INTRODUCCION

El microscopio compuesto, que se ha hecho de uso general a partir de

mediados del siglo XIX y que fue de importancia crucial para la evolucin de la
microbiologa como ciencia, es todava, con ciertas variaciones, el principal
apoyo de la investigacin microbiolgica rutinaria.
Este tipo de microscopio est formado bsicamente por una parte mecnica y
una parte ptica y es capaz de conseguir aumentos considerablemente
mayores que el microscopio construido con una sola lente. Este ltimo, llamado
microscopio simple, se usa principalmente en el formato de lupa.
Los elementos mecnicos bsicos son el pie, que es el soporte del
microscopio, la columna, en la que se apoyan las restantes piezas, el tubo,
que es el elemento de unin entre el ocular y el revlver (pieza giratoria que
soporta los objetivos), la platina, sobre la que se apoya la preparacin a
observar, y los tornillos Micromtrico y Macromtrico que se utilizan para
enfocar la preparacin (el primero es de pequeo recorrido, para movimientos
de pequea amplitud, y el segundo de largo recorrido, para movimientos de
gran amplitud.
En cuanto a la parte ptica, un microscopio compuesto tiene dos lentes o
sistemas de lentes: el objetivo, situado cerca del objeto que se observa,
proyecta una imagen ampliada del objeto observado en direccin al ocular,
que est colocado cerca del ojo y acta, a modo de lupa, ampliando la imagen
que produce el objetivo, y el condensador, cuya misin es concentrar la luz
sobre la preparacin y permitir manipular su intensidad.
La ampliacin total aportada por el conjunto objetivo-ocular es igual al producto
de multiplicar la capacidad de aumento del objetivo por la del ocular; as: la
mayor parte de los microscopios usados en microbiologa tienen oculares de
diez aumentos (abreviadamente, x10) y objetivos de aumentos diversos,
habitualmente x10 (aumento total, x100), x40 (total, x400), y x90 x100
(objetivos de inmersin en aceite; x900 x1000 total).

Las lentes de menor aumento se utilizan para rastrear la preparacin buscando

objetos de inters, el objetivo de 40 aumentos permite la observacin detallada
de los microorganismos grandes tales como algas, protozoos y hongos, y los
objetivos de 90 100 aumentos se emplean para ver las bacterias y los
pequeos microorganismos eucariotas.
Adems del aumento, una propiedad importante de un microscopio es su poder
resolutivo. Este es la capacidad de mostrar distintos y separados dos puntos
muy cercanos; y por tanto, cuanto mayor sea el poder resolutivo, mayor ser la
definicin con que podremos observar un objeto. Los microscopios de gran
poder resolutivo son especialmente buenos para ver pequeas estructuras.
El poder resolutivo de un microscopio compuesto depende de la longitud de
onda utilizada y de una propiedad ptica de la lente conocida como apertura
numrica. Como la longitud de onda habitualmente est fijada, la resolucin de
un objeto es funcin de la apertura numrica; cuanto mayor sea la apertura, el
objeto resuelto ser ms pequeo. Hay una correspondencia aproximada entre
el aumento de un objetivo y su apertura numrica, de tal modo que las lentes
con mayores aumentos habitualmente tendrn mayores aperturas numricas.
(El valor de la apertura est marcado al lado de la lente)
El sistema de iluminacin de un microscopio es tambin de considerable
importancia, especialmente cuando se utilizan grandes aumentos. La luz que
entra en el sistema debe enfocarse sobre la preparacin para que la imagen se
traslade de forma adecuada al objetivo y llegue con la mayor calidad posible al
ojo del observador a travs del ocular. En los microscopios antiguos, la fuente
de luz era externa, y se utilizaba un espejo, situado en el propio microscopio,
para reflejar esa luz externa hacia la preparacin y los objetivos. Actualmente
se utiliza un sistema de lentes, incorporado al propio microscopio, llamado
condensador. Elevando o bajando el condensador puede alterarse el plano del
foco de la luz y elegirse una posicin que consiga el foco preciso. El
condensador tiene tambin un diafragma iris, que controla el dimetro del
crculo de luz que pasa por el sistema.

Lo que se busca con este diafragma iris no es controlar la intensidad de la luz

que alcanza el objeto, sino asegurar que la luz que pasa por el sistema
condensador ocupe justamente el objetivo. Si el diafragma iris es demasiado
grande, parte de la luz pasar no slo al objetivo sino tambin alrededor de l,
y no se utilizar. Si la luz es demasiado brillante, no deber reducirse alterando
la posicin del condensador o del diafragma iris sino usando filtros de
neutralizacin, o disminuyendo el voltaje de la lmpara. Nunca se insistir lo
suficiente en que el ajuste apropiado de la luz es crucial para la buena
microscopa, especialmente a los mayores aumentos.
Los tornillos macro/micromtrico estn engarzados con la platina que soporta
las muestras por medio de un mecanismo de cremallera y se utilizan para subir
y bajar dicha platina (acercarla o alejarla del objetivo) con el fin de enfocar la
imagen que se forma en el ocular. El tornillo Macromtrico maneja un
engranaje de paso largo, diseado para efectuar movimientos de gran amplitud
y largo recorrido, mientras el tornillo micromtrico controla un engranaje de
paso corto, especial para movimientos de pequea amplitud y pequeo
recorrido y se utiliza para el enfoque fino de la imagen.

HISTORIA
El ser humano posee el sentido de la vista desarrollado. Sin
embargo, no se pueden ver a simple vista cosas que midan
menos de una dcima de milmetro. Y muchos de los
avances en qumica, biologa y medicina no se hubieran
logrado si antes no se hubiera inventado el microscopio.
El primer microscopio fue inventado, por una casualidad en
experimentos con lentes, lo que sucedi de similar manera
pocos aos despus con el telescopio de Hans Lippershey
(1608). Entre 1590 y 1600, el ptico holands Zacharas
Janssen (1580-1638) invent un microscopio con una
especie de tubo con lentes en sus extremos, de 8 cm de largo soportado por
tres delfines de bronce; pero se obtenan imgenes borrosas a causa de las
lentes de mala calidad. Estos primeros microscopios aumentaban la imagen
200 veces. Estos microscopios pticos no permiten agrandar la imagen ms de
2000 veces. En la actualidad los de efecto tnel los amplan 100 millones de
veces.
Galileo hizo un microscopio en el Siglo XVII.
Durante el siglo XVII muchos estudiosos de las lentes y los microscopios
hicieron toda clase de pruebas y ensayos para lograr un resultado de mayor
precisin. Entre los intentos fue el del italiano Marcello Malpighi (1628-1694)
que en 1660 logr ver los vasos capilares de un ala de murcilago.
El ingls Robert Hooke (1635-1701) hizo mltiples experiencias que public en
el libro "Micrographia"(1665) con dibujos de sus observaciones. Sus aparatos
usaban lentes relativamente grandes.
El holands Antonie van Leeuwenhoek (1632-1723), perfeccion el microscopio
usando lentes pequeas, potentes, de calidad, y su artefacto era de menor
tamao. Alrededor del 1676 logr observar la cantidad de microorganismos que
contena el agua estancada. Tambin descubri los espermatozoides del

semen humano; y ms adelante, en 1683, las bacterias. Durante las siguientes

dcadas los microscopios fueron creciendo en precisin y complejidad y fueron
la base de numerosos adelantos cientficos.
Pero recin en el Siglo XX lleg el gran cambio, con el microscopio electrnico,
que sustituy la luz por electrones; y las lentes por campos magnticos. El
primer microscopio electrnico lo construy el fsico canadiense James Hillier
en 1937 y poda ampliar las imgenes hasta 7000 veces. Se continu
perfeccionando hasta llegar a aumentar unos dos millones de veces.
En 1981 surgi el microscopio de efecto tnel (MET), que surgi aplicando la
mecnica cuntica, y logrando atrapar a los electrones que escapan en ese
efecto tnel, para lograr una imagen ultradetallada de la estructura atmica de
la materia con una espectacular resolucin, en la que cada tomo se puede
distinguir de otro, y que ha sido esencial para el avance -a su vez- de la
microelectrnica moderna.

Microscopio compuesto
Un microscopio compuesto es un microscopio ptico que tiene ms de un
lente de objetivo. Los microscopios compuestos se utilizan especialmente para
examinar objetos transparentes, o cortados en lminas tan finas que se
transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las imgenes de objetos y
organismos no visibles a simple vista. El microscopio ptico comn est
conformado por tres sistemas:

El sistema mecnico est constituido por una palanca que sirve para
sostener, elevar y detener los instrumentos a observar.

El sistema de iluminacin comprende un conjunto de instrumentos,

dispuestas de tal manera que producen las ranuras de luz.

El sistema ptico comprende las partes del microscopio que permiten un

aumento de los objetos que se pretenden observar mediante filtros
llamados "de antigel subsecuente".

Parte mecnica del microscopio

La parte mecnica del microscopio comprende el pie, el tubo, el revlver, el
asa, la platina, el carro y el tornillo micromtrico. Estos elementos sostienen la
parte ptica y de iluminacin; adems, permiten los desplazamientos
necesarios para el enfoque del objeto.

El pie y soporte: Constituye la base sobre la que se apoya el

microscopio y tiene por lo general forma de Y o bien es rectangular.

La columna o brazo: Llamada tambin asa, es una pieza en forma de

C, unida a la base por su parte inferior mediante una bisagra,
permitiendo la inclinacin del tubo para mejorar la captacin de luz
cuando se utilizan los espejos. Sostiene el tubo en su porcin superior y
por el extremo inferior se adapta al pie.

El tubo: tiene forma cilndrica. El tubo se encuentra en una carretera

superior de la columna mediante un sistema de cremalleras, las cuales
permiten que el tubo se mueva mediante los tornillos.

El tornillo Macromtrico: girando este tornillo, asciende o desciende el

tubo del microscopio, deslizndose en sentido vertical gracias a un
mecanismo de cremallera. Estos movimientos largos permiten el
enfoque rpido de la preparacin.

El tornillo micromtrico: mediante el ajuste fino con movimiento casi

imperceptible que produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el
enfoque exacto y ntido de la preparacin. Lleva acoplado un tambor
graduado en divisiones de 0,001 mm., que se utiliza para precisar sus
movimientos y puede medir el espesor de los objetos.

La platina: es una pieza metlica plana en la que se coloca la

preparacin u objeto que se va a observar. Presenta un orificio, en el eje
ptico del tubo, que permite el paso de los rayos luminosos a la
preparacin. La platina puede ser fija, en cuyo caso permanece inmvil;
en otros casos puede ser giratoria; es decir, mediante tornillos laterales
puede centrarse o producir movimientos circulares.

Las pinzas: son dos piezas metlicas que sirven para sujetar la
preparacin. Se encuentran en la platina.

El revlver: es una pieza giratoria provista de orificios en los que se

enroscan los objetivos. Al girar el revlver, los objetivos pasan por el eje
del tubo y se colocan en posicin de trabajo, lo que se nota por el ruido
de un pin que lo fija.

Sistema ptico
El sistema ptico es el encargado de reproducir y aumentar las imgenes
mediante el conjunto de lentes que lo componen. Est formado por el ocular y
los objetivos. El objetivo proyecta una imagen de la muestra que el ocular luego
ampla.

El ocular: se encuentra situado en la parte superior del tubo. Su nombre

se debe a la cercana de la pieza con el ojo del observador. Tiene como

funcin aumentar la imagen formada por el objetivo. Los oculares son

intercambiables y sus poderes de aumento van desde 5X hasta 20X.
Existen oculares especiales de potencias mayores a 20X y otros que
poseen una escala micromtrica; estos ltimos tienen la finalidad de
medir el tamao del objeto observado.

Los objetivos: se disponen en una pieza giratoria denominada revlver

y producen el aumento de las imgenes de los objetos y organismos, y,
por tanto, se hallan cerca de la preparacin que se examina. Los
objetivos utilizados corrientemente son de dos tipos: objetivos secos y
objetivos de inmersin.
o Los objetivos secos se utilizan sin necesidad de colocar
sustancia alguna entre ellos y la preparacin. En la cara externa
llevan una serie de ndices que indican el aumento que producen,
la abertura numrica y otros datos. As, por ejemplo, si un objetivo
tiene estos datos: plan 40/0,65 y 160/0,17, significa que el
objetivo es planacromtico, su aumento 40 y su apertura
numrica 0,65, calculada para una longitud de tubo de 160 mm.
El nmero de objetivos vara con el tipo de microscopio y el uso a
que se destina. Los aumentos de los objetivos secos ms
frecuentemente utilizados son: 4X, 10X, 20X, 40X y 60X.
o El objetivo de inmersin est compuesto por un complicado
sistema de lentes. Para observar a travs de este objetivo es
necesario colocar una gota de aceite de cedro entre el objetivo y
la preparacin, de manera que la lente frontal entre en contacto
con el aceite de cedro. Generalmente, estos objetivos son de
100X y se distingue por uno o dos crculos o anillos de color
negro que rodea su extremo inferior.

Sistema de Iluminacin

Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial de tal manera
que ilumine la preparacin u objeto que se va a observar en el microscopio de
la manera adecuada. Comprende los siguientes elementos:

Fuente de iluminacin: se trata clsicamente de una lmpara

incandescente de tungsteno sobrevoltada; en versiones ms modernas
con leds. Por delante de ella se sita un condensador (una lente
convergente) e, idealmente, un diafragma de campo, que permite
controlar el dimetro de la parte de la preparacin que queda iluminada,
para evitar que exceda el campo de observacin produciendo luces
parsitas.

El espejo: necesario si la fuente de iluminacin no est construida

dentro del microscopio y ya alineada con el sistema ptico, como suele
ocurrir en los microscopios modernos. Suele tener dos caras: una
cncava y otra plana. Goza de movimientos en todas las direcciones. La
cara cncava se emplea de preferencia con iluminacin artificial, y la
plana, para natural (luz solar). Los modelos ms modernos no poseen
espejos sino una lmpara que cumple la misma funcin que el espejo.

Condensador: est formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es

concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la preparacin,
formando un cono de luz con el mismo ngulo que el del campo del
objetivo. El condensador se sita debajo de la platina y su lente superior
es generalmente planoconvexa, quedando la cara superior plana en
contacto con la preparacin cuando se usan objetivos de gran abertura
(los de mayor ampliacin); existen condensadores de inmersin, que
piden que se llene con aceite el espacio entre esa lente superior y la
preparacin. La abertura numrica mxima del condensador debe ser al
menos igual que la del objetivo empleado, o no se lograr aprovechar
todo su poder separador. El condensador puede deslizarse verticalmente
sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo, bajndose para su
uso con objetivos de poca potencia.

Diafragma: el condensador est provisto de un diafragma-iris, que

regula su abertura para ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de
manera irregular, para aumentar el contraste, lo que se hace cerrndolo
ms de lo que conviene si se quiere aprovechar la resolucin del
sistema ptico.

Trayectoria del rayo de luz a travs del microscopio

El haz luminoso procedente de la lmpara pasa directamente a travs del
diafragma al condensador. Gracias al sistema de lentes que posee el
condensador, la luz es concentrada sobre la preparacin a observar. El haz de
luz penetra en el objetivo y sigue por el tubo hasta llegar al ocular, donde es
captado por el ojo del observador.

Propiedades del microscopio

Poder separador. Tambin llamado a veces poder de resolucin, es una

cualidad del microscopio, y se define como la distancia mnima entre dos
puntos prximos que pueden verse separados. El ojo normal no puede
ver separados dos puntos cuando su distancia es menor a una dcima
de milmetro. En el microscopio viene limitado por la longitud de onda de
la radiacin empleada; en el microscopio ptico, el poder separador
mximo conseguido es de 0,2 dcimas de micrmetro (la mitad de la
longitud de onda de la luz azul), y en el microscopio electrnico, el poder
separador llega hasta 10 .

Poder de definicin. Se refiere a la nitidez de las imgenes obtenidas,

sobre todo respecto a sus contornos. Esta propiedad depende de la
calidad y de la correccin de las aberraciones de las lentes utilizadas.

Ampliacin del microscopio. En trminos generales se define como la

relacin entre el dimetro aparente de la imagen y el dimetro o longitud
del objeto. Esto quiere decir que si el microscopio aumenta 100
dimetros un objeto, la imagen que estamos viendo es 100 veces mayor
linealmente que el tamao real del objeto (la superficie de la imagen
ser 1002, es decir 10.000 veces mayor). Para calcular el aumento que
est proporcionando un microscopio, basta multiplicar los aumentos
respectivos debidos al objetivo y el ocular empleados. Por ejemplo, si
estamos utilizando un objetivo de 45X y un ocular de 10X, la ampliacin
con que estamos viendo la muestra ser: 45X x 10X = 450X, lo cual
quiere decir que la imagen del objeto est ampliada 450 veces, tambin
expresado como 450 dimetros.

Campo del microscopio

Se denomina campo del microscopio al crculo visible que se observa a travs
del microscopio. Tambin podemos definirlo como la porcin del plano visible
observado a travs del microscopio. Si el aumento es mayor, el campo
disminuye, lo cual quiere decir que el campo es inversamente proporcional al
aumento del microscopio. Para medir el dimetro del campo del microscopio
con cualquiera de los objetivos se utiliza el micrmetro, al que se har
referencia en el siguiente punto.
MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO PTICO

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la

platina completamente. Si el microscopio se recogi correctamente en el
uso anterior, ya debera estar en esas condiciones.
2. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas
metlicas.
3. Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o
colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparacin es de bacterias.
4. Para realizar el enfoque:
1. Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin,
empleando el tornillo macromtrico. Esto debe hacerse mirando
directamente y no a travs del ocular, ya que se corre el riesgo de
incrustar el objetivo en la preparacin pudindose daar alguno
de ellos o ambos.
2. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando
lentamente el objetivo de la preparacin con el macromtrico y,
cuando se observe algo ntida la muestra, girar el micromtrico
hasta obtener un enfoque fino.
b. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y
suele ser suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el
enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen,
es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la
operacin desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca
distancia de la preparacin y por ello es fcil que ocurran dos tipos de
percances:

incrustarlo

en

la

preparacin

si

se

descuidan

las

precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersin si se

observa una preparacin que ya se enfoc con el objetivo de inmersin.
c. Empleo del objetivo de inmersin:
1.

Bajar totalmente la platina.

2. Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de

luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habr
que echar el aceite.
3. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio
camino entre ste y el de x40.
4. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo
de luz.
5. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del
objetivo de inmersin.
6. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta
que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como
si la gota ascendiera y se adosara a la lente.
7. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de
trabajo entre el objetivo de inmersin y la preparacin es mnima,
aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es
muy grande.
8. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin,
ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues
se manchara de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo,
hay que bajar la platina y repetir la operacin desde el paso 3.
9. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la
platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el
revlver. En este momento ya se puede retirar la preparacin de
la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersin en
posicin de observacin.
10. Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel
especial para ptica. Comprobar tambin que el objetivo 40x est
perfectamente limpio.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento
en posicin de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la
platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su
funda.
2. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo
cubierto con su funda para evitar que se ensucien y daen las lentes. Si
no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro
de un armario para protegerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas
muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el
microscopio.
5. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite
que queda en el objetivo con pauelos especiales para ptica o con
papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasar el
papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha
llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una
mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo
de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden
daar las lentes y su sujecin.
6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico,
micromtrico, platina, revlver y condensador).
7. El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la
mirada a la preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra.
No cambiar nunca de objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni
hacerlo mientras se est observando a travs del ocular.

8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre

ella algn lquido, secarlo con un pao. Si se mancha de aceite, limpiarla
con un pao humedecido en xilol.
9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la
sesin prctica y, al acabar el curso, encargar a un tcnico un ajuste y
revisin general de los mismos.
Fundamentos matemticos de la lupa

Sistema de la lupa:
La lupa es un lente positiva destinado a la observacin visual de un objeto
situado en el plano focal anterior de la lente, las caractersticas de esta son el
aumento visual y el campo visual 2l
Caso general del aumento de una lupa.

De la figura de desprende que:

Du = 2 (f + Xo) tg W + Do (1)
Donde tg w = 1/f

Por consiguiente:

(2)
Por eso cuando la lupa se aparta del ojo, menor es el campo visual.
Adems calculemos el aumento visual de la lupa
De la figura anterior:

(3)
Adems:

(4)
De 3 y 4:

(5)
Que es el aumento visual de la lupa.

Piezas pticas de los microscopios:

Constan de los siguientes, objetivos, oculares, condensadores y colectores. El
objetivo y el ocular crean el aumento til del objeto, es decir, forman el sistema
de observacin: el condensador y el colector constituyen el sistema de
iluminacin del microscopio.

Caractersticas pticas de los microscopios

El microscopio, como la lupa, se emplea para observar objetos cercanos pero,
a distincin de la lupa, este tiene mayor poder separador.

El sistema ptico del microscopio transforma el haz de luz homocntrico

divergente que entra al sistema en un haz de rayos paralelos que emergen de
el.

Figura 2) sistema ptico del microscopio.

El sistema ptico tiene 2 etapas de aumento, la primera el objetivo 1 y la
segunda el ocular 2 .El objetivo 1 asegura la obtencin de la imagen real l del
objeto l en el plano focal anterior del ocular 2 mediante el cual esta imagen se
mira como una lupa (en el plano focal anterior del ocular se puede colocar una
escala que se ve por el ocular para valorar las dimensiones de lo que se
observa)
Las caractersticas del microscopio son:
1.- Aumento visual
2.- Campo visual 2l
3.- abertura numrica A
Aumento Visual:
El objetivo tiene un aumento lateral mientras que el ocular, como la lupa, un
aumento visual . Por esto el aumento visual es igual a:

(6)
Donde es la razn de la longitud de la imagen y la longitud del objeto.

Si el microscopio se considera como una lupa su distancia focal esta dada por:

(7)
En este caso de 7 nos queda:

(8)
Campo visual:

Figura 3) Diafragma de pupila y de campo para un microscopio.

El campo visual del microscopio depende del dimetro del circulo en el plano
del objeto, cuya imagen coincide con el diafragma de campo visual 3 (figura 3)
situado en el plano focal anterior del ocular 2.
As pues:

(9)

Adems de 6 y 9 se obtiene que el campo visual del microscopio sea:

(10)
Abertura numrica, caractersticas del diafragma de abertura y la pupila
de entrada y de salida (ocular):
Se le llama abertura numrica al producto del ndice de refraccin del medio
donde se encuentra el objeto, por el seno del ngulo de abertura, es decir:
A = n1 sen Um (11)
La abertura numrica determina la luminosidad y el poder separador del
microscopio.
El diafragma de abertura de los objetivos de los microscopios es la montura
de una de las ltimas lentes o el diafragma situado junto al foco posterior
(comnmente en el plano focal posterior del objetivo, en la figura 3 es la cifra
4). Por lo tanto, la pupila de salida del objetivo ser, o la imagen de la montura
de la lente, obtenida como resultado de la accin de las siguientes lentes del
objetivo, o la montura de la ultima lente, o, por fin, el propio diafragma que es
de abertura.
La pupila de entrada 5 de dimetro D, de todo el sistema del microscopio, que
es la imagen del diafragma de abertura 4 durante la marcha inversa de los
rayos por el objetivo, en virtud de la formula de Newton (xx = ff ) se encuentra
a una distancia del foco anterior F1 igual a:

(12)
Donde X1p es la distancia desde el foco posterior F1 del objetivo hasta el
diafragma de abertura.
En los microscopios de gran aumento, el diafragma de abertura se dispone en
el plano focal posterior del objetivo, (X1p = 0), entonces la pupila deentrada
del microscopio se encuentra en el infinito X1p = .

Determinemos la posicin y el dimetro de la pupila de salida 6

Segn la formula de Newton, el segmento que determina la posicin de la
pupila de salida, respecto al foco posterior del ocular, es (figura 3):

(13)
Donde X 2p es la posicin imagen a la lente.
El dimetro D de la pupila de salida del microscopio se determina, partiendo de
que la condicin de los senos se cumple en el sistema del microscopio, es
decir:

(14)
Donde:
l = tamao del objeto.
n1 = ndice de refraccin donde se halla el objeto.
Um = ngulo de abertura del espacio objeto.
l = tamao de la imagen intermedia
n1 = ndice de refraccin donde se encuentra la imagen (este caso el del aire,
n1 = 1)
Um = ngulo de abertura del espacio objeto.
Valindonos de la condicin de los senos y considerando que Um es pequeo,
entonces:

(15)

Donde =

= 1.

De la figura se desprende que el dimetro D de la pupila se determina

mediante la formula:
D = 2f2tan Um (16)
De 11 y 6, tenemos que:

(17)
De aqu se concluye que el dimetro de la pupila de salida es directamente
proporcional a la abertura numrica A e inversamente proporcional al
aumento visual del microscopio.
Por esto cuando la pupila de salida de aproxima al dimetro del ojo, mayor ser
la "calidad" del objeto a observado y cuando los dimetros son iguales se le
denomina aumento visual normal (dada una abertura y aumento visual)
Poder separador, objetivos de inmersin y aumento til.
Poder separador
De la teora de la difraccin sobre la formacin de imgenes mediante un
microscopio se tiene que la distancia mnima entre dos puntos visibles por
separado es:

(18)
Donde es la longitud de onda de la luz monocromtica en la que se observa
el objeto y A es la abertura del microscopio.
Por eso cuanto mayor sea la abertura numrica A y menor la longitud de onda
, mejor ser el poder separador del microscopio.
Por lo tanto es natural la tendencia de utilizar objetivos con mayor abertura
numrica obtenida tanto por el aumento del ngulo de abertura de entrada,
como el ndice de refraccin del medio en el que se coloca el objeto.
Objetivos de inmersin:

El medio ptico lquido que rellena el espacio entre el objeto y el objetivo se le

denomina lquido de inmersin. El ndice de refraccin de este es prximo al
del

vidrio

(se

utiliza

agua,

glicerina,

aceites

cedral

de

enebro,

monobromonaftalina, etc.) En la figura se muestra el papel del lquido:

En el sistema "seco" el flujo luminoso se limita por el ngulo slido U y en el

lado sumergido por el ngulo Um, donde Um>U. De esta forma con la misma
intensidad de iluminacin e igual abertura del condensador, la imagen se vera
mucho mejor con el objetivo de inmersin que en "seco".
Adems esto asegura al microscopio un mayor poder separador.
La magnitud de Um, que determina la abertura numrica, depende de la
construccin del objetivo y en los secos esta limitada por la reflexin interna
total. Adems longitud de onda en la que se observa el objeto disminuye por
que el poder separador se aumenta (en este caso manteniendo constante a A).
Aumento til del microscopio:
Se define como el aumento visual del microscopio que puede ser utilizado
totalmente por el ojo del observador Por ejemplo, un ojo con un poder
separador de 2-4 in, debe satisfacer la desigualdad:
500 < ut< 100 (19)
Donde, si se sale de los rangos la visin ser formada por aberraciones.
5. Sistema de Iluminacin
--Estructura geomtrica:

La fuente de luz 1, con l ayuda de una lente (o sistema) 2, llamada colector, se

representa en el plano del diafragma iris de abertura 5 del condensador 6.
Este diagrama se instala en el plano focal anterior del condensador 6 y puede
variar su abertura numrica. El diagrama iris 3 dispuesto junto al colector 2 es
el diafragma de campo. La variacin del dimetro del diafragma de campo
permite obtener su imagen igual al campo visual lineal del microscopio. La
abertura numrica del condensador 6 supera, generalmente la de la abertura
del objetivo microscpico. El objeto 7 se proyecta por el objetivo 8 en el plano
del diafragma de campo 10, que coincide con el plano focal anterior del ocular
11. La pupila del ojo del observador se hace coincidir con la pupila de salida del
microscopio 12. Para el ojo normal los haces de rayos despus del ocular son
paralelos. El haz de rayos de una fuente de luz con iluminancia irregular (la
espiral de una lmpara incandescente) asegura con el sistema de iluminacin

uniforme del campo visual a merced de que los diafragmas de campo 3 y 10

son conjugados, as como tambin los son los diafragmas de abertura 5 y 9 del
condensador y del microscopio .
Si por razones relacionadas con el tamao y al haber posibilidades de
despreciar la accin trmica de la luz, es posible instalar sta en el plano del
diafragma de abertura 5 del condensador 6, entonces el sistema de iluminacin
se simplifica.

CONCLUSIONES
El Microscopio es: cualquiera de los distintos tipos de instrumentos que
se utilizan para obtener una imagen aumentada de objetos minsculos o
detalles muy pequeos de los mismos.
El microscopio simple o lente de aumento es el ms sencillo de todos y
consiste en realidad en una lupa que agranda la imagen del objeto
observado.
Dos lentes convexas bastan para construir un microscopio. Cada lente
hace converger los rayos luminosos que la atraviesan. Una de ellas,
llamada objetivo, se sita cerca del objeto que se quiere estudiar.
El objetivo forma una imagen real aumentada e invertida. Se dice que la
imagen es real porque los rayos luminosos pasan realmente por el lugar
de la imagen. La imagen es observada por la segunda lente, llamada
ocular, que acta sencillamente como una lupa. El ocular est situado de
modo que no forma una segunda imagen real, sino que hace diverger
los rayos luminosos, que al entrar en el ojo del observador parecen
proceder de una gran imagen invertida situada ms all del objetivo.
Como los rayos luminosos no pasan realmente por ese lugar, se dice
que la imagen es virtual

Bibliografa

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Hecht, Eugene, ptica Pgs. 151-241 3a edicin, Editorial Adisson Wesley
iberoamericana Espaa 2000.
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LINKOGRAFIA
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http://danival.org/600%20microbio/6000notasmicro/microscopio/microsco
p_20_microscop.html

http://www.joseacortes.com/practicas/microscopio.htm

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http://www.educar.org/inventos/elmicroscopio.asp