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Tcnicas de Procesamiento
Qu es la Tcnica Histolgica?
Clulas NO procesadas
Se observan en microscopio de contraste de
fases o de campo oscuro:
Clulas de la sangre
Clulas de descamacin
Clulas Procesadas
Obtencin de la muestra
Fijacin
Deshidratacin
Aclaracin o diafanizacin
Infiltracin
Inclusin
Corte
Desparafinizacin
Rehidratacin
Tincin
Deshidratacin
Aclaracin
Montaje
Obtencin de la muestra
Ser vivo: biopsia
Circunstancias o condiciones:
De rutina
Transoperatoria
Procedimientos:
Corte
Raspado: de sistemas epiteliales citologia exfoliativa (cervico-vaginal citobrush o
abatelenguas)
Legrado
Puncin
Endoscopia
Cadver: necropsia
FIJACIN
Conservacin de la estructura, evitar
cambios postmortem, como la autolisis, la
putrefaccin o la proliferacin
Qumica:
desnaturaliza
protenas
proteolticas, estabiliza membranas, inactiva
enzimas (autolisis), antispticos (evita
proliferacin de microorganismos)
Fsica: congelacin
FIJACIN
Los fijadores mas usados son:
Formol (formaldehdo) al 10%: endurece el tejido y tiene
capacidad de penetracin al espacio intracelular, buen poder
fijador; se usa de 12 a 24 horas (ideal); se utiliza un volumen
de 1 a 20 veces el tamao de la muestra.
Glutaraldehido, tetraxido de osmio (para ME)
Alcohol Etlico al 50% o 70%
Deshidratacin
Es gradual para evitar la refraccin
Se utiliza etanol o alcohol etlico al 30%,
50%, 70% y 100%
Aclaramiento o diafanizacin
Se utiliza como ayudante para observar
con mayor calidad los compartimientos
celulares
Se utilizan solventes como: Xilol, Toluol o
Cloroformo (Agentes Aclarantes)
Se dan 2 baos al menos
Infiltracin
INCLUSIN
Solubles en agua: gelatina, carbowax,
metacrilato de glicol
Solventes orgnicos: parafina, celoidina
CORTE
Se utiliza el micrtomo
Van de 4 a 8 micras por lo general
Desparafinizacin
Rehidratacin
TINCIN
Se utiliza para dar contaste a la muestra
Monocrmica (1 colorante) Azul de toluidina
TINCIN
Hematoxilina: azul-morado, base
(basofilia). Ncleos (cido y basofilo)
Eosina: rosa-naranja, cido (acidofilia)
citoplasma (bsico y acidofilo)
TINCIN
Ortocromasia: se respeta el color del
colorante
Metacromasia: cambio del color original del
colorante (tonalidades) Vg. Azul de Toluidina
Pancromasia: mezcla de varias colorantes
neutros, da como resultado varios colores y
tonalidades Vg. Wright y Giemsa
Deshidratacin
Aclaracin
MONTAJE
Se coloca un cubreobjetos a la muestra
junto con Resina Sinttica o Blsamo de
Canad, como pegamento formando una
capa transparente y adhesiva.
Para lpidos:
cido perydico de Schiff (PAS); Rojo-magenta para glucgeno, Rojo para glucoprotenas
Carmn de Best: glucogeno
HISTOQUMICA ENZIMTICA
Detecta un grupo de enzimas especficas
(la misma enzima)
Se va a observar en forma de precipitado
denominado MARCA
Enzima + sustrato = producto(s) +
revelador = MARCA
INMUNOMARCAJE
Se utilizan anticuerpos, se identifican molculas altamente
especficas
Inmunoflorescencia
se utiliza un compuesto fluorescente
muestra fluorescentes los anticuerpos a los cuales se les
pega el antigeno
Puede ser directa: 1 antgeno por 1 anticuerpo
Puede ser indirecta: 1 antgeno por varios anticuerpos
Inmunohistoqumica
se utiliza para marcar enzimas
Pnfigo vulgar
IHQ indirecta
IHQ negativa
IHQ positiva
CASO CLNICO
Mujer de 58 aos
Lesin difusa en mama derecha que infiltra piel y
complejo arola pezn
Her2-neu
DIAGNSTICO
IMPREGNACIONES METLICAS O
ARGNTICAS
En lugar de usar tincin de color, se
utilizan sales de Oro y Plata (tonos de
caf a negro)
Se utilizan para procesar muestras de:
tejido nervioso (se tien bien las diferentes
clulas gliales)
ULTRACENTRIFUGACIN DIFERENCIAL
Se utiliza para separar organelos
Despus de la centrifugacin se obtiene un sedimento y un
sobrenadante
Ejemplo:
1. A la primera centrifugacin quedan: en sedimento clulas
completas y en el sobrenadante mitocondrias y otros
organelos
2. Al repetir el proceso en el sedimento quedan los ncleos y
en el sobrenadante los dems organelos
3. Al repetir el proceso en el sedimento quedan mitocondrias
y en el sobrenadante ribosomas