboxihemoglobina: Hemoglobina resultante de la unin con el CO.
Es letal en grandes concentraciones (40 %). El CO presenta una afinidad
210 veces mayor que el oxgeno por la Hb, por lo que desplaza a ste
fcilmente y produce hipoxia tisular, pero con una coloracin cutnea
normal (produce coloracin sangunea fuertemente roja) (Hb+CO)
Hemoglobina glucosilada: aunque se encuentra normalmente
presente en sangre en baja cantidad, en patologas como la diabetes se
ve aumentada. Es el resultado de la unin de la Hb con glucosa u otros
carbohidratos libres.

Tambin hay hemoglobinas de los tipos: Gower 1, Gower 2

y Portland. stas solo estn presentes en el embrin.