UNIVERSIDAD DE CARTAGENA

AUTORES: SUGEY LUCIA VILLERA ROQUEME JUAN MANJARES VEGA

DETERMINACIN CUALITATIVA DE ALGUNOS COMPONENTES
DEL PROTOPLASMA CLULAR

RESUMEN

Para poder llevar acabo la correcta identificacin de los diferentes componentes

del protoplasma celular, de forma cualitativa es necesaria la utilizacin de
diferentes reactivos y soluciones qumicas que nos permiten identificar o
determinar la presencia y adems de eso la cantidad del componente
protoplasmtico en cuestin.
Varios conceptos o mtodos como lo fueron la determinacin de carbohidratos
travs del reactivo de benedict, la determinacin de varias protenas a partir a
travs de unas soluciones que permitan ver un precipitado y la solubilidad de este,
la determinacin de lpidos a partir del sudan 3 como compuesto liposolubles;
entre otros mtodos y procesos que fueron llevados a cabo para la determinacin
de las diferentes protenas, carbohidratos, lpidos y enzimas.
Palabras Clave: Colesterol; reactivo de benedict; protena; macerado; enzima;
carbohidrato; lpido.

INTRODUCCION
Las biomolculas son compuestos de carbono con una variedad de grupos funcionales y
se encuentran jerrquicamente organizados en las clulas. La versatilidad de los tomos
de carbono para formar enlaces covalentes sencillos y dobles principalmente, es de gran
significancia biolgica porque a partir de ellos se establecen unidades monomricas como
los monosacridos, aminocidos y nucletidos. La polimerizacin de estas unidades
monomricas primarias permite la aparicin de un segundo nivel de complejidad al que
pertenecen macromolculas como los polisacridos (almidn y glucgeno), protenas
(Albmina e histonas) y cidos nucleicos (DNA y RNA). Las interacciones de
macromolculas a travs de diferentes tipos de fuerzas intermoleculares y mecanismos
complejos de empaquetamiento, permiten la conformacin de las diferentes organelas
(membranas plasmticas) y estructuras supramoleculares, como los cromosomas.

Finalmente la interaccin conjunta de las biomolculas en sus Diferentes niveles de

organizacin permite la conservacin de la estructura y funcionamiento de las clulas En
esta prctica se estudiarn los dos primeros niveles de complejidad estructural de algunas
biomolculas.
OBJETIVO GENERAL:
Identificar en forma cualitativa la presencia de algunos componentes que se encuentran
en el protoplasma celular.
OBJETIVOS ESPECFICOS:
Determinar mediante mtodos cualitativos la presencia de carbohidratos, lpidos,
protenas, enzimas y cidos nucleicos en muestras de materia viva.
Reconocer la composicin qumica de los reactivos que se utilizan en la identificacin de
los compuestos protoplasmticos.
Investigar las reacciones que se producen en la identificacin de los compuestos
protoplasmticos.

MATERIALES
Tubos de ensayos
Pipetas
Goteros
Gradillas para tubos de ensayos
Mechero de alcohol
Pinzas
Reactivo de Benedict
Solucin de glucosa al 3%
Fruta madura
Macerado de pan
Lugol

 Solucin de clara de huevo

Solucin de gelatina sin sabor
Suero fisiolgico
Hidrxido de sodio al 10%
Sulfato de cobre al 0.5%
Aceite vegetal
Grasa animal
Sudan III o IV
Agua destilada
Papel filtro
Anhdrido actico
Cloroformo
cido Sulfrico concentrado
Solucin reactivo de almidn al 0.1%

PROCEDIMIENTO
1 Monosacridos:
a. En un tubo de ensayo se vierten 5ml del reactivo de Benedict, y se calienta hasta
ebullicin. No debe cambiar de color.
b. Se aade al mismo tubo de ensayo 1ml de una solucin de glucosa y se calienta hasta
ebullicin. Qu color aparece? Una turbidez verde indica de 0.1 a 0.3% de azcar
reductor, y un precipitado rojo naranja o rojo ladrillo, indica que la concentracin de azcar
supera el 1.5%.
c. Macere un pedacito de fruta madura y adicinela a un tubo de ensayo que contiene 5
ml de reactivo de Benedict. Caliente hasta ebullicin

.2 Polisacrido:
a. Haga una suspensin acuosa de almidn y vierta en un tubo de ensayo 2 ml de ella.
b. Agrguele a la anterior solucin dos gotas de solucin de lugol. Anote los resultados.
Caliente hasta ebullicin esta solucin por dos minutos,
Deje el tubo de ensayo en reposo hasta que se enfre.
c. deposite dos gotas de lugol en una solucin acuosa de un macerado de pan, y observe
3 Protenas:
a. Diluya la clara de huevo en 50ml de suero fisiolgico o en agua.
b. A 1ml de la solucin anterior se aaden dos gotas de sulfato de cobre al 0.5% y 1ml de
hidrxido de sodio al 10%, Se produce algn cambio?
c. En un tubo de ensayo, coloque 2ml de solucin de gelatina sin sabor, y proceda como
en el caso anterior. Agregue dos gotas de sulfato de cobre y 1ml de hidrxido de sodio y
agite.
4 Lpidos:
a. Coloque en un tubo de ensayo 3ml de agua. Agregue una pizca del reactivo Sudan III
agite y observe, anote los resultados.
b. En el mismo tubo de ensayo adicione 1ml de aceite vegetal, agite nuevamente y deje
en reposo por unos minutos. Luego observe y anote los resultados.
c. En otro tubo de ensayo coloque 2ml de grasa animal y agregue una pizca de Sudan III.
Si la grasa est solidificada caliente un poco para derretirla. Agite y anote los resultados,
comparndolos con los del tubo anterior.

5 Reaccin de Lieberman Burchard para colesterol:

a. Diluya una parte de la yema de huevo en 10 ml de cloroformo.
b. Tome 1 ml de la solucin clorofrmica y colquelo en un tubo de ensayo limpio y seco.
c. Adicione 1 ml de anhdrido actico.
d. Adicione 3 a 4 gotas de cido sulfrico concentrado.
e. Agite suavemente y observe los cambios de coloracin.

6 Enzimas:
a. En un tubo de ensayo limpio y seco coloque un embudo pequeo con papel filtro.
Enjuguese la boca con suero fisiolgico y descarte.
b. S es necesario mastique un trocito de parafina (vela) y la saliva secretada virtala
sobre el embudo, recogiendo la saliva filtrada en el tubo.
c. Coloque, en una serie de 5 a 10 tubos de ensayo, dos gotas de lugol en cada uno.
d. En otro tubo coloque 10mL de suspensin acuosa de almidn y adale 1ml de saliva y
agite.
e. Cada 20 segundos pase 1mL de la mezcla almidn ms saliva a cada uno de los tubos
de la serie, hasta que no se produzca coloracin. Observe la variacin de los colores a lo
largo de la serie.
f. Caliente a ebullicin otra muestra de saliva y repita todo el experimento.

RESULTADOS OBTENIDOS EN LA PRCTICA

Biomolcula

Monosacrido

solucin

Exp 1: Glucosa

Calor

si

reactivo

Benedict

Exp 1: suspensin
de almidn
Exp2: macerado de
pan

De azul a
marron
anaranjao
Azul- verde naranja

Exp 2: fruta
Polisacrido

Cambio de
color

si

no

Lugol

lugol

De azul a
violeta
De azul a
violeta
oscuro

protenas

Exp 1:clara de
huevo

no

Sulfato de
cobre+Hidrx
ido de sodio

Nata blanca
en la
superficie

Sulfato de
cobre

Trasparente
azul palido

Hidrxido de
sodio

Morado claro

Sudan

Rojoanaranjado

Exp:2 gelatina sin

sabor

*gelatina sin sabor

lpidos

Exp1 :aceite
vegetal

no

Exp2:grasa animal

Colesterol

Exp1: yema de
huevo

no

*anhdrido
actico.

Amarillo
claro

*cloroformo
*cido
sulfrico
concentrado.

MONOSACARIDOS

Amarillo claro
a negro

Figura 1/1 glucosa y

reactivo de benedict

Figura 1/2 fruta y reactivo

de benedict tomando un color

Tomando color marrn anaranjado.

Naranja .calentado a punto de

Calentado a punto de ebullicin

Ebullicin

POLISACARIDOS

Figura 1/1 macerado de pan y

2 gotas de Lugol tomando un color violeta

Figura 1/2 solucin de almidn y

2gotas de lugol tomando un color violeta
Oscuro calentado a punto de ebullicin

PROTEINAS
CLARA DE HUEVO

Figura 1/1

Figura 1/2

Imagen 1/1Clara de huevo diluida

a la misma solucin de clara de huevo

Se agreg dos gotas de sulfato

y (CuSO4) se le agrego 1ml de

De cobre al 5 % (CuSO4)

dixido de sodio al 10% se observ que

Dando como resultado una

la solucin se torn de color morado

Especie de nata blanca

GELATINA SIN SABOR

Figura 1/1Gelatina sin sabor y

de

Figura 1/2gelatina sin sabor y 1ml

Dos gotas de sulfato de cobre al 5 %

dixido de sodio al 10% se torna de

(CuSO4) tomando un color azul plido

color morado claro

LIPIDOS

Figura1/1 reactivo sudan lll ms agua

Figura 1/2 reactivo de sudan lll

Y aceite vegetal se observ que el sudan

ms grasa animal .se observo

No se mescla con el agua .en cambio si

que el sudan se disolvi

Se mesclo con el aceite

completamente con la grasa animal

REACCION DE LIEBERMAN BURCHARD PARA COLESTEROL

Figura 1/1 mescla de yema de huevo

Figura1/2 la misma mescla de yema de

Ms 10ml de cloroformo y 1ml de

huevo ms el cloroformo y se adiciono

Anhdrido actico se torn amarillo plido

4 gotas de cido sulfrico se torn negro

ENZIMAS

Figura 1/1 mescla de saliva ms 10ml de

Suspensin acuosa de almidn y una gota
De lugol, despus de ser expuesto al calor
Se torn de color claro

DISCUSION
Monosacridos:
Los monosacridos o azcares simples son los glcidos ms sencillos, no se
hidrolizan, es decir, no se descomponen en otros compuestos ms simples.
Poseen de tres a siete tomos de carbono1 y su frmula emprica es (CH2O)n,
donde n 3. Se nombran haciendo referencia al nmero de carbonos (3-7), y
terminan con el sufijo -osa. El principal monosacrido es la glucosa
En la muestra que se prepar de glucosa. Y, fruta madura (mango) ms la de
Benedict de color azul claro porque contiene sulfato de cobre. Cuando se mezcla y
se calienta con un azcar, como la glucosa, la cual tiene electrones disponibles
para donar, el cobre acepta estos electrones y se reduce, con lo cual se vuelve
marrn anaranjado. Durante este proceso, el ion cobre azul (II) se reduce a ion
cobre rojo (I). Mientras que el cobre se reduce, la glucosa dona un electrn y se

oxida. Como la glucosa es capaz de reducir al cobre en la solucin de Benedict, la

llamamos azcar reductor. Por esta razn se produjo el cambio de color de verde a
naranja

Polisacridos
Un polisacrido es un polmero que est compuesto por una extensa sucesin de
monosacridos, unidos entre s a travs de enlaces glucosricos. Los
polisacridos pueden incluirse dentro del grupo de los hidratos de carbono, que
tambin son conocidos como carbohidratos o glcidos.
Estos polisacridos cumplen con diferentes funciones en el organismo:
contribuyen al desarrollo de las estructuras orgnicas, permiten almacenar energa
y actan como un mecanismo de proteccin frente a ciertos fenmenos
En la muestra de polisacridos se observ que el cambio de color de azul a
violeta se da porque Esta reaccin es el resultado de la formacin de cadenas de
poli yoduro a partir de la reaccin del almidn con el yodo presente en la solucin
de un reactivo llamado Lugol. La amilasa, el componente del almidn de cadena
lineal, forma hlices donde se juntan las molculas de yodo, formando un color
azul oscuro a negro. La amilopectina,1 el componente del almidn de cadena
ramificada, forma hlices mucho ms cortas, y las molculas de yodo son
incapaces de juntarse, obtenindose un color entre naranja y amarillo. Al romperse
o hidrolizarse el almidn en unidades ms pequeas de carbohidrato, el color azulnegro desaparece. En consecuencia, esta prueba puede determinar el final de una
hidrlisis,.
Protenas
Una protena es una cadena de aminocidos cuya secuencia es especfica. Se
forman en los ribosomas por lectura de los genes que llevan la informacin de la
secuencia concreta de aminocidos que da lugar a una determinada protena.
Esta cadena de aminocidos agrega otros tomos o molculas como cobre, zinc,
hierro, etc, para dar lugar a la protena final que comienza a plegarse sobre s
misma para adoptar la conformacin espacial necesaria para realizar
correctamente su funcin biolgica. La prdida de esta conformacin espacial
hace que la protena no pueda cumplir con su funcin biolgica en el organismo y
es lo que se conoce como desnaturalizacin de protenas. Por ejemplo, un enzima
pierde su funcin cataltica.La desnaturalizacin de protenas es consecuencia de
algn factor externo como acidez del medio, temperatura, etc. Es importante saber
que la desnaturalizacin de una protena no afecta a lo que se conoce cmo
estructura primaria, esto es, la secuencia de aminocidos base de la protena.
Dado en este caso la protena de la clara de huevo se desnaturalizo cambiando su
color de transparente natural a formarse especies de nubes blancas en la
superficie.

Lipidos
El Sudan no reacciona con los lpidos de ninguna forma.
Se trata de un colorante rojo o rojo-amarillento que tiene una alta afinidad por
lpidos, graso, triglicridos y ceras. Cuando me refiero a alta afinidad, es que se
une a ste tipo de sustancias qumicas de forma no covalente. No hay un enlace
qumico como tal entre los lpidos y el sudn. Sino una serie de interacciones de
tipo lipoflico (ya que tanto el colorante como la sustancia a la que se une son de
baja polaridad).
Por lo tanto el Sudn sirve para indicar si en una muestra dada (alimento, extracto,
tejido etc), sta tiene entre sus constituyentes una cierta cantidad de lpidos o
grasas.

Colesterol

El colesterol es una sustancia cerosa, de tipo grasosa, que existe naturalmente en

todas las partes del cuerpo. El cuerpo necesita determinada cantidad de colesterol
para funcionar adecuadamente. Pero el exceso de colesterol en la sangre,
combinado con otras sustancias, puede adherirse a las paredes de las arterias.
Este es un mtodo colorimtrico, para identificacin del colesterol, la base es la
formacin de un cromo foro al final de la reaccin. La reaccin del anhdrido
actico es:
C27-H46-O + [CH3-CO]2-O + H2So4= C29H4802 = el colestahexano-cido
Sulfrico.
Que absorbe energa en la zona de la luz visible, a 410 nm.
Enzimas
Esa coloracin producida por el Lugol se debe a que el yodo se introduce entre las
espiras de la molcula de almidn. Por lo tanto, no es una verdadera reaccin
qumica, sino que se forma un compuesto de inclusin que modifica las
propiedades fsicas de esta molcula, apareciendo la coloracin azul violeta. Este
complejo es sensible a la temperatura, ya que si se calienta el tubo, el color
desaparece. Esto se debe a que las espiras del almidn se "desarman", por as
decirlo, y el yodo se libera. Una vez fro, las espiras se reorganizan y se vuelve a
ver el color.
en la saliva tenemos presente una enzima que se denomina amilasa cuya accin
es hidrolizar el almidn por lo tanto al almidn en presencia de esta enzima se va
a hidrolizar a glucosa y por lo tanto no va a haber reaccin positiva con el lugol ya
que el almidn ya no est mas

CONCLUSION

En el presente estudio se confirm lo siguiente.

*Mediante la reaccin de Benedict podemos identificar azcares reductores
* Las enzimas son protenas que catalizan todas las reacciones bioqumicas
*Con la reaccin del Lugol podemos identificar de modo general polisacridos
*Se utiliz anhdrido actico y cido sulfrico para el punto del colesterol
*Se expusieron muchos experimentos al calor y se notaron muchos cambios en
su color

CUESTIONARIO

Que es un azcar reductor?

Son aquellos azcares que poseen su grupo carbonilo (grupo funcional) intacto, y
que a travs del mismo pueden reaccionar como reductores con otras molculas.
Todos los monosacridos son azcares reductores, ya que al menos tienen un
-OH hemiacetlico libre, por lo que dan positivo a la reaccin con reactivo de
Fehling, a la reaccin con reactivo de Tollens, a la Reaccin de Maillard y la
Reaccin de Benedict.
-Azcares reductores: Los monosacridos y muchos disacridos, (excepto
Sacarosa y Trehalosa).
Monosacridos: Ej Glucosa, Fructosa

Disacridos reductores Ej: Lactosa, Maltosa, Isomaltosa, Celobiosa, etc

-Azcares no reductores: Oligosacridos y Polisacridos.
Oligosacridos: molculas formadas por 2 a 10 monosacridos.
Polisacridos molculas formadas por ms de 10 monosacridos. Ej almidn,
Celulosa, Glucgeno, Ac. Hialurnico.
Cules son los componentes del reactivo de Benedict?
El reactivo de Benedict consta de:

Sulfato cprico;

hidrato de sulfato de sodio y o cloruro

Carbonato Anhidro de Sodio.

Adems se emplea NaOH para alcalinizar el medio.

Que reaccin se produce cuando se calienta el tubo de ensayo que contiene el

reactivo de Benedict y glucosa?
Una forma rpida para probar la presencia de glucosa en una muestra es agregar
solucin de Benedict, La solucin de Benedict es un lquido de color azul claro en
su estado puro, pero cuando se agrega a la glucosa y se calienta, se vuelve rojo
ladrillo. La solucin de Benedict tambin puede detectar la presencia de otros
azcares de estructura similar.

Cul es la naturaleza del precipitado de color rojo ladrillo que se forma en la

anterior reaccin?
El fundamento de esta reaccin radica en que en un medio alcalino, el ion cprico
(otorgado por el sulfato cprico) es capaz de reducirse
Cul es la composicin qumica del lugol?
La composicin qumica es la siguiente:
1. Iodo...5 gramos
2. Ioduro de potasio...10 gramos.

3. agua destilada......85 gramos. O cantidad suficiente para 100 ml.

1 mililitro de lugol= 130 mg. de Iodo.
A qu se debe la desaparicin del color azul violceo de la solucin de almidn
cuando se calienta hasta ebullicin?
El color azul -ndigo desaparece momentneamente ya que al calentarse la
solucin, el complejo de Yodo con Almidn que se forma en fro, se desnaturaliza.
Por qu aparece nuevamente el color cuando la anterior solucin se enfra?

El proceso de formacin del complejo colorido es reversible, por lo que al enfriarse

la solucin, se vuelve a estabilizar y se observa como reaparicin del color azul ndigo.
En qu consiste la reaccin del biuret?
La reaccin o prueba de Biuret es un mtodo que detecta la presencia de
compuestos con dos o ms enlaces peptdicos y, por tanto, sirve para todas las
protenas y pptidos cortos.
El reactivo del biuret (sulfato de cobre en una base fuerte) reacciona con los
enlaces del pptido y cambia el color cuando entra en contacto con otra sustancia.
En qu consiste la reaccin xantoproteica?
La reaccin xantoproteca es un mtodo que se puede utilizar para determinar la
cantidad de protena soluble en una solucin, empleando cido ntrico
concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con
aminocidos portadores de grupos aromticos, especialmente en presencia de
tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali vira a un color
amarillo oscuro.

Que es el Sudan III?

El Sudan III es solo una solucin que se usa en laboratorio para el
reconocimiento de lpidos (grasas), por lo tanto es soluble en ellas
predominantemente utilizado para colorear triglicridos en secciones congeladas
de micrtomos, pero tambin pueden colorear algunos lpidos en secciones con
parafina. Se usa al 0.15%, en alcohol etlico.

BIBLIOGRAFIA
http://www.ibiblio.org/virtualcell/index.ht m
http://www.acdlabs.com/
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query. fcgi?DB=pubmed